丝裂霉素C对人结膜囊成纤维细胞胶原合成的影响

目的　观察丝裂霉素 C(MMC)对培养的人结膜囊成纤维细胞胶原合成的影响 .方法　用 3H-脯氨酸掺入和原位杂交法观察 MMC对培养人结膜囊成纤维细胞胶原合成活性的作用 .结果　 0 .4g· L- 1 MMC作用 5 min,可使结膜囊成纤维细胞对 3H-脯氨酸的摄取减少 5 5 %以上 (P<0 .0 5 ) ,并降低了 型前胶原 m RNA原位杂交信号 .结论　临床青光眼滤过手术中使用的 MMC剂量与作用时间 ,可减少成纤维细胞胶原的合成 ,有利于青光眼滤过手术成功率的提高     

人Tenon’s囊成纤维细胞的离体培养及生长特性观察

目的离体培养人Tenon’s囊成纤维细胞,观察其生长特性。方法将人Tenon’s囊成纤维细胞进行离体培养及生长抑制实验,采用含10％胎牛血清的DMEM培养基,细胞计数法及MTT法描述细胞生长曲线。并通过免疫组织化学法对细胞进行鉴定。站果人Tenon’s囊成纤维细胞离体培养48h至7d处于对数生长期。细胞角蛋白染色阴性,波蛋白染色阳性。结论人Tenon’s囊成纤维细胞在体外易于生长,是细胞离体实验研究的良好材料。     

兔眼角膜、结膜成纤维细胞的培养

目的 建立眼角膜、结膜细胞体外培养的方法。方法 采用组织块培养法培养兔眼角膜基质及结膜成纤维细胞。结果 结膜成纤维细胞在培养10天以后可以形成单层细胞。眼角膜成纤维细胞在培养瓶中培养2周后可形成单层；24孔板培养3d后细胞贴壁生长旺盛，10d形成单层。结论 眼角膜、结膜成纤维细胞组织块培养法是可行的，但在24孔培养板上眼角膜成纤维细胞比在培养瓶中贴壁快而且容易生长。     

干扰素-γ对人结膜下Tenon''''s囊成纤维细胞表型转化的干预

目的探讨干扰素-γ(IFN-γ)对人结膜Tenon s囊成纤维细胞(HTCF)表型转化的干预作用。方法4例白内障手术中,取结膜下组织块培养成纤维细胞。用蛋白质印迹免疫检测技术和免疫细胞化学技术鉴定细胞表型。检测未经诱导及经转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导(有或无IFN-γ预处理)后的HTCF表达α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的情况。结果与未经诱导的HTCF相比较,10ng/mL的IFN-γ能显著抑制HTCF转化为肌成纤维细胞(MF)(P<0.01)。对于经过IFN-γ预处理后再用TGF-β1诱导的HTCF,IFN-γ仅能部分抑制其表达α-SMA。结论IFN-γ能抑制HTCF转化为MF;仅能部分干预TGF-β1诱导HTCF转化为MF的作用。     

干扰素-γ对人结膜下Tenon's囊成纤维细胞表型转化的干预

目的探讨干扰素-γ(IFN-γ)对人结膜Tenon's囊成纤维细胞(HTCF) 表型转化的干预作用.方法 4例白内障手术中,取结膜下组织块培养成纤维细胞.用蛋白质印迹免疫检测技术和免疫细胞化学技术鉴定细胞表型.检测未经诱导及经转化生长因子-β1(TGF- β1)诱导(有或无IFN-γ预处理)后的HTCF表达α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的情况.结果与未经诱导的HTCF相比较,10 ng/mL的IFN-γ能显著抑制HTCF转化为肌成纤维细胞(MF)(P<0.01).对于经过IFN-γ预处理后再用TGF-β1诱导的HTCF, IFN-γ仅能部分抑制其表达α-SMA.结论 IFN-γ能抑制HTCF转化为MF;仅能部分干预TGF-β1诱导HTCF转化为MF的作用.     

药物抑制后成纤维细胞再增殖的实验研究

应用细胞培养的方法，采用体外培养的兔结膜成纤维细胞，观察氟尿嘧啶和地塞米松对成纤维细胞的抑制情况及抑制后细胞再增殖情况。结果：氟尿嘧啶能有效地抑制成纤维细胞增殖，药物抑制后细胞增殖速度明显减慢，当浓度达到１００ｍｇ／Ｌ时，抑制后细胞再增殖达到融合时间平均３３ｄ，地塞米松对成纤维细胞的抑制作用较弱，且具有双重性，药物抑制后细胞仍能迅速增生。提示：氟尿嘧啶能有效地应用于防治眼内增殖性病变，地塞米松抑制     

大鼠Tenon''''s囊成纤维细胞体外培养及生长特性的研究

目的 探讨建立体外大鼠Tenon’s囊成纤维细胞的培养方法，并对体外培养的Tenon’s囊成纤维细胞的生长特性进行观察。方法 选用健康年幼的SD大鼠40只，采用断颈法将其处死，摘除眼球，无菌条件下，分离剪下Tenon’s囊组织，采用植块法对Tenon’s囊成纤维细胞进行体外培养；通过细胞形态学观察和细胞免疫组化染色技术对其细胞性质进行鉴定；通过细胞记数和MTT法对其生长特性进行研究。结果 原代培养的大鼠Tenon’s囊组织块接种后，约48h即可见细胞由组织块中爬出，培养8～10d，细胞汇合程度大约可达70％左右；培养14～16d，细胞完全汇合；在细胞汇合程度达到70％-80％时，可以进行细胞传代，传代细胞接种后4—5h大部分细胞贴壁，10-12d左右传代细胞完全汇合。光镜下观察，可见Tenon’s囊成纤维细胞，在汇合程度低时细胞呈细长梭形外观，汇合程度高时细胞可呈多边形改变。免疫组化染色可见Tenon’s囊成纤维细胞角蛋白染色阴性，波蛋白染色阳性。细胞生长曲线显示，在2—8d细胞处于对数生长期。结论 体外成功地培养了大鼠Tenon’S囊成纤维细胞，这不仅为青光眼滤过泡瘢痕化防治的基础研究提供了一种新的细胞来源，同时为抗结膜瘢痕化药物的研究和开发提供了一种新的简便实用的细胞来源途径。     

新鲜羊膜移植联合丝裂霉素C在睑球粘连的结膜囊重建术中的应用

很多眼表疾病可引起结膜广泛的瘢痕形成：例如眼部的化学伤，热烧伤，复发性翼状胬肉，Stevens—Johnson综合征。各种原因引起的结膜瘢痕所致的结膜囊狭窄，临床上多采用自体皮肤、唇黏膜、颊黏膜或异体球结膜等进行结膜囊的再造成形，但因自体材料来源有限、方法痛苦，且术后易发生植片感染及挛缩，而异体球结膜易发生免疫排斥反应等，因此，该类方法难以推广。近年来，随着对羊膜组织研究的不断深入，利用人羊膜移植行眼表重建的方法已有报道。我们对20例结膜囊狭窄住院患者行新鲜羊膜移植联合丝裂霉素C治疗，取得了满意疗效，现报道如下。     

雷帕霉素对培养的人Tenon’s囊成纤维细胞的作用

目的：观察雷帕霉素（rapamycin）对培养的人Tenon’s囊成纤维细胞的增殖及细胞周期的作用。方法：将培养的人Tenon’s囊成纤维细胞用含不同雷帕霉素浓度的培养液培养24h后，用MTT法测定细胞的增殖情况，用流式细胞仪测定细胞周期的变化情况。结果：用含10、20、40、80和160ng／ml雷帕霉素的培养液培养细胞时，细胞增殖抑制率分别为9．32％，22．55％，41．42％，42．25％，43．57％。细胞周期分析显示，雷帕霉素（40ng／ml）作用后，G0／G1期细胞较对照组增多（41．76％vs44、19％，P〈0.05），S期细胞较对照组减少（45．42％vs40．18％，P〈0．05）。结论：雷帕霉素具有抑制人Tenon’s囊成纤维细胞增殖的效果，且随浓度增加抑制作用增强，并将细胞抑制在G1期的限制点内。     

酶消化法原代培养兔结膜成纤维细胞及进行传代培养的体会

目的 用酶消化法原代培养兔眼结膜成纤维细胞并进行传代培养。方法 取兔眼结膜，加入胰蛋白酶及乙二胺四乙酸二钠直接消化后放入孵箱培养，并通过改进后的传代培养技术将原代培养成功的成纤维细胞进行传代，观察细胞的生长情况。结果 原代培养7～9d成纤维细胞在培养基中长成单层且分布均匀。传代培养后3～4d成纤维细胞铺满培养基，即可再传代。结论 酶消化法原代培养兔眼结膜成纤维细胞比常规的组织块培养法更快促使细胞长成单层，且贴壁细胞分布更均匀。运用改进后的传代培养技术可以使成纤维细胞的增殖和纯化更加方便快捷。     

苦参碱抑制血小板衍生生长因子诱导的小鼠皮肤成纤维细胞增殖

目的：探讨苦参碱对血小板衍生生长因子－ＢＢ（ＰＤＧＦ－ＢＢ）诱导的小鼠成纤维细胞增殖的影响。方法：取新生ＩＣＲ小鼠皮肤细胞培养成纤维细胞。用四甲基偶氮唑盐（ＭＴＴ）法和细胞计数法分析细胞增殖情况。结果：５０￣２５０μｇ／ｍｌ的苦参碱能剂量依赖地降低血清刺激的细胞增殖,撤除苦参碱后抑制作用能完全逆转。苦参碱（１００￣５００μｇ／ｍｌ）亦能剂量依赖地抑制ＰＤＧＦ－ＢＢ诱导的细胞增殖。结论：苦参碱显示了     

美洲大蠊提取物对人胚胎皮肤成纤维细胞增殖的影响*

目的 研究美洲大蠊提取物Ento-A、Ento-B、Ento-C、Ento-D、Ento-E、Ento-F对体外培养人胚胎皮肤成纤维细胞（CCC-ESF-1）增殖的影响。方法 在不同时间用不同浓度的美洲大蠊提取物作用CCC-ESF-1,同时设不加药的阴性对照组（含等量细胞重悬液）和只加培养液的空白组。结果 与阴性对照组比较,3和 10?μg/ml的Ento-A、Ento-B、Ento-C、Ento-D、Ento-E对CCC-ESF-1细胞的增殖抑制作用效果较好,300?μg/ml Ento-F对CCC-ESF-1细胞的增殖有抑制作用。3?μg/ml Ento-A作用24?h时对CCC-ESF-1细胞的增殖抑制作用效果最好,3、10?μg/ml Ento-B、Ento-C、Ento-D、Ento-E作用72和96?h时对CCC-ESF-1细胞的增殖抑制作用效果较好,Ento-F对CCC-ESF-1细胞的增殖抑制作用不佳,均弱于其他5种。结论 美洲大蠊提取物能抑制体外CCC-ESF-1细胞的增殖。     

rhEGF对人皮肤成纤维细胞的促增殖作用

目的 研究重组人表皮生长因子(rhEGF)在不同浓度下对人皮肤成纤维细胞增殖的影响,为临床准确定量应用这两种因子修复创面、加速创面愈合提供理论依据. 方法 体外培养人皮肤成纤维细胞,分别用浓度为0,10,30,50,80,100,150 μg/L的rhEGF干预细胞,48 h后四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测细胞的活性.选择最适浓度生长因子干预的细胞,用流式细胞仪检测细胞的DNA倍体情况. 结果 不同浓度的rhEGF分别对成纤维细胞干预48 h后,显示rhEGF在80μg/L浓度时MTT值最大;并检测出在最适浓度生长因子干预24 h后细胞大多处于DNA合成前期和合成期. 结论 rhEGF浓度在30-100μg/L之间对人皮肤成纤维细胞有明显的促增殖作用,其中以80μg/L较显著.     

富血小板血浆对体外培养条件下人真皮成纤维细胞增殖能力的影响

目的:探讨富血小板血浆(PRP)对人真皮成纤维细胞(hDFbs)在体外培养条件下增殖能力的影响,探讨PRP促进皮肤、黏膜伤口愈合的机制.方法:PRP和hDFbs来源于健康成年人,两次离心法制备PRP,倒置相差显微镜观察0、12.5%、25.0%、50.0%和100.0%PRP浓度作用下 hDFbs的增殖;免疫细胞化学检...     

丝裂霉素C热化疗对人肝癌细胞-7721的细胞毒作用

目的：探讨比较丝列霉素C（MMC）化疗与加热化疗对人肝癌细胞（HCC－7721）的细胞毒作用．方法：以体外培养的HCC－7721为研究对象，采用水浴加温法，体外细胞毒试验（MTT法），观察了MMC化疗与加热化疗对细胞的生长抑制规律的影响二结果：①43℃30min以上的单独热疗对细胞具有较强的细胞毒作用．②热疗能增强肿瘤细胞对MMC的敏感性，热与MMC联合应用的效果强弱依次为热化同时（HM组）优于先热后化（H→M组）或先化后热（M→H组）．结论：加热可以显著提高丝裂霉素C对HCC－7721的细胞毒作用．     

松花粉对人肺成纤维细胞增殖活性影响的实验研究

目的 :研究松花粉对人肺成纤维细胞增殖的影响 ,探讨中药松花粉可能的作用机理。方法 :松花粉作用于人肺成纤维细胞不同时间后观察细胞生长速度 ,应用台盼蓝对细胞进行染色 ,测定细胞死亡率。松花粉浓度分别为 10 0、2 0 0、40 0、80 0mg·L-1,以未经松花粉处理的细胞为对照。结果 :松花粉作用于人肺成纤维细胞能够明显促进细胞群体倍增水平 ,降低死亡细胞数目 ,且呈剂量依赖关系。结论 :松花粉可通过促进细胞生长而影响细胞增殖。     

氟伐他汀对大鼠肺成纤维细胞增殖的抑制作用

目的:观察氟伐他汀(fluvastatin, Flu)对体外培养的大鼠肺成纤维细胞(fibroblast, Fb)增殖的抑制作用.方法:在体外培养的大鼠肺Fb中,加入Flu,用计数法和MTT比色法观察并比较不同浓度的Flu对培养细胞增殖的抑制作用、对大鼠肺Fb分裂指数及分泌胶原的影响.结果:计数法和MTT比色法均显示,Flu对体外培养的大鼠肺Fb的增殖具有明显的抑制作用(P<0.01),并呈剂量依赖效应,10-4 mol/L的Flu已可使培养细胞的增殖受到完全抑制.培养的大鼠肺Fb细胞分裂指数及胶原分泌量在Flu的作用下也有明显降低(P<0.01).结论:Flu对体外培养的大鼠肺Fb的增殖及其胶原分泌具有明显的抑制作用,为肺纤维化的治疗提供了一种新的方法.     

姜黄素对人胚肺成纤维细胞的生长抑制及细胞外基质合成的影响

目的:研究姜黄素对体外培养人胚肺成纤维细胞(HEF-5)MRC-5增殖、胶原表达和周期分布的影响。方法:体外培养MRC-5细胞,用姜黄素处理,分为正常对照组和10、20、30、40、50、60μmol/L姜黄素组。于37℃继续培养24 h后,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖情况,用天狼猩红染色法测定细胞内胶原的表达,用流式细胞仪检测细胞周期的变化。结果:姜黄素呈剂量和时间依赖性抑制MRC-5细胞的增生(P<0.05),并降低胶原的生成(P<0.05),流式细胞仪检测结果显示,细胞主要停滞于G1期。结论:姜黄素能抑制MRC-5细胞的增殖和胶原的增加,并使细胞周期停滞在G1期,提示姜黄素可能通过抑制MRC-5细胞的增殖来减少细胞外基质积聚,从而发挥其抗肺纤维化的作用。