基因芯片技术在乙肝病毒分型和耐药突变检测中的应用

目的探讨基因芯片技术在乙肝病毒(HBV)分型和耐药突变检测中的应用。方法采用基因芯片法检测105例HBV病毒携带者血清标本,观察HBV基因分型特点及针对核苷酸类药物的耐药突变情况,并结合受试者荧光定量PCR病毒载量、血清HBV标志物及病理检测结果进行分析。结果 105例HBV病毒携带者C型63例(60.0%),B型、C型混合型16例(15.2%),B型26例(24.8%),各基因型构成差异有统计学意义(P0.05)。C型HBV-DNA载量对数值、HBe Ag阳性率与B型比较差异有统计学意义(P0.05)。病理活检结果显示炎症分期G3~G4期、纤维化分级S3~S4级C型乙肝病毒携带者所占比重高于B型,差异有统计学意义(P0.05)。共检出耐药突变28例(26.67%);204I居多,占11.4%,180M+204V+204I突变共7例,占6.67%。临床耐药种类表现为拉米夫定耐药26例,阿德福韦耐药2例。结论基因芯片技术对乙肝病毒分型及耐药突变检测具有重要的作用。     

基因芯片技术在乙肝病毒基因型及YMDD变异检测中的应用

目的评价基因芯片技术在HBV基因型及HBVP基因YMDD变异检测中的应用价值,并对不同基因型病例的临床情况进行分析。方法抽提HBV DNA,用PCR方法扩增S基因及P基因部分区域,扩增产物与基因芯片上的寡核苷酸探针进行杂交,杂交结果通过芯片影像读取仪扫描到计算机上,经软件分析可得到HBV基因型、HBVYMDD野生型及YVDD、YIDD变异型结果;部分标本通过HBV preS/S基因序列测序证实。结果38份高病毒滴度标本(HBV DNA定量>1.0×105拷贝/毫升)中22例为B基因型(58%),16例为C基因型(42%);32例为HBV YMDD野生型,2例为YVDD变异型、4例为YIDD变异型。临床情况方面,无症状携带者中有2例为基因型B、3例为基因型C,慢乙肝患者中有16例为基因型B1、2例为基因型C,肝硬化患者中有4例为基因型B、1例为基因型C;B型和C型患者e抗原阳性率分别为54.5%(12/22)和87.5%(14/16)。10份HBV DNA定量<1.0×105拷贝/毫升的标本不能检测出HBV基因型及YMDD变异情况。11例阳性标本的基因测序结果与基因芯片检测结果一致。结论(1)基因芯片检测HBV基因型及HBV P基因区YMDD变异准确性高、特异性好,同时每次实验得到的信息量多,适合于临床开展应用,但需提高灵敏度;(2)C基因型乙肝患者HBV e抗原阳性率高于B型患者。     

检测拉米夫定耐药位点基因芯片的研制及其应用初探

目的：研发检测拉米夫定耐药的基因芯片进行临床拉米夫定致乙型肝炎病毒（HBV）耐药相关基因突变的监测。方法：（1）将HBV YMDD区4个突变位点为靶的16条寡核苷酸探针，用GMS 417芯片点样仪固定在经特殊处理的玻片上。待检HBV突变相关的核酸经过聚合酶链反应（PCR）扩增，及用Cy5标记的三磷酸脱氧胞苷进行荧光标记，再通过与基因睛杂交，严谨洗涤，将非突变的标记片段洗脱后，将芯片在Gene TAC LS IV扫描仪下进行扫描，计算机解读。（2）应用PCR定点突变技术构建Leu515Met,Met539Ile,Met539Val和V542I 4位点和4位点的单一突变质粒，并将芯片检测结果与测序结果对照，以鉴定其特异性。同时，用血清标本和质粒的重复检测，测定其重要性，并对50份拉米夫定治疗血清和慢性HBV感染患者血清进行检测。结果：我们研制的芯片能同时特异性地检测耐药相关单一或多位点突变。其检测与测序的符合率98％。重复率达96％－100％。结论：本研究制作的4位点基因芯片，既可检测乙型肝炎拉米夫定耐药相关单一碱基突变，亦可一次有效检出4个位点的突变，且具有快速、高特异性和可重复性，检测结果可靠的优点。     

贵州省少数民族乙肝病毒基因型分布及耐药变异研究

目的 了解贵州省少数民族乙型肝炎病毒基因型及耐药变异状况.方法 采用膜芯片技术对473份来自5个少数民族人群乙肝病毒DNA阳性标本进行基因型和耐药突变分析.结果 土家族137例,B型57.7%,C型32.1%,B/C混合型7.3%,未分型2.9%;水族88例,B型91.0%,C型4.5%,未分型4.5%;侗族99例,B型94.0%,C型3.0%,B/C混合型1.0%,未分型2.0%;苗族98例,B型92.8%,C型4.1%,未分型3.1 %;仡佬族51例,B型88.0%,C型6.0%,B/C混合型4.0%,未分型2.0%.土家族基因型分布与其它少数民族相比,差异有统计学意义(χ2 =83.893,P<0.01).各民族有0.7%～2%不等的耐拉米夫定毒株,没有发现耐阿德福韦毒株.结论 在贵州省少数民族乙肝病毒基因型分布中,水族、侗族、苗族和仡佬族B基因型占绝对优势,而土家族则以B型和C型为主,各少数民族有少量耐拉米夫定毒株存在;所采用的基因芯片技术可用于乙肝病毒基因分型及耐药变异检测,值得临床推广应用.     

应用基因芯片检测乙型肝炎病毒基因变异

目的探讨利用基因芯片技术检测乙型肝炎病毒(HBV)前C区/BCP区以及P区基因变异的临床意义。方法应用基因芯片技术检测220例不同临床类型乙肝患者的血清前C区n t1896、1814,HBVC区基因启动子(BCP)n t1762和1764以及P区n t552、528位点的变异。结果220份血清中未检出1例n t1814突变,n t1896变异率为19.09%(42/220)。其中HB eA g阳性n t1896的变异率为21.4%(9/42),HB eA g阴性n t1896的变异率为78.6%(33/42),后者变异率显著高于前者。BCP双变异的检出率为69.09%(152/220),轻度、中度、重度慢性乙型肝炎、肝硬化以及肝癌患者中BCP双变异的检出率分别为21.88%(7/32),66.67%(56/84),100%(28/28),100%(76/76)。BCP双变异阳性与阴性组相比,ALT、A ST、HBVDNA无明显差异,TB il、ALB、CHE相差有显著性。P区YM DD基序n t552、528位点变异率为5.45%(12/220)。结论利用基因芯片对同一份标本可同时检测多位点的变异,快速方便,具有一定的临床应用价值。     

应用PCR-LDR法检测乙型肝炎病毒核苷类药物耐药多基因突变位点

目的用多重聚合酶连接反应-连接酶检测反应分型法（PCR-LDR）同时检测乙型肝炎病毒（HBV）的180、181、184、204、236、250位点突变。方法以50例慢性乙型肝炎患者血清中HBV的DNA为模板,获得PCR-LDR反应探针连接产物,用ABI 3130Sequencer进行检测分析。结果共检测出拉米夫定耐药突变8例（16%）、阿德福韦耐药突变5例（10%）,恩替卡韦耐药突变1例（2%）,拉米夫定和阿德福韦同时耐药突变1例（2%）,突变情况与直接测序法检测的结果完全一致。结论用PCR-LDR法可以快速检测HBV基因的已知位点突变,与直接测序等其他方法相比具有更简单、方便、快捷的优势,有利于临床医生早期发现乙肝病人的耐药情况并及时更改治疗方案。     

高通量检测技术检测乙型肝炎病毒变异的临床意义

目的探讨基因芯片技术检测乙型肝炎病毒(HBV)6位点变异的临床意义。方法对91例乙型肝炎患者采用基因芯片技术,检测HBV 6位点的自然变异。结果91例乙型肝炎患者HBV变异率98.9%(90/91),其中BCP区1762位点变异率最高(61.5%)。重度肝炎和肝硬化中双位点变异显著高于轻中度肝炎(P<0.01)。29例进行过拉米呋啶抗病毒治疗的病例中P区552位点变异率为96.6%(28/29)。结论基因芯片技术检测HBV变异具有高通量、高灵敏等特点,对观察HBV基因突变有很高的临床应用价值。     

高通量检测技术检测乙型肝炎病毒变异的临床意义

目的 探讨基因芯片技术检测乙型肝炎病毒（HBV）6位点变异的临床意义。方法 对91例乙型肝炎患者采用基因芯片技术，检测HBV6位点的自然变异。结果 91例乙型肝炎患者HBV变异率98．9％（90／91），其中BCP区1762位点变异率最高（61．5％）。重度肝炎和肝硬化中双位点变异显著高于轻中度肝炎（P〈0．01）。29例进行过拉米呋啶抗病毒治疗的病例中P区552位点变异率为96．6％（28／29）。结论 基因芯片技术检测HBV变异具有高通量、高灵敏等特点，对观察HBV基因突变有很高的临床应用价值。     

乙型肝炎病毒逆转录酶区多位点预存耐药变异研究

目的研究宁德地区乙型肝炎病毒(HBV)预存耐药变异情况及相关影响因素,为临床制订个体化抗病毒治疗方案提供理论依据。方法采用基因芯片法,对未经核苷(酸)类似物治疗的慢性乙型肝炎患者及慢性HBV携带者进行多位点耐药突变检测,分析预存耐药变异与年龄、性别、谷氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、乙型肝炎e抗原(HBeAg)、HBV-DNA载量之间的关系。结果 401例患者共检出预存耐药变异79例,检出率为19.70%。突变位点主要集中在rtN236T、rtM204I、rtL180M。突变模式以rtN236T、rtN236T+rtM204I+rtM204V、rtN236T+rtM204为主。相关药物前3位为阿德福韦(15.96%)、拉米夫定(7.48%)、恩曲他滨(7.48%)。年龄20岁及60岁,肝酶10ULN,病毒载量10~7 IU/mL,HBeAg阳性的患者,其预存耐药变异检出率较高。结论宁德地区慢性乙型肝炎患者及慢性HBV携带者的预存耐药变异率较高,以rtN236T突变最为常见,相关药物阿德福韦应慎用。替诺福韦、恩替卡韦的预存耐药变异检出率低,抗病毒治疗时可首选。抗病毒治疗前进行多位点耐药突变检测,对指导个体化用药具有重要的临床意义。     

微波ELISA法快速检测乙肝病毒5项标志物的实验研究及临床应用

微波辐射技术应用于乙肝病毒５项标志物ＥＬＩＳＡ法的检测是一种全新的尝试。作者选用家用微波炉２０％的输出功率，用微波辐射４ｍｉｎ和３ｍｉｎ分别代替ＥＬＩＳＡ反应时间３７℃６０ｍｉｎ和显色时间３７℃１５ｍｉｎ，提高效率１０倍。     

乙肝病毒前C基因区1896位点变异的实验研究

目的探讨慢性乙肝病人血清HBV DNA前c基因区nt1896的变异情况及其与HBV DNA水平及转氨酶（ALT）关系。方法将172例慢性乙肝患者分为两组：大三阳组（106例）和小三组（66例）。检测ALT、HBV DNA及前C区nt1896的变异情况。结果大三阳组与小三阳组HBV DNA阳性率有显著差异（P〈0．05）,nt1896变异率无显著差异（P〉0．05）。小三阳患者中ALT升高组（〉40U／L）HBV DNA（＋）患者nt1896变异率100％,而ALT正常组HBV DNA（＋）患者nt1896变异率30％（3／10）（P〈0．05）。结论大三阳和小三阳慢性乙型肝炎病人都存在较高的前C区nt1896变异率（P〉0．05）。前C区nt1896变异可能是影响HBV DNA复制的一个因素。     

基因芯片检测乙型肝炎病毒多态性

自然界中，遗传和变异延续着生命的过程。乙型肝炎病毒(HBV)的突变正是病毒适应宿主细胞环境和抗宿主免疫系统作用的一种选择，也可一开始即以一种稳定突变株的方式传播。然而，病毒的变异却严重干扰了临床治疗，甚至诱发重症肝炎。本文应用基因芯片技术对乙型肝炎患者血清中HBV多态性进行分析，并探讨其临床应用价值。     

拉米夫定抗乙肝病毒治疗YMDD变异研究

目的]探讨拉米夫定治疗后乙肝病毒发生YMDD变异情况，及未接受拉米夫定治疗的乙型肝炎患者中是否存在天然变异的情况。[方法]采用聚合酶链式反应（PCR）结合Taqman荧光技术对海南地区110例慢性乙肝患者进行HBVYMDD检测，一组80例接受拉米夫定治疗及保肝治疗，另一组30例为对照组只给予保肝治疗，治疗1年对患者HBV多聚酶基因YMDD基序定性检测，观察是否有突变。[结果]拉米夫定治疗组在用药1年后有31例发生YMDD突变，其中YIDD变异有15例，YVDD变异有7例，YIDD＋YVDD变异有9例，变异株中有19例伴HBVDNA、ALT水平高于正常水平；而对照组有11例发生YMDD突变，其中YIDD变异有2例，YVDD变异有1例，YIDD＋YVDD变异有8例。[结论]在未经抗病毒治疗的慢性乙肝患者中存在YMDD变异株，l临床上在应用拉米夫定对慢性乙型肝炎患者进行抗病毒治疗前，应对患者是否存在YMDD变异加以重视。     

某市苗族、侗族及汉族乙型肝炎病毒基因分型及耐药基因检测

目的研究凯里市苗族、侗族及汉族乙型肝炎病毒(HBV)的基因分型和耐药基因变异状况。方法采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)和基因芯片反向斑点杂交技术检测凯里市苗族、侗族及汉族293例乙型肝炎患者基因型和对拉米夫定、阿德福韦耐药突变基因型。用试剂盒自带的阴性、阳性对照作为每次测定的质控,确保结果的准确性。结果 (1)HBV基因型检测到B型及C型,其中B型259例(88.4%),C型25例(8.5%),无法分型9例(3.1%)。汉族B基因型比例低于苗族和侗族,C基因型比例明显高于其他2个民族,其基因型分布与其他少数民族比较,差异有统计学意义(χ2=15.55,P0.01);(2)286例对拉米夫定敏感,7例对拉米夫定耐药;7例对拉米夫定耐药的突变基因中,为苗族和汉族患者,侗族未见拉米夫定耐药。但3个民族HBV耐拉米夫定变异检出率比较,差异无统计学意义(χ2=3.20,P0.05)。所有293例患者均对阿德福韦敏感。结论凯里市HBV基因型以B型为主;HBV基因B型患者易对拉米夫定耐药,且以突变基因型以180M和204V为主。     

基因芯片技术检测结核杆菌耐药的临床研究

目的 评价基因芯片技术在结核病防治工作中对结核分枝杆菌异烟肼和利福平耐药性的检测效果.方法 利用基因芯片技术对38例涂阳肺结核患者的痰标本进行异烟肼和利福平耐药检测,以传统罗氏药敏试验为金标准,对基因芯片技术的检测效果进行评价.结果 在38例菌株中,用基因芯片法进行异烟肼耐药基因检测,与罗氏药敏的符合率为84.2％,对38例进行利福平耐药基因检测,符合率为89.5％.结论 基因芯片检测异烟肼和利福平的耐药性与罗氏药敏方法具有很好的一致性,具有简便快速,灵敏度高,特异性好的优点,对临床及时准确进行抗结核治疗具有重要意义.     

泉州地区拉米夫定抗乙肝病毒治疗YMDD变异

目的 检测泉州地区乙肝病毒YMDD变异的类型,探讨拉米夫定治疗后及未接受拉米夫定治疗的乙型肝炎患者中乙肝病毒(HBV)发生YMDD变异情况.方法 采用聚合酶链反应(PCR)结合Taqman荧光技术对泉州地区114例慢性乙肝患者进行HBV YMDD检测,一组66例接受拉米夫定治疗及保肝治疗,另一组48例为对照组只给予保肝治疗,治疗1年对患者HBV多聚酶基因YMDD基序定性检测,观察是否有突变.结果 拉米夫定治疗组在用药1年后有24例发生YMDD突变.其中YVDD变异有15例,YIDD变异有6例,YIDD YVDD变异有3例,其中变异株中有15例,伴有HBV DNA、ALT高于正常水平;而对照组有17例发生YMDD突变.其中YVDD变异有9例,YIDD变异有4例,YIDD YVDD变异有4例.结论 泉州地区乙肝病毒变异株主要是YVDD型,在未经抗病毒治疗的慢性乙肝患者中存在YMDD变异株,临床上在应用拉米夫定对慢性乙型肝炎惠者进行抗病毒治疗前,应对患者是否存在YMDD变异加以重视.     

遗传性耳聋基因芯片检测的临床应用研究

目的应用遗传性耳聋基因芯片对散发性耳聋患者进行耳聋基因筛查,评价其在临床上快速检测常见遗传性耳聋基因的可行性。方法研究对象为76例耳聋患儿,取外周血5mL,分离提取全血淋巴细胞基因组DNA,用遗传性耳聋基因芯片检测中国人中常见的4个耳聋相关基因上的9个热点突变,包括GJB2（35delG、176del16、235delC及299delAT）、GJB3（C538T）、SLC26A4（IVS7-2A〉G、A2168G）以及线粒体12S rRNA（A1555G、C1494T）。结果在76例样本中,共检出9例突变,其中5例为SLC26A4IVS7-2A〉G杂合突变型;1例线粒体12S rRNA1555A〉G均质突变型;1例GJB2235delC/GJB2299delAT复合杂合突变型;1例GJB2235delC纯合突变型;1例SLC26A4IVS7-2A〉G纯合突变型。结论遗传性耳聋基因芯片对中国人中常见耳聋相关基因突变位点检出率高,可满足临床耳聋基因检测的要求,具有广阔的临床应用前景。     

基因芯片技术在耐药结核病临床诊断中的应用价值研究

目的 探讨基因芯片技术在耐药结核病临床诊断中的应用价值.方法 2016年1月-2018年12月连续纳入连云港地区各区县发现的所有肺结核病例,所有2018例涂片阳性患者的痰样本运送到连云港第四医院,进行培养、传统药物敏感性试验和基因芯片耐药检测.以传统药物敏感性试验结果为金标准,分析基因芯片耐药检测技术用于耐药结核病诊断...     

应用PCR-RFLP技术检测阿德福韦耐药相关性HBV变异

目的建立一种简便、快速、实用的检测阿德福韦(ADV)耐药相关性HBV变异(rtA181V/T/S和rtN236T变异)的方法。方法根据GenBank收录的HBV基因全序设计套式-PCR引物,使野毒株的PCR产物上游末端引入BglI的酶切位点,使rt236变异株的PCR产物下游末端引入BseDI(SecI)的酶切位点,建立PCR-限制性片段长度多态性(RFLP)方法。用此方法分别检测含rt181变异株、rt236变异株及野毒株质粒和3例ADV耐药慢性乙型肝炎患者血清标本。将变异株和野毒株配成不同比例,再用此方法检测,以了解该方法的敏感性。结果本研究建立的PCR—RFLP方法可同时检测rt181变异和rt236变异;用此方法检测血清标本,结果与测序及克隆分析一致;此方法可检测出标本中10%的变异株。结论应用PCR- RFLP方法可同时检测rtA181V/T/S和rtN236T变异,具有较高的敏感性,可用于ADV耐药变异的早期诊断。     

乙肝病毒变异检测中基因芯片技术的临床应用价值分析

目的探讨乙肝病毒变异检测中基因芯片技术的临床应用价值,为临床乙肝疾病诊治提供参考依据。方法选择2014年确诊为慢性乙肝疾病的患者200例作为研究对象,使用基因芯片技术测定研究对象的血清中乙肝病毒前C区A1896、A1814以及BCP区nt1762、nt1764的变异情况,对比患者临床诊断分型、乙肝病毒DNA复制程度和血清e系统进行综合分析。结果 200例研究对象中,乙肝病毒前C区A1896、A1814、BCP区nt1762和BCP区nt1764变异阳性率分别为58.5%、13.0%、55.0%、53.0%,且随着患者病情加重,乙肝病毒的变异情况发生情况逐步增多;HBeAg(-)HBeAb(+)患者或乙肝病毒DNA定量在104-106copy/ml之间时乙肝病毒变异发生率最高.结论使用基因芯片技术检测乙肝病毒多位点变异情况对临床疾病的诊治具有一定的应用价值,值得推广。