常氧与低氧下CagA~+幽门螺杆菌对人胃癌SGC7901细胞系HIF-2α、ABCG2表达的影响

目的:观察常氧与低氧下CagA+幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)对人胃癌SGC7901细胞系低氧诱导因子-2α(hypoxia inducible factor-2alpha,HIF-2α)、ABCG2表达的影响,初步探讨H.pylori在胃癌发生发展中的干细胞机制,及其与肿瘤微环境低氧的协同作用.方法:内镜下采集胃黏膜标本,行H.pylori培养并鉴定,PCR方法检测H.pyloriCagA+基因.CagA+H.pylori与胃癌SGC7901细胞于常氧和低氧环境下共培养48h(分常氧对照组、低氧对照组、常氧CagA+H.pylori组、低氧CagA+H.pylori组).免疫细胞化学法检测HIF-2α和ABCG2蛋白的表达,RT-PCR法检测ABCG2 mRNA的表达.结果:免疫细胞化学结果显示:常氧下胃癌SGC7901细胞HIF-2α、ABCG2蛋白呈低水平表达,低氧和CagA+H.pylori均能显著诱导HIF-2α、ABCG2蛋白表达(与常氧对照组相比,均P0.01),与低氧对照组和常氧CagA+H.pylori组相比,低氧CagA+H.pylori组表达进一步升高(均P0.01).相关分析显示HIF-2α与ABCG2表达呈正相关(r=0.976,P0.05).RT-PCR检测ABCG2 mRNA表达结果与免疫细胞化学一致.结论:CagA+H.pylori可刺激胃癌细胞HIF-2α、ABCG2表达,低氧环境下其表达进一步增加,表明CagA+H.pylori和低氧对HIF-2α、ABCG2的表达有协同作用.提示CagA+H.pylori和低氧可能是诱导胃癌细胞干细胞化及化疗抵抗的重要原因.     

丹参酮ⅡA对低氧培养下人胃癌SGC7901细胞增殖、凋亡及HIF-1α表达的影响

目的:观察丹参酮ⅡA(Tan ⅡA)对低氧培养下人胃癌SGC7901细胞增殖、凋亡及HIF-1α表达的影响.方法:用氯化钴(CoCl2)创建低氧模型,设常氧对照组、低氧对照组和低氧加不同浓度Tan ⅡA组.分别取0.5、1.0、2.0、5.0、10.0 mg/L的Tan ⅡA干预低氧胃癌SGC7901细胞24、48、72 h后,MTT法检测细胞活力:用上述同样浓度的Tan ⅡA干预低氧胃癌细胞48 h和72h后.HOECHST染色法检测细胞凋亡.Tan ⅡA(0.5、2.0、10.0 mg/L)干预低氧胃癌细胞48h后,免疫细胞化学二步法检测HIF-1α蛋白表达的变化.结果:MTT法证实,低氧条件下,Tan ⅡA呈时间、剂量依赖性地抑制胃癌SGC-7901细胞增殖(P＜0.01),10.0 mg/L Tan ⅡA作用细胞72 h后,其抑制率达71.2%.HOECHST染色法发现,低氧条件下,分别用0.5-1 0.0 mg/L浓度的Tan ⅡA作用胃癌细胞24、48 h,Tan ⅡA可呈时间、剂量依赖性地诱导胃癌SGC-7901细胞凋亡(F=60354.00,187922.10,均P＜0.05),10.0mg/L Tan ⅡA作用细胞72 h后,凋亡率达40.70%±1.55%.免疫细胞化学法显示,Tan Ⅱ A呈剂量依赖性地抑制低氧诱导的HIF-1α蛋白表达(F=712.326,P＜0.01).结论:低氧条件下,Tan ⅡA抑制胃癌细胞增殖并诱导其凋亡,这种作用可能与其抑制HIF-1α蛋白表达有关.     

低氧下丹参酮ⅡA对人胃癌SGC-7901细胞HIF-1α与c-Myc表达的影响

目的观察低氧下丹参酮ⅡA（Tan ⅡA）对人胃癌SGC-7901细胞低氧诱导因子let（HIF-1α）与c—Myc表达的影响和二者的相关性。方法用氯化钴创建低氧模型,设常氧对照组、低氧对照组和低氧加不同浓度Tan Ⅱ A组。分别取0．5、2．0、10．0mg／L Tan ⅡA干预低氧胃癌细胞48h后,免疫细胞化学二步法检测HIF-1α和c—Myc蛋白表达的变化。结果Tan ⅡA呈剂量依赖性地抑制HIF—1α和c—Myc蛋白表达,且二者呈高度正相关（r=0．901,P〈0．05）。结论低氧条件下,Tan ⅡA可同时抑制人胃癌SGC-7901细胞HIF-1α和c—Myc蛋白的表达,提示Tan ⅡA可能对抑制肿瘤的无氧糖酵解和VEGF表达具有重要作用。     

丹参酮ⅡA联合5-FU对低氧下人胃癌SGC7901细胞增殖、凋亡的影响及与HIF-1α和突变型P53表达的关系

目的:观察低氧环境下不同浓度的丹参酮ⅡA(Tan Ⅱ A)联合5-氟尿嘧啶(5-FU)对人胃癌SGC7901细胞增殖、凋亡的影响及与HIF-1α和突变型P53的表达.方法:用氯化钴(CoCl<,2>)创建低氧模型,采用0、0.5、1.0、2.0、5.0、10.0 mg/L的TanⅡA联合10.0 mg/L的5-FU分别作用于低氧SGC7901细胞24、48和72 h,MTT法检测细胞活力:用上述同样方式作用于低氧SGC7901细胞24、48和72 h后,Hoechst染色法检测细胞凋亡:TanⅡA(0、0.5、2.0、10.0 mg/L)联合10.0 mg/L的5-FU作用于低氧SGC7901细胞48h后,免疫细胞化学二步法检测IHIF-1α及突变型P53的表达.结果:低氧环境下,不同浓度的Tan Ⅱ A联合10.0 mg/L 5-FU呈时间、剂量依赖性地抑制SGC7901细胞的增殖(均P<0.01),10.0 mg/LTan Ⅱ A联合5-FU作用细胞72 h后,其抑制率为67.46%.0.5-10.0 mg/L TanⅡA联合5-FU作用细胞24、48、72 h.TanⅡA呈时间、剂量依赖性地促进SGC7901细胞凋亡(均P<0.01).HIF-1α及突变型P53表达明显高于常氧组(t=22.786,13.914,均P<0.01),不同浓度的Tan Ⅱ A联合10.0 mg/L 5-FU作用细胞48 h后,HIF-1α、突变型P53蛋白表达明显降低(F=182.234,130.062,均P<0.01),且二者呈高度正相关(n=5,r=0.995,P<0.01).结论:在低氧环境下,TanⅡA可能通过抑制HIF-1α及突变型P53蛋白表达从而增强5-FU抑制SGC7901细胞增殖及诱导凋亡作用.     

膀胱移行细胞癌组织中COX-2、HIF-1α的表达及意义

目的探讨环氧化酶-2（COX-2）和缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）在膀胱移行细胞癌组织中的表达及意义。方法膀胱移行细胞癌标本64例份,正常膀胱组织19例份。用免疫组化SP法检测其COX-2和HIF-1α。结果COX-2和HIF-1α在膀胱移行细胞癌中的阳性表达率分别为54.7%（35/64）、42.2%（27/64）,而正常膀胱组织中均无表达;膀胱移行细胞癌中,COX-2、HIF-1α阳性表达率均随其病理分级和临床分期增加而升高（P均〈0.01）,且COX-2与HIF-1α的表达呈正相关（r=0.460,P〈0.01）。结论COX-2、HIF-1α与膀胱移行细胞癌的恶性程度和浸润深度有关,两者相互作用,共同参与膀胱移行细胞癌的发生、发展。     

紫杉醇对TRAIL诱导胃癌SGC7901细胞凋亡的影响

目的探讨紫杉醇对TRAIL诱导的胃癌SGC7901细胞凋亡的影响。方法采用MTT法测定细胞活力、采用流式细胞仪检测细胞凋亡、Western blot检测蛋白表达。结果在胃癌SGC7901细胞中,100 ng/ml的TRAIL导致轻度的增殖抑制和细胞凋亡,TRAIL（100 ng/ml）联合紫杉醇（7.19μg/ml,24 h的IC50剂量）引起明显的细胞增殖抑制和诱导凋亡作用（P〈0.05）。TRAIL单药没有改变死亡受体5（DR5）的蛋白表达,而7.19μg/ml紫杉醇作用于胃癌SGC7901细胞后明显上调了DR5的蛋白表达。TRAIL和紫杉醇联合作用后,也有DR5蛋白的明显上调。结论紫杉醇通过上调DR5的蛋白表达增强了TRAIL诱导的胃癌SGC7901细胞凋亡。     

PGE2诱导人胃癌BGC-823细胞HIF-1α、VEGF表达的信号转导途径研究

目的研究前列腺素E2（PGE2）诱导人胃癌细胞株（BGC-823）、低氧诱导因子-1α（HIF—1α）、血管内皮生长因子（VEGF）表达的信号转导途径。方法应用100μmol／L的PGE。联合不同浓度的MAPK阻滞剂PD98059（10、50和100μmol／L）或磷酸肌醇3-激酶（P13K）阻滞剂Wortmannin（50、100和200nmol／L）作用于BGC-823细胞24h,收集细胞,行Western blot检测HIF-1α、VEGF的表达。结果正常对照组BGC-823细胞低度表达HIF-1α、VEGF蛋白,100μmol／LPGE。刺激细胞24h显著诱导HIF-1α、VEGF蛋白表达。PD98059或Wortmannin均对PGE2诱导的HIF-1α和VEGF蛋白表达产生剂量依赖性抑制,100μmol／LPD98059几乎全部阻断了PGE2对HIF-1α和VEGF蛋白表达的诱导（P〈0．01）,而200nmol／LWortmannin可部分阻断PGE2的这种作用。结论PGE2可能通过激活MAPK和／（或）P13K信号转导途径调控HIF—1α蛋白表达,进而促进VEGF表达。     

低氧对L02细胞脂肪代谢的影响及其机制

目的 研究低氧对L02细胞脂质代谢的影响及其可能的机制. 方法 以正常人肝细胞株L02细胞为研究靶细胞,对照组和低氧处理组细胞分别在21％和1％氧浓度下培养.油红O染色、甘油三酯(TG)测定检测肝细胞脂肪变程度;RT-PCR法检测细胞内低氧诱导因子(HIF) 2α、固醇调节元件结合蛋白(SREBP) -lc mRNA的表达情况; Western blot法检测HIF-2α亚基、脂肪分化相关蛋白(ADRP)、脂肪酸合成酶(FAS)蛋白的表达量.各组甘油三酯测定值行2×3的析因设计方差分析;两样本均数间比较采用t检验;其他多个样本均数的比较采用单因素方差分析与NewmanKeulS法检验.结果 与对照组比较,低氧组L02细胞内出现脂质沉积,TG含量增多,且随低氧处理时间延长逐渐增多(F=115.04,P＜0.01).低氧12、24、48 h组SREBP-1c mRNA表达水平校对照组下调(0.236±0.043、0.287±0.044、0.342±0.049与0.503±0.037,F=28.37,P＜0.01),FAS蛋白表达水平较对照组下调(0.562±0.054、0.674±0.062、0.682±0.057与0.857±0.069,F=16.08,P＜0.0l).对照组未检测到HIF-2α表达,而低氧处理3h后HIF-2 α蛋白表达逐渐增加,6h后达高峰,12、24h又逐渐降低,各时间点分别为0.609±0.031、0.973±0.067、0.792±0.056、0.437±0.038(F=85.30,P＜0.01);低氧12、24、48h各组ADRP蛋白相对含量分别为0.319±0.043、0.732±0.056、0.873±0.066,均明显高于对照组0.211±0.019(P值均＜0.05),且随低氧时间延长,表达量逐渐增多(F=167.49,P＜0.01).结论 低氧通过HIF-2 α-ADRP途径诱导肝细胞脂肪沉积.     

PGE2诱导胃癌细胞株BGC-823HIF-1α、VEGF表达

目的研究前列腺素E2(PGE2)对人胃癌细胞株BGC-823低氧诱导因子-1α(HIF-1α)、血管内皮生长因子(VEGF)表达的调节作用。方法以不同剂量的PGE2刺激BGC-823细胞24h,应用RT-PCR和Western blot方法检测PGE2能否在常氧下诱导BGC-823细胞HIF-1α、VEGF表达。结果PGE2呈剂量依赖性诱导HIF-1α蛋白表达,但对HIF-1α mRNA表达无影响,PGE2呈剂量依赖性诱导细胞VEGF mRNA和蛋白表达。结论PGE2对VEGF表达的诱导可能通过HIF-1α途径介导．这可能是环氧合酶-2(COX-2)诱导肿瘤血管生成的机制之一。     

胃癌MKN-28肿瘤细胞系SP细胞亚群初步分析

目的:分析胃癌细胞株MKN-28中是否包含肿瘤干细胞相关的SP(side population)细胞亚群.方法:采用免疫荧光方法检测干细胞标记ABcG2在胃癌细胞株MKN-28的表达;制备MKN-28细胞悬液,经Hoechst33342染色,流式细胞仪分析SP亚群.结果:ABCG2在胃癌细胞系MKN-28中有少量表达,ABCG2阳性细胞约占1.7%.SP亚群占MKN-28细胞的0.25%,维拉帕米阻断后减少为0.05%.结论:人胃癌细胞株MKN-28中存在SP细胞亚群,提示胃癌干细胞的存在.     

食管鳞癌中HIF-1α、Bax、Bcl-2的表达及意义

采用RT-PCR及免疫组化技术检测食管鳞癌和其正常食管上皮中低氧诱导因子（HIF-1α）的表达,用免疫组化SP法检测Bax和Bcl-2蛋白在食管鳞癌及其正常上皮中的表达。结果：食管鳞癌中HIF-1α基因和蛋白阳性表达率分别为96．0％和94．0％,正常食管上皮中未见表达,其阳性表达与食管鳞癌的组织学分级、pTNM分期及淋巴结转移呈正相关（P均〈0．05）。Bax和Bcl-2蛋白阳性表达率分别为80．0％和76．0％,正常食管上皮中未见表达。Bax蛋白表达水平与食管鳞癌淋巴结转移呈正相关（P〈0．05）,Bcl-2蛋白在不同组织学分级间表达差异显著（P〈0．01）。HIF-1α蛋白与Bax、Bcl-2蛋白之间表达呈正相关（P〈0．05）。认为HIF-1α是食管鳞癌发生发展的一个关键基因,HIF-1α、Bax、Bcl-2在食管鳞癌发生发展过程中有协同作用,联合检测这三者在食管鳞癌中的表达有助于其早期诊断、治疗和预后判断。     

腹主动脉瘤组织中HIF-1α、MMP-2及MMP-9的表达及意义

目的探讨低氧诱导因子(HIF)-1α、基质金属蛋白酶(MMP)-2及MMP-9在腹主动脉瘤(AAA)组织中的表达及意义。方法采用免疫组化法检测68例AAA及20例正常腹主动脉组织中HIF-1α、MMP-2及MMP-9的表达,并分析三者与临床病理参数的关系。结果 HIF-1α表达于AAA中膜及外膜平滑肌细胞、巨噬细胞的细胞核中,MMP-2表达于AAA中膜及外膜平滑肌细胞的细胞质中,MMP-9表达于AAA中膜及外膜平滑肌细胞、巨噬细胞的细胞质中,三者在正常腹主动脉组织中均不表达。AAA中HIF-1α、MMP-2及MMP-9的阳性率显著高于正常腹主动脉(P<0.001)。AAA中动脉瘤直径≥5.0 cm的患者HIF-1α、MMP-2及MMP-9的表达高于动脉瘤直径<5.0 cm者(P<0.001);AAA中有发生心脑血管意外史患者HIF-1α、MMP-2及MMP-9的表达高于未发生者(P<0.001)。AAA中HIF-1α、MMP-2及MMP-9与年龄、性别、有无吸烟史及高血压无关。同时AAA中HIF-1α、MMP-2及MMP-9表达两两呈正相关。结论 HIF-1α在AAA中高表达,并与MMP-2及MMP-9起协同作用,在AAA的发生发展中起重要作用。     

HIF-1α、COX-2在溃疡性结肠炎中的表达及与疾病活动性的关系

目的 探讨低氧诱导因子-1α(HIF-1α)、环氧合酶-2(COX-2)在溃疡性结肠炎组织中的表达及与疾病活动性的关系.方法 采用免疫组织化学方法检测51例UC患者(活动期38例,缓解期13例)和20例正常对照组中的HIF-1α、COX-2表达.结果 溃疡性结肠炎患者活动期HIF-1α表达显著高于正常人,差异有显著性(153.29±15.26vs.193.28±16.65)(P<0.01),缓解期HIF-1α表达与正常人差异无显著性(185.45±12.08 vs.193.28±16.65)(P>0.05).溃疡性结肠炎中HIF-1α的表达与Walmsley评分标准有相关性,且呈正相关;COX-2在溃疡性结肠炎患者的活动期的表达显著高于正常人,差异有显著性(156.45±18.25 vs.199.28±15.43)(P<0.01),缓解期的表达与正常人差异无显著性(190.93±13.78 vs.199.28±15.43)(P>0.05).溃疡性结肠炎中COX-2的表达与Walmsley评分标准也呈正相关;溃疡性结肠炎中HIF-1α和COX-2蛋白表达水平呈正相关(r=0.690)(P<0.5).结论 HIF-1α和COX-2均参与了溃疡性结肠炎的发病且与疾病的活动性有关,HIF-1α作为一种转录因子可能是COX-2均参与了溃疡性结肠炎的发病且与疾病的活动性有关,HIF-1α作为一种转录因子可能是COX-2基因表达中的一个重要调节者.     

低氧对人喉鳞癌Hep-2细胞凋亡的影响及其机制探讨

目的 观察低氧对人喉鳞癌Hep-2细胞凋亡的影响,并探讨其机制.方法 将体外培养的人喉鳞癌细胞分为常氧组、低氧组.流式细胞仪检测细胞凋亡率,RT-PCR及Western blot法分别检测各组细胞低氧诱导因子α（HIF-1α）、赖氨酰氧化酶（LOX）mRNA及蛋白.结果 常氧组细胞凋亡率13.86％±0.12％、低氧组5.13％±0.67％,P≤0.05.与常氧组比较,低氧组细胞中HIF-1 α、LOX蛋白及其mRNA表达增加（P均≤0.05）,且二者表达呈正相关（r均为0.862,P均≤0.05）.结论 低氧可抑制Hep-2细胞凋亡,该作用可能与其上调细胞中HIF-1α、LOX表达有关.     

胃癌SGC7901/OXA细胞耐药与侧群细胞比例及Mdr1、ERCC1基因表达的关系

目的:探讨胃癌耐药细胞系SGC7901/OXA获得性耐药的发生机制.方法:利用间歇增加剂量方法诱导成功的SGC7901/OXA细胞株作为观察组,亲代细胞株SGC7901为对照组,采用MTT的方法观察OXA对两组的抑制率,计算IC50和耐药指数(RI);采用RT-PCR和Westernblot的方法分别检测两组多药耐药1(Mdr1)mRNA浓度和切除修复交叉互补基因组1(ERCC1)的蛋白浓度;采用流式细胞仪检测两组细胞中侧群(SP)细胞的比例.结果:SGC7901/OXA细胞各浓度抑制率较SGC7901明显降低,两者IC50分别为38.23μmol/L和7.12μmol/L,RI为5.37;Mdr1mRNA与β-actinmRNA光密度比值在两组中分别为0.468±0.147和0.427±0.136(n=5),两者差异无明显统计学意义(P=0.079);ERCC1蛋白浓度在SGC7901/OXA细胞较SGC7901细胞中明显增加;SGC7901中SP细胞的比例为1.8%,SGC7901/OXA中SP细胞的比例达到了6.1%,较SGC7901细胞明显升高(P<0.05).结论:SGC7901/OXA较SGC79...     

低氧对前列腺间质细胞活性氧、低氧诱导因子-1α、雄激素受体表达的影响及依达拉奉的干预作用

目的探讨低氧环境下活性氧(ROS)在前列腺增生中的作用及依达拉奉对其的干预作用。方法流式细胞仪检测前列腺增生组织及原代培养细胞中ROS的表达,低氧条件下观察前列腺间质细胞ROS及生长变化,荧光定量PCR法检测低氧诱导因子(HIF)-1α、雄激素受体(AR)的变化。低氧条件下用依达拉奉干预后,检测细胞生长及ROS、HIF-1α、AR的变化。结果前列腺增生组织及3%O_2条件下细胞ROS均明显升高(P<0.01),3%O_2条件下细胞增殖升高(P<0.01);HIF-1α、AR表达上调(均P<0.05);在3%O_2条件下依达拉奉干预后,ROS明显降低(P<0.01),HIF-1α明显下调(P<0.05);细胞增殖明显下降(P<0.01)。结论低氧及低氧环境刺激产生的ROS在前列腺增生中可能起关键作用。     

NGF对CoCl2诱导的化学性缺氧神经元HIF-1α表达的影响

以CoCl2诱导的原代培养胚胎小鼠大脑皮层神经元为缺氧模型,Western blot分析神经生长因子(NGF)对神经元低氧诱导因子-1α(HIF-1α)及磷酸化细胞外信号调节激酶(p-ERK)表达的影响.发现正常培养的神经元HIF-1α、p-ERK表达水平较低,CoCl2缺氧处理后表达升高;单独NGF处理或预加NGF再缺氧处理时两者表达均明显上调;ERK特异性抑制剂PD98059处理后两者表达下调,NGF能阻止这种抑制作用;酪氨酸蛋白激酶的抑制剂Genistein处理能下调HIF-1α的表达,NGF不能阻止这种抑制作用;Genistein处理后p-ERK表达无变化,预加NGF则表达水平上调.认为NGF抗缺氧损伤作用可能与HIF-1α、p-ERK信号通路的激活有关.     

5-Fu对食管癌细胞株EC9706 凋亡及HIF-1α蛋白表达的影响

目的 探讨5-氟尿嘧啶(5-Fu)对食管癌细胞株EC9706凋亡及HIF-1α蛋白表达的影响.方法 将EC9706细胞随机分为A、B、C、D、E五组,其中A、B、C、D组于培养基内加入浓度分别为12.5、25、50、100 μg/ml的5-Fu 作用72 h, E组不加药.用流式细胞仪及免疫细胞化学染色技术检测各组细胞凋亡率及HIF-1α蛋白表达情况.结果 细胞凋亡率A组和E组均为0,B、C、D组分别为12.0%、23.2%、22.3% ,C组显著高于其他四组,P＜0.05;HIF-1α蛋白表达阳性率A组为66.50%±3.45%、B组为50.58%±4.34%、C组为37.00%±6.15%、D组为34.83%±3.25%、E组为78.58%±5.71%,E组显著高于其他四组(P＜0.05).结论 5-Fu可诱导EC9706细胞凋亡、下调HIF-1α表达,此可能是其治疗食管癌的机制之一.     

HIF-2α、VEGF与非小细胞肺癌中微血管生成及生物学转移的关系

应用免疫组化技术检测48例小细胞肺癌（NSCLC）中缺氧诱导因子-2α（HIF-2α）和血管内皮生长因子（VEGF）的表达,用CD34单克隆抗体标记血管内皮细胞并计数微血管密度（MVD）。结果48例NSCLC的HIF-2α和VEGF阳性表达率分别为72．9％和75％,与正常肺组织相比有统计学意义（P＜0．01）;HIF-2α和VEGF的表达呈正相关（r=0．721,P＜0．01）;HIF-2α或VEGF阳性NSCLC组织中MVD明显高于阴性组织;NSCLC转移者与未转移者的HIF-2α和VEGF比值有显著性差异（P＜0.01）。结论HIF-2α参与丁济导VEGF表达,促进NSCLC血管生成及转移的过程．可能在NSCLC早期形成和发展阶段有重要作用。