DC-CIK细胞对K562/ADR细胞多药耐药的逆转作用

目的 探讨共培养树突状细胞(dendritic cell,DC)和细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine-induced killer cell,CIK),即DC-CIK逆转白血病细胞多药耐药的作用及相关机制.方法 采用RT-PCR方法检测DC-CIK处理后的耐药细胞株(K562/ADR细胞)中多药耐药基因(mdr1基因)的表达;利用MTT法检测DC-CIK细胞处理后的耐药细胞株对阿霉素敏感性的变化.结果 经DC-CIK作用后的K562/ADR细胞mdr1表达明显低于未经DC-CIK处理的K562/ADR细胞组(P<0.05),而且其对阿霉素的敏感性也明显高于未经DC-CIK处理的K562/ADR细胞(P<0.05).结论 DC-CIK可逆转耐药细胞的多药耐药,其作用机制可能与下调耐药细胞中mdr1的表达有关.     

Puerarin逆转K562/AO2耐药的分子机制

目的:研究黄酮类化合物puerarin对K562/A02(人红白血病多药耐药细胞系)细胞耐药逆转作用的分子机制.方法:免疫荧光染色方法检测阿霉素(ADR)和puerarin对K562(人红白血病细胞系)和K562/A02两种细胞NF-кB活性的影响;免疫细胞化学染色方法检测ADR和puerarin对K562和K562/A02的survivin表达的影响;流式细胞仪检测ADR和puerarin对K562和K562/A02的P-gP表达的影响.结果:经ADR处理后的K562细胞和K562/A02细胞NF-кB的活性明显高于K562细胞空白对照组;经puerarin预处理后再加ADR处理的K562细胞中的NF-кB的活性明显低于只用ADR处理的K562细胞.经puerarin干预后的K562/A02细胞的NF-кB的活性明显低于未经puerarin干预的K562/A02细胞;经ADR处理后的K562细胞和K562/A02细胞的p-gP,survivin表达明显高于K562细胞空白对照组;经puerarin预处理后再加ADR处理的K562细胞中的p-gp,survivin表达明显低于未经pu-erarin预处理的K562细胞;经puerarin干预后的K562/A02细胞的p-gp,survivin表达明显低于未经puer-arin干预的K562/A02细胞.p-gp和survivin表达呈正相关.结论:NF-кB的活化使p-gp和survivin表达增多可能是K562细胞多药耐药形成的机制之一.Puerarin能预防和阻止K562细胞耐药形成,并能逆转K562/A02对ADR的耐药,其机制与抑制NF-кB活性及survivin和p-gp的表达有关.     

甲孕酮联合苦参碱对耐药细胞株K562/AO2多药耐药逆转作用的研究

目的应用甲孕酮(MPA)联合苦参碱(MAT)逆转人白血病细胞株K562/AO2对阿霉素的耐药性,观察联合用药逆转耐药的疗效。方法用MTT法检测MPA与MAT的细胞毒性,荧光分光光度法检测各组细胞内药物(ADM)浓度的改变,流式细胞仪测定细胞凋亡的情况,流式细胞术检测细胞的p-gp表达情况。结果(1)确定了甲孕酮及苦参碱对K562/AO2细胞的非细胞毒性剂量和低细胞毒性剂量,确定了非细胞毒性剂量的两药联合应用后未出现毒性叠加。(2)在与ADM合用时,K562/AO2+甲孕酮及K562/AO2+苦参碱组,细胞凋亡百分率均高于K562/AO2耐药组(P<0.05,P<0.01),但均低于K562/AO2+甲孕酮+苦参碱组(P<0.01,P<0.05)。(3)与K562比较,K562/AO2细胞中P-gP呈高表达;与K562/AO2耐药组比较,K562/AO2十苦参碱组及K562/AO2+甲孕酮组P-gp表达量降低(P<0.01),但当两者联合应用时作用大于两者单独作用。(4)与ADM组比较苦参碱、甲孕酮均能提高K562/AO2细胞内ADM浓度,P均<0.01,两者联合应用时作用大于两者单独作用。结论非细胞毒性剂量的...     

川芎嗪对转基因多药耐药细胞K562/MDR耐药性的逆转作用

目的：研究川芎嗪（TMP）与环孢菌素A（CsA）单独及联合逆转人红白血病多药耐药细胞K562/MDR的多药耐药性（MDR）,并进一步探讨其耐药逆转机制。方法：分别以倍比稀释后不同浓度的TMP（50～6　400 mg?L^-1 ）和CsA（0.5～256 mg·L^-1 ）作用于体外培养的K562/MDR细胞72 h,采用MTT法检测细胞生长率,确定TMP和CsA的非细胞毒性剂量;采用非细胞毒性剂量,实验分为5组：G1组（TMP+ADM+K562/MDR）、G2组（CsA+ADM+K562/MDR）、G3组（TMP+CsA+ADM+K562/MDR）、阴性对照组（以K562/S代替K562/MDR）、空白对照组（以1640培养基代替药物）,检测各组细胞生长抑制50%的ADM浓度,即IC₅₀,计算耐药倍数和逆转倍数;利用荧光分光光度法检测各组细胞内ADM浓度;流式细胞术检测跨膜糖蛋白P-gp的表达情况。结果：TMP及CsA的非细胞毒性剂量分别为320和2.0 mg·L^-1,K562/MDR细胞的耐药倍数为19.2倍;TMP及CsA均能降低K562/MDR细胞的耐药性,逆转倍数分别为5.2及9.6倍,并且两者联合应用,逆转倍数为15.6倍;TMP和CsA单独及联合应用均能明显增加K562/MDR细胞内ADM浓度;TMP及CsA单独应用均能降低K562/MDR细胞P-gp的表达,并且两者联合应用使K562/MDR细胞P-gp的表达率明显降低,与阴性对照组比较差异有显著性（P<0.01)。结论：TMP和CsA单独及联合应用可逆转K562/MDR细胞对化疗药物ADM的MDR,且两者具有协同作用。其逆转机制可能为降低P-gp水平,升高细胞内ADM浓度,增强对ADM的敏感性,从而发挥治疗肿瘤的作用。     

普乐林对K562、K562/AO2的增殖抑制和耐药逆转作用

目的 研究黄酮类化合物普乐林(Puerarin)对K562和K562/AO2细胞增殖抑制、药物增敏、耐药逆转的作用.方法 台盼蓝拒染试验、MTT实验检测Puerarin对K562、K562/AO2的抑制作用;MTT实验检测阿霉素单独和与Puerarin合用对K562、K562/AO2的半数抑制浓度.结果 3.2μmol/L的Puerarin即对K562、K562/AO2有生长抑制作用,其最大抑制浓度为25.0μmol/L,Puerarin对两种细胞的抑制差异无统计学意义(P＞0.05);阿霉素对K562细胞的IC50为0.131μg/mL,对K562/AO2的IC50为7.542μg/mL,耐药倍数为57.14倍;Puerarin加大了阿霉素对K562的杀伤敏感性(最大增敏倍数1.42),同时能部分逆转K562/AO2对阿霉素的耐药性(最大相对逆转效率91%).结论 Puerarin对K562、K562/AO2细胞的增殖抑制作用有限;但Puerarin具有较明显逆转K562/AO2对阿霉素的耐药作用.     

环孢素A对K562/DOX细胞药物积累和外排的影响

目的 研究环孢素A(cyclosporin A,CsA)对K562/DOX细胞多药耐药的逆转作用.方法 以 CsA作为耐药逆转剂,用MTT法和流式细胞仪观察CsA对多药耐药白血病细胞株K562/DOX的药物敏感性、细胞内药物积聚和外排的影响.结果 CsA能剂量相关性地增加阿霉素(doxorubicin,DOX)K562/DOX细胞内的累积,明显抑制P-gp介导的DOX外排,显著增强阿霉素对K562/DOX细胞的细胞毒作用.但对K562细胞药物敏感性、细胞内药物外排和积聚均无影响.结论 CsA能有效地减慢K562/DOX细胞内DOX外排速度,增加细胞内DOX积聚.     

新型多胺缀合物NMMB逆转K562/ADM细胞多药耐药及其机制

目的：研究新型多胺缀合物NMMB对白血病细胞株K562/ADM的多药耐药（MDR）逆转作用,并进一步探讨其耐药逆转机制。方法：分别以不同浓度的NMMB(10～1 000 mg/L)作用于体外培养的K562和K562/ADM细胞24 h,采用MTT 法检测细胞增殖抑制率,确定NMMB的非毒性剂量;采用非毒性剂量,NMMB 0、 2.5 、5.0 和10.0 mg/L组,分别与不同浓度ADM（0.25～100.00 mg/L）联合作用,检测各组细胞生长抑制50%的ADM浓度,即IC50,计算逆转倍数;利用流式细胞术检测NMMB联合ADM作用后K562/ADM 细胞内ADM蓄积程度和细胞周期变化。结果：随着NMMB浓度的增加,细胞增殖抑制率也相应增加,呈剂量-效应关系;NMMB的最大无毒剂量为12.5 mg/L,逆转倍数为4倍;NMMB可明显提高ADM在K562/ADM细胞内的蓄积,与未加NMMB对照组比较差异有显著性（P<0.05）;K562/ADM细胞被阻滞在G0/G1期,与未加NMMB对照组比较差异有显著性（P<0.01）。结论：NMMB对白血病耐药细胞株K562/ADM有增殖抑制和多药耐药逆转作用,其部分逆转机制可能是通过增加细胞内化疗药物蓄积和将K562/ADM细胞阻滞在G0/G1期而实现的。     

GCS通过影响凋亡相关基因致白血病细胞耐药的分子病理机制探讨

目的 通过研究苯基棕榈酰胺吗啡丙醇(PPMP)和小干扰RNA(siRNA)对白血病多药耐药细胞K562/AO2葡萄糖神经酰胺合成酶(GCS)基闪的调节及对凋亡相关基因的影响,以探讨GCS基因致白血病多药耐药的分子病理机制.方法 应用体外细胞培养技术和RNA干扰技术观察GCS特异性的化学抑制剂PPMP及针对GCS的siRNA对K562/AO2细胞GCS基因的抑制作用,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术分析GCS基因被抑制前后K562/AO2细胞中GCS摹因、Bcl-2基因、Bax基因的表达水平及差异.结果 PPMP和siRNA可抑制K562/AO2细胞GCS mRNA的表达,同时致相应细胞的Bcl-2基因表达下降,Bax基因则无明显变化.结论 GCS可能是通过Bcl-2信号转导途径使细胞的抗凋亡能力增强,从而导致白血病细胞的多药耐药.     

PDTC逆转K562/AO2细胞多药耐药性机制研究

目的研究核因子κB（NF-κB）抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸盐（PDTC）逆转K562/AO2细胞耐药效应及其机制。方法采用MTT比色法分别检测K562/AO2细胞的耐药性、PDTC对K562/AO2细胞增殖的影响以及非细胞毒剂量PDTC、维拉帕米（Ver）预作用后K562/AO2细胞药物敏感性的变化,采用免疫细胞组织化学法、RT-PCR检测K562、K562/AO2细胞NF-κB、mdr-1 mRNA表达水平以及PDTC作用一定时间对其影响。结果①K562/AO2细胞对阿霉素（ADM）的耐药性是K562细胞的59倍;非细胞毒剂量PDTC预作用后,ADM对K562/AO2细胞的半数抑制浓度（IC50）显著降低,相对逆转耐药效率为93.03%,强于经典耐药逆转剂Ver的作用81.07%（P〈0.01）;②K562/AO2细胞NF-κB表达水平高于K562细胞（P〈0.01）;PDTC可有效抑制K562/AO2细胞NF-κB表达,伴随mdr-1 mRNA表达减少,呈时间依赖性。结论抑制NF-κB异常活化可部分逆转K562/AO细胞耐药性,其机制与mdr-1 mRNA转录表达减少有关。     

拮新康逆转K562/A02细胞多药耐药的机理研究

目的利用血清药理学方法探讨中药拮新康复方逆转K5 62 /A0 2细胞多药耐药的机理 ,为临床应用提供理论和实验依据。方法分别采用MTT法、RT—PCR、Western印迹法观察含拮新康大鼠血清处理后K5 62 /A0 2细胞的增殖及mdr—1 /P—gp表达的改变。结果含 1 0 %拮新康血清 +ADM组对K5 62 /A0 2细胞的抑制率比 1 0 %正常大鼠血清 +ADM组明显增加 (P <0 .0 5 ) ;含 1 0 %拮新康血清 +ADM组K5 62 /A0 2细胞的mdr—1及P—gp的表达比ADM组及 1 0 %正常大鼠血清 +ADM组均降低 (P <0 .0 1 )。结论拮新康能抑制K5 62 /A0 2细胞的增殖 ,通过降低mdr—1 /P—gp的表达逆转K5 62 /A0 2细胞的多药耐药。     

葡萄糖神经酰胺合酶基因在多药耐药肿瘤细胞株K562/AO2中的表达及其与白血病多药耐药的关系

目的观察葡萄糖神经酰胺合酶（GCS）基因在人红白血病多药耐药细胞株K562/AO2的表达及其与肿瘤多药耐药性（MDR）的关系。方法运用Alamar Blue^TM多功能细胞染色法证实K562/AO2的多药耐药性;采用RT-PCR技术检测K562/AO2及其亲本K562细胞株的GCS基因、MDR1基因、bcl-2基因、bax基因的表达水平及其差异。结果（1）阿霉素（ADR）对K562/AO2细胞和K562细胞的IC50分别为75μg/ml和0.65μg/ml,耐药指数为115;长春新碱（VCR）对K562/AO2细胞和K562细胞的IC50分别为8μg/ml和0.22μg/ml,耐药指数为36。（2）K562/AO2细胞GCS基因和MDR1基因的表达明显强于K562细胞;K562/AO2细胞bcl-2基因表达强于K562细胞,而bax基因表达弱于K562细胞。结论GCS基因可能在白血病多药耐药中起着重要的作用,而细胞凋亡基因的表达异常可能是它导致肿瘤多药耐药的主要分子病理机制之一。     

洛美利嗪逆转K562/A02细胞多药耐药的研究

目的 :研究洛美利嗪对肿瘤多药耐药的逆转作用 ,探讨洛美利嗪逆转肿瘤细胞多药耐药的机制。方法 :以人红白血病细胞系K5 6 2及其耐药细胞系K5 6 2 /A0 2 (耐阿霉素 )为研究对象 ,采用MTT法检测细胞毒作用 ;免疫组化测定法检测P 糖蛋白 (P glycoprotein ,P gp)表达水平 ;RT PCR法检测mdr1mRNA水平 ;以流式细胞术测定两种细胞系内罗丹明 12 3(Rh12 3)的潴留来反映P gp的外排功能。结果 :与K5 6 2细胞系相比 ,K5 6 2 /A0 2耐药细胞系mdr1mRNA及P gp高表达 ,Rh12 3潴留减少。洛美利嗪 (10 μmol/L)对K5 6 2 /A0 2细胞的mdr1mRNA及P gp表达水平无明显影响 (P >0 .0 5 )。洛美利嗪对K5 6 2 /A0 2细胞的阿霉素 (ADM)、长春新碱 (VCR)细胞毒性有剂量相关性增敏作用。洛美利嗪能增加K5 6 2 /A0 2耐药细胞系的Rh12 3潴留。结论 :洛美利嗪对K5 6 2 /A0 2细胞的ADM、VCR细胞毒性有剂量相关性增敏作用 ,其机制可能与增加细胞内药物浓度有关。     

阿霉素纳米粒对白血病耐药细胞株K562/DOX耐药逆转作用的研究

目的　合成阿霉素聚氰基丙烯酸异丁酯纳米粒 ,观察其对阿霉素耐受性细胞株K5 6 2 (K5 6 2 /DOX)耐药性逆转效果并探讨可能机制。方法　采用乳液聚合法合成纳米粒 ,透射电镜观察计算粒径 ,分光光度法计算包封率 ;以梯度浓度的阿霉素纳米粒处理培养的K5 6 2 /DOX细胞 ,噻唑蓝比色法 (MTT)检测K5 6 2 /DOX细胞的半数生长抑制浓度 (IC50 )并计算逆转倍数 ;流式细胞术检测细胞内药物浓度 ;TUNEL法检测药物诱导后凋亡的发生及凋亡率。结果　阿霉素纳米粒平均粒径 (98 5± 3 7)nm ,包封率为 95 % ;MTT结果显示阿霉素纳米粒对K5 6 2 /DOX细胞的生长抑制率较单纯阿霉素显著增高 ,阿霉素纳米粒对K5 6 2 /DOX的耐药逆转倍数为 6 2 ;TUNEL检测经 10 μg/ml阿霉素纳米粒处理后的K5 6 2 /DOX平均凋亡率为 38 7%。结论　以聚氰基丙烯酸异丁酯纳米粒为载体的阿霉素可增强诱导K5 6 2 /DOX细胞凋亡的效率和有效逆转其耐药性。     

中药复方君子汤对白血病细胞株K562/VCR耐药性的逆转作用

观察中药复方君子汤(FFJZ)对白血病耐药细胞株K562/VCR细胞耐药性的逆转效果.方法 采用MTT法、流式细胞仪术分别检测FFJZ、环孢霉素A(CsA)和维拉帕米(VRP)作用于白血病耐药细胞株K562/VCR的耐药指数、逆转指数及细胞内ADM的浓度,与CsA、VRP进行比较. 结果 FFJZ、CsA和VRP在...     

亚砷酸对白血病K562/A02细胞的作用及机制

目的研究亚砷酸对白血病多药耐药细胞株K562/A02细胞的作用及对多药耐药基因1（mdr1）、P糖蛋白（P-gp）和血管内皮生长因子（VEGF）表达的影响,探讨亚砷酸逆转白血病多药耐药（MDR）的作用机制。方法将K562/A02细胞与不同浓度的亚砷酸（0、0.5、2.0、5.0μmol/L）共同孵育,分别在24、48、72h时,用Wrights染色法观察K562/A02细胞形态,流式细胞术（FCM）检测凋亡细胞,MTT法检测细胞增殖活性,RT-PCR法检测mdr1mRNA的表达,免疫组织化学法观察P-gp表达,并用ELISA法检测VEGF的浓度。结果随着亚砷酸作用浓度和时间的增加,K562/A02细胞的数目减少,并出现凋亡形态学改变,FCM显示随着作用浓度和时间的增加,细胞凋亡率逐渐上升;从作用48h组开始,mdr1mRNA及P-gp的表达出现显著降低（P〈0.05）,mdr1mRNA条带颜色较空白对照组明显变浅,mdrl/GAPDH灰度比值下降,此时,P-gp的灰度值上升,且随亚砷酸作用浓度和时间的增加,mdr1mRNA条带颜色进一步变浅,表达水平进一步下降;ELISA法检测表明从0.5μmol/L作用24h组开始,VEGF浓度即下降至405.02pg/mL（P〈0.05）,相同作用时间下以5.0μmol/L组较其它浓度组下调VEGF的作用最为显著。结论亚砷酸呈药物浓度-时间依赖性抑制K562/A02细胞增殖,诱导其凋亡,下调VEGF表达,有效抑制了mdrlmRNA的产生和P-gp的合成。     

参芪扶正注射液对K562/ADM多药耐药的影响

目的研究参芪扶正注射液对K562耐药细胞株（K562／ADM）多药耐药的影响。方法采用MTT法检测参芪扶正注射液的细胞毒性；采用PI单染色流式细胞术检测ADM加以及不加参芪扶正注射液处理K562／ADM后的细胞凋亡率；采用直接免疫荧光法流式细胞术检测参芪扶正注射液处理K562／ADM细胞的Bcl-2基因表达水平。结果（1）参芪扶正注射液在10μL／mL时对K562／ADM增殖无抑制作用；（2）参芪扶正注射液明显增加ADM对K562／ADM的毒性作用（P〈0.05），参芪扶正注射液在10μL／mL时耐药逆转倍数为1．71；（3）参芪扶正注射液可明显增强ADM对K562／ADM的促凋亡作用（P〈0．05）；（4）参芪扶正注射液可明显抑制K562／ADM的Bcl-2基因表达（P〈0.05）。结论参苠扶正注射液可以逆转K562／ADM耐药性，其可能机制是促进细胞凋亡和下调Bcl-2表达。     

Thapsigargin逆转K562/A02细胞多药耐药性的实验研究

目的 探讨内质网Ca^2 -ATP酶抑制剂thapsigargin对白血病多药耐药细胞株K562／A02化疗敏感性的影响。方法 用MTT比色法检测K562／A02细胞耐药性、thapsigargin的增殖抑制活性及其对K562／A02细胞化疗敏感性的影响；丫啶橙(AO)／溴化乙锭(EB)染色荧光显微镜观察thapsigargin处理后K562／A02细胞形态改变；流式细胞仪(FCM)检测P-糖蛋白(P-gp)表达；荧光显微镜检测Pgp功能。结果 ①thapsigargin对K562和K562／A02细胞的增殖抑制活性呈剂量和时间依赖性，K562／A02细胞较K562细胞对thapsigargin更敏感，thapsigargin诱导K562／A02细胞呈现典型的凋亡细胞形态学改变。②K562／A02细胞对阿霉素(ADM)、柔红霉素(DNR)、长春新碱(VCR)、依托泊苷(VP-16)、高三尖杉酯碱(HHT)和米托蒽醌(MXT)均出现不同程度的耐药性；thapsigargin抑制K562／A02细胞P-gP功能而对其表达无影响，thapsigargin能增加K562／A02细胞对ADM、DNR、VCR、VP-16、HHT和MXT的化疗敏感性。结论 Thapsigargin能诱导白血病多药耐药细胞株K562／A02细胞凋亡并能部分逆转K562／A02的多药耐药性；thapsigargin的多药耐药逆转功能可能与其凋亡诱导作用和抑制PgP功能有关。     

核糖体蛋白L6在K562/A02和K562细胞株中的表达差异

目的探讨核糖体蛋白L6（ribosomal proteinL6，RPL6）在急性髓细胞性白血病耐药细胞系K562／A02和敏感细胞系K562中的差异表达。方法分别从K562／A02和K562细胞中提取总RNA，以内参对照RT—PCR检测fuPL6基因表达。结果RPL6在飚62／A02细胞中的表达较K562高（P〈0．001）。结论在耐药细胞系K562／A02高表达RPL6可能与白血病耐药有关。