树突状细胞在髓性白血病免疫治疗中的作用

髓性白血病治疗失败的主要原因之一是疾病的复发,而复发的根源是由于白血病微小残留病灶的存在.采用特异性免疫治疗以清除白血病微小残留病灶已日益引起人们的重视.     

抗原负载的树突状细胞介导的抗慢性粒细胞白血病作用

目的：研究慢性粒细胞白血病（CML）细胞冻融抗原(CLA)负载的树突状细胞（DC）对特异性抗白血病T细胞的作用。方法：将健康人外周血单个核细胞来源的DC在体外用CLA负载,再与CML患者的经细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK）共同培养,应用乳酸氢酶释放法观察其对自身CML细胞杀伤活性,与未负载的DC与CIK共培养组、CIK组分别进行比较。结果：DC经抗原负载后介导的特异性抗白血病T细胞对CML细胞杀伤活性明显增强。结论：用CLA负载可进一步提高DC介导的特异性抗白血病T细胞对CML细胞的杀伤活性。     

来源不同的三种树突状细胞介导白血病免疫杀伤效应比较研究

树突状细胞(dendritic cells,DC)是迄今为止发现的递呈功能最强的专职抗原呈递细胞(antigen presenting cells,APC),通过启动细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T lympho-cytes,CTL)而发挥特异性抗肿瘤免疫效应.本研究利用流式细胞技术及体外细胞培养方法,观察脐血、健康人及慢性粒细胞白血病(chronic myeloid leukemia,CML)患者外周血等不同来源的单个核细胞在细胞因子(GM-CSF,TNF-a,IL-4)培养条件下诱导DC,观察DC细胞形态、产率、免疫表型的差别,同时观察了Ph染色体阳性的CML细胞可溶性抗原刺激后的DC所诱导的CTL特异性抗白血病效应,为临床最终治愈白血病提供实验依据.结果表明:3种来源的DC均表现出典型的镜下DC形态,DC产率分别为74.43%、61.23%和60.48%,脐血DC产率高于其它2组(P＜0.001),这可能由于:①脐带血中含有较丰富和更纯的造血干/祖细胞(与外周血比),其分化增殖的潜能更强;②脐血血浆中含有丰富的造血因子如GM-CSF、干细胞生长因子(SCF)等DC生长所必须的因子.培养第7天后,3组DC均高表达HLA-DR,CD83,CD1a,CD80等特征性DC分子.     

治疗急性髓系白血病的树突状细胞疫苗的研究进展

摘 要 本文综述了免疫治疗急性髓系白血病（acute myeloid leukemia, AML）的树突状细胞（dendritic cells, DC）疫苗的近期研究进展，主要涉及各种类型的白血病肿瘤抗原的确认与制备，包括AML特异融合蛋白及相关多肽、癌症睾丸抗原、酸洗脱多肽、白血病细胞冻融抗原/凋亡细胞、AMLDC融合细胞、白血病细胞来源的DC等；DC的制备与特性以及优化方法；临床试验研究的初步结果等，还对今后的研究方向进行了分析和展望。     

树突状细胞/肿瘤细胞融合疫苗抗肿瘤免疫研究进展

0引言 在肿瘤的发生发展过程中,肿瘤细胞通过抑制抗原呈递细胞(Antigen presenting cells,APCs),特别是树突状细胞(Dendritic cells,DCs)的抗原呈递作用来逃避宿主对其进行的免疫攻击.进行APC的研究,尤其是DCs来源的肿瘤疫苗的研究对肿瘤的免疫治疗具有重要意义.DC/肿瘤细胞融合疫苗因其独特的抗原呈递特点,已成为目前以DCS为基础的细胞免疫治疗的研究热点之一[1].本文将对近年来DC/肿瘤细胞疫苗与肿瘤的细胞免疫治疗方面的研究进展进行综述.     

树突状细胞局部免疫抗瘤作用的初步研究

目的：探讨树突状细胞（ＤＣ）瘤内注射的局部免疫方式对小鼠Ｈ２２肿瘤的治疗效果。方法：体外诱导生成树突状细胞,经Ｈ２２肿瘤裂解抗原致敏,实验分为对照组、ＤＣ组和ＤＣ＋ＣｐＧ-ＯＤＮ组,分别与Ｔ细胞共培养,收获的Ｔ细胞与肿瘤细胞共培养,观察其对肿瘤细胞的杀伤。体内试验：ＢＡＬＢ／ｃ小鼠皮下接种Ｈ２２肿瘤细胞制作成荷瘤鼠,第４天时进行局部瘤内免疫治疗,分为３组：生理盐水组、ＤＣ组和ＤＣ＋ＣｐＧ-ＯＤＮ组,免疫治疗１０天后处死小鼠,观察其治疗小鼠Ｈ２２肿瘤的效果。结果：体外实验中,对照组、ＤＣ组和ＤＣ＋ＣｐＧ-ＯＤＮ组的肿瘤杀伤率分别为（１０.８０±３.２７）％、（３８.２６±５.６０）％和（４２.６６±９.００）％,后两组杀伤率均高于对照组（Ｐ＜０.０１）;体内实验中,生理盐水组、ＤＣ组和ＤＣ＋ＣｐＧ-ＯＤＮ组的平均瘤重（ｇ）分别为１.８０４±０.４２２、１.２１６±０.３３５和０.７３３±０.１９１（Ｐ＜０.０１）。结论：ＤＣ瘤苗局部瘤内注射可抑制小鼠Ｈ２２肿瘤的生长,联合应用非甲基化ＣｐＧ-ＯＤＮ可以明显提高抑瘤效果。     

树突状细胞疫苗的临床研究进展

 树突状细胞(Dendritic Cells，DC)最先由Steinman在1973年描述，是体内最活跃、功能最强大的专职抗原提呈细胞。DC广泛存在于淋巴组织和非淋巴组织中，在血细胞中占单个核细胞总数的0．5%～1％。在大多数组织中，DC以不成熟形式存在，其MHC、共刺激分子和黏附分子的表达低，不能够有效地捕捉抗原和激活T细胞。而多种细胞因子能够在体外培养中刺激外周血、骨髓和脐血中DC前体，如在GM-CSF、IL-4和TNF-a的作用下，产生成熟的树突状细胞。     

前列腺癌树突状细胞疫苗的研究进展

几乎所有晚期及复发前列腺癌患者发展成为激素非依耐性前列腺癌,甚至部分患者继续发展为HRPC。目前对HRPC尚无完全有效治疗手段。近年来前列腺癌的免疫治疗,特别是基于树突状细胞的免疫疗法取得了快速进展并应用于临床,本文就前列腺癌树突状细胞疫苗的研究进展做一综述。     

胶质瘤树突状细胞疫苗研究进展

树突状细胞(DC)在抗原的提呈、识别及激活T细胞发挥抗肿瘤免疫方面有重要作用，以DC为基础的胶质瘤免疫治疗已成为临床生物治疗中的重要一员。现就胶质瘤DC疫苗的来源、类型、免疫方法、临床应用、安全性等方面的研究进行综述。     

α干扰素促进急性髓性白血病来源的树突状细胞的成熟分化

目的:研究α干扰素(interferon alpha,IFN-α)对不同亚型的急性髓性白血病(acute myeloid leukemia,AML)细胞来源的树突状细胞(dendritic cell,DC)免疫表型及功能的影响。方法:5例初发AML患者(其中M2 1例、M4 2例、M5 2例)的外周血单个核细胞,在含GM-CSF、IL-4、TNF-α的无血清培养液中培养11 d,其后加入IFN-α-2a(1 000 U/ml)继续培养3 d,获得DC(IFN-AML-DC),光镜下观察细胞形态,流式细胞仪测定细胞免疫表型,同种异体混和淋巴细胞反应检测DC的免疫功能。结果:所有患者白血病细胞培养14 d后均转化为IFN-AML-DC,与正常人外周血单核细胞由GM-CSF IL-4 TNF-α培养获得的DC(monocyte-derived DC,MoDC)及AML细胞由GM-CSF IL-4 TNF-α培养获得的DC(AML-DC)相比,IFN-AML-DC具有典型成熟形态的细胞明显增多,表达CD83 细胞的比例显著增加,HLA-DR、CD86分子的表达水平增高,对同种异体T淋巴细胞的激活能力明显高于MoDC及AML-DC。结论:IFN-α能够促进AML-DC的体外成熟,形成更强的免疫激活能力,为AML的免疫治疗提供更有力的手段。     

自体热休克凋亡细胞负载树突状细胞治疗大肠癌的疗效观察

目的：探讨自体热休克凋亡细胞负载的树突状细胞（dendritic cells,DC）治疗大肠癌的临床疗效。方法：采用酶消化法从手术切除的14例大肠癌新鲜组织获得单细胞悬液,热休克处理后用桦脂酸诱导其凋亡制备成细胞抗原;采集外周静脉血,分离单个核细胞,经GM-CSF与IL-4体外诱导成未成熟树突状细胞,负载细胞抗原后制备成DC肿瘤疫苗;对14例大肠癌患者进行4个疗程的DC免疫治疗,观察患者不良反应、敏感程度、生存质量、生存时间、癌胚抗原等临床指标。结果：DC治疗大肠癌未出现明显不良反应,5例患者的DTH检测阳性;14例患者的平均CEA水平由治疗前的99.5ng/ml降至治疗后的71.4ng/ml（P〈0.05）;治疗后血清中IL-2、IL-12及IFN-γ浓度均显著高于治疗前,具有统计学差异（P〈0.05）;所有患者均生存1年,其中1例患者出现了短暂的后腹膜淋巴结缩小,持续3个月,第2年由于肿瘤的进展生存率下降,由80%降至20%;患者的KPS评分上升,与治疗前比较有所改善（P〈0.05）。结论：自体热休克凋亡细胞负载的DC治疗大肠癌在临床治疗中具较高安全性,可改善患者免疫功能,临床观察显示患者近期临床效果明显;为大肠癌的临床综合治疗提供了一种新方法。     

自体热休克凋亡细胞负载树突状细胞治疗大肠癌的疗效观察

目的:探讨自体热休克凋亡细胞负载的树突状细胞(dendritic cells,DC)治疗大肠癌的临床疗效。方法:采用酶消化法从手术切除的14例大肠癌新鲜组织获得单细胞悬液,热休克处理后用桦脂酸诱导其凋亡制备成细胞抗原;采集外周静脉血,分离单个核细胞,经GM-CSF与IL-4体外诱导成未成熟树突状细胞,负载细胞抗原后制备成DC肿瘤疫苗;对14例大肠癌患者进行4个疗程的DC免疫治疗,观察患者不良反应、敏感程度、生存质量、生存时间、癌胚抗原等临床指标。结果:DC治疗大肠癌未出现明显不良反应,5例患者的DTH检测阳性;14例患者的平均CEA水平由治疗前的99.5ng/ml降至治疗后的71.4ng/ml(P<0.05);治疗后血清中IL-2、IL-12及IFN-γ浓度均显著高于治疗前,具有统计学差异(P<0.05);所有患者均生存1年,其中1例患者出现了短暂的后腹膜淋巴结缩小,持续3个月,第2年由于肿瘤的进展生存率下降,由80%降至20%;患者的KPS评分上升,与治疗前比较有所改善(P<0.05)。结论:自体热休克凋亡细胞负载的DC治疗大肠癌在临床治疗中具较高安全性,可改善患者免疫功能,临床观察显示患者近期临床效果明显;为大肠癌的临床综合治疗提供了一种新方法。     

黄芪多糖促进急性髓细胞白血病患者浆细胞样树突状细胞成熟

目的： 研究黄芪多糖（astragalus polysaccharide,APS）对急性髓细胞白血病（acute myeloid leukemia,AML）患者浆细胞样树突状细胞（plasmacytoid dendritic cell,pDC）成熟的影响。 方法： 收集淮安市第二人民医院2009年10月至2010年2月23例AML患者外周血单个核细胞,流式细胞仪分选pDC。APS刺激pDC 5 d后,流式细胞术检测pDC表型、光镜观察pDC的形态、扫描电镜观察pDC的超微结构;不同质量浓度APS（0、50、100、200 μg/ml）处理24 h后,ELISA检测pDC上清中IFN-α、TNF-α和IL-6的水平。 结果: 光镜及扫描电镜结果显示,APS可使pDC的突起增多、变长,呈现成熟形态特征。APS可促进pDC的分化和成熟,使CD11c、CD80、CD86阳性率明显提高,并呈APS浓度依赖性（P＜0.05）。APS还可浓度依赖性地上调pDC分泌IFN-α、TNF-α和IL-6（P＜0.05）。 结论： APS能够增强AML患者pDC的功能,并促进其分化和成熟。     

来源于未缓解白血病患者的DC-CIK细胞对白血病细胞的杀伤活性

目的：体外诱导培养缓解期及未缓解期急性白血病患者来源的树突状细胞（dendritic cell, DC)联合细胞因子诱导的杀伤(cytokine-induced killer, CIK)细胞,比较两者的增殖能力、免疫表型及对白血病细胞的杀伤活性。方法: 提取2013年4月25日至2014年1月17日河北医科大学第二医院血液科收治的复发难治未缓解期白血病患者（7例）和缓解期患者（7例）的外周血单个核细胞,分别按常规方法诱导产生DC-CIK细胞,在培养过程中检测细胞增殖倍数,流式细胞术检测CD3+CD8+、CD3+CD56+细胞比例,细胞涂片法和流式细胞术检测培养前后CD34+白血病细胞比例,CCK-8法检测两组DC-CIK细胞对K562细胞及患者单个核细胞的杀伤活性。结果: 缓解组和未缓解组来源的DC-CIK细胞均以相似的速度快速增殖,CD3+CD8+和CD3+CD56+细胞比例均随培养时间延长显著升高（ P <0.05）,但两组间差异没有统计学意义（ P >0.05）。培养第15天时,非缓解组DC-CIK细胞涂片检测未见CD34+原始白血病细胞,流式细胞术检测显示CD34+细胞比例较培养前显著降低\[（0.1±0.05）% vs (8.3±3.1)%, P <0.05\]。效靶比在5 ∶1~20 ∶1范围内时,缓解组与未缓解组DC-CIK细胞对K562细胞的杀伤率差异没有统计学意义（ P >0.05）,但未缓解组DC-CIK对患者单个核细胞的杀伤率显著高于缓解组（ P <0.05）,并且显著高于未缓解组对K562细胞的杀伤率（ P <0.05）。结论:未缓解期白血病患者来源的DC-CIK细胞在增殖活性、CD3+CD8+和CD3+CD56+表达水平和对K562细胞的非特异性杀伤活性方面与缓解期患者来源的DC-CIK细胞均相似,但对患者单个核细胞的杀伤具有更强的特异性。     

Immunotherapy with allotumour mRNA-transfected dendritic cells in androgen-resistant prostate cancer patients

Here, we present results from a clinical trial employing a new vaccination method using dendritic cells (DCs) transfected with mRNA from allogeneic prostate cancer cell lines (DU145, LNCaP and PC-3). In all, 20 patients were enrolled and 19 have completed vaccination. Each patient received at least four weekly injections with 2 x 10(7) transfected DCs either intranodally or intradermally. Safety and feasibility of vaccination were determined. Immune responses were measured as delayed-type hypersensitivity and by in vitro immunoassays including ELISPOT and T-cell proliferation in pre- and postvaccination peripheral blood samples. Serum prostate-specific antigen (PSA) levels and bone scans were monitored. No toxicity or serious adverse events related to vaccinations were observed. A total of 12 patients developed a specific immune response to tumour mRNA-transfected DCs. In total, 13 patients showed a decrease in log slope PSA. This effect was strengthened by booster vaccinations. Clinical outcome was significantly related to immune responses (n = 19, P = 0.002, r = 0.68). Vaccination with mRNA-transfected DCs is safe and results in cellular immune responses specific for antigens encoded by mRNA derived from the prostate cancer cell lines. The observation that in some patients vaccination affected the PSA level suggests that this approach may become useful as a treatment modality for prostate cancer patients.     

Vaccination of fusion cells of rat dendritic and carcinoma cells prevents tumor growth in vivo

Several reports on immunotherapy using dendritic cells-based vaccine have been published. We investigated findings using fusion cells (FCs) generated from rat dendritic cells and a syngeneic hepatic cancer cell line with regard to inducing anti-tumor immunity. Vaccination of rats using FCs protected against growth of the subcutaneously implanted tumor in vivo and induced infiltration of CD8(+) T cells into the tumor. At the site of CD8(+) T cell infiltration, there were apoptotic tumor cells. T cells from spleen of FCs-vaccinated rats with protective ability against tumor growth included tumor specific cytotoxic CD8(+) T cells restricted to major histocompatibility complex Class I. In addition, adaptive transfer of in vitro re-stimulated splenic T cells with FCs was effective in preventing tumor growth and in vivo vaccinations of rats with FCs after resection of the subcutaneous implanted tumor inhibited local tumor recurrences. Immunotherapy using FCs appears to be an effective method if used in combination with surgical or other anti-cancer therapies.     

香菇多糖促进急性髓细胞性白血病患者DC的成熟并增强其功能

目的： 研究香菇多糖（lentinan, LNT）对急性髓细胞性白血病（acute myeloid leukemia, AML）患者树突状细胞（dendritic cell,DC）成熟及功能的影响,探索白血病免疫治疗的新途径。 方法： 分离AML完全缓解期患者（AML-complete remission,AML-CR）的骨髓单个核细胞（bone marrow mononuclear cell,BMC）,用GM-CSF和IL-4诱导7 d培养DC,然后分组：LPS阳性对照组、LNT实验组和对照组。培养48 h后以瑞氏－吉姆萨(Wright-Giemsa)染色观察各组DC形态,流式细胞术检测各组DC表面分子CD80、CD83、CD86、CD1a和HLA-DR的表达,ELISA法检测各组DC上清液中IL-12的水平。免疫磁珠法分离AML-CR患者经LNT治疗后的外周血DC,ELISA法检测治疗后DC上清液中IL-12的水平。 结果： 体外实验中,LNT处理后DC呈典型树突状形态;其表面分子CD80、CD83、CD86、CD1a及HLA-DR的表达上调（P<0.05）;DC分泌IL-12较阴性对照组显著增高（P<0.05）,且呈LNT浓度依赖性。患者体内试验结果显示,LNT治疗后AML患者的DC上清液中IL-12分泌水平较治疗前显著提高（P<0.05）。 结论： LNT在体内外均能促进AML患者的DC成熟和增强DC功能。     

DC-CIK细胞清除微小残留白血病的临床研究

目的： 观察异体树突状细胞（dendritic cell,DC）与细胞因子诱导的杀伤（cytokine-induced killer,CIK）细胞联合化疗清除微小残留白血病（minimal residual leukemia,MRL）的临床效果和安全性。 方法： 选择48例2009年1月至2011年6月石家庄平安医院收治的达到形态学完全缓解（complete remission,CR）但未达到分子学完全缓解（molecular CR,CRm）的急性白血病患者或MRL阳性白血病患者,依患者意愿分为联合组和化疗组,各24例,两组的一般资料和疾病程度相当;联合组应用DC-CIK细胞治疗和巩固化疗,化疗组仅应用巩固化疗。采集健康供者（患者的父母或子女）单个核细胞,制备DC-CIK细胞,每位患者输注4~6次,每次间隔15 d。Real-time PCR检测患者白血病特异基因或相关基因表达,流式细胞术检测患者MRL免疫表型组合、外周血淋巴细胞亚群的变化,记录治疗的不良反应发生情况。 结果： 随访至2012年6月。与化疗组相比,联合组CRm率显著提高\[45.8% (11/24) vs 8.3% (2/24); χ2=8.55, P<0.01\], 四色流式细胞微小残留白血病免疫表型组合（four-color combination flow cytometric immunophenotype of minimal residual leukemia,CFIM）转阴率显著提高（66.7% vs 25.0%; χ2=839,P<0.01）,MRL清除显著提高（66.7% vs 250%; χ2=8.39,P<0.01）,3年以上持续完全缓解（continued complete remission,CCR）率也明显更高（79.2% vs 45.8%; χ2=569,P<0.05）。联合组治疗后患者淋巴细胞CD4+/CD8+比值较治疗前显著上升（1.3±0.4 vs 0.8±0.4,P<0.05）。DC-CIK细胞输注未见严重不良反应。 结论： DC-CIK细胞联合化疗能够抑制白血病相关基因,促进CFIM转阴、提高MRL清除率、改善患者免疫功能、延长缓解期,DC-CIK输注无严重不良反应。