植物雌激素对乳腺癌细胞MCF-7增殖的影响

目的 :　探讨植物雌激素大豆异黄酮 (genistein,GS)和玉米赤霉烯酮 (zearalenone,ZEA)对乳腺癌细胞株 MCF- 7增殖的影响。方法 :　雌激素依赖性 MCF- 7细胞在 DMEM培养液(含小牛血清 1 0 % )中采用开放式单层贴壁培养 ,于加受试物前 5 d将细胞用 PBS洗涤后改为无酚红高糖 DMEM(含 5 %经活性碳 -葡聚糖苷处理的胎牛血清 ,CDT- FBS)培养 ,实验设溶剂对照、雌激素对照、抗雌激素对照及两种受试物各四个剂量组 ,采用噻唑蓝 (MTT)法、3H- Td R掺入法及流式细胞术对 MCF- 7细胞的增殖情况进行分析。结果 :　与溶剂对照组相比较 ,GS(96μmol/ L,2 4h)可明显抑制 MCF- 7细胞增殖和细胞 DNA合成 ,并将细胞周期阻滞在 G2 / M;8μmol/ L GS处理96 h也能产生类似的抑制效果。 96 nmol/ L ZEA处理 2 4 h可明显促进 MCF- 7细胞增殖和细胞DNA合成 ,并将细胞周期由 G0 / G1向 S期推进 ,提高细胞分裂增殖指数。结论 :　ZEA和 GS均属环境雌激素 ,但对乳腺癌细胞 MCF- 7增殖产生的影响不同 ,ZEA可促进 MCF- 7增殖 ,而 GS能够抑制 MCF- 7细胞的增殖 ,即 GS具有用于癌症预防及有关保健食品开发的价值     

环境干扰物对卵巢癌细胞株PEO4增殖的影响

目的：观察环境干扰物壬基酚（4-n-nonyphenol,NP）、双酚A(bisphenolA,BisA）、邻苯二甲酸酯二丁酯（Dibutylphthalate DBP）对卵巢癌细胞株PEO4增殖的影响。方法PEO4细胞在DMEM培养基（含10％小牛血清）中采用开放式单层贴壁培养。试验前5d将细胞用PBS洗涤，改为在无酚红DMEM培养基（含5％活性碳－葡聚糖处理过的胎牛血清）中继续培养，以耗尽细胞内储存的柴激素，实验设溶剂对照、雌激素对照及3种受试物各4个剂量组，采用MTT法、^3H-TdR掺入法及流式细胞术对PEO4细胞的增殖情况进行分析。结果：3．2μmol/L NP、32μmol/L BisA和960μmol/L DBP对PEO4细胞处理72h可产生与雌激素类似的效果，即促进PEO4细胞增殖和细胞DNA合成，并推进G0／G1期细胞进入S期，提高细胞增殖指数，且其促进增殖作用存在时间－依赖和剂量－依赖关系。结论：对－壬基酚、双酚A和邻苯二甲酸酯二丁酯均能促进雌激素受体阳性卵巢癌细胞株PEO4增殖，提示近几年环境污染加剧可能与女性生殖肿瘤发病率增高有关。     

环境雌激素对卵巢癌细胞PE04凋亡的影响

目的探讨膳食中的环境雌激素大豆异黄酮(genistein,GS)及玉米赤霉烯酮(zearalenone,ZEA)对卵巢癌细胞PEO4凋亡的影响.方法将PEO4细胞在DMEM培养液(含10%小牛血清)中采用开放式单层贴壁培养,开始试验前将培养细胞用磷酸盐缓冲溶液洗涤后改为在无酚红DMEM培养液(含5%CDT-FBS)中继续培养5 d,其目的是耗尽细胞内储存的雌激素.实验设溶剂对照、雌激素对照、抗雌激素对照及2个试验组.观察指标包括亚二倍体细胞的峰高及位置,DNA断裂片段及凋亡小体的形成情况.结果雌激素耗尽能够明显诱导PEO4细胞发生凋亡,在这时候往培养液中分别加入32×10-9mol/L及96×10-9 mol/L的ZEA可抑制细胞的凋亡作用;而分别加入32×10-6mol/L及96×10-6 mol/L GS对细胞处理72 h可加重细胞的凋亡现象.结论 ZEA具有雌激素效应,可模拟雌二醇抑制细胞的凋亡作用;GS具有抗雌激素效应,在较大剂量范围内可促进细胞的凋亡.     

玉米赤霉烯酮和氯化镉对MCF-7细胞增殖的联合作用

目的研究玉米赤霉烯酮(ZEA)和氯化镉(CdCl2)联合作用对MCF-7细胞增殖的影响。方法调整MCF-7细胞密度约为1×10~5/mL,以0(对照)、10~(-8)、10~(-7)、10~(-6)、10~(-5)、10~(-4)、10~(-3)mol/L CdCl_2分别染毒MCF-7细胞24h,以0(对照)、6.25、12.5、25、50、100nmol/L ZEA分别染毒MCF-7细胞24h,采用CCK-8法检测CdCl_2和ZEA对MCF-7细胞增殖的影响,同时进行3×3析因设计研究CdCl_2和ZEA对MCF-7细胞增殖的联合作用。结果 CdCl_2和ZEA分别在10~(-6) mol/L、100nmol/L时促增殖效应均达到最大,相对增殖率分别为112.3%和114.6%,明显高于阴性对照组的100.0%;析因实验结果显示CdCl_2和ZEA对MCF-7细胞增殖的影响表现为相加作用。结论 CdCl_2和ZEA在一定剂量范围内能促进MCF-7细胞增殖,表现为明显的拟雌激素活性,二者联合作用表现为加和效用。     

膳食雌激素影响乳腺癌MCF-7细胞增殖和凋亡的机制探讨

目的:探讨膳食中常见的两种环境类雌激素大豆异黄酮(genistein,GS)、玉米赤霉烯酮(zearalenone,ZEA)影响人乳腺癌细胞MCF-7增殖和凋亡的分子生物学作用机制。方法:MCF-7细胞在DMEM培养液(含10%胎牛血清)中进行常规传代培养,实验前将细胞转移至无酚红DMEM(含5%活性碳葡聚糖苷处理过的FBS)中继续培养5d,收集细胞,PBS洗涤后接种于内置血盖片的六孔板或75ml培养瓶,32×10-9mol/LZEA和75×10-6mol/LGS对细胞分别处理72h,用半定量RT-PCR技术观察GS对核增殖抗原PCNA、bcl-2及baxmRNA表达的影响,并用免疫组化方法对结果进行验证。结果:与溶剂对照组相比,75×10-6mol/LGS对MCF-7细胞处理72h可显著提高baxmRNA表达而抑制bcl-2和PCNAmRNA的表达,随后的免疫组化实验也证实了这一结果;ZEA的作用效应则与GS相反。结论:膳食雌激素GS和ZEA可通过影响细胞增殖和凋亡相关调节基因PCNA、bcl-2和bax表达而调节人乳腺癌细胞MCF-7的增殖和凋亡作用。     

三种增塑剂对乳腺癌细胞株MCF-7增殖的影响

目的　观察对 壬基酚 (NP)、双酚A(BisA)和邻苯二甲酸酯二丁酯 (DBP)对乳腺癌细胞株MCF 7增殖的影响。方法　将MCF 7细胞在达尔克 (DMEM)培养液 (含 10 %小牛血清 )中采用开放式单层贴壁培养 ,开始实验前将培养细胞用磷酸盐缓冲液 (PBS)洗涤后改在无酚红DMEM (含 5 %胎牛血清 )中培养继续 4d以耗尽其内源性雌激素。实验设溶剂对照、雌激素对照、抗雌激素对照及 3种受试物各 4个剂量组 ,采用噻唑蓝 (MTT)法、3 H TdR掺入法及流式细胞术对MCF 7细胞的增殖情况进行分析。结果　与对照组相比 ,NP、BisA和DBP对细胞处理 2 4h ,分别在 96× 10 -7mol/L、96× 10 -7mol/L、96× 10 -6mol/L可促进MCF 7细胞增殖和细胞DNA合成 ,并推进G0 /G1期细胞进入S期 ,提高细胞增殖指数 ;随着培养时间延长至 96h ,3种化合物在较低浓度条件下也表现促进细胞增殖的效果。结论　对 壬基酚、双酚A和邻苯二甲酸酯二丁酯可促进雌激素依赖性乳腺癌细胞MCF 7的增殖 ,可能具有雌激素样作用。     

壬基酚对卵巢癌细胞和蛋白表达的影响

目的　观察环境雌激素化合物壬基酚 (nonylphenol,NP)对卵巢癌细胞 (PEO4 )c -myc和 p5 3mRNA及蛋白表达的影响 ,以探讨NP雌激素活性的分子生物学作用机制。方法　将PEO4细胞在DMEM培养液中进行常规传代培养。采用MTT比色法观察NP对PEO4细胞增殖的影响 ,用逆转录聚合酶链反应 (RT -PCR)技术和免疫组化方法检测NP对c -myc原癌基因和p5 3抑癌基因表达的影响。 结果　与溶剂对照组相比 ,在 (8～ 96 )× 10 -7mol/L浓度范围内 ,NP与 8× 10 -9mol/L雌二醇作用类似可显著促进PEO4细胞增殖 (P <0 0 5 ) ,并表现出良好的剂量 -效应和时间 -效应关系。RT -PCR及免疫组化结果显示 ,32× 10 -7mol/LNP可促进卵巢癌细胞PEO4c -myc和 p5 3mR NA及蛋白表达。结论　NP具有雌激素样生物活性 ,可促进雌激素反应性肿瘤细胞PEO4增殖 ,这一效应主要是通过影响c-mycmRNA和蛋白质的表达而实现的。     

金雀异黄酮对人成骨细胞增殖及分化的影响

目的　观察金雀异黄酮 (GS)对人成骨细胞增殖及分化的影响。方法　在加入受试物前 4天 ,将本实验室所建立的第 4代成人骨膜成骨细胞接种于无酚红高糖DMEM培养液中 (含5 %经活性炭 -葡聚糖苷处理的胎牛血清 ) ,实验设溶剂对照、雌激素 (E2 )对照、抗雌激素它莫西芬 (TAM)对照及三个GS剂量组 ,观察指标包括细胞DNA合成、细胞周期分布、细胞胶原蛋白的合成和碱性磷酸酶 (AKP)活性的测定。结果　 10 - 8mol LE2、10 - 7mol LGS和 10 - 6 mol LGS对人成骨细胞处理 4 8h ,细胞DNA合成量明显增加 ,细胞增殖指数呈上升趋势 ,S期和M期细胞分布比例较溶剂对照组相明显提高 ,细胞胶原蛋白合成及细胞内碱性磷酸酶的活性增加 ;10 - 7mol LTAM可结抗GS及E2对细胞所产生的这些生物学效应。结论　GS可促进人成骨细胞增殖及细胞合成和分泌胶原蛋白 ,并提高成骨细胞AKP活性 ,这些结果提示 ,在雌激素缺乏的条件下 ,GS对成骨细胞来说具有雌激素效应 ,可刺激成骨细胞的增殖及分化作用。由于这些效应可被雌激素受体拮抗剂TAM所抑制 ,故GS的促进骨形成作用可能是通过影响雌激素受体途径而发挥作用的     

三种环境雌激素对卵巢癌PEO4细胞增殖及凋亡相关基因表达的影响

目的　探讨几种常见的环境类雌激素壬基酚 (NP)、双酚A(BisA)和邻苯二甲酸二丁酯 (DBP)对人雌激素受体阳性卵巢癌细胞PEO4增殖和凋亡相关基因PCNA ,bcl 2和baxmRNA及相应蛋白质表达的影响。方法　PEO4细胞在DMEM培养液 (含 1 0 %小牛血清 )中进行常规传代培养 ,实验前将细胞转移至无酚红DMEM(含 5 %活性碳葡聚糖苷处理过的FBS)中继续培养 5d ,收集细胞 ,PBS洗涤后接种于内置血盖片的六孔板或 75ml培养瓶 ,32× 1 0 - 7mol LBisA和NP及 32× 1 0 - 6 mol LDBP对PEO4细胞分别处理 72h ,用半定量RT PCR技术观察其对核增殖抗原PCNA、bcl- 2及baxmRNA表达的影响 ,并用免疫组化方法对结果进行验证。结果　与溶剂对照组相比 ,32× 1 0 - 7mol LNP和BisA对PEO4处理 72h可促进核增殖抗原PCNA和抗凋亡基因bcl 2mRNA表达 ,但对baxmRNA的表达没有影响 ;DBP可促进PCNA的表达 ,但对bcl 2和bax的表达均没有明显的影响。随后进行的免疫组化实验结果显示 ,NP和BisA可促进Bcl 2蛋白的表达 ,并抑制Bax蛋白的表达。结论　对PCNA和bcl 2表达的影响可能是环境类雌激素调节卵巢癌细胞PEO4增殖和凋亡的重要机制之一。     

染料木黄酮对骨形成的促进作用研究

目的:用成年人成骨细胞体外培养的方法,观察染料木黄酮(genistein,GS)对骨形成的影响。方法:将生长状态良好的第三代成骨细胞用PBS洗涤后接种于无酚红高糖DMEM培养液中(含5%经活性碳-葡聚糖苷处理的胎牛血清),实验设二甲基亚砜溶剂对照、雌二醇对照(E2)、抗雌激素它莫西芬对照(TAM)及三个GS剂量组,观察指标包括细胞增殖,碱性磷酸酶活性及细胞骨钙蛋白合成量。结果:与溶剂对照组相比,10-8mol/L E2、10-7mol/L GS和10-6mol/L GS对人成骨细胞处理48h,能够明显促进成骨细胞的增殖作用,使细胞骨钙蛋白合成量显著增加,细胞内碱性磷酸酶活性明显提高;同时,GS可保护因雌激素耗尽所造成的成骨细胞内Ⅰ型胶原蛋白降低。10-7mol/L TAM可拮抗GS对成骨细胞所产生的这些生物学效应。结论:GS具有雌激素效应,可模拟E2而刺激骨形成并保护成骨细胞因雌激素缺乏所造成的细胞内Ⅰ型胶原蛋白降低。由于这一效应可被TAM拮抗,此结果提示,GS的促进骨形成作用是通过与雌激素受体结合产生的。     

染料木黄酮对乳鼠颅骨成骨细胞增殖分化的影响及其与c-jun的关系

目的研究染料木黄酮对成骨细胞活性的影响及其相关机制。方法胰蛋白酶和Ⅱ型胶原酶分步消化法获得乳鼠盖骨成骨细胞,Ⅱ代细胞用于实验。MTT和3H-TdR测定成骨细胞增殖和DNA合成,原位杂交的方法测定c-jun表达。结果成骨细胞培养基中加入(10-5、10-6和10-7mol/L)染料木黄酮或10-9mol/L和10-10mol/L雌激素培养48h和72h后,MTT的吸光度值与对照组相比均明显升高,48h和72h后对照组、染料木黄酮组和雌激素组MTT值分别为0.19、0.15;0.39、0.45、0.46;0.29、0.32、0.37和0.35、0.38;0.50、0.49。3H-TdR掺入量均显著增加,对照组、染料木黄酮组和雌激素组3H-TdR掺入量分别为68.47;101、844、512和1108.8、1204.2。c-jun表达各组差异无显著性。结论染料木黄酮不是通过促进c-jun表达来促进成骨细胞增殖与分化。     

染料木黄酮对人成骨细胞凋亡的影响

目的: 观察染料木黄酮(Gen)对人成骨细胞凋亡的影响。方法: 将体外分离到的人骨膜成骨细胞在高糖DMEM(含10 %小牛血清)中进行纯化扩增至第三代,然后接种于无酚红高糖DMEM培养液中(含10 %经活性碳-葡聚糖苷处理的胎牛血清,CDT-FBS),4 d后用0.25 %的胰蛋白酶消化、收集细胞,用PBS洗涤2次后,用于各项实验。指标包括:流式细胞仪分析细胞凋亡比例,琼脂糖凝胶电泳检测DNA断裂条带,免疫组化观察Gen对Bax、Bcl-2及caspase-3表达的影响。结果: 无雌激素(E2)血清培养可诱导成骨细胞发生凋亡(45.7 %),加入10-8 mol/L E2、10-6 mol/L 和10-5 mol/L Gen对细胞处理48 h,成骨细胞凋亡率分别降低到15.3 %、36.3 %及28.4 %(P<0.05)免疫组化结果表明,同E2类似,Gen可抑制Bax和capsase-3的表达,而促进Bcl-2蛋白的表达。结论: 染料木黄酮可能是通过影响雌激素受体途径而发挥其骨保护作用的。     

两种有机磷酸酯对人成神经细胞瘤细胞生长与钙摄取的影响

目的　探讨具有迟发性神经毒性的有机磷酸酯 (organophosphates,OPs)对人成神经细胞瘤细胞SH SY5Y的毒性作用。方法　采用四甲基偶氮唑蓝 (MTT)比色法测定SH SY5Y细胞活力 ;用培养的SH SY5Y细胞与45CaCl2 和磷酸三邻甲苯酯 (tri o cresylphosphate ,TOCP)或甲胺磷共育后 ,洗脱 ,裂解 ,经液闪仪计数测定细胞对钙的摄取情况。结果　甲胺磷在较低浓度 (7× 10 -7～ 7× 10 -6mol/L)时可刺激SH SY5Y细胞的生长 ,在 7× 10 -7mol/L浓度时细胞的增长比对照增加了 2 8% ,而在高浓度 (7× 10 -4～ 7× 10 -3mol/L)时抑制细胞生长 ,在 7× 10 -3 mol/L时的抑制率为 6 2 % ;但TOCP只在高浓度 (7× 10 -3 mol/L)时才对细胞的生长有抑制作用 (抑制率为 34% )。TOCP在几乎所有的测试浓度下都对SH SY5Y细胞的钙摄取量有影响 :在低浓度 (1× 10 -9～ 1× 10 -7mol/L)时刺激细胞的钙摄取 ,细胞的钙摄取量最高增加 2 4 1% ,但在高浓度 (1× 10 -6～ 1× 10 -4mol/L)时抑制细胞的钙摄取 ,最高的抑制率达 5 5 %。结论　OPs的神经毒性可能涉及阻遏神经细胞生长和干扰细胞钙平衡。     

对硫磷对PEO4卵巢癌细胞凋亡的影响

目的:探讨有机磷农药对硫磷对PEO4卵巢癌细胞凋亡的影响。方法:应用耗尽细胞内雌激素的常规传代培养的PEO4细胞,采用流式细胞仪观察细胞周期分布及其凋亡情况。结果:雌激素耗尽可诱导PEO4细胞发生凋亡。1×10-6mol/L对硫磷处理细胞72小时显著抑制细胞的凋亡作用并可促进细胞由G0/G1期进入S期和G2/M期。结论:有机磷农药污染可能与近年来卵巢癌发病率升高有关。