祛风通络方对阿霉素肾病大鼠肾小球足细胞nephrin mRNA表达的影响

目的：观察阿霉素肾病（AN）大鼠肾小球足细胞nephrin mRNA表达及祛风通络方对其表达的影响。方法：清洁级SD大鼠140只,随机抽取32只作为空白组,余108只建立AN大鼠模型,90只大鼠模型成功后随机分为模型组、祛风组、祛风＋激素组、激素组和苯那组,给予相应干预,电镜检测超微结构变化,第0,3,5,7周应用间接免疫荧光技术、RT-PCR分别检测nephrin蛋白荧光表达分布和nephrinmRNA表达并进行组间比较。结果：模型成功时,透射电镜示AN大鼠肾小球足突呈部分或弥漫性融合。7周时与模型组相比,祛风组和激素组nephrin蛋白的荧光分布呈连续性或斑片状分布,荧光强度明显增强（P〈0.01）;祛风组和激素组nephrin mRNA的表达明显上调（P〈0.01）。结论：Nephrin的表达异常是AN大鼠蛋白尿发生发展的重要分子机制,祛风通络方可上调AN大鼠足细胞nephrin的表达和分布而起保护肾小球滤过屏障的作用。     

祛风通络方对阿霉素肾病大鼠肾小球足细胞 nephrin mRNA表达的影响

目的：观察阿霉素肾病(AN)大鼠肾小球足细胞nephrin mRNA表达及祛风通络方对其表达的影响。方法：清洁级SD大鼠140只,随机抽取32只作为空白组,余108只建立AN大鼠模型,90只大鼠模型成功后随机分为模型组、祛风组、祛风+激素组、激素组和苯那组,给予相应干预,电镜检测超微结构变化,第0,3,5,7周应用间接免疫荧光技术、RT-PCR分别检测nephrin蛋白荧光表达分布和nephrin mRNA表达并进行组间比较。结果：模型成功时,透射电镜示AN大鼠肾小球足突呈部分或弥漫性融合。7周时与模型组相比,祛风组和激素组nephrin蛋白的荧光分布呈连续性或斑片状分布,荧光强度明显增强(P＜0.01);祛风组和激素组nephrin mRNA的表达明显上调(P＜0.01)。结论：Nephrin的表达异常是AN大鼠蛋白尿发生发展的重要分子机制,祛风通络方可上调AN大鼠足细胞nephrin的表达和分布而起保护肾小球滤过屏障的作用。     

祛风通络方对阿霉素肾病大鼠肾小球基底膜HSPG蛋白及mRNA表达的影响

目的 观察阿霉素肾病大鼠肾小球基底膜硫酸肝素蛋白多糖(HSPG)蛋白及其mRNA表达及祛风通络方对其表达的影响.方法 尾静脉注射阿霉素建立阿霉素肾病大鼠模型,并随机分为A(空白对照,n=32)、B(模型,n=18)、C(祛风通络方,n=18)、D(祛风通络方+激素,n=18)、E(激素,n=18)、F(苯那普利,n=18)组,应用间接免疫荧光染色、RT-PCR分别检测各组大鼠肾小球基底膜HSPG的荧光分布和HSPG mRNA表达的变化.结果 造模成功后透射电镜示B组肾小球足突呈部分或弥漫性融合.干预结束后与B组相比,C、E组HSPG的荧光分布呈连续性或斑片状,平均荧光强度明显增强(P<0.01);D、F组HSPG的荧光呈不连续分布或点状分布,平均荧光强度增强(P<0.01).干预结束后与B组相比,各干预组HSPG mRNA的表达均上调(P<0.01),尤以C、F组明显.相关分析显示24 h尿蛋白定量与HSPG蛋白表达呈明显负相关(r=-0.7353,P<0.001).结论 肾小球基底膜HSPG的表达异常和分布改变是阿霉素肾病大鼠蛋白尿发生发展的重要机制,祛风通络方可能通过改变HSPG的表达和分布而达到治疗蛋白尿的目的 .     

祛风通络方对阿霉素肾病大鼠蛋白尿及肾小球滤过膜的影响

目的探讨祛风通络方对阿霉素肾病(AN)大鼠蛋白尿及肾小球滤过膜的影响。方法 56只雄性清洁级SD健康大鼠随机分为空白对照组(A组)和AN模型组,采用一次性尾静脉注射阿霉素(ADR)的方法,建立大鼠AN模型,空白对照组一次性尾静脉注射等量生理盐水,造模成功后再将模型组分为病理组(B组)、祛风通络方组(C组)、强的松组(D组)和贝那普利组(E组)。邻苯三酚红/钼酸盐法测定24 h尿蛋白量;取肾皮质经聚乙烯亚胺(PEI)染色检测大鼠肾小球滤过膜上AS的表达;免疫荧光技术检测Nephrin蛋白表达。结果①模型组大鼠于实验第21天时尿蛋白排泄较正常对照组明显增高(P<0.01),提示造模成功;药物干预后,各药物组大鼠尿蛋白排泄均显著下降,与病理组比较(P<0.01);②祛风通络方组比模型组大鼠肾小球滤过膜上阴离子位点、Nephrin蛋白表达明显上调(P<0.01)。结论祛风通络方能显著降低阿霉素肾病大鼠24 h尿蛋白定量,改善症状,上调肾小球滤过膜上AS及Nephrin蛋白表达。     

祛风通络方对阿霉素诱导的肾病大鼠足细胞Synaptopodin、α-Actinin-4蛋白的影响

目的 探讨祛风通络方对阿霉素肾病大鼠足细胞Synaptopodin和α-Actinin-4蛋白的作用。方法 采用一次性尾静脉注射阿霉素(adriamycin,ADR)的方法,建立阿霉素肾病大鼠模型。3周后造模成功,进行24 h尿蛋白定量及血清生化项目检测。此后随机分为空白对照组(A组,n=12),模型组(B组,n=8),祛风通络方小、中、大剂量组(分别为C、D、E组,每组n=8)和阳性对照组(F组,n=8)。从第4周起,A组和B组给生理盐水,C、D、E组分别给祛风通络方1.0,2.1,4.2 g/ml,F组给泼尼松25 mg/kg。各组均灌胃给药,10 ml/kg,1次/d,连续28 d。期间进行24 h尿蛋白定量、血清生化指标检测,实验结束时用real-time PCR法及Western blot法检测足细胞骨架蛋白Synaptopodin mRNA、α-Actinin-4 mRNA及Synaptopodin、α-Actinin-4蛋白表达。结果 1各干预组均可有效减少尿蛋白,升高血浆白蛋白、降低总胆固醇的含量。2阿霉素肾病大鼠中α-Actinin-4 mRNA及蛋白表达升高,Synaptopodin mRNA及白表达下降。经祛风通络方干预后,各组Synaptopodin mRNA及蛋白表达均上调,α-Actinin-4 mRNA及蛋白表达下调。结论 祛风通络方对阿霉素肾病大鼠的治疗作用伴随着改变足细胞骨架蛋白Synaptopodin和α-Actinin-4表达的改变而实现。     

祛风通络方对阿霉素大鼠肾小球内皮细胞VEGF及其受体FLK-1表达的影响

目的 研究祛风通络方对阿霉素模型大鼠肾小球内皮细胞VEGF及其受体FLK-1表达的影响.方法 130只SD大鼠抽出30只作为空白对照组(A组),余下大鼠采用阿霉素给予尾静脉一次性注射构建大鼠肾病模型,造模成功后,随机分为模型组(B组,n=18)、祛风通络方组(C组,n=18),祛激组(祛风通络方和激素共用组,D组,n=18),激素组(E组,n=18),苯那普利组(F组,n=18),构建肾小球内皮细胞阿霉素模型,给予相应大鼠血清治疗,邻苯三酚红/钼酸盐法检测24h尿蛋白定量;全自动生化分析仪检测血清白蛋白(ALB)、血脂(TG)、肾功能BUN、Cr;Western Bloting及RT-PCR检测肾小球内皮细胞VEGF及其受体FLK-1的表达.结果 C、E组能升高大鼠血清ALB的含量,降低血清TCH的含量,与B组比较,差异均有统计学意义(P＜0.01);肾小球内皮细胞经阿霉素损伤后,B组较A组VEGF、FLK-1蛋白及mRNA的表达均升高,差异有统计学意义(P＜0.01),各组加入相应血清冻干粉后,C、E组VEGF、FLK-1蛋白表达均下调,与B组比较,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 祛风通络方能够下调肾小球内皮细胞VEGF及其受体FLK-1的表达,改善阿霉素大鼠肾病模型的肾功能.     

祛风通络方对肾小球系膜细胞间隙连接蛋白36及基因表达的影响

目的 研究间隙连接蛋白36(Cx36)及其基因在肾小球系膜细胞（MCs）的表达,观察祛风通络方的干预作用,从而进一步探讨祛风通络方抑制肾小球MCs增殖的作用机制。方法 应用血清药理学方法,制备贝那普利药物血清和祛风通络药物血清,体外培养肾小球MCs,并将其分为正常对照、脂多糖(LPS)、贝那普利治疗和祛风通络方治疗组。分别采用激光扫描共聚焦显微镜、Western blot、免疫组化及实时定量PCR检测各组肾小球系膜细胞Cx36蛋白及基因的表达变化。结果 与对照组比较,脂多糖组肾小球MCs Cx36表达明显增强（P<0.01）;与脂多糖组比较,两治疗组Cx36表达均减弱（P<0.01或P<0.05）。各组肾小球MCs Cx36基因表达与蛋白表达相似。结论 Cx36及基因在脂多糖诱导的肾小球MCs中有明显表达,祛风通络方抑制肾小球系膜细胞增殖的作用可能与其调节Cx36及基因表达有关。     

基于玄府理论的固本通络方对IgA肾病大鼠Podocin mRNA和α-actinin-4 mRNA表达的影响

目的:探析基于玄府理论的固本通络方对IgA肾病大鼠Podocin mRNA和α-actinin-4 mRNA表达的调节及对IgA肾病蛋白尿的治疗作用。方法:将80只SD大鼠随机分为正常组、模型组、中药组和科素亚组,采用牛血清清蛋白+四氯化碳+蓖麻油+脂多糖的方法建立IgA肾病大鼠模型。分别于造模结束后、治疗2周、治疗4周后检测各组大鼠24 h尿蛋白定量、血肌酐、尿素氮水平。治疗2周和4周时,采用光镜、免疫荧光法观察肾小球形态学变化;PCR法检测Prodocin、α-actinin-4 mRNA表达量。结果:治疗前,正常组24 h尿蛋白定量明显少于模型组,差异具有统计学意义(P<0.05)。模型组、中药组及科素亚组肾脏病理示肾小球系膜增生,基底膜增厚,系膜区IgA荧光强度极高。经治疗,与模型组比较,中药组及科素亚组在治疗2周、4周后24 h尿蛋白定量明显下降,差异具有统计学意义(P<0.05);中药组在治疗2周、治疗4周后与科素亚组比较24 h尿蛋白定量均减少,差异具有统计学意义(P<0.05)。与模型组比较,治疗后中药组和科素亚组Podocin mRNA含量明显升高,α-actinin-4 mRNA含量均明显降低,差异具有统计学意义(P<0.05);治疗4周与治疗2周比较,科素亚组Podocin含量明显升高,中药组α-actinin-4 mRNA含量均明显降低,差异具有统计学意义(P<0.01);治疗4周后中药组α-actinin-4 mRNA含量均明显低于科素亚组,差异具有统计学意义(P<0.05)。中药组及科素亚组肾小球病变较治疗前损伤程度轻,荧光强度明显减低。结论:固本通络方可以减轻IgA肾病大鼠蛋白尿与调节足细胞Podocin和α-actinin-4表达有关。     

祛风通络方对肾小球系膜细胞周期蛋白表达的影响

目的通过不同检测方法观察祛风通络方对肾小球系膜细胞周期调节蛋白表达的影响,进一步探讨祛风通络方抑制肾小
球系膜细胞增殖的作用机制。方法以体外培养肾小球系膜细胞为研究对象,应用血清药理学方法,分别采用激光扫描共聚焦显
微镜及免疫组化法检测各组大鼠肾小球系膜细胞周期蛋白的表达变化。结果与正常组比较,LPS组肾小球系膜细胞周期蛋白
CyclinD1、CDK2、P21表达明显增强（P<0.01）,P27蛋白表达明显减弱（P<0.01）;经过药物干预治疗,肾小球系膜细胞周期蛋白
Cyclin D1、CDK2、P21的表达均有不同程度减弱（P<0.05或P<0.01）,而P27蛋白表达明显增强（P<0.01）,且祛风通络方对
Cyclin D1、P21和P27蛋白表达的调节明显优于贝那普利（P<0.05或P<0.01）。结论祛风通络方抑制肾小球系膜细胞增殖的作
用机制可能与其下调细胞周期蛋白Cyclin D1、CDK2、P21和上调P27蛋白的表达有密切关系。
     

祛风通络方对大鼠系膜细胞增殖及转化生长因子β1和白细胞介素6mRNA表达的影响

目的：观察祛风通络方对脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）诱导的大鼠肾小球系膜细胞（mesangial cell，MC）增殖及其分泌的转化生长因子β1（transforming growth factor—betal，TGF—β1）和白细胞介素6（interleukin-6，IL-6）mRNA表达的影响。方法：采用血清药理学方法，体外培养大鼠肾小球系膜细胞，分为正常对照组、模型组、蒙诺（福辛普利钠）组和祛风通络方组。并采用甲基噻唑基四唑（methyl thiazolyl tetrazolium，MTT）法检测大鼠MC增殖情况，逆转录聚合酶链反应法检测TGF—β1和IL-6mRNA的表达。结果：与正常对照组比较，模型组大鼠肾小球系膜细胞增殖升高（P〈0．05）；与模型组比较，祛风通络方组大鼠肾小球系膜细胞增殖受到抑制（P〈0．05），且祛风通络方作用优于蒙诺（P〈0．05）。模型组系膜细胞TGF-β1mRNA表达高于正常对照组（P〈0．01）；祛风通络方组和蒙诺组系膜细胞TGF—β1mRNA表达低于模型组（P〈0．01）；祛风通络方组与蒙诺组比较，TGF—β1mRNA的表达降低（P〈0．01）。LPS刺激后可提高大鼠系膜细胞内IL-6mRNA的表达，与正常对照组比较，模型组IL-6mRNA表达上升，差异有统计学意义（P〈0．01）；祛风通络方组、蒙诺组与模型组比较，IL-6mRNA表达下降（P〈0．01）；祛风通络方降低IL-6mRNA表达的作用亦优于阳性对照药蒙诺（P〈0．01）。结论：祛风通络方对大鼠MC增殖及其TGF—β1和IL-6mRNA表达均有明显的抑制作用。     

糖尿病大鼠肾组织Nephrin mRNA与Podocin mRNA表达的研究

目的观察糖尿病大鼠肾组织中nephrinmRNA、podocinmRNA蛋白表达与分布，探讨nephrin和podocin分子在糖尿病肾病蛋白尿中的可能作用。方法采用健康雄性Sprague—Dawley大鼠随机分为正常对照组、糖尿病组，第4、8周任取6只大鼠，收集血、尿标本测定生化指标。大鼠肾组织分别作组织学、超微结构、应用逆转录一聚合酶链反应（RT—PCR）观察nephrinmRNA、podocinmRNA在肾组织中的表达。结果在4周、8周，糖尿病组血糖、肌酐清除率、尿白蛋白排泄率较正常对照组均有不同程度的升高。糖尿病组大鼠肾组织nephrinmRNA和podocinmRNA和蛋白表达较正常对照组明显降低。尿白蛋白排泄率与nephrin、podocin表达量呈负相关，nephrin与podocin表达量呈正相关。结论糖尿病大鼠肾小球上皮细胞足突nephrin、podocin蛋白表达的减少可能是糖尿病肾病蛋白尿发生的机制之一。     

阿霉素肾病大鼠podocin mRNA和蛋白的表达

目的观察阿霉素肾病大鼠肾小球上皮细胞足突蛋白podocin mRNA和蛋白的表达。方法肾病组予阿霉素5mg/kg尾静脉注射一次,正常对照组予等量生理盐水尾静脉注射,注射后2周24h尿蛋白定量>30mg为肾病模型成立。观察4周后留24h尿行蛋白定量及血生化检查,并应用半定量RT-PCR和印迹法(Western blotting)测定podocinmRNA和蛋白质的表达。结果正常对照组大鼠podocin蛋白表达的相对量是5·26±1·19,而肾病组大鼠podocin蛋白基本不表达;正常对照组、肾病组podocin分子mRNA的相对值分别为1·06±0·19、1·96±0·98,肾病组大鼠podocinmRNA的表达与正常对照组相比显著上调(P<0·05)。结论阿霉素肾病大鼠蛋白尿的产生可能与podocin蛋白表达的减少有关。     

足细胞损伤在多柔比星肾损害大鼠病程中变化及意义

目的 通过检测肾组织WT-1的表达变化来动态观察多柔比星肾纤维化大鼠足细胞的数目的变化,探讨其与蛋白尿和肾纤维化发展的时效量效关系.方法 36只SD大鼠随机分为模型组和对照组,尾静脉注射多柔比星建立多柔比星肾纤维化大鼠模型,首次注射多柔比星起,第4、7、10、13周每组处死模型组大鼠5只和对照组4只,留取肾脏标本,应用光镜、电镜观察肾组织的病理改变,BCA法检测24 h尿蛋白排泄率,免疫组化和Western blot的半定量方法检测大鼠肾皮质中WT-1蛋白的表达.结果 第4周开始,肾纤维化组大鼠蛋白尿显著高于对照组(P＜0.01),肾脏病理在第7周时出现局灶肾小球硬化,第10周时呈典型肾小球硬化,第13周时出现广泛的肾小球硬化和小管间质纤维化.随着模型组大鼠肾组织病理改变逐步加重及尿蛋白量逐渐增加,肾皮质WT-1蛋白的表达量逐渐减少,第4、7、10、13周分别较对照组下降24%、42%、56%、 70%.结论 足细胞相对密度及相对数量的减少与蛋白尿的严重程度成正比,并与肾纤维化的发展呈时间依赖性.     

阿霉素肾病大鼠podocin mRNA的表达及全反式维甲酸对其表达的影响

目的 观察阿霉素诱导的肾病模型大鼠肾脏podocin mRNA的表达特点和全反式维甲酸(ATRA)对其表达的影响,探讨在蛋白尿发生发展中podocin的作用以及ATRA治疗肾病的可能机制.方法 大鼠随机分为3组(对照组、模型组、干预组),建立阿霉素肾病大鼠模型,于阿霉素注射后第2天干预组每天给予20 mg/kg ATRA灌胃,每周检测24 h尿蛋白定量,4周后处死大鼠,检测血清白蛋白、胆固醇、甘油三酯,RT-PCR检测podocin mRNA的表达.结果 ①模型组、干预组大鼠与对照组相比,pdocin mRNA表达明显增加(P＜0.01),干预组podocin mRNA较模型组有所降低(P＜0.01).②阿霉素诱导的大鼠于注射阿霉素后24 h尿蛋白开始逐渐升高,第28天达高峰,干预组与模型组相比大鼠尿蛋白明显减少,第28天时降低约57％,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 阿霉素肾病大鼠肾皮质podocin mRNA的表达发生了显著变化;ATRA可减少肾病大鼠尿蛋白量,同时减少肾皮质podocin mRNA的表达.     

温阳活血方上调慢性马兜铃酸肾病大鼠肾组织血管生成素1 mRNA表达

目的：观察温阳活血方对慢性马兜铃酸肾病大鼠肾组织血管生成素（angiopoietin,Ang）表达的影响,并探讨其保护作用机制。方法：将28只雄性SD大鼠随机分为正常对照组、模型组和温阳活血方组。模型组大鼠予关木通水煎液10ml/（kg.d）灌胃,温阳活血方组于模型组基础上,再予温阳活血方30g/（kg.d）灌胃。20周后,采用实时逆转录聚合酶链式反应方法检测3组大鼠肾组织中Ang-l和Ang-2mRNA的表达。结果：与正常对照组比较,模型组大鼠肾组织Ang-1mRNA表达明显减少（P〈0.01）,Ang-2mRNA表达明显升高（P〈0.01）;与模型组大鼠比较,温阳活血方组大鼠肾组织Ang-1mRNA表达升高（P〈0.01）,Ang-2mRNA表达下降,但差异无统计学意义（P〉0.05）;肾脏病理显示温阳活血方组肾损害较模型组明显减轻。结论：温阳活血方通过上调Ang-1mRNA的表达发挥对慢性马兜铃酸肾病大鼠肾脏保护作用。     

槐杞黄颗粒对阿霉素肾病大鼠肾组织nephrin和podocin表达的影响

目的：通过观察槐杞黄颗粒对阿霉素肾病大鼠肾组织中nephrin与podocin基因及蛋白表达的影响,探讨槐杞黄颗粒治疗肾病综合征的作用机制。方法：将Sprague-Dawley大鼠20只随机分为5组（即正常对照组、模型组、激素组、槐杞黄组和槐杞黄＋激素组）,除正常组大鼠外,各组大鼠尾静脉一次性注射阿霉素造模。分别在建模后第7、14、21及28天收集24h尿液,检测大鼠24h尿中的蛋白含量;第29天处死所有大鼠,取肾脏组织,光学显微镜和电子显微镜下观察大鼠肾脏病理改变,实时荧光定量聚合酶链式反应法检测肾组织nephrin与podocin mRNA的表达,蛋白质印迹法检测肾组织nephrin与podocin蛋白的表达。结果：与正常对照组比较,从建模第14天开始模型组大鼠24h尿液中蛋白量增多（P=0.005）,并随造模时间延长逐渐增加（P=0.015,P=0.012）;从第14天开始,槐杞黄组与正常对照组相比,其尿蛋白减少不明显（P〈0.05）;第21天时,激素组与正常对照组相比,其尿蛋白明显增加（P=0.045）。光学显微镜下发现：模型组肾间质有灶性炎症细胞浸润,伴少量纤维组织增生;药物治疗组炎症细胞浸润较少。电子显微镜下发现：模型组肾小球足突大部分融合、消失,或出现部分微绒毛;槐杞黄组基底膜基本光滑均匀,足突融合明显减轻;激素组及槐杞黄＋激素组足突清晰,甚至接近正常对照组。与正常对照组相比,模型组肾组织中nephrin、podocin mRNA及蛋白表达均明显减少（P〈0.05）;与模型组比较,药物治疗组nephrin、podocin mRNA及蛋白表达均明显增加（P〈0.05）。24h尿蛋白量与nephrin mRNA以及nephrin和podocin蛋白的表达呈负相关。结论：槐杞黄颗粒可通过上调裂孔隔膜上的nephrin及podocin的表达维持足细胞裂孔隔膜的完整性,减轻肾小球滤过屏障的损伤,以此降低尿蛋白漏出。