复发尖锐湿疣患者感染人乳头瘤病毒基因型的荧光偏振检测

目的　检测复发尖锐湿疣患者的人乳头瘤病毒 (HPV)基因型 ,以探讨尖锐湿疣复发的机理 ,并指导治疗。方法　以蛋白酶K消化法提取 81例复发尖锐湿疣组织临床样本DNA ,以各型HPVDNA通用引物行PCR扩增 ,将荧光偏振检测技术与模板指导的末端延伸反应 (TDI FP)结合 ,应用HPV 6B ,11,16 ,18各型特异探针杂交延伸反应对扩增产物进行HPV分型 ,并分别以含HPV 6B ,11,16 ,18L1质粒的阳性及不含待测靶基因的同源质粒的阴性标准品为参照。结果　 81例尖锐湿疣组织块中HPV检出率 10 0 % ,其中两型混合感染 2 9例 ,占 36 .6 % ,三型混合感染 7例 ,占 8.6 %。结论　本组 81例复发尖锐湿疣患者的HPV的多重感染率高达 4 5 % ,可能与该病的反复复发有一定相关性。     

176例男性尿道口细胞中HPV感染基因型分布的研究

目的 探讨苏州市男性生殖器尖锐湿疣患者尿道口细胞中人乳头瘤病毒(HPV)不同基因型别感染情况及其临床意义.方法 从176例男性生殖器尖锐湿疣患者尿道口细胞标本中提取23种HPV DNA,采用基因扩增结合基因芯片杂交技术对其进行HPV基因型别的检测,并对受检者进行基因型别的分析.结果 176例男性受检者中检出HPV感染者110例,总阳性率为62.50％(110/176).其中单一型别的HPV感染者72例,占40.91％(72/176),单一型别的感染中,HPV6型感染者26例,阳性率为14.77％(26/176),是单一型别最主要的感染类型,其次分别为HPV11型24例、16型8例、58型3例、18型2例、56型2例,感染率分别为13.64％ (24/176)、4.55％(8/176)、1.71％(3/176)、1.14％ (2/176).混合型HPV感染者38例,占21.59％(38/176),其中二型混合感染者25例,占混合型感染的65.79％(25/38),三型感染者9例,占混合型感染的23.68％(9/38).结论 HP,V 6型、11型、16型、18型、58型和56型是苏州市男性生殖器尖锐湿疣患者尿道口细胞感染的主要基因型别,基因扩增结合基因芯片检测技术是一种比较适合临床对男性进行HPV分型检测的敏感性高、特异性强的诊断方法,尤其适合开展男性尿道口细胞中HPV感染的分子流行病学的研究.     

我院妇女宫颈人乳头瘤病毒普查结果分析

目的 对许昌市中心医院普查的2500例妇女宫颈人乳头瘤病毒(HPV)进行分析.方法 选取2009-2011年间参与检查的2500例妇女为对象,对受检者进行宫颈刮片检查并对结果进行HPV的DNA检测.结果 在普查的2500例受检者中检测出HPV感染者共1212例,占普查总人数的48.48％；在检出感染者中,高危型HPV者911例,占HPV感染总人数的75.17％:低危型HPV感染者301例,占总感染人数的24.83％.单发感染占61.58％,多发感染占38.42％.结论 在这次普查结果中发现HPV-16、58、56、18、51的检测阳性率明显多于其他、这与目前外界报道研究结果相符合；广大妇女应定时的进行HPV的测定,以及时纠正宫颈病变和预防宫颈癌的发生.     

基因芯片对外阴尖锐湿疣患者宫颈脱落细胞中HPV亚型的检测

目的探讨外阴尖锐湿疣（CA）患者宫颈人乳头瘤病毒（HPV）感染亚型状况，为临床尖锐湿疣诊断及宫颈癌的防治提供实验依据。方法采用基因芯片方法检测77例CA患者和同期无外阴CA的64例对照宫颈脱落细胞中HPV—DNA亚型（包括5种低危型和18种高危型）。结果77例CA患者标本中检出HPV阳性64例，阳性检出率为84．4％，高于对照组的18．75％（P〈0．01），共检测出12种HPV基因型别，其中低危型（HPV6、11、43、44）感染21例，占32．8％；高危型（HPV16、18、31、33、45、56、58、73）感染30例，占46．9％；高低危同时感染13例，占20．3％。结论基因芯片是一种敏感性高，特异性好，适合临床HPV分型检测的方法。外阴CA患者宫颈HPV感染较为普遍，且高危型感染占有相当大的比例，因此对外阴CA患者在治疗疣体同时需进行HPV-DNA检测，必要时需进行相应治疗，以期较低宫颈癌的发病风险。     

1763例妊娠期女性宫颈HPV感染情况分析

目的了解妊娠期女性宫颈人乳头瘤病毒(HPV)感染情况和基因分型的分布情况。方法采用HPV分型基因芯片检测系统对2014年11月至2017年8月在该院门诊就诊的1 763例孕妇进行HPV基因分型检测,分析妊娠期HPV的感染率及分型的分布特点。结果 1 763例孕妇中检出HPV感染者489例,阳性率为27.74%,其中HPV高危亚型411例,占阳性感染者的84.05%;单纯低危亚型45例,占阳性感染者的9.20%;高低混合感染33例,占阳性感染的6.75%。感染率较高的高危型是HPV58、52、16、53,感染率较高的低危型是HPV6和HPV54。双重及双重以上亚型感染者84例,占感染者的17.18%。结论妊娠期女性HPV高危型与单一型感染率较高。     

玉林437例高危型人乳头瘤病毒感染与宫颈上皮内瘤变的分析

目的 调查玉林地区妇女生殖道高危型人乳头瘤病毒(human papilloma virus,HPV)感染与宫颈上皮内瘤病变(cervical intraepithelial neoplasia,CIN)的关系. 方法 应用导流杂交基因芯片技术(HybriMax),对妇科门诊就诊的3 317例有性生活史的妇女,采集宫颈脱落细胞进行HPV分型检测,对检查HPV高危型别阳性者进行宫颈活组织检查. 结果 自2014年7月至2015年6月期间,共检测我院就诊病例3 317例,检出高危型HPV感染者694例,阳性率为20.92％.对437例进行宫颈活组织检查,CIN 26例,占5.95％ (26/437),其中CINⅡ～Ⅲ12例,占2.74％ (12/437). 结论 玉林地区妇女高危型HPV感染率及高危型HPV感染者宫颈病变检出率均较高,本地区妇女宫颈上皮内瘤病变常见的高危型HPV类型为HPV16、52、58、18、33.     

1827例女性宫颈细胞HPV感染基因型分析

目的探讨苏州地区女性宫颈细胞中23种人乳头瘤病毒(HPV)感染的基因型分布情况及其临床意义。方法采用基因扩增结合基因芯片技术对1827例女性宫颈细胞标本进行23种HPV基因型别的检测,并对其受检者进行相关资料分析。结果 1827例中检出HPV感染者611例,总的HPV感染率为33.44%,其中1种型别感染的阳性检出率为22.44%;1种型别感染中HPV16型为114例,其阳性检出率为6.24%,是最主要的感染型别;其次HPV58型为48例,其阳性检出率为2.63%;多重HPV感染201例,其阳性检出率为11.00%;其中多重HPV16型68例,占多重感染的33.83%,是多重感染的主要型别,其次是多重HPV11型32例,占多重感染的15.92%。结论 HPV16型、58型1种型别及16型和11型多重型别是感染苏州地区女性宫颈细胞感染的主要基因型别,基因扩增结合基因芯片技术一次可检测23种HPV基因型别,特异性强,敏感性高,可应用于宫颈细胞标本HPV感染的检测。     

人乳头瘤病毒线性杂交分型技术的建立及评价

目的建立人乳头瘤病毒（Humanpa pillomavirus，HPV）线性探针反向杂交（line probe assay，LiPA）基因分型技术，通过基因测序技术对LiPA分型检测的效果进行评价。方法利用基因工具软件比对HPVL1基因，设计HPV型别的基因探针，手工将探针点样于条形尼龙膜上，再进行LiPA杂交分型。LiPA检测的样本结果与H1）v基因测序的结果进行比较，以评价IjPA检测的效果。结果74例利用LiPA成功地作出了基因分型，其中单独一型HPV感染为40例，涉及13种不同基因型HPV，最常见的型别为HPV16，占单独感染的37．5％（15／40）；另34例为不同型别HPV混合感染，二、三重感染占主导地位，同时也检测出其它多重感染。6例HPV阳性的标本应用LiPA未能作出基因分型，DNA序列分析显示这6例分别为HPV83、84、53、59感染，这几种型别不包括在LiPA所标记的探针内。ⅡPA检测与基因测序结果分型的符合率高达90．9％（20／22），可以检测常见的高危型和导致性传播疾病的HPV型别，结果可通过肉眼直接判读。结论HPVLiPA分型技术具有较高的敏感性和特异性，与基因测序的结果符合率高，具有临床推广使用潜力。     

不同引物介导的聚合酶链反应对人乳头瘤病毒的快速检测与分型

目的 比较通用引物、型特异性引物在检测人乳头瘤病毒（HPV）DNA中的应用。方法 104例尖锐湿疣组织中提取DNA后分别用HPV6b、11、16、18型特异性引物及通用引物MY09／11、GP5^＋／6^＋经聚合酶链反应（PCR）进行扩增。部分标本采用限制性内切酶Pst I来确定HPV11型。结果 GP5^＋／6^＋的检出率高于MY09／11，但差异无显著性（χ^2=3．78，P〉0．05）。GP5^＋／6^＋检出微量HPV DNA的敏感度高于MY09／11。型特异性引物检测HPV感染优于通用引物MY09／11结合酶切分型。结论 型特异性引物检出HPV11单一型感染显著多于HPV6b型，且发现HPV6b、11型同时感染有逐年增高之趋势。GP5^＋／6^＋引物结合型特异性引物可为临床上检测尖锐湿疣HPV型别提供方便易行的选择。     

FQ—PCR检测HPV基因型的临床应用分析

目的了解人乳头瘤病毒感染患者HPV6,11型和HPV16,18型的分布。探讨HPV—DNA分型检测的临床应用价值。方法采用荧光定量聚合酶链反应（FQ—PCR）方法检测1567例HPV感染者疣体组织或分泌物中的HPV6,11型和HPV16,18型。结果男女性均可感染HPV6,11和HPV16,18型,男性感染者以HPV6,11型为主,感染率为27．68％（157／567）。女性1000人次中,确诊感染HPV有659人,HPV阳性320人次,检出率为32％,其中低危型208例,即HPV6,11型阳性率为31．56％;高危型112例,即HPVl6,18型为16．99％。结论FQ—PCR具有灵敏度高、特异性强、简捷方便的特点,适于临床推广应用。HPVDNA分型检测技术可以快速区分高危型及低危型HPV感染,有助于对尖锐湿疣的复发和宫颈癌变作出可能性预测。     

Detection of human papillomavirus DNA by PCR/microfluorometry for screening of cervical cancer

BACKGROUND: Cervical cancer screening is conducted by a cytological Papanicolaou (Pap) test. For screening, it is becoming increasingly important to introduce a more objective result, based on human papillomavirus (HPV) DNA test. We describe here a practical method allowing the mass detection of HPV-DNA by PCR followed by fluorogenic DNA intercalation. METHODS: Samples used were cervical scrapes or biopsy specimens obtained from women who had undergone cytological testing for cervical cancer. Crude DNAs were extracted by a simplified proteinase K-boil method. Common and type-specific primers were newly designed for major types of high-risk HPVs. A fluorogenic DNA intercalator, SYBR Green I was directly added to the specific PCR products. The resultant fluorescence was measured by a conventional fluorometric microplate reader. RESULTS: The proposed PCR/microfluorometry (MFL) allowed a simple, rapid and economical detection of HPV-DNA without any use of labeling primers or probes. HPV-DNAs were found in 48.2% (123/255) of the cervical scrapes. The detection rate of HPV in cervical cancer biopsy specimen was 92.4% (61/66). CONCLUSIONS: PCR/MFL detection of HPV-DNA, followed by combined type-specific PCR, is expected to be an extremely useful tool in cervical cancer screening.     

人乳头瘤病毒PCR产物酶标-微孔板杂交分型

目的建立聚合酶链反应（ＰＣＲ）产物直接酶标记微孔板反向分子杂交法用于人乳头瘤病毒（ＨＰＶ）型别鉴定。方法利用ＨＰＶ通用引物介导ＰＣＲ（ＧＰＰＣＲ）扩增靶ＤＮＡ，然后对产物直接标记辣根过氧化物酶复合物（ＨＲＰＰＥＩＱＩ），与预先包被在微孔板上的ＨＰＶ寡核苷酸探针杂交后酶显色法检测。结果ＨＰＶ各型之间无交叉杂交；杂交灵敏度可达１３～７６个病毒ＤＮＡ拷贝，比ＰＣＲ琼脂糖凝胶电泳检测高１０倍；该法重复性好，阳性孔批内ＣＶ为６．３４％，批间ＣＶ为１０．５３％，阴性孔批内ＣＶ为１％，批间ＣＶ为５．７９％；而且杂交影响因素较少。结论该法特异性强、灵敏度高、操作简便，无放射性和ＥＢ染料污染，杂交时间短、仪器读取结果，便于大量常规临床样本定性或定量检测。     

Sandwich hybridization in solution: a rapid method to screen HPV 16 DNA in cervical scrapes

A solution hybridization method is introduced as a rapid diagnostic method for demonstration of papillomavirus DNA in cervical scrapes. 32P-Labelled detector probe and the biotinylated capture probes were hybridized with DNA of the specimen after pretreatment by boiling in alkaline SDS. After 4 h of hybridization the hybrids were collected onto avidin coated beads and measured. The sensitivity of the method was 1-5 x 10(5) HPV 16 DNA molecules. Cervical carcinoma cell lines CaSki and SiHa were informative as to the sensitivity of the solution hybridization and the in situ hybridization methods. CaSki cells containing about 700 HPV 16 DNA copies per cell were positive by both methods. SiHa cells with one HPV 16 DNA copy per cell were positive by the sandwich assay but remained negative in the in situ test. A series of 126 cervical scrapes collected from consecutive patients participating in a follow-up study for cervical HPV infection were tested for HPV 16 DNA by both methods. The detection rate of the sandwich test was 19/126 (15%) and that of the in situ method 21/126 (17%) yielding 26 diagnoses altogether. Twelve of these were obtained by one method only. The results obtained by studying the cervical cell lines and repeated specimens taken from constantly HPV 16 positive patients suggested that the two methods can measure different types of infections and thus complement each other in the diagnosis of cervical HPV infections.     

多重PCR法和HPV分型基因芯片法在高危型人乳头瘤病毒感染检测中的应用

目的评价高危型人乳头瘤病毒（HPV）多重核酸扩增荧光检测法和HPV分型基因芯片检测法在HPV感染女性患者标本基因分型的临床应用效果。方法应用13种高危型HPV多重PCR荧光检测法对在深圳市人民医院进行宫颈癌筛查的653例疑似HPV感染女患者的宫颈细胞样本进行检测,并与HPV分型基因芯片检测法的检测结果进行比较,2种方法检测13种高危型HPV不一致的样本经序列分析方法进一步验证。结果13种高危型HPV多重PCR荧光检测法检测HPV阳性样本,阳性检出率为21．5％（140／653）;用HPV分型基因芯片检测法验证,与13种高危型HPV多重PCR荧光检测法一致的阳性样本占20．4％（133／653）,总一致率为98．2％。2种方法的检测结果具有高度一致性（kappa值一o．945）;用HPV分型基因芯片检测法检出：HPV单一型别感染占59．4％（79／133）,主要的高危HPV型别为HPV16、52、39、68、33和59型,6种高危型占总数的87．3％（69／79）,其中HPV16和HPV52为主要感染,占44．9％。结论高危型HPV多重PCR荧光检测法和HPV分型基因芯片检测法在13种高危型HPV的检结果具有高度一致性;多重PCR荧光检测法覆盖主要的13种高危型HPV,分型基因芯片检测法可进行具体的单一型别分型。2种检测方法的联合应用,对宫颈癌筛查和预防具有较高的临床应用价值,同时可为HPV分子流行病学和HPV疫苗的应用研究提供依据。     

The use of real-time PCR and fluorogenic probes for rapid and accurate genotyping of newborn mice

Real-time PCR and fluorogenic probes were combined in a simple, rapid and sensitive method to genotype murine breeding stocks and their progeny for a point mutation. DNA from tail biopsies of newborn mice was mixed with amplification primers and fluorogenic hybridization probes in a PCR mixture. The primers were designed to amplify a region of the Fas-Ligand gene including the site for the gld natural point mutation. The fluorogenic hybridization probes overlaid this target sequence and were used to detect amplification of the PCR fragment as well as determine the presence of the point mutation using fluorescence resonance energy transfer (FRET). Both mutated and wild-type forms of the gene fragment were amplified as detected with real-time PCR. Melting curve profiles completed on each amplified sample revealed the genotype for each mouse. These genotypes were confirmed by sequencing the amplified fragments. These results suggest real-time spectrofluorometric PCR techniques incorporating FRET-based hybridization probes may be used for rapid, sensitive, inexpensive and reliable genotyping.     

A direct comparison of methods proposed for use in widespread screening of human papillomavirus infections.

We obtained cervical swabs from 397 women participating in a human papillomavirus (HPV) prevalence study. Samples were assayed for HPV infection using ViraPap expanded cocktail (detecting HPV types 6, 11, 16, 18, 31, 33, 35, 42, 43, 44, 45, 51, 52 and 56), ViraType and PCR amplifications. Consensus primers from the L1 region were used with generic and type-specific oligonucleotide probes. Additionally, the generic amplifications were analysed with a novel restriction digest scheme. Samples positive by these methods were confirmed by PCR amplification using primers from the E5 region specific for HPV types 6, 16 and 18. The presence of human DNA in the samples was verified with amplification of the human KM-19 haplotyping primers. Our results confirm that the PCR reporter oligomer hybridization method is more sensitive than ViraPap/ViraType, but encompasses a narrower range of HPV types. This is particularly true of the higher number types in the expanded cocktail. The narrow range seems to occur as the result of the reporter oligomer used in hybridization, rather than the consensus amplimer pair used. Amplification of a broader range of HPVs is seen on gels or using the restriction digest as confirmation of HPV infection. Both ViraPap and PCR methods of detection gave about a 10% rate of uninterpretable results. PCR methods indicated about 1.7 times as many positives, while showing overall agreement of 77.6% with ViraPap. Agreement on types ranged from 67% to 100%. All methods indicated large fractions of untypable HPVs).     

男性复发性尖锐湿疣患者肛管HPV感染情况及其基因分型研究

目的分析男性复发性尖锐湿疣(CA)患者肛管人乳头状瘤病毒(HPV)感染情况及其基因分型。方法回顾性选取2016年5月至2019年8月南方科技大学医院皮肤科就诊的男性复发性CA患者104例,采用聚合酶链式反应-反向斑点杂交技术(PCR-RDB)对其肛周皮损组织进行21种HPV基因分型检测,分析HPV阳性者中多重感染情况对比不同年龄HPV-DNA亚型分布状况。结果 104例男性复发性CA者中,98例患者检出肛管HPV阳性,阳性率为94.23%(98/104);42例单一感染(42.86%,42/98),56例多重感染(57.14%,56/98),总计出现178次阳性(含多重感染);在检测的21种HPV基因分型中,以HPV6、HPV11、HPV16、HPV18型为主,分别占比20.79%(37/178)、19.10%(34/178)、12.92%(23/178)、8.43%(15/178)。低危型HPV感染占比50.56%(90/178),高危型HPV感染占比49.44%(88/178);在发生多重感染患者中,以高、低危HPV混合感染比率最高,占47.19%(84/178);在复发性CA患者中,20~30岁患者所占比率最高,达46.94%(46/98)。结论男性复发性CA患者肛管HPV感染率高,HPV6、HPV11、HPV16、HPV18是其主要基因型,且以高低危混合感染为主,20~30岁为其高发年龄段,HPV感染有低龄化趋势,应加以重视。     

广西沿海地区妇女宫颈病变感染人乳头瘤病毒分布特点

目的分析广西沿海地区妇女宫颈病变感染HPV的状况和分布规律;探讨HPV感染与宫颈病变发生的关系。方法将164例临床宫颈有病变、HPV-DNA分型检测阳性患者,按病理检查结果分为3组：慢性炎症组（n=22）、宫颈上皮内瘤变（CINⅠ、Ⅱ、Ⅲ）组（n=73）和宫颈癌组（n=69）。采集患者宫颈脱落细胞样本,用人乳头瘤病毒核酸扩增分型检测方法作HPV基因分型检测,分析HPV感染状况及HPV基因型在各组疾病中的分布。结果 164例HPV阳性标本中,21种亚型有20种亚型被检测到,未被检出是低危型HPV42型;HPV单一感染者117例（71.3%）,多重感染47例（28.7%）。慢性炎症组的阳性率13.4%,常见HPV基因型为16、52、58、18、33、53;宫颈上皮内瘤变组阳性率为44.5%,常见HPV基因型为16、18、33、52、58、31;宫颈癌组阳性率为42.1%,常见HPV基因型为16、18、33、31、58、52。结论广西沿海地区妇女宫颈病变以HPV16、18型感染为主,其次是33、52、58、31型。HPV-DNA分型检测可为宫颈癌高危人群的筛查、临床诊断、预后判断及疫苗的研制提供重要的理论依据。     

血性宫颈脱落细胞标本对人乳头瘤病毒DNA检测结果的影响

目的探讨血红蛋白对人乳头瘤病毒(HPV)DNA检测结果的影响程度及有效的干预措施,为临床工作提供参考依据。方法收集2019年1月就诊于北京友谊医院妇科门诊的女性患者宫颈脱落细胞标本,其中20例未溶血,且HPV-DNA检测为阳性的标本作为HPV阳性组,20例未溶血,且HPV-DNA检测为阴性的标本作为HPV阴性组,再根据试验需要,制备成含不同水平(0.0、2.5、5.0、10.0、20.0 g/L)的血红蛋白标本。采用荧光定量PCR对HPV-DNA进行定性和定量检测,并进行组间比较。结果定性检测结果显示,HPV阳性组中,血红蛋白水平为2.5和5.0 g/L时,HPV-DNA结果均为阳性,符合率为100%,血红蛋白水平为10.0和20.0 g/L时,HPV-DNA分别有13个和0个阳性结果,符合率分别为65%和0%。定量检测结果显示,HPV阳性组中,血红蛋白水平为2.5和5.0 g/L时,所有标本HPV-DNA扩增循环阈值(Ct值)的偏倚均小于7.5%,血红蛋白水平为10.0和20.0 g/L时,分别有40%和95%标本HPV-DNA扩增Ct值的偏倚超过7.5%。HPV阴性组中,HPV-DNA定性和定量检测结果在不同水平血红蛋白标本中均一致。结论血性宫颈脱落细胞标本在一定程度上会影响HPV-DNA检测结果,严重血性标本应预先处理后再进行检测。