小鼠卵丘细胞核移植到体内成熟卵浆构成的重构卵的发育

[目的]观察小鼠卵丘细胞核移植到体内成熟卵浆构成的重构卵的发育.[方法]昆明小鼠超排后获取体内成熟卵母细胞及卵丘细胞.成熟卵子去核后用将卵丘细胞核与精子直接注入,观察其受精和胚胎发育情况.[结果]卵子去核存活率为75.9%(362/477),注核存活率为39.8%(143/359),D1存活率为38.4%(138/359).39.9%(57/143)重构卵子成功排出一个极体并形成两原核,其卵裂率为80.7%(46/57).大部分重构胚发育到2～3细胞停滞,其中2个分裂至4细胞,无囊胚形成.[结论]将小鼠卵丘细胞核、精子同时移植到小鼠的体内成熟卵浆中,可以诱导极体排出,形成2原核 1极体的重构胚胎.重构胚胎大部分发育到2～3细胞即发生停滞,最多到达4细胞期,发育潜能差.     

卵丘细胞线粒体移植对年老小鼠早期胚胎发育的影响

目的探讨线粒体对早期胚胎发育的影响。方法采用昆明小鼠为动物模型,以其卵丘颗粒细胞、卵母细胞、受精卵为试验材料,提取年老小鼠卵丘细胞线粒体,将其注入年老小鼠卵母细胞和体内冲出的受精卵中。结果与结论通过卵丘细胞线粒体移植,给卵子补充了一定量的线粒体,可以部分弥补卵母细胞因变异引起的功能不足。为第2次减数分裂、受精卵和胚胎发育提供足够的能量,明显改善了胚胎的质量。     

破坏高尔基体对小鼠体细胞核移植重组胚的构建及其体外发育的影响

目的探讨破坏高尔基体对小鼠核移植重组胚的构建及其体外发育的影响;方法采用血清饥饿法同步化处理KM小鼠成纤维细胞作为供体细胞;常规超排KM小鼠获得卵母细胞,布雷菲德菌素A（Brefeldin A,BFA）特异性破坏其高尔基体并采用盲吸法去核;直接注核法构建重组胚胎,6-DMAP＋CCB＋乙醇激活重组胚,在含5μg/mL BFA的CZB培养液中培养。结果经BFA处理后,小鼠核移植重组胚的存活率降低,与对照组存活率相比较统计学差异显著（P〈0.05）,但其卵裂率与对照组比较统计学差异不显著（P〉0.05）;     

表皮生长因子调节小鼠卵丘卵母细胞复合体卵丘细胞扩散及激素分泌的研究

目的　研究表皮生长因子 (EGF)对小鼠GV期卵丘卵母细胞复合体 (COC)卵丘细胞扩散以及对孕酮 (P)、雌二醇 (E2 )合成的影响 ,探讨EGF对卵巢功能的调节作用。方法　GV期COC在EGF的浓度为 0、2、5、10、15 μg·L-1的培养基中体外培养 48h ,每组COC数为 5 5～ 65。以不含EGF的培养组为对照组 ,观察 2 4、3 6、48h时各组卵丘细胞扩散情况 ,测定培养终末上清液中P及E2 的含量。结果　在含不同浓度EGF培养基中培养的 4组 ,其 2 4h、3 6h、48h的Ⅱ度和Ⅲ度扩散率均大于对照组 (P <0 .0 5或P <0 .0 1) ;EGF含量为 5、10、15 μg·L-1的培养组E2 分泌低于对照组 (P <0 .0 5或P <0 .0 1) ;不同EGF含量的培养组P的分泌较对照组增加 (均为P <0 .0 1)。结论　EGF能促进卵丘细胞扩散 ,抑制E2 合成 ,促进P分泌。     

小鼠卵在体内外受精和胚胎发育的比较

比较了人工促排的小鼠卵在体内和体外的受精和受精后的胚胎发育情况。结果表明：两者的受精率无明显差别，各为４９．４％和５５．０％，但受精卵在体外的发育速度明显慢于体内。     

卵丘细胞凋亡预测相应配子及胚泡发育的价值

目的：检测卵丘细胞大量凋亡是否可预测卵母细胞质量及其发育能力下降。设计：前瞻性研究。机构：公立医院及大学。患者：37例患者知情同意自愿参加本次试验并签字。干预：完全分离卵丘卵母细胞复合体，采用TUNEL试剂盒（以末端脱氧核糖核酸转移酶介导的地高辛-三磷酸去氧鸟苷为标记的缺口末端标记技术）分析卵丘细胞悬液。主要观察指标：卵丘细胞凋亡百分比及囊胚形成率。结果：年轻患者（年龄≤35岁）卵丘细胞凋亡百分比显著低于年长患者，所有患者配子成熟度与卵丘细胞凋亡高度相关。受精卵与卵裂期（第1～4天）形态学特征与编程细胞死亡程度无相关性，但根据未分化体细胞凋亡百分比可以预测囊胚发育状况。此外，有一种倾向，即由高质量卵泡发育而来的囊胚细胞凋亡率降低。妊娠率与着床率不受影响。结论：卵泡内的凋亡过程可能影响卵母细胞成熟。虽然尚无形态学证据，但是由未发生凋亡或仅轻度凋亡的卵丘复合物发育形成的配子或受精卵发育为最佳囊胚的机会增多。     

不同电融合条件对小鼠卵丘细胞核移植重组胚融合和早期发育的影响

目的 研究不同电融合条件对来源于小鼠卵丘细胞核移植重组胚的融合和早期发育的影响，寻找最佳电融合参数。方法 将直径10～12mm的C57BL／6j小鼠卵丘细胞核注射到去核卵母细胞透明带下，构建供体核一卵母细胞复合体。在不同电融合条件下诱导两者问的融合，并对重组胚激活以及随后发育的早期阶段包括2细胞、4～8细胞和桑椹胚进行观察和计数。结果 电融合时电场强度或脉冲时间在一定范围内允许波动，变动范围分别是电场强度1000-2000kV／cm和脉冲时程40～160ms。低于容许范围的电融合参数会降低供体核一卵母细胞复合体的融合率．而高于容许范围的参数会导致供体核-卵母细胞复合体溶解乃至死亡。如果电融合参数在容许范围内，供体核-卵母细胞复合体的融合率无统计学差异，并且融合后重组胚的激活，以及发育至2细胞、4～8细胞和桑椹胚阶段的比率也无统计学差异。此外，脉冲重复次数以1～2次为佳。结论 优化的电融合参数是决定供体核-卵母细胞复合体融合与重组胚激活的关键因素。     

小鼠电激活孤雌胚胎早期体内外发育能力的比较

目的 探讨小鼠电激活孤雌胚胎的早期体内、外发育能力.方法 利用不同电脉冲参数和激活液对小鼠卵母细胞进行活化,观察激活后的小鼠孤雌胚体外发育状况和移植后的发育能力.结果 非电解质激活液优于电解质液,脉冲强度、脉冲宽度和脉冲次数3个参数各自处于某一范围内时,他们之间存在某种相关性,降低其中1个参数可通过升高另外2个参数得到补偿,经筛选较适宜的电脉冲参数为:1.0 kV/cm、40μs、2p,或者1.5kV/cm、30/μs、2p,分别为74.65％和71.19％,体外囊胚发育率分别为43.40％和47.62％.电激活孤雌胚体外发育时序比正常胚胎慢,但囊胚细胞数与对照组差异不显著.它们经胚胎移植后,其中的一部分能够着床,但着床率仅为3.6％,极显著低于对照组(67％,P＜0.01).结论 电刺激能够较好地模拟正常受精过程激活小鼠卵母细胞,但激活后的多数小鼠孤雌胚胎着床能力较低,不能够顺利着床.     

重组人白细胞介素-1β对冷冻后小鼠桑椹胚体内外发育率的影响

本试验探讨了重组人白细胞介素－１β（ｒｈＩＬ－１β）对小鼠桑椹胚玻璃化冷冻后体内外发育的影响。结果表明：当ｒｈＩＬ－１β添加浓度为５、５０、５００ＩＵ／ｍｌ时,对解冻后的胚胎经体外培养,发育率（８７％～１００％）与对照组（９４％）相比无显著性差异（Ｐ＞００５）。而浓度提高到１０００ＩＵ／ｍｌ时,胚胎的发育受到抑制。解冻后胚胎在含有５、５０、５００ＩＵ／ｍｌ浓度的ｒｈＩＬ－１β培养液中培养３～４ｈ后移植于假妊娠３ｄ的受体鼠,移植妊娠率（８６％、１００％、８３％）高于对照组（５６％）,特别是５０ＩＵ／ｍｌ处理组与对照组有极显著差异（Ｐ＜００１）。而浓度为１０００ＩＵ／ｍｌ处理组的胚胎移植妊娠率（３０％）低于对照组。试验证明,添加浓度为５～５００ＩＵ／ｍｌｒｈＩＬ－１β的培养液,对解冻后胚胎的体外发育率无影响,而且能够显著提高移植妊娠率。     

不同电融合条件对小鼠卵丘细胞核移植重组胚融合和早期发育的影响

目的 研究不同电融合条件对来源于小鼠卵丘细胞核移植重组胚的融合和早期发育的影响,寻找最佳电融合参数。方法 将直径10~12mm的C57BL/6j小鼠卵丘细胞核注射到去核卵母细胞透明带下,构建供体核-卵母细胞复合体。在不同电融合条件下诱导两者间的融合,并对重组胚激活以及随后发育的早期阶段包括2细胞、4~8细胞和桑椹胚进行观察和计数。结果 电融合时电场强度或脉冲时间在一定范围内允许波动,变动范围分别是电场强度1000~2000kV/cm和脉冲时程40~160ms。低于容许范围的电融合参数会降低供体核-卵母细胞复合体的融合率,而高于容许范围的参数会导致供体核-卵母细胞复合体溶解乃至死亡。如果电融合参数在容许范围内,供体核-卵母细胞复合体的融合率无统计学差异,并且融合后重组胚的激活,以及发育至2细胞、4~8细胞和桑椹胚阶段的比率也无统计学差异。此外,脉冲重复次数以1~2次为佳。结论 优化的电融合参数是决定供体核-卵母细胞复合体融合与重组胚激活的关键因素。