硫化氢对短暂脑缺血/再灌注老年大鼠海马神经元Camkkβ、Bcl-2和Bax表达的影响

目的探讨硫化氢对短暂脑缺血再灌注老年大鼠海马神经元Camkkβ、Bcl-2和Bax表达的影响。方法健康雄性SD老龄大鼠120只,随机分为对照组(C组)、缺血/再灌注组(IR组)、H2S组(H组)和生理盐水组(S组),采用Pusinelli四动脉阻断法建立全脑缺血模型。H组缺血前10 min腹腔内注射H2S外源性供体NaHS;S组注入等量生理盐水;C组不行任何处理。大鼠脑缺血/再灌注后24 h进行神经行为学评分;脑缺血/再灌注后1、3、5 d采用TUNEL法检测神经元的凋亡情况,采用Western-blot法测定大鼠海马内Camkkβ、Bcl-2和Bax蛋白表达。结果与对照组比较,缺血/再灌注组老年大鼠脑缺血/再灌注24 h后神经行为学评分升高,海马TUNEL阳性神经元计数升高,Camkkβ表达升高,Bcl-2表达下调,Bax表达上调(P<0.05);与缺血/再灌注组比较,H2S组老年大鼠脑缺血/再灌注24 h后神经行为学评分降低、海马区TUNEL阳性神经元计数降低、Camkkβ表达降低,Bcl-2表达上调、Bax表达下调(P<0.05)。结论硫化氢可通过降低神经元海马Camkkβ蛋白表达、上调Bc1-2蛋白表达、抑制Bax蛋白表达来减轻短暂脑缺血/再灌注损伤。     

蛋白偶联受体GPR40在缺血性成年猴海马的表达

目的 利用猴短暂性全脑缺血模型,研究蛋白偶联受体40(GPR40)在海马的表达,从而探讨GPR40受体在缺血性卒中的作用.方法 参照Yamashima建立成年猴短暂性全脑缺血模型,24只猴随机数字表法分成4组,即对照组、缺血后4 d组(d4)、缺血后9 d组(d9)和缺血后15 d(d15),采用Western印迹和免疫荧光在蛋白质水平观察GPR40的表达.结果 Western blotting结果显示CA1区域GPR40在短暂性全脑缺血后表达逐渐下降(15 d内);而在DG区域表达升高,与对照组比较有统计学意义(P<0.05).免疫荧光分析显示CA1区域与GPR40共表达的神经元细胞数逐渐下降.到d15约下降50%;而DG区域则无明显变化,邻近SGZ区域与GPR40共表达的星形细胞数量迅速升高,d4升高约2.5倍.结论 脑缺血后海马CA1和DG两区域GPR40表达差异.特别SGZ星形细胞GPR40表达升高,提示可通过增加GPR40配体中长链不饱和脂肪酸如DHA来改善脑缺血后海马神经元的损伤.     

GCs对慢性低灌注大鼠海马脑组织IL-2及KRT6A蛋白表达影响的实验研究

目的采用免疫组化及蛋白质组学技术观察慢性脑缺血大鼠海马脑组织IL-2及蛋白表达产物变化。方法 BCAO建立慢性脑缺血大鼠模型,随机分为假手术组、模型组,GCs低中高剂量组及阳性药物(奥拉西坦)对照组。免疫组化ABC法检测海马脑组织IL-2表达改变;蛋白质组学技术分析鉴定慢性脑缺血大鼠模型及GCs干预后差异蛋白表达改变。结果 (1)模型组大鼠海马脑区IL-2表达量显著上升(2.15±0.45),与假手术组相比差异显著,差异有统计学意义(P0.05),GCs低中高剂量干预后IL-2表达水平出现显著上升,分别是(2.01±0.54、1.76±0.61、1.56±0.31)(P0.01,P0.05);(2)研究发现,慢性脑缺血大鼠海马脑组织Ⅱ型细胞骨架蛋白(typeⅡcytoskeletal 6A,KRT 6A)表达发生显著下降。结论慢性脑缺血病理过程中存在炎性相关蛋白的活化,推测其病理生理机制与炎症反应及细胞活化密切相关。     

PKA-CREB信号转导通路在大鼠慢性脑缺血所致认知功能障碍中的作用

目的:观察PKA-CREB信号转导通路在慢性脑缺血所致大鼠认知功能损害中的作用。方法:结扎大鼠双侧颈总动脉,制成慢性脑缺血模型,分缺血8周组和假手术对照组,术后第8周时用Morris水迷宫测定大鼠学习记忆能力。用Westernbloting检测大鼠海马胞核内PKAca及pCREB的表达。结果:缺血组与假手术组相比学习记忆能力明显下降(P<0.05),缺血组大鼠海马中PKAca及pCREB的表达与假手术组相比也下降(P<0.05),且两者之间的下降存在正相关关系。结论:PKA-CREB信号转导通路可能参与了慢性脑缺血所致大鼠认知功能的损害。     

慢性应激抑郁大鼠脑内5-羟色胺受体mRNA表达

目的探讨慢性应激抑郁模型大鼠脑内前额叶、海马、中缝核、伏隔核5—羟色胺1A(5—HT1A)与5—羟色胺2A(5—HT2A)受体m RNA表达的变化。方法将成年雄性SD大鼠适应性喂养1w后随机分为实验组和对照组,每组10只。实验组连续28d,随机给予强迫游泳、夹尾、潮湿垫料、鼠笼倾斜、食物和水的剥夺等其中一种刺激,建立慢性轻度不可预知应激动物模型。对照组正常饲养,不予以实验性处理。采用旷场实验及糖水偏好实验评定其行为学改变;应用逆转录聚合酶链反应检测并比较两组大鼠大脑中前额叶、海马、中缝核、伏隔核5—HT1A与5—HT2A受体m RNA的表达水平。结果 1实验组5—HTl A受体m RNA表达在前额叶、海马、中缝核、伏隔核中分别为1.35±0.05、1.76±0.35、0.84±0.67、2.17±0.56,对照组分别为1.57±0.38、2.04±0.71、0.92±0.12、2.25±0.09。2组比较差异无统计学意义(P0.05);2实验组5—HT2A受体m RNA表达在前额叶、海马、中缝核、伏隔核中分别为1.24±0.80、0.37±0.75、0.34±0.14、0.45±0.41,对照组分别为1.66±0.43、2.02±0.12、1.90±0.56、1.28±0.31,2组比较在海马,中缝核,伏隔核中差异有统计学意义(P0.05)。结论 1慢性应激抑郁模型大鼠脑内前额叶、海马、中缝核、伏隔核中5—HT1A受体m RNA表达均无变化;2慢性应激抑郁模型大鼠脑内海马、中缝核、伏隔核中5—HT2A受体m RNA表达均减少;在前额叶表达无变化。     

神经生长因子对脑缺血大鼠学习与记忆的影响

目的为了观察神经生长因子（NGF）对脑缺血大鼠学习与记忆的影响和海马内N-甲基-D-天门冬氨酸受体NR2A/B亚zhanghaopeng（NR2A/B）表达的变化。方法本研究将48只成年雄性SD大鼠分为正常组（n=12）、假手术组（n=12）、慢性脑缺血组（n=12）、NGF处理组（n=12）。于造模后开始腹腔注射0.25 ug/100 g NGF,假手术组和慢性脑缺血组腹腔注射等量生理盐水,均1次/d,共21 d。用Morris水迷宫和＂＂Y＂迷宫作业测试其空间学习与记忆成绩,再采用Western blot方法分析海马的NR2A、NR2B的表达。结果①Morris水迷宫测试：模型组大鼠寻找平台的潜伏期较假手术组明显延长,NGF处理组大鼠寻找平台的潜伏期较模型组明显缩短;＂Y＂迷宫测试：模型组大鼠学会躲避电击的正确次数较假手术组明显减少,NGF处理组大鼠学会躲避电击的正确次数较模型组明显增多;②模型组NR2A表达水平较假手术组明显降低,而NR2B明显升高;NGF处理组海马内NR2A表达水平较模型组明显上调,而NR2B明显下调。结论神经生长因子可增强学习与记忆,海马内N-甲基-D-天门冬氨酸（NMDA）受体表达变化可能是影响学习与记忆的机制之一。     

TLR4、MRP8在内侧颞叶癫痫幼大鼠海马中表达的动态变化

目的观察氯化锂-匹罗卡品致痫幼大鼠各期海马中Toll-样受体4(TLR4)、髓样相关蛋白8(MRP8)表达的变化,探讨其是否与内侧颞叶癫痫(MTLE)发生有关。方法 21d SD雄性大鼠90只,随机分对照组(30只)和模型组(60只),腹腔注射氯化锂。17～18h后模型组腹腔注射匹罗卡品诱导癫痫持续状态(SE);对照组予等量生理盐水取代匹罗卡品腹腔注射。按自发发作出现和稳定时间(自发痫性发作在致痫后约3w出现,8w趋稳定),对照组和模型组随机分6个亚组:急性模型组(SE后2h)、潜伏模型组(SE后3w)、慢性自发发作组(SE后8w)及相对应时间点对照组。每亚组动物10只。免疫组化、免疫印迹、RT-PCR技术测定各亚组幼大鼠海马内TLR4、MRP8的表达。结果 TLR4、MRP8在模型组海马内表达明显增多,以CA3、CA1、DG区显著;与对照组相比,差异有显著性(P0.05)。模型亚组内,TLR4、MRP8在急性期和慢性期表达明显增高,而潜伏期无明显表达变化;3组比较差异有显著性(P0.05)。结论大鼠海马内TLR4、MRP8表达增多可能与MTLE发生有关。探讨其机制可能为MTLE的治疗提供新的靶点。     

全脑缺血后海马区单胺类神经递质的变化

目的观察全脑缺血后大鼠海马区单胺类神经递质的变化规律,探讨其在缺血后迟发性神经元死亡中的作用。方法建立大鼠全脑缺血再灌注模型,观察全脑缺血再灌注后酪氨酸羟化酶(TH)、多巴胺-β-羟化酶(DβH)的表达并对海马区去甲肾上腺素(NE)、肾上腺素、多巴胺、5-羟色胺(5-HT)和单胺类神经递质代谢产物高香草酸(HVA)、5-羟吲哚乙酸(5-H IAA)的含量进行测定。结果对照组TH及DβH呈阴性表达。全脑缺血再灌注后1 d,3 d缺血组海马CA1区神经元TH及DβH表达阴性。5 d后神经元TH及DβH呈阳性表达;全脑缺血再灌注后6 h,缺血组海马区单胺类神经递质含量显著上升,NE、肾上腺素、多巴胺及5-HT分别为对照组的232.5%、347.3%、336.1%和210.1%,1 d后开始回落,3 d已明显低于对照组,5 d后又有回升并接近对照组;缺血组,海马区单胺类神经递质的代谢产物HVA、5-H IAA含量于全脑缺血再灌注后6 h开始上升,1 d依然保持较高的水平,至3 d回落,5 d接近对照组。结论全脑缺血再灌注后早期海马区单胺类神经递质含量显著上升;单胺类神经递质含量显著上升可能是导致迟发性神经元死亡的主要因素之一。     

大鼠慢性脑缺血后海马CA_1区HCN1及p38MAPK的表达

目的探讨慢性脑缺血后大鼠海马HCN1及p38MAPK表达变化及意义。方法双侧颈总动脉永久性结扎(two vessels occlusion,2VO)制备慢性脑缺血模型,40只雄性Wistar大鼠随机分为缺血1 m组和缺血2 m组,每组均设对照组,共4组。应用Morris水迷宫、HE染色、Western blot及免疫荧光双重染色观察各组大鼠认知功能改变、海马CA1区形态学变化、HCN1和p38MAPK定位及表达情况。结果与对照组相比,大鼠缺血1 m时即出现空间学习记忆能力障碍,且缺血2 m组较1 m组更加显著,具有统计学意义(P<0.05);缺血1 m组海马CA1区可见锥体细胞变性,排列松散,个别细胞脱失,伴炎细胞浸润及胶质细胞增生;缺血2 m组海马CA1区可见锥体细胞排列紊乱,细胞脱失明显;HCN1和p38MAPK共同表达于海马CA1区锥体细胞,并且随着缺血时间的延长,海马区p38MAPK表达上调、HCN1表达下调,具有显著性差异(P<0.05)。结论慢性脑缺血导致海马CA1区神经元损伤进而影响认知功能;HCN1和p38MAPK在海马CA1区锥体细胞共同表达;随着缺血时间延长p38MAPK表达上调,HCN1表达下调,推测是慢性脑缺血大鼠认知功能损伤机制之一。     

大鼠全脑缺血再灌注损伤后海马CA1区神经元酪氨酸羟化酶和多巴胺-β-羟化酶表达的变化

目的　研究大鼠全脑缺血再灌注损伤后酪氨酸羟化酶 (TH)和多巴胺 β 羟化酶 (DβH)表达的改变及意义。方法　利用改良四血管闭塞法 ,建立大鼠全脑缺血模型。于缺血再灌注后 1,3,5d断头取脑 ,行免疫组化染色 ,在光镜下观察海马CA1区神经元TH及DβH表达的变化 ,并计数海马CA1区正常神经元。结果　全脑缺血再灌注后 1d ,TH及DβH的表达呈阴性 ,海马CA1区神经元未见显著的病理形态学改变 ;全脑缺血再灌注后 3d ,TH及DβH呈阳性表达 ,海马CA1区可见部分神经元死亡 ;全脑缺血再灌注后 5d ,TH及DβH呈明显阳性表达 ,海马CA1区可见大部分神经元死亡。结论　全脑缺血再灌注后 ,由于TH及DβH异常表达 ,使得儿茶酚胺生物合成增加 ,这可能是短暂性脑缺血损伤的机理之一。     

慢性脑缺血老龄大鼠海马区突触素及NMDAR2B表达的研究

目的 本实验旨在观察慢性脑缺血老龄大鼠海马区突触素及NR2B表达的变化.方法 健康Wistar大鼠100只,随机分为5组,A组(对照组)、B组(缺血4周组)、C组(缺血8周组)、D组(缺血12周组)、E组(缺血16周组),每组20只.造模方法采用手术结扎大鼠双侧颈总动脉.分别于手术后4周、8周、12周、16周,采用免疫...     

慢性脑缺血老龄大鼠海马NMDA受体亚单位NR2B表达的特征

目的研究老龄大鼠慢性脑缺血后大脑海马中NR2B表达特征。方法应用免疫组化染色技术检测大鼠脑海马中CA1、CA3区和齿状回中NR2B的表达。结果缺血组海马CA1、CA3区和齿状回三处NR2B灰度值均低于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论老龄大鼠海马结构内CA1、CA3区及齿状回内NR2B的表达明显减少。     

慢性脑缺血老龄大鼠海马中突触素的表达特征

目的 研究老龄大鼠慢性脑缺血后大脑海马中突触素表达特征.方法 应用免疫组化染色技术检测大鼠脑海马中CA1区、CA3区和齿状回中突触素的表达.结果 缺血组海马CA1区、CA3区和齿状回三处突触素灰度值均低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05.结论 老龄大鼠海马结构内CA1区、CA3区及齿状回内突触素和NR2B的表达明显减少.     

慢性脑缺血信号转导和转录激活因子-1的表达

目的 探讨慢性脑缺血大脑皮质及海马STAT-1的变化.方法 采用免疫组织化学和激光共聚焦方法观察慢性脑缺血大鼠脑中STAT-1蛋白表达变化.结果 STAT-1免疫反应阳性细胞在正常和假手术大鼠脑内发现有少量表达;缺血30d组,STAT-1蛋白阳性细胞分布于皮层及海马,细胞数量明显多于非缺血组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 STAT-1可能参与慢性脑缺血大鼠神经细胞死亡的诱导.     

高血压对慢性脑缺血大鼠海马和大脑皮质的脑源性神经营养因子表达的影响

目的 探讨高血压对慢性脑缺血大鼠海马及大脑皮质部位脑源性神经营养因子（Brain-derivedneurotrophic factor,BDNF）表达的影响。方法 使用正常血压的WKY大鼠以及有高血压的SHR大鼠制作双侧总颈动脉永久阻塞的慢性脑缺血模型。应用原位杂交及免疫组织化学染色观察BDNF在缺血后第1～4周的变化,H&E染色比较缺血后第4周脑梗死范围的大小。结果 慢性脑缺血后,在SHR大鼠海马CA1和大脑皮质,BDNF的mRNA及免疫染色密度在缺血后第1~4周皆有显著的减少（P <0.05）,蛋白质印迹（Western-blot）实验也呈现了相同的结果。而WKY大鼠,只在缺血后第1周有短暂的减少（P <0.05）。在第4周,HE染色显示SHR大鼠比WKY大鼠有较大范围的脑组织受损（[ 12.40±4.26）% vs（0.41±0.17）%,P =0.026]。结论 在慢性脑缺血的情况下,长期的高血压会加重脑损伤,并且影响BDNF的mRNA及蛋白质的表达,尤其在缺血耐受性低的海马CA1及大脑皮质部位。     

丁基苯酞对慢性脑缺血老龄大鼠海马中NMDA受体亚单位NR2B及突触素表达的影响

目的 观察丁基苯酞对慢性脑缺血老龄大鼠海马中N-甲基-D-天门冬氨酸受体2B亚单位(NR2B)及突触素表达的影响.方法 采用免疫组化方法观察丁基苯酞对慢性脑缺血老龄大鼠海马中NR2B及突触素表达的影响.结果 B组与A组比较,海马CA1区、CA3区及齿状回NR2B及突触素的表达明显减少(P＜0.05),C、D组大鼠海马各区NR2B及突触素的表达与单纯缺血组比较均不同程度增加(P＜0.05);D组与C组比较,NR2B及突触素的表达增加更明显(P＜0.05).结论 慢性缺血3个月后,大鼠海马CA1区、CA3区及齿状回中NR2B 及突触素的表达明显减少,而丁基苯酞能改善这种缺血改变,增加NR2B 及突触素的表达.     

苯甲酸雌二醇对慢性脑缺血大鼠海马胆碱乙酰转移酶变化及雌激素的影响

目的观察苯甲酸雌二醇对慢性脑缺血大鼠海马神经元胆碱乙酰转移酶的影响,以探讨胆碱乙酰转移酶的变化在慢性脑缺血发病中的作用及雌二醇对此变化的影响。方法采用双侧颈总动脉永久性结扎制备慢性脑缺血模型,30只大鼠随机分为假手术组、缺血组和雌二醇治疗组。各组于造模60d后,应用Y迷宫观察其行为学改变,采用免疫组化观测大鼠海马神经元胆碱乙酰转移酶的变化。结果治疗组较缺血组认知障碍明显改善（P〈0.01）,其海马胆碱乙酰转移酶的表达也明显增高（P〈0.01）。结论苯甲酸雌二醇能改善慢性脑缺血大鼠的认知功能可能与其提高海马区胆碱乙酰转移酶水平有关。     

脑缺血对大鼠皮层及海马铜蓝蛋白表达的影响

目的 探讨脑缺血对大鼠皮层及海马中铜蓝蛋白(Ceruloplasmin,Cp)表达的影响.方法 雄性Wistar大鼠60只,随机分为脑缺血1、3、7、28 d组和假手术对照组,每组各12只.实验组结扎双侧颈总动脉造成大鼠脑缺血,假手术对照组仅分离出双侧颈总动脉但不结扎.采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测皮层及海马组织中Cp mRNA的表达,免疫组织化学观察皮层及海马组织中Cp的表达.结果 大鼠皮层和海马均表达Cp mRNA.皮层和海马Cp mRNA的表达随缺血时间的延长逐渐降低,缺血1、3、7、28 d组表达均低于假手术组(P＜0.01).脑组织脉络丛细胞、室管膜细胞、皮层和海马的星形胶质细胞、血管内皮细胞均表达Cp;而皮层和海马的锥体细胞和颗粒细胞均不表达Cp.缺血1 d组皮层及海马Cp表达与对照组差异不显著(P＞0.05);缺血3 d组皮层和海马Cp表达低于假手术组(P＜0.05);缺血第7、28 d组Cp表达减少极为显著(P＜0.01).脑缺血大鼠皮层和海马中铁含量与Cp的表达呈负相关,相关系数分别为-0.831(P＜0.01)和-0.809(P＜0.01).结论 脑缺血可诱导大鼠皮层及海马中Cp表达降低.脑缺血后Cp表达减少可能参与了脑缺血引起的铁含量升高及神经元铁沉积的过程.     

Effect of propofol on brain-derived neurotrophic factor and tyrosine kinase receptor B in the hippocampus of aged rats with chronic cerebral ischemia

We intraperitoneally injected 10 and 50 mg/kg of propofol for 7 consecutive days to treat a rat model of chronic cerebral ischemia. A low-dose of propofol promoted the expression of brain-derived neurotrophic factor, tyrosine kinase receptor B, phosphorylated cAMP response element binding protein, and cAMP in the hippocampus of aged rats with chronic cerebral ischemia, but a high-dose of propofol inhibited their expression. Results indicated that the protective effect of propofol against cerebral ischemia in aged rats is related to changes in the expression of brain-derived neurotrophic factor and tyrosine kinase receptor B in the hippocampus, and that the cAMP-cAMP responsive element binding protein pathway is involved in the regulatory effect of propofol on brain-derived neurotrophic factor expression.     

丁咯地尔对慢性脑缺血大鼠海马CA1区星形胶质细胞及认知障碍的影响

目的研究丁咯地尔对慢性脑缺血大鼠海马CA1区星形胶质细胞和认知障碍的影响。方法采用双侧颈总动脉永久性结扎制备慢性脑缺血模型,治疗组大鼠给与丁咯地尔灌胃,免疫组化法多克隆抗血清GFAP标记海马CA1区星形细胞,用Y-型迷宫测定大鼠的认知功能变化。实验研究为持久性2VO2个月。结果慢性脑缺血2个月后大鼠海马CA1区星形胶质细胞大量增生肥大,认知能力明显下降,丁咯地尔治疗后,星形胶质细胞的活动明显减少,认知功能明显提高。结论丁咯地尔能抑制慢性脑缺血大鼠海马CA1区星形胶质细胞反应,改善其认知功能障碍。