检测受染旋毛虫猪血清中循环抗原对诊断和监测本病的研究

用双抗体夹心-ELISA法检测54头感染旋毛虫的猪血清,33头(61.1±6.7％)呈阳性反应。11头受染猪,于感染后不同时间检测CAg,有10头(90.9％)显示阳性,且绝大多数(8头,72.7％)于感染后3天即出现阳性反应,另于感染后6天和9天各有1头阳性。同时对比检测110头正常猪和两种其它寄生虫病猪,仅有两头(1.8％)感染弓形体的猪出现轻度交叉反应。对北京海淀区某屠宰场1987年自外地引进224头猪,进得流行病学调查,有18头(8.0±1.8％)CAg显示阳性反应,其中且有11头猪同时伴有抗体阳性;另检测陕西省商县50头猪,CAg皆为阴性。     

检测感染旋毛虫猪血清中循环抗原以诊断和监测本病的研究和应用

用目测快速双抗体夹心—ELISA法检测61头感染旋毛虫猪血清中CAg,40头(65.6±6.1％)呈阳性反应。100头正常猪均为阴性,30头感染囊虫和30头感染弓形体的猪,仅有1头感染弓形虫的猪出现轻度交叉反应,该猪未能追踪检查是否合并旋毛虫感染。对北京海淀区224头(1987年自外地引进),陕西商县50头和河南省新野县258头被屠杀的猪,进行流行病学调查,35头(6.6％)CAg显示阳性,其中71.4％(25/35)同时伴有抗体阳性。本法以TMBS为底物,不仅对人体无毒,而且不需新鲜配制,配好的底物溶液可以长期保存备用。本实验操作简便,完成全过程仅需20分钟,以目测观察结果,特别适于基层开展应用。实验中所需特异性抗体及酶的结合物,均系我室自制,价格低廉,相当稳定,在低温下保存2年,其效价不变,对人和动物均适用。     

旋毛虫肌幼虫排泄分泌抗原诊断早期旋毛虫病的研究

目的评价旋毛虫肌幼虫排泄分泌(excretory-secretory,ES)抗原诊断早期旋毛虫病的价值。方法应用旋毛虫肌幼虫ES抗原Western blot对旋毛虫感染后6~11d的小鼠血清及19d的早期旋毛虫病人血清进行检测,并与感染后35d的晚期旋毛虫病人和其他寄生虫病人血清的检测结果进行比较。结果 Western blot分析显示,肌幼虫ES蛋白中的2条蛋白带(41.5、55kDa)可被旋毛虫感染后7~11d的小鼠血清识别,6条蛋白带(41.5、44.1、45、55、61和65.2kDa)能被早期和晚期旋毛虫病人血清识别,阳性反应率均为100%(15/15);这6条蛋白带与裂头蚴病人和健康人血清无交叉反应,但与其他寄生虫病(血吸虫病、并殖吸虫病、华支睾吸虫病、棘球蚴病及囊尾蚴病)患者血清具有明显的交叉反应(19.12%~38.23%)。结论旋毛虫肌幼虫ES抗原中的41.5kDa~65.2kDa蛋白带可与旋毛虫感染早期血清反应,但与其他蠕虫病患者有明显的交叉反应。     

122例脑炎脑膜炎症候群患者猪囊尾蚴、刚地弓形虫抗体血清学检测结果分析

目的了解122例脑炎脑膜炎症候群患者血清中猪囊尾蚴(Cysticercus cellulosae)、刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)IgG、IgM抗体阳性情况,为临床诊断脑炎脑膜炎症候群患者的病原提供参考依据。方法 2014年8月至2015年12月,采集上海交通大学附属第六人民医院、江苏省丹阳市人民医院和江苏大学附属医院收治的脑炎脑膜炎症候群患者血清,用猪囊尾蚴和刚地弓形虫IgG、IgM抗体检测试剂盒检测血清中抗猪囊尾蚴、刚地弓形虫的抗体,计算抗体阳性率,分析其性别分布、急性感染季节分布、年龄分布和职业分布情况。结果 122例脑炎脑膜炎症候群患者血清中,猪囊尾蚴Ig G和Ig M抗体阳性分别为17例、22例,阳性率为13.9%(17/122)和18.0%(22/122);刚地弓形虫IgG和IgM抗体阳性分别为29例和8例,阳性率为23.8%(29/122)和6.6%(8/122)。男性猪囊尾蚴和刚地弓形虫阳性率为30.6%(22/72)和31.9%(23/72),女性为26.0%(13/50)和24.0%(12/50)。猪囊尾蚴Ig M抗体阳性率季节分布分别为12.0%(3/25)、27.0%(17/63)、6.9%(2/29)和0/5;阳性率最高的年龄段出现在13~25岁组,为45.0%(9/20);工人组阳性率最高,为7/14。刚地弓形虫Ig M抗体阳性率季节分布为4.0%(1/25)、11.1%(7/63)、0(0/29)和0/5;阳性率最高出现在65岁组,为44.0%(11/25);不同职业中其他组的阳性率最高,为4/10。猪囊尾蚴、刚地弓形虫抗体阳性率在性别、季节、年龄和职业分布上差异均无统计学意义(P0.05)。结论 122例脑炎脑膜炎症候群患者血清猪囊尾蚴、刚地弓形虫抗体阳性率较高,临床诊断该症候群病原时应结合其寄生虫血清学检测结果,考虑感染寄生虫的可能性。     

应用免疫-PCR检测弓形虫循环抗原的实验研究

目的　控索弓形虫感染早期诊断方法。方法　用链亲素将生物素化的二抗和生物素化的 DNA偶联起来 ,通过PCR扩增标记 DNA检测固定的抗原 ,建立了弓形虫循环抗原免疫— PCR检测技术 ,用该技术和 EL ISA法平行检测系列稀释的弓形虫的感染鼠阳性血清中的 CAg以及实验感染鼠血清中 CAg的动态变化 ,对比研究二者之间的敏感性。结果　免疫—PCR法检测弓形虫 CAg吴阳性的血清最高稀释度为 1∶ 10 0 0 ,EL ISA法检测弓形虫 CAg呈阳性的血清最高稀释度为 1∶ 5 ,免疫— PCR最早在鼠感染弓形虫后第 3天测到 CAg,EL ISA最早在鼠感染弓形虫后第 5天测到 CAg。结论　免疫— PCR是一种特异性强、敏感性高的弓形虫 CAg检测方法 ,敏感性较 EL ISA法提高了 2 0 0倍 ,免疫— PCR检出阳性结果时间早 ,为弓形虫病早期诊断提供了科学依据     

应用特异单克隆抗体测定猪囊尾蚴病人血清和脑脊液中的循环抗原

我们应用特异的抗猪囊尾蚴抗原的单克隆抗体(CCy1),建立了单克隆抗体抑制性ELISA方法以测定囊尾蚴病患者的循环抗原(CAg)。测定灵敏度为ng水平。83例囊尾蚴病患者血清的CAg阳性率为71.1％。其范围为0.16-128μg/ml。对41例囊尾蚴病患者,同时测定了血清和脑脊液中的CAg。单项或两项阳性的总阳性率为90.2％。114例正常人血清、107例其它寄生虫病患者(包括30例包虫病患者)的血清及10例非寄生虫病患者的脑脊液的CAg量均为零。有23例囊尾蚴病患者治疗半年到1年后,有21例抗原浓度为零。另2例分别为0.64μg/ml和1.6μg/ml。表明测定CAg不仅可以确定活动性囊尾蚴感染,而且可考核疗效。     

贵州省抑郁症患者刚地弓形虫感染状况调查及其基因型鉴定

目的了解贵州省抑郁症患者弓形虫感染状况及弓形虫基因型。方法 ELISA检测141例抑郁症患者和150例健康对照外周血弓形虫特异性抗体(IgG、IgM)和循环抗原(CAg),PCR扩增血样弓形虫高重复DNA片段(529 bp),多重-巢式PCR-限制性片段长度多态性(Mn-PCR-RFLP)方法鉴定弓形虫529 bp阳性样本的基因型。结果 ELISA检测结果显示,抑郁症患者组和健康对照组弓形虫抗体阳性率分别为21.3%(30/141)和7.3%(11/150),两者间差异有统计学意义(χ~2=11.674,P0.05);抑郁症患者组的IgG、IgM、CAg阳性率分别为18.4%(26/141)、1.4%(2/141)、1.4%(2/141);健康对照组IgG阳性率为7.3%(11/150),与抑郁症患者组间差异有统计学意义(P0.05),未检测到IgM和CAg。PCR结果显示,抑郁症患者组检测出1例弓形虫核酸阳性,经Mn-PCR-RFLP方法鉴定其基因型,结果为非典型Toxo DB#9(Chinese 1型)。结论贵州省抑郁症患者弓形虫抗体阳性率高于健康人群,1例抑郁症患者感染的弓形虫基因型为Chinese 1型。     

产妇弓形虫感染对新生儿影响的研究

目的 探讨孕妇弓形虫感染对胎儿的影响。方法 采用酶免三联诊断法对356例母婴杨对标本进行血清学检测。结果 产妇弓形虫感染率平均为19.1%,各单项检测分别为CAg15.2%、IgM2.5%、IgG3.4%;新生儿弓形虫感染率平均为17.7%,其脐血各单项检测分别为CAg16.9%、IgM0.3%、IgG2.2%。CAg垂直传播率为35.2%(19/54),IgG垂直传播率为33.3%(4/12)。在4例畸胎儿中,2例脐血弓形虫血清学阳性。结论 孕妇感染弓形虫有1/3机会可通过胎盘垂直感染胎儿,影响胎儿发育,重者致畸、致死。     

产妇弓形虫感染对新生儿影响的研究

目的探讨孕妇弓形虫感染对胎儿的影响.方法采用酶免三联诊断法对356例母婴配对标本进行血清学检测.结果产妇弓形虫感染率平均为1 9.1%,各单项检测分别为CAg 15.2%、IgM 2.5%、IgG 3.4%;新生儿弓形虫感染率平均为17.7%,其脐血各单项检测分别为CAg 1 6.9%、IgM 0.3%、IgG 2.2%.CAg垂直传播率为35.2%(19/54),IgG垂直传播率为33.3%(4/12).在4例畸胎儿中,2例脐血弓形虫血清学阳性.结论孕妇感染弓形虫有1/3机会可通过胎盘垂直感染胎儿,影响胎儿发育,重者致畸、致死.     

肌幼虫可溶性抗原与ES抗原检测抗旋毛虫抗体效果的比较

目的比较旋毛虫肌幼虫可溶性抗原(SAg)与ES抗原(ESAg)检测抗旋毛虫抗体的效果。方法应用SAg-ELISA和ESAg-ELISA对旋毛虫病患者血清、感染旋毛虫的小鼠血清及肉汁、其他寄生虫感染人及动物血清进行抗旋毛虫抗体的检测。结果SAg-ELISA和ESAg-ELISA对10例旋毛虫病患者血清检测时抗体阳性率均为100%,但对10份正常人血清检测时SAg-ELISA的背景较深,两种抗原的A值相比较具有显著性差异(P<0.05);应用两种抗原对旋毛虫感染小鼠和正常小鼠血清及肉汁的检测结果与对人血清的检测结果相似。SAg与肝吸虫、肺吸虫、血吸虫等寄生虫感染人及动物血清均有交叉反应,而ESAg仅与1例肺吸虫病患者血清有交叉反应。结论旋毛虫肌幼虫SAg和ESAg检测抗旋毛虫抗体的敏感性相同,但ESAg的特异性优于SAg;肉汁也可作为样本进行抗旋毛虫抗体的检测。     

幼虫冰冻切片抗原间接荧光抗体试验诊断旋毛虫病

目的：评价幼虫冰冻切片抗原间接荧光抗体试验（ＩＦＡＴ）诊断旋毛虫病的价值。方法：应用纯净幼虫冰冻切片间接荧光抗体试验检测感染旋毛虫小鼠和旋毛虫病患者血清中的抗旋毛虫抗体,在患者发病后及应用阿苯达唑治疗后不同时间采集血清,以其他寄生虫病患者和健康人血清为对照。结果：１５只小鼠感染旋毛虫后２ｗｋ即可检出抗体,４６７例旋毛虫病患者的抗体阳性率为８６．５％,而丝虫病、包虫病患者各４５例和健康人血清５６份均为阴性。４８份并殖吸虫病患者的交叉反应率为１６．６７％。旋毛虫病患者发病后１ｗｋ的抗体阳性率为７０．２１％,至发病后２ｗｋ、３ｗｋ及４ｗｋ则分别升至９１．０％、９５．８％及１００％。幼虫冰冻切片的抗原活性于－２０℃可保存至５年。旋毛虫病患者治疗后１ｗｋ抗体阳性率从治疗前的８７．５％上升到１００％,血清抗体滴度比治疗前也有明显升高,治疗后１个月的抗体转阴率为２４％,至治疗后４个月达７５％。结论：幼虫冰冻切片间接荧光抗体试验诊断旋毛虫病具有较高的敏感性和特异性,并可用于疗效考核     

单克隆抗体74D_(11)、SJA_(111)检测慢性日本血吸虫病循环抗原的研究

本研究用双抗夹心ＥＬＩＳＡ法检测慢性日本血吸虫病人血清循环抗原，观察血吸虫感染家兔血清循环抗原的动态变化。该方法采用兔抗ＡＷＡ－ＩｇＧ作包被抗体，抗日本血吸虫成虫和虫卵单抗ＳＪＡ１１１和７４Ｄ１１组合作Ⅱ抗，１７２例经粪孵毛蚴确诊的血吸虫病人中，１３６例循环抗原阳性（７９．１％），其中轻度（毛蚴数＜５只／２０克粪）、中度（６－２０）、重度（大于２０）感染者循环抗原阳性率分别为７３．４％、８７．７％、９２．８％，检测６５例健康献血员，２０例肺吸虫病人，１２例华支睾吸虫病人，１０倒包虫病人，交叉反应率依次为１．５％、５％、０％、０％，４２例经吡喹酮治疗后的血吸虫病人用该方法复查，治后３月和６月随访粪孵毛蚴阴转者中，循环抗原阴转率分别为７８．０％和９２．１％，考核疗效明显优于检测循环抗体。用单抗ＳＪＡ１１１检测感染家兔循环抗原动态变化，循环抗原于感染后３—４周可检出，７周达高峰，以后逐渐消退，而循环抗体（ＩｇＧ）推迟１周出现，８－９周达高峰。实验结果表明，血吸虫病血清ＣＡｇ阳性率与感染度有关，可在早期检出，检测方法具有较高敏感性和特异性，可用于早期诊断和疗效考核。     

血吸虫循环抗原检测及疗效考核价值

采用单克隆抗体(McAb)S31/32双夹心ELISA法检测感染不同寄生虫病人血清中循环抗原(CAg)427份,其中慢性血吸虫病188例,阳性检出率为95.2%,晚期血吸虫病阳性率4.5%(2/44),正常53人假阳性率5.7%.测定其他寄生虫感染患者及肝炎病人,除发现肺吸虫病、旋毛虫病和华枝睾吸虫病有交叉反应外,其它均呈阴性反应.同时,检测血吸虫病治疗前、后CAg,计495 份血清,慢性血吸虫病治疗前188例,阳性率95.2%,吡喹酮治疗后3、6、12和36个月,其阴转率分别为20.4%、31.9%、96.2%和87.7%.比较双夹心ELISA法和一步法ELISA检查CAg,无显著差异.测试结果提示,采用单抗S31/32建立的双夹心ELISA检测血吸虫循环抗原有很高的敏感性和良好的特异性,病人在治疗后一年其阴转率高,有很好的疗效考核价值.     

双抗体夹心ELISA检测循环抗原在血吸虫病控制流行地区应用的研究

对血吸虫病已控制流行地区1099名10岁以上的人群,应用抗血吸虫成虫抗原多克隆抗体(PcAb)为捕捉抗体,抗血吸虫虫卵抗原单克隆抗体(McAb)MG_2-HRP为覆盖抗体的双抗体夹心ELISA,检测血吸虫循环抗原(CAg),并以ELISA检测抗体(CAb)作平行对照.结果CAg和CAb的阳性检出率分别为4.55%和4.64%,两者的差异无显著意义(P>0.05).在50例CAg阳性者中,无血吸虫病治疗史者31例,而51例CAb阳性者中,无血吸虫病治疗史者仅6例.CAg和CAb联合检测能提高检出率.     

单克隆抗体检测囊虫病人循环抗原及其在疗效考核中的应用

用单克隆抗体致敏绵羊红细胞作反向间接血凝试验，检测７７例囊虫病人血清循环抗原，阳性率为６４．９％；３０例正常人血清的假阳性率为０；２２例华支睾吸虫病人、２４例包虫病人和１７例弓形虫病人的交叉反应率分别为４．６％、４．２％和１１．８％。结果表明，该法较为敏感、特异，且稳定可靠、简单易行，尤适于在基层医疗单位推广应用。检测经治疗１～１０个疗程囊虫病人血清中循环抗原和抗体，发现随着疗程的增加循环抗原的消失明显快于抗体，且大部分患者的循环抗原和其临床症状、体征同时消失。表明循环抗原的检测对囊虫病的诊断和疗效考核有一定的实用价值。     

间接荧光抗体试验诊断人体旋毛虫病的研究

应用旋毛虫幼虫冰冻切片抗原ＩＦＡＴ检测２１６份旋毛虫病人血清，抗体阳性率为９０．７４％，发病后第１周抗体阳性率７０．５９％，第２周升至９１．３０％，有显著差异（ｘ￣２＝６．５９，Ｐ＜０．０２５），至第３、４周分别达９５．８３％和１００％。丝虫、日本血吸虫及包虫病人和健康人血清均为阴性反应。华支睾吸虫、并殖吸虫及囊虫病人的假阳性率分别为３．３３％、２２．２２％及３．３３％。旋毛虫幼虫抗原片在－２０℃至少可保存２．５年而不丧失活性。ＩＦＡＴ诊断人体旋毛虫病具有较高的敏感性和特异性及良好的重复性和稳定性。     

BALB／C小鼠感染卫氏并殖吸虫后血清中循环抗原的动态

用滤纸血以抗卫氏并殖吸虫囊蚴单克隆抗体Ｇ２Ｂ３间接双抗体夹心－ＥＬＩＳＡ检测感染卫氏并殖吸虫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠血中循环抗原（ＣＡｇ），结果显示：小鼠感染卫氏并殖吸虫囊蚴后第３天检出ＣＡｇ，其阳性率为３８％，第１５天起ＣＡｇ达高峰，阳性率１００％，２６～５６天ＣＡｇ维持高水平，第７１天ＣＡｇ滴度下降，以后维持在一定水平，说明滤纸血可以代替血清作ＣＡｇ检测。以抗卫氏并殖吸虫囊蚴单克隆抗体Ｇ２Ｂ３间接双抗体夹心－ＥＬＩＳＡ检测感染卫氏并殖吸虫小鼠血中ＣＡｇ时，具有简便，敏感和特异的优点，可试用于肺吸虫感染的早期诊断和流行病学调查。     

三种血清学试验检测旋毛虫病抗体的研究

用免疫酶染色试验（ＩＥＳＴ）、间接血凝试验（ＩＨＡ）和玻片法环蚴沉淀试验（Ｓｌｉｄｅ）３种血清学方法检测感染旋毛虫豚鼠血清，阳性率分别为９７．１％、１００％和９６．７％。用此３种血清学方法检测正常豚鼠、血吸虫病兔、肺吸虫病大白鼠、蛔虫病人和鞭虫病人血清，除１例肺吸虫病大白鼠血清ＩＨＡ出现阳性反应外，其它血清３种方法均为阴性反应。结果表明３种方法对旋毛虫病特异性抗体的检测均有较好的敏感性和特异性。     

棘球蚴病CAb、CAg与CIC检测结果的评价

对棘球蚴病患者用ABC-ELISA法检测CAb,ABC-夹心双抗体法和Pernice法分别检测CAg和CIC,阳性率分别为87.0％(40/46)、15.6％(7/45)和17.8％(8/45)。在检测CAb阴性的6例中CAg阳性者4例,表明CAb与CAg同时检测可提高阳性检出率达95.6％(43/45)。 CAb阴性病例主要是肺棘球蚴病,占83.3％(5/6)。CAg的检出率仅15.6％,但特异性高,未出现交叉反应和假阳性反应。检测CIC不但检出率不高,而且非特异性反应与检测CAb时相似。     

旋毛虫病p49抗原相关抗体的ELISA检测

目的 以纯化的融合蛋白p49/GST为抗原建立ELISA检测方法。方法 对一批试验血清进行间接ELISA检测。结果 19份工人感染鼠血清、5份人工感染猪血清、4份病人血清呈IgG抗体阳性,21份人工感染鼠血清呈IgM抗体阳性,而正常对照血清及300份屠宰场待检猪血清均呈阴性反应,其结果与常规压片法结果相符。结论 融合蛋白p49/GST对于研制旋毛虫病的诊断抗原具有潜在应用价值。