趋化肽fMLP与博安霉素偶联物制备及其体内抗肿瘤活性的初步评价

目的：建立fMLP与博安霉素（BAM）的偶联物制备方法,初步评价其抗肿瘤活性。方法：以偶联剂EDC和NHS-S03将fMLP与BAM进行偶联,以MALDI—TOF质谱检测其偶联效果,以SephadexG15分离纯化偶联物;以TTC法观察偶联物的抗菌作用,采用小鼠肝癌H22移植瘤模型来观察其抗肿瘤作用。结果：通过SephadexG15分离纯化,收集第1峰前半部分获得了较纯的偶联物;偶联物fMLP—BAM的抗菌活性是BAM的17．0％,偶联物BAM—fMLP5mg·kg^-1组抑瘤率为52．3％,BAM5mg·k^-1组抑瘤率为67．6％（P〉0．05）。结论：根据本文提供的方法可以制备fMLP与BAM的偶联物,但该偶联物体内抗肿瘤活性与博安霉素相比略有下降。     

力达霉素增强顺铂诱导人肝癌BEL-7402细胞凋亡作用及机制研究力达霉素增强顺铂诱导人肝癌BEL-7402细胞凋亡作用及机制研究

目的 研究抗肿瘤抗生素力达霉素与顺铂的体外协同抗肿瘤作用及其机制。方法 采用克隆形成法、流式细胞术、琼脂糖凝胶电泳、Hoechst 33342和PI双荧光染色法、Western blot等方法。结果 力达霉素与顺铂联合对人肝癌BEL-7402细胞有很强的协同杀伤作用;可以使BEL-7402细胞的DNA 出现明显的梯状断裂；可以使阻滞于S期的BEL-7402细胞减少而使凋亡细胞比例明显增多；联合用药后BEL-7402细胞核出现明显的凋亡形态变化；使BEL-7402细胞内Bcl-2的表达显著降低。结论 力达霉素可以增强顺铂的抗肿瘤作用，提示力达霉素与顺铂联合有望应用于肿瘤联合化疗。     

力达霉素烯二炔发色团对肝癌的实验治疗

目的研究力达霉素发色团对肝癌的实验治疗。方法采用体内接种肿瘤法研究力达霉素发色团对小鼠肝癌22或裸鼠人肝癌Bel-7402的抗肿瘤作用。结果力达霉素发色团在肿瘤接种24h后1次静脉给药能明显抑制小鼠肝癌22的生长，当剂量达4．6、9．2、18．3μg／kg时，抑制率分别为59％、81％、85％。力达霉素发色团在接种肿瘤后72h给药的抑瘤效果不如接种后24h的效果强。力达霉素发色团（LDC）和力达霉素（LDM）均能抑制裸鼠肝癌Bel-7402肿瘤的生长。接种后d27。具有相同克分子数的LDC（18．5μg／kg）和LDM（250μg／kg）的抑瘤率分别为51．1％和45．9％，抑瘤效果相当。LDC对肿瘤生长的抑制作用存在剂量．效应关系。结论力达霉素发色团在动物体内能抑制小鼠肝癌和人裸鼠肝癌的生长，是力达霉素产生生物学作用的主要活性部分。     

力达霉素抗肝癌作用的实验研究

目的观察力达霉素(LDM)在体外、体内对肝癌的抑制作用。方法用四甲基偶氮唑蓝(MTT)方法测定力达霉素和丝裂霉素C对人肝癌BEL-7402细胞及小鼠肝癌22细胞的增生抑制作用。以小鼠移植性肝癌22模型观察不同剂量力达霉素的治疗效果。结果力达霉素和丝裂霉素对人肝癌BEL-7402细胞的半数抑制浓度(IC50)分别为(0.0030±0.0006)nmol/L和(150±27)nmol/L。力达霉素对小鼠肝癌22细胞的IC50为0.025nmol/L。体内试验:力达霉素静脉给药1次及延迟静脉给药3次对小鼠移植性肝癌22细胞的生长均有显著抑制作用。当通过静脉给予1次力达霉素剂量为0.025、0.05和0.1mg/kg时对肝癌22细胞抑瘤率分别为62%、72%和85%。结论力达霉素在体外对肝癌细胞增生有强烈的抑制作用,动物试验有显著疗效     

力达霉素对人肝癌BEL—7402细胞基因组DNA的影响

目的：深入研究力达霉素对人肝癌BEL－7402细胞基因组DNA的影响。方法：琼脂糖凝胶电泳检测DNA泳带;Suthern杂交检测对基因的损伤;中性凝胶电泳检测DNA断裂修复;超螺旋GEM质粒检测断裂DNA位点。结果：力达霉素1μmol/L处理BEL-7402细胞,15,30,60min,可检测到明显的DNA梯带。低浓度的力达霉素对活跃基因N－ras的外显子和内含子均有明显的损伤作用,但对沉默IL－2基因没有影响。力达霉素断裂DNA后,DNA损伤难以修复。力达霉素断裂GEM质粒DNA的位点是－OH HO－。结论 ：力达霉素明显地损伤人肝癌BEL－7402细胞的基因组DNA。该结果有助于解释其高活性地杀伤肿瘤细胞的分子机制。     

鸦胆子油亚纳米乳注射液对小鼠移植性肿瘤的抑制作用

目的观察鸦胆子油亚纳米乳注射液对3种小鼠移植性肿瘤的抑制作用。方法应用移植性s180腹水瘤、Heps肝癌细胞、Lewis肺癌细胞荷瘤小鼠,设鸦胆子油亚纳米乳注射液0．45、0．9、1．8g·kg^-13个剂量组,尾静脉给药,计算肿瘤生长抑制率。结果鸦胆子油亚纳米乳注射液低、中、高剂量对小鼠S180腹水瘤的抑制率分别为11．1％、19．5％、33．5％;对小鼠Heps肝癌细胞抑制率分别为12．6％、21．1％、33．0％;对小鼠Lewis肺癌细胞抑制率分别为14．0％、24．9％、42．2％。与模型对照组比较,低剂量组差异无统计学意义（P〉0．05）,中、高剂量组差异有统计学意义（P〈0．05,P〈0．01）,呈现一定的剂量相关性。结论鸦胆子油亚纳米乳注射液对ICR小鼠S180腹水瘤、Heps肝癌、Lewis肺癌有明显的抑制作用。     

抗IV型胶原酶单抗与平阳霉素新型免疫偶联物的抗肿瘤作用

目的考察抗IV型胶原酶单抗3G11与平阳霉素(PYM)偶联物的抗肿瘤作用。方法采用多聚谷氨酸(PLG)为中间载体制备3G11-PLG-PYM偶联物,MTT法测定其对肿瘤细胞增殖的抑制作用,以小鼠移植性肝癌H22为模型观察体内抗肿瘤作用。结果偶联物保留了单抗3G11对IV型胶原酶的免疫活性,对体外培养H22和KB细胞的杀伤作用弱于PYM。动物实验中PYM10mg·kg-1对H22肝癌的抑制率为60·6%,而等细胞毒性剂量的3G11-PLG-PYM偶联物抑瘤率达到90·8%,与PYM相比可显著延长小鼠的中位生存时间。结论3G11-PLG-PYM偶联物对小鼠肝癌H22的抑瘤作用比PYM强,可能成为新型的抗肿瘤靶向药物。     

蟾酥脂质体注射液的抗肿瘤作用

目的探讨蟾酥脂质体注射液(CS)的抗肿瘤作用。方法体内实验采用小鼠肝癌H22、肉瘤S180荷瘤小鼠模型,考察CS的抑瘤作用;采用小鼠接种肝癌H22后,用环磷酰胺造成免疫低下模型,考察CS提高机体免疫力作用。体外实验采用MTT法,测CS对人宫颈癌HeLa细胞或人肝癌BEL-7402细胞增殖抑制率。结果CS(0.2、0.4、0.8 mg.kg-1)对2种荷瘤小鼠肿瘤增长有显著或非常显著的抑制作用(P<0.05,P<0.01);同时对机体具有明显的免疫调节作用。CS 0.01~3.00 mg.L-1对人宫颈癌HeLa细胞或肝癌BEL-7402细胞增殖有非常显著的抑制作用;CS对人宫颈癌HeLa细胞IC50为0.51 mg.L-1,95%可信限0.213 2~1.214 0 mg.L-1,CS对人肝癌BEL-7402细胞IC50为0.75 mg.L-1,95%可信限0.312 6~1.801 5 mg.L-1。结论蟾酥脂质体注射液体内、体外均有抗肿瘤活性,且具有免疫调节功能。     

月腺大戟与狼毒大戟对人肝癌细胞BEL-7402体外增殖的影响对比研究

目的:对比研究月腺大戟与狼毒大戟对人肝癌细胞BEL-7402体外增殖的影响。方法:灌胃月腺大戟(0.097、0.485、0.2425g.kg-1)、狼毒大戟(0.05、0.025、0.0125g.kg-1)混悬液,每天1次,连续3d,末次给药后自大鼠腹主动脉采血,以分离的血清加培养液体外培养人肝癌细胞BEL-7402;MTT比色法测定生长抑制率;通过集落形成试验测定克隆形成率。结果:狼毒大戟对BEL-7402细胞增殖和克隆形成率有明显的抑制或降低作用,且与给药剂量呈正相关;月腺大戟对BEL-7402细胞增殖和克隆形成率无明显影响。结论:狼毒大戟对人肝癌细胞BEL-7402体外增殖抑制作用明显强于月腺大戟。     

平阳霉素与单克隆抗体3D6及其Fab＇片段偶联物对肝癌的实验治疗

单抗3D6是抗IV型胶原酶单克隆抗体。以葡聚糖T－40（DxtranT-40)为中介体制备3D6和平阳霉素（PYM）的偶联物3D6－PYM。采用间接ELISA法、TTC抑菌效价检测法，克隆形成法，MTT法及动物移植性肿瘤模型测定偶联物的生物学活性与体内外抗肿瘤作用。实验表明，3D6－PYM偶联物与PG、KB、C26及H22细胞等于免疫学阳性反应；3D6－PYM偶联物对BEL－7402、B和H22细胞的细胞毒作用强于游离PYM。应用小鼠移植性肝癌模型观察偶联物对肝癌生长的抑制作用及长期疗效。结果显示，3DY－PYM偶联物对肿瘤生长有较强的抑制作用且在体内作用时间延长，发挥较好的疗效。第21天时，按100mg/kg剂量比较，3D6－PYM偶联物、3D6与PYM混合物及PYM的抑瘤率分别达到99．7％、95．6％、81．5％，停止治疗后，继续观察各组动物的生存时间，对照组的中位生存期脒38d，按10mg/kg剂量比较，3D6－PYM偶联物组、3D6与PYM混合物组以及PYM组的中位生存期分别为＞120、88和54d。120d时，3D6－PYM偶联物10mg/kg组未见动物死亡。以β－环糊精为中介体制备单抗3D6 Fab′片段与PYM偶联物Fab′－PYM，小鼠移植性肝癌模型皮下接种后第7天给药，Fab′－PYM偶联物组与PYM抑瘤率分别为81．0％和29．1％，以上研究结果表明，3D6－PYM及Fab′－PYM偶联物具有比游离PYM更强的抑制肝癌生长作用，特别是长期观察，其差别更为显著。     

抗IV型胶原酶单抗3G11与力达霉素偶联物的抗肿瘤作用

目的观察抗IV型胶原酶单抗3G11与力达霉素（LDM）偶联物的抗肿瘤作用。方法 用MTT法测定其对肿瘤细胞的增殖抑制作用；用小鼠移植性肝癌H22观察体内抗肿瘤作用。结果3G11-LDM偶联物保留了单抗3G11与IV型胶原酶和靶细胞H22细胞的结合能力，体外试验H22细胞显示比游离LDM更强的细胞增殖抑制作用。体内3G11-LDM偶联物0.05和0.10 mg·kg^-1对小鼠移植性肝癌H22的抑瘤率分别为87.8%和97.2%，而游离LDM 0.05 mg·kg^-1的抑瘤率为67.1%， 且3G11-LDM偶联物组小鼠的中位生存时间比LDM组明显延长。结论3G11-LDM偶联物对小鼠移植性肝癌H22的抑瘤作用比LDM强，可能成为抗肿瘤靶向药物。     

人肝癌Bel7402/5-FU耐药株多药耐药与凋亡关系的研究

目的　从凋亡的角度探讨人肝癌细胞Bel74 0 2 / 5 FU多药耐药的分子机制。方法　采用SRB法检测Bel74 0 2 / 5 FU耐药株的多药耐药性 ,用AnnexinV FITC/PI双标流式细胞术检测Bel74 0 2细胞及其耐药株的凋亡程度 ,PI单染检测细胞周期变化 ,RT PCR方法检测凋亡相关因子bcl 2、bcl xl、bcl xs、bax、fas、p5 3和cpp32的表达情况。 结果　Bel74 0 2 / 5 FU耐药株具有多药耐药性 ;相同剂量 30 μmol·L-1及 15 0 μmol·L-15 FU处理 ,Bel74 0 2细胞凋亡明显增加 ,G0 /G1期增加 ,S期、G2 /GM减少 ,耐药株不出现凋亡增加及细胞周期改变 ;耐药株凋亡相关因子bcl xl、bcl xs和bax表达上调 ,p5 3和cpp32表达下调。 结论　人肝癌Bel74 0 2 / 5 FU耐药株的多药耐药性可能和凋亡减少有关 ,抗凋亡因子bcl xl表达上调 ,促凋亡因子 p5 3和cpp32表达下调可能参与Bel74 0 2 / 5 FU耐药株的多药耐药。     

半边旗提取物5F-Na盐溶液的制备及体外抑癌作用研究

目的:制备5F-Na盐,并观察其对肺癌细胞株NCL-H460和肝癌细胞株BEL-7402的杀伤作用。方法:加入0.5mol·L-1NaOH使半边旗提取物5F完全溶解,稀HCl调节pH值为7.4,加入磷酸盐缓冲液使其pH值稳定,高效液相色谱法测定5F-Na盐溶液中5F的含量。通过MTT法检测所制备5F-Na盐溶液对肺癌细胞株NCL-H460和肝癌细胞株BEL-7402的杀伤作用。结果:所制备5F-Na盐溶液中5F为标示量的(100.51±2.18)%,其对NCl-H460细胞株24、48、72h的IC50分别为23.7、14.2、7.0μg·mL-1,对BEL-7402细胞株24、48、72h的IC50分别为157.3、41.5、21.0μg·mL-1。结论:本研究制备的5F-Na盐溶液能有效抑制癌细胞株生长增殖。     

Cinnamamide, an antitumor agent with low cytotoxicity acting on matrix metalloproteinase

The antitumor activity of cinnamamide (CNM), an agent acting on matrix metalloproteinase (MMP), was investigated in the present study. CNM displayed low cytotoxicity. By the MTT assay the IC50 (50% inhibitory concentration) values of CNM on cell proliferation ranged from 1.29 to 1.94 mM in human oral epidermoid carcinoma KB cells, human hepatoma BEL-7402 cells and human fibrosarcoma HT-1080 cells. Moreover, the IC50 for human fetal lung 2BS cells reached 4.33 mM. The administration of CNM in the range of 50-150 mg/kg (i.p. or p.o.) showed moderate antitumor effects in mice. When administered i.p. or p.o., CNM (150 mg/kg) inhibited the growth of transplanted hepatoma 22 by 48.8 or 40.5%, respectively. At the dose of 100 mg/kg, CNM inhibited the growth of colon 26 carcinoma by 39.0% and that of Lewis lung carcinoma by 53.9%. In the Lewis lung carcinoma model, CNM at the dose of 100 mg/kg (i.p.) also reduced the lung metastasis by 59.1%. Gelatine zymography revealed that CNM was able to decrease the level of MMP-2 in conditioned medium of HT-1080 tumor cells in a concentration-dependent manner. These results indicate that CNM is an antitumor agent with low cytotoxicity acting on MMP and may serve as a lead compound in the development of antitumor drugs.     

异长春花碱脂质体的制备及其在小鼠体内的组织分布

目的:制备异长春花碱(VRB)脂质体并考察其在小鼠体内的组织分布情况。方法:采用薄膜分散法制备VRB脂质体;以Lewis肺癌C57BL/6J荷瘤小鼠为模型,分为对照组(VRB注射液)和脂质体组(VRB脂质体),每组24只,分别尾静脉注射10mg·kg-1,于给药后0.5、2.0、12.0h取样,以高效液相色谱法测定各组小鼠不同时间血浆、心、肝、脾、肺、肾、肌肉、大脑、肿瘤中的药物浓度,并计算制剂的靶向性参数。结果:制备的VRB脂质体的平均粒径为158.3nm,脂质体外观圆整、大小均匀,可见明显的双分子层结构;与VRB注射液比较,VRB脂质体在模型小鼠肝、脾、肿瘤中3个时间点的分布均明显增强(P<0.05或P<0.01),其余组织分布无明显变化;VRB脂质体对模型小鼠具有明显的肝、脾、肿瘤靶向性及一定的肺靶向性。结论:所制备的VRB脂质体对肺癌模型小鼠肿瘤组织具有明显靶向性。     

补康灵对Lewis肺癌小鼠癌性恶病质的改善作用研究

目的:研究补康灵对Lewis肺癌小鼠癌性恶病质的改善作用。方法:在小鼠腋后线第6肋间胸膜腔接种Lewis肺癌细胞悬液复制C57BL/6小鼠癌性恶病质模型,观察补康灵对恶病质小鼠的生存状况(体重、摄食量、饮水量、生存期)的影响;检测分析与癌性恶病质相关的血清细胞因子(肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素(IL)-1、IL-6)的水平变化。结果:补康灵能显著增加癌性恶病质小鼠摄食量及饮水量,抑制其体重下降(P<0.01或P<0.05),显著降低TNF-α、IL-1、IL-6水平(P<0.05)。结论:补康灵对Lewis肺癌小鼠的癌性恶病质有明显的改善作用,其作用机制可能与其调节TNF-α、IL-1、IL-6等细胞因子有关。     

17aα-D-高炔雌二醇-3-乙酯抑瘤活性及与γ-射线协同增效作用研究

目的:研究新型雌激素17aα-D-高炔雌二醇-3-乙酯(DHEA)的抑瘤活性。方法:对DHEA进行肺腺癌细胞系A549、肝癌细胞系Bel-7402的体外抑瘤试验,计算半数抑制浓度(IC50);在小鼠体内进行宫颈癌细胞U14抑瘤实验及与γ-射线协同作用的肉瘤细胞S180的抑瘤增效实验,计算抑瘤率。结果:体外试验中DHEA对A549和Bel-7402的IC50分别为12.28、17.79μg·mL-1;体内实验中对U14抑瘤率最高达64.3%,对S180抑瘤率合用及DHEA单用的抑瘤率均高于50%,且合用组更高。结论:DHEA具有体内、外抑瘤活性,且与γ-射线合用具有协同增效作用。     

Antiangiogenic effect of berberineα-hydroxy-δ-decanoylethyl sulfonate on Lewis lung carcinoma

OBJECTIVE To investigate the antiangiogenic and antitumor effects of berberineα-hydroxy-δ-decanoylethyl sulfonate(HB)in vitro and in vivo.METHODS MTT assay was employed to determine the proliferation of tumor cells.Western blot analysis was used to detect the expression of VEGF and MMP-9.Transwell co-culture was used to determine the cell migration at the conditioned medium of Lewis lung carcinoma cells exposed to HB for 24 h.The C57BL/6 mice bearing Lewis lung carcinomas were treated with vehicle,different doses of HB(60,90 and 120mg·kg-1,ig)for 20 d,or cyclophosphamide(50mg·kg-1,ig)at d 1,d 8 and d 15.Afterwards,the xenografted tumors were exercised and weighed,and the lung metastasis was determined by HE stainingof the lung tissues.Tumor angiogenesis was determined by CD34 staining and microvessel density(MVD)by immunohistochemistry.RESULTSHB inhibited the growth of Lewis lung carcinoma cells in a time-dependent manner with IC50 value of 8.87,2.26 and 0.98mg·L-1,respectively when the cells were treated with HB for 24,48 and 72h.Cell migration induced by the conditioned medium of Lewis lung carcinoma cells treated with 2.5,5 and 10mg·L-1 HB was reduced by 37%,54% and 63%respectively(P<0.01).HB suppressed the expression of angiogenesis factors in a concentration-dependent manner.HB was effective in inhibition of MMP-9 expression at 5,10 and 20mg·L-1(P<0.05),whereas HB 20mg·L-1 was minimal effective concentration in inhibition of VEGF expression(P<0.01).On C57BL/6 mice bearing Lewis lung carcinomas,HB significantly reduced the tumor burden and MVD in tumor mass as well as inhibited lung metastasis at doses of 90 and 120mg·kg-1.CONCLUSION HB produces reliable antiangiogenic effect,inhibits the growth and metastasis of Lewis lung carcinoma.These effects may be attributed to its ability of suppressing the expression of VEGF and MMP-9,and reducing MVD.     

魟鱼软骨多糖抗血管形成的实验研究

目的:探讨魟鱼软骨多糖(RCG)对血管形成的作用。方法:原代培养人脐静脉内皮细胞,采用MTT法检测不同浓度RCG对人脐静脉内皮细胞增殖的影响;缝线诱导大鼠角膜新生血管,通过计算新生血管面积评价不同浓度RCG对大鼠角膜新生血管的作用;建立小鼠Lewis肺癌模型,观察不同浓度RCG作用后肿瘤生长情况,计算原发瘤抑制率,免疫组织化学染色计数肿瘤组织微血管密度(MVD)。结果:RCG可明显抑制人脐静脉内皮细胞的体外增殖,IC50为62.93mg.mL-1;与生理盐水组比较,应用不同浓度RCG后新生血管面积明显减少(P<0.01),原发瘤抑制率呈浓度依赖性,MVD值降低(P<0.01)。结论:RCG对实验动物具有良好的抗血管生成活性。