芍药苷对大鼠急性胰腺炎的保护作用及相关机制研究

目的探讨芍药苷(Paeoniflorin,PAE)对大鼠急性胰腺炎的作用及相关分子机制研究。方法建立大鼠急性胰腺炎模型,60只SD大鼠随机分为5组,A组(空白对照组)、B组(急性胰腺炎模型组)、C组(PAE 20 mg/kg)、D组(PAE 40 mg/kg)、E组(PAE 80 mg/kg),每组12只,灌胃处理。48 h后干湿法检测胰腺水肿指数;血生化仪测定血清淀粉酶水平;酶联免疫吸附测定法(ELISA法)检测肿瘤坏死因子α(TNF-α),白细胞介素1β(IL-1β)以及白细胞介素6(IL-6)表达,蛋白质印迹法(Western blot)检测核转录因子κB(NF-κB)、凋亡蛋白Bax和Bcl-2表达。结果造模后,B组水肿指数和血清淀粉酶明显高于A组,而PAE治疗48 h后C、D、E组水肿指数和血清淀粉酶明显低于B组(P0.05);ELISA显示,造模后,B组TNF-α,IL-1β以及IL-6表达显著高于A组,而C、D、E组TNF-α,IL-1β以及IL-6表达明显低于B组,差异有统计学意义(P0.05);Western blot法显示,造模后,B组NF-κB和Bax蛋白表达显著高于A组,而Bcl-2表达明显低于A组,PAE治疗后,C、D、E组NF-κB和Bax蛋白表达显著低于B组,Bcl-2表达明显高于B组,差异有统计学意义(P0.05)。结论 PAE可通过抑制炎症反应和胰腺腺泡细胞凋亡减轻大鼠的急性胰腺炎。     

EPO对心肺复苏后大鼠海马神经元的细胞凋亡、Bcl-2及Bax表达的影响

目的观察促红细胞生成素(EPO)在心肺复苏后对大鼠脑海马神经元细胞凋亡、Bcl-2和Bax表达的影响。方法雄性Wistar大鼠32只,随机分4组:正常对照组(A组)、假手术组(B组)、心肺复苏模型组(C组)、EPO干预组(D组)。C组、D组采用窒息的方法制作大鼠呼吸心跳骤停模型,后行心肺复苏治疗(CPR),D组CRP同时静脉给予EPO 3000U/kg;B组仅静脉给予等剂量生理盐水,4小时的脑海马组织,采用免疫组化法观察各组神经元细胞凋亡、Bcl-2及Bax的表达情况。结果光镜下A、B组未见凋亡细胞,C组可见较多凋亡细胞,D组凋亡细胞数少于C组(P0.01)。A、B组少量Bcl-2、Bax阳性细胞,C、D组Bcl-2、Bax阳性细胞数均高于A、B组(P0.01),D组Bcl-2阳性细胞数高于C组(P0.01),D组Bax阳性细胞数低于C组。结论心肺复苏后大鼠海马神经元的细胞凋亡明显增加,Bcl-2、Bax表达上调。EPO可抑制心肺复苏后海马神经元的细胞凋亡、上调Bcl-2表达同时下调Bax表达。     

坏死血管平滑肌细胞释放IL-1对其周围正常肌细胞迁移能力的影响

[目的]观察坏死的血管平滑肌细胞对周围正常细胞迁移能力的影响,并探讨其可能的作用机制.[方法]采用无血清无糖低氧条件制备血管平滑肌细胞坏死模型,并收集坏死细胞培养上清液(简称坏死上清)干预正常细胞.实验设置坏死上清干预组(A组)、IL-1干预组(B组)、坏死上清与IL-1拮抗剂联合干预组(C组)以及无血清低糖DMEM培养的对照组(D组).RT-PCR检测各组细胞基质金属蛋白酶(MMP)2、MMP-9 mRNA的表达;Western blot检测各组细胞MMP-2、MMP-9蛋白的表达;Transewell检测各组细胞的迁移能力.[结果]A组和B组MMP 2、MMP9mRNA的表达均显著高于D组,差异具有统计学意义(P＜0.05),C组MMP-2、MMP-9mRNA的表达显著低于A组和B组,差异具有统计学意义(P＜0.05).A组和C组MMP 2、MMP-9蛋白的表达显著高于D组(P ＜0.05),且具有时间依赖性.C组MMP-2、MMP-9蛋白的表达显著低于A组和B组(P＜0.05).条件培养液培养24 h,B组细胞迁移能力显著高于D组(P＜0.05),C组迁移细胞数显著低于A组和B组(P＜0.01),A组细胞迁移能力无显著变化.条件培养液培养48 h,A组和B组细胞迁移个数显著高于D组(P＜0.01),C组迁移细胞数显著低于A组和B组(P ＜0.01).[结论]坏死的血管平滑肌细胞可能通过释放IL-1促进了周围正常平滑肌细胞MMP-2、MMP-9的表达,进而促进细胞的迁移.     

香芹酚对大鼠痛风性关节炎中血清炎性因子及软骨细胞凋亡的影响

目的探索香芹酚(CAR)对痛风性关节炎(GA)大鼠炎性因子的影响,以及对膝关节软骨细胞凋亡的影响。方法尿酸钠诱导大鼠痛风性关节炎模型,60只大鼠随机分为5组,A组(正常组),B组(模型组),C组(香芹酚10mg/kg),D组(香芹酚25 mg/kg)和E组(香芹酚50 mg/kg),每组12只。A、B组给予等量生理盐水处理,连续给药14 d,C、D、E分别在GA造模后给予香芹酚10 mg/kg、25 mg/kg、50 mg/kg,每日一次,灌胃喂食。7 d和14 d分别观察各组大鼠踝关节肿胀程度,并利用ELISA法检测各组大鼠血清中肿瘤坏死因子α(TNF-α),白细胞介素1β(IL-1β),前列腺素E2(PGE2),转换生长因子β1(TGF-β1)。14 d取踝关节软骨,利用Western blot检测软骨Bax和Bcl-2蛋白表达。结果 7 d和14 d B组大鼠踝关节肿胀程度显著高于A组,而C、D、E组明显低于B组(P均0.05),且呈剂量依耐性。在给药第7 d和14 d,B组大鼠血清TNF-α,IL-1β,PGE2水平显著高于A组(P均0.05),而C、D、E组血清TNF-α,IL-1β,PGE2水平明显低于B组(P均0.05),且呈剂量依耐性。而7 d和14 d B组大鼠血清TGF-β1水平显著低于A组(P均0.05),而C、D、E组血清TGF-β1水平明显高于B组(P均0.05),且呈剂量依耐性。14 d B组大鼠踝关节软骨Bax蛋白表达明显高于A组,而C、D、E组明显低于B组(P均0.05),B组Bcl-2蛋白表达明显低于A组,而C、D、E组明显高于B组(P均0.05),且呈剂量依耐性。结论香芹酚能显著抑制痛风性关节炎大鼠踝关节肿胀度,抑制炎症反应以及减轻软骨细胞的凋亡,且香芹酚的作用呈剂量依耐性。     

不同剂量FTY720 对大鼠急性脊髓损伤后Caspase-3 表达及细胞凋亡的影响

目的比较不同剂量FTY720 对大鼠急性脊髓损伤后Caspase-3 的表达及神经细胞凋亡的影响。方法雌性SD 大鼠200 只,随机分为5 组,每组40 只。A 组大鼠不打击脊髓,缝合切口后立即以0.3 ml 生理盐水灌胃。B、C、D、E 组大鼠制作Allen'sT9脊髓损伤模型。B组造模后立即以0.3 ml 生理盐水灌胃,C、D、E 组分别以FTY720 按1 mg/kg、3 mg/kg、5 mg/kg 生理盐水稀释至0.3 ml 灌胃。分别于术后6 h、12 h、24 h、48 h 和72 h 取损伤段脊髓超薄切片,行SP 免疫组化染色观察Caspase-3 表达及TUNEL 染色观察细胞凋亡情况,并计算相应时间点免疫组化学染色阳性细胞比值。结果A组各时间点几乎见不到Caspase-3 和细胞凋亡阳性表达。B、C、D、E 组均在伤后6 h 开始出现凋亡细胞表达,伤后24 h 达高峰,伤后48 h 开始减弱,伤后72 h 进一步减少。伤后各时间点细胞凋亡表达均为B 组>C 组>D 组=E 组(P>0.05)>A 组(P<0.05)。Caspase-3 表达与细胞凋亡同步。相关性检验显示B、C、D组中,FTY720 的剂量与Caspase-3 表达、细胞凋亡表达呈负相关(P<0.05)。D组和E 组中,FTY720 剂量与上述指标不相关(P>0.05)。结论FTY720 可以显著减少大鼠急性脊髓损伤后Caspase-3 的表达及神经细胞凋亡。FTY720 的剂量与其减轻Caspase-3 表达和细胞凋亡效果之间存在一定量效关系。3 mg/kg 是FTY720 治疗大鼠急性脊髓损伤的最适剂量。     

钙调磷酸酶在β肾上腺素能刺激诱导心肌凋亡中的作用

目的:探讨钙调磷酸酶(calcineurin,CaN)在β肾上腺素能刺激诱导的心肌凋亡中的作用及其机制。方法:将原代培养的乳鼠心肌细胞随机分为6组:正常对照组(N组),Iso组(A组),β1受体拮抗剂-比索洛尔组(B组),β2受体拮抗剂-ICI11851组(C组),α1受体拮抗剂-哌唑嗪组(D组),β、α1受体拮抗剂-卡维地洛组(E组)。B、C、D、E组在A组基础上分别给予上述药物,终浓度分别为10μmol/L、0.1μmol/L、0.1μmol/L、50μmol/L。流式细胞仪和DNALadder测定各组心肌细胞凋亡的情况,RT-PCR检测CaNmRNA的表达水平。结果:A、B、C、D、E与N组相比,细胞凋亡率升高(P<0.05),并有CaNmRNA表达;B、E组与A组比较,细胞凋亡率分别降低30.12%,44.55%(P<0.01),并且CaNmRNA相应表达下降,差异有显著性(P<0.05),而对D组来说,凋亡率及CaNmRNA却有所增加(P<0.05),C组与A组相比变化无显著性。结论:β肾上腺素能刺激诱导心肌凋亡作用主要通过β1受体介导,伴随CaN表达升高,β1受体阻断剂使其表达降低,说明CaN参与...     

生长激素释放肽对高糖诱导下胰岛β细胞凋亡的影响

目的 探讨生长激素释放肽(Ghrelin)对高糖诱导的胰岛β细胞凋亡的影响.方法 根据不同的培养基将胰岛β细胞株NIT-1细胞划分为四组:A组(5.6 mmol/L葡萄糖全程),B组(5.6 mmol/L葡萄糖+10-7 mol/L Ghrelin 24 h,5.6 mmol/L葡萄糖72 h),C组(5.6 mmol/L葡萄糖24 h,33.3 mmol/L葡萄糖72 h),D组(5.6 mmol/L葡萄糖+10-7 mol/L Ghrelin 24 h,33.3 mmol/L葡萄糖培养72 h).流式细胞仪Annexin V/PI双染色法测定四组NIT-1细胞早期凋亡率;Hoechst 33258标记细胞核并在荧光显微镜下测各组细胞总凋亡率;RT-PCR法测定Bcl-2、Bax mRNA水平.结果 (1)与A组比较,B组NIT-1细胞早期凋亡率及总凋亡率均无统计学意义(P均>0.05),而C组NIT-1细胞早期凋亡率及总凋亡率均显著增加(P均<0.01);与C组比较,D组NIT-1细胞早期凋亡率及总凋亡率均降低(分别P<0.01,P<0.05).D组较A组细胞早期凋亡率有增加(P<0.05),而总凋亡率无统计学意义(P>0.05).(2)与A组比较,B组NIT-1细胞Bax、Bcl-2、Bcl-2/Bax表达水平无变化,而C组Bcl-2、Bcl-2/Bax水平显著下降(P<0.05);与C组比较,D组Bcl-2、Bcl-2/Bax表达有升高趋势,但无统计学意义;各组Bax表达水平无差别.结论 Ghrelin对葡萄糖生理浓度下的胰岛β细胞凋亡无影响,但可抑制高浓度葡萄糖诱导的β细胞凋亡.Ghrelin可能不通过Bcl-2、Bax抑制高糖诱导的β细胞凋亡.     

血管内皮生长因子在大鼠胰腺炎相关肺损伤中的作用

目的:观察胰腺炎大鼠血清中血管内皮生长因子(VEGF)的变化与肺组织湿/干质量比(W/D)及细胞凋亡的关系,探讨VEGF在胰腺炎相关肺损伤中的作用。方法:健康雄性SD大鼠40只,按随机数字法分为A、B、C、D、E共5组。A、B、C组以5%牛磺胆酸钠(1mL/kg)逆行胆胰管注射制备大鼠急性坏死性胰腺炎(ANP)模型,D组以0.5%牛磺胆酸钠(1mL/kg)注射制备大鼠急性水肿性胰腺炎(AEP)模型,E组以生理盐水注射作为对照。A、B、C组分别于建模后3、6、12h处死大鼠,D、E组于建模后12h处死大鼠,取大鼠肺组织进行W/D测定,采用ELISA方法测定大鼠血清中VEGF浓度,以末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记法(TUNEL)原位检测大鼠肺组织细胞凋亡情况。结果:ANP模型组血清VEGF水平较AEP组及生理盐水对照组显著升高(P<0.05)。ANP模型组血清VEGF值与肺组织W/D比值无关(r=0.082,P=0.702),与肺组织细胞凋亡指数呈负相关(r=-0.785,P<0.05)。结论:急性胰腺炎时血清VEGF升高可能与肺组织水肿无关,其升高对胰腺炎相关肺损伤可能具有保护作用。     

重复经颅磁刺激治疗脑出血家兔的实验研究

目的　探讨重复经颅磁刺激 (rTMS)对脑出血家兔的治疗作用及其相关机制。方法　家兔 3 6只 ,随机分为A、B、C组。A组 (治疗组 )和B组 (模型组 )采用家兔自体血注射制作脑出血模型 ,C组 (对照组 )注射生理盐水。A组家兔于造模后 12h开始实施rTMS ,每日 3次 ;B组和C组不进行rTMS。各组家兔分别于模型制作后 12h、2 4h、48h、72h、1周、2周处死。采用TUNEL法和免疫组化技术 ,检测出血灶周围脑组织中细胞凋亡及bcl 2、TNF α和IL 6的表达。结果　 3组均未见自发性出血。C组未见凋亡细胞及bcl 2阳性表达 ;A组和B组均有凋亡细胞和bcl 2表达水平增高 ,2组相比 ,A组的凋亡细胞较少 ,bcl 2表达水平更高(P <0 .0 5 )。C组无TNF α和IL 6阳性细胞 ;A组和B组均有TNF α和IL 6表达 ,2组相比 ,A组的TNF α表达水平较低 ,IL 6表达较高 (P均 <0 .0 5 )。结论　rTMS刺激可通过调控炎症因子表达、减轻炎性损伤以及上调bcl 2的表达、减少细胞凋亡 ,在脑出血中发挥治疗作用。     

尼达尼布联合参附注射液对大鼠百草枯中毒肾损伤的保护作用

目的 研究尼达尼布联合参附注射液对大鼠百草枯(PQ)中毒所致肾损伤的保护作用。方法 将90只SD大鼠按随机数字表法分为A、B、C、D、E组，其中A组为正常对照组，B组为PQ染毒对照组，C组为参附注射液治疗组，D组为尼达尼布治疗组，E组为参附注射液联合尼达尼布治疗组，每组18只。B、C、D、E组给予20%PQ 80 mg/kg灌胃制备大鼠急性PQ中毒模型，A组给予等量生理盐水灌胃。C、D、E组在PQ灌胃后6 h开始每日给予药物干预，A组和B组在相同时点给予等量生理盐水，分别在不同处理后第1、3、7天时处死大鼠。观察血清中转化生长因子-β1(TGF-β1)、白细胞介素-1β(IL-1β)水平，取肾组织，通过苏木精-伊红(HE)染色在光镜下观察肾组织病理变化。Western blot印迹方法检测肾组织中成纤维细胞生长因子受体1(FGFR1)、血小板衍化生长因子受体α(PDGFRα)以及血管内皮生长因子受体2(VEGFR2)的表达水平。结果 (1)药物治疗后第1、3、7天，与A组比较，B、C、D、E组TGF-β1、IL-1β均升高(P<0.05)。与B组比较，C、D、E组TGF-β1、I...     

超声辐照携带miR-520c-3p和miR-132微泡对体外培养人肝癌细胞Huh7的影响

目的:观察超声辐照携带miR-520c-3p和miR-132微泡对体外培养人肝癌细胞Huh7的影响。方法:以超声辐照携带miR-520c-3p和miR-132微泡转染体外培养人肝癌Huh7细胞株。实验分5组:对照组(A组),miR-520c-3p mimics negative control+miR-132 mimics negative control+微泡造影剂+超声辐照(B组),miR-520c-3p mimics+微泡造影剂+超声辐照(C组),miR-132 mimic+微泡造影剂+超声辐照(D组),miR-520c-3p mimics+miR-132 mimics+微泡造影剂+超声辐照(E组)。超声辐照条件:机械指数0.4,辐照参数2.0 W/cm2,连续辐照30 s,间隔60 s,共5次。采用实时荧光定量PCR检测miR-520c-3p,miR-132,磷脂酰肌醇蛋白多糖-3(GPC3)和转录辅助因子YAP m RNA表达,采用Western印迹检测GPC3和YAP蛋白表达,采用噻唑蓝比色法检测细胞增殖活性,采用流式细胞术检测细胞凋亡。结果:与A组、B组比较,C组、E组miR-520c-3p相对表达量升高(P0.05),而D组无明显改变(P0.05);D组、E组miR-132相对表达量升高(P0.05),而C组无明显改变(P0.05)。与A组、B组比较,C组、E组GPC3蛋白相对表达量降低(P0.05),而其m RNA相对表达量无明显改变(P0.05)。C组、D组、E组YAP蛋白以及其m RNA相对表达量均降低(P0.05)。与A组、B组比较,C组、D组、E组细胞增殖率降低(P0.05),且E组降低最明显(P0.05);C组、D组、E组细胞凋亡率增加(P0.05),且E组凋亡最明显(P0.05)。结论:超声辐照携带miR-520c-3p和miR-132微泡能显著抑制人肝癌Huh7细胞株增殖,并促进其凋亡,其机制可能与调节GPC3和YAP的表达有关。     

4 ℃高渗盐对心搏骤停大鼠S100蛋白的影响

目的 探讨4℃高渗盐(HTS)对心搏骤停(SCA)大鼠血清及脑海马组织S100蛋白的影响.方法 30只大鼠随机分为假手术(A)组、生理盐水(NS)(B)组、4℃生理盐水(NS)(C)组、HTS(D)组、4℃HIS(E)组.每组6只,除A组外,其余各组均于复苏即刻给药.制作窄息致大鼠SCA模型,自主循环恢复(ROSC)后24 h采静脉血检测各组血清S100蛋白浓度,处死大鼠取脑组织检测脑海马S100蛋白的表达.数据以均数±标准差(χ±s)表示,统计采用方差分析和q检验,以P<0.05为差异具有统计学意义.结果 血清S100蛋白浓度B,c,D,E组较A组均明显升高(P<0.01),C,D.E组较B组明显降低(P<0.01),D,E组较C组明显降低(P<0.01),E组较D组降低(P<0.05).脑组织S100表达B,C,D组较A组均明显升高(P<0.01),E组较A组亦升高(P<0.05);C组较B组低(P<0.05),D,E较B组降低更明显(P<0.01);D、E组较C组下降显著(P<0.01);E组较D组低(P<0.05).结论 SCA后给予4℃HTS能降低血清S100蛋白的浓度、抑制脑海马组织S100蛋白的表达,保护脑组织.     

花旗松素通过抑制NF-κB信号通路对缺氧复氧诱导H9c2心肌细胞损伤的保护作用

目的探讨花旗松素通过抑制核转录因子-κB(NF-κB)信号通路对缺氧复氧诱导H9c2心肌细胞损伤的保护作用。方法将H9c2细胞分为A组、B组、C组、D组、E组,A组于37℃、5%CO_2恒温箱中培养30 h; B组缺氧(O_2浓度6%的厌氧培养箱)培养24 h,再复氧(37℃、5%CO_2恒温箱)培养6 h; C组加入1μmol/L花旗松素,缺氧培养24 h,复氧培养6 h; D组加入10μmol/L花旗松素,缺氧培养24 h,复氧培养6 h; E组加入100μmol/L花旗松素,缺氧培养24 h,复氧培养6 h。比较各组H9c2细胞形态学变化、存活率、凋亡率、NF-κB蛋白表达量、NF-κB抑制蛋白α(IκB-α)蛋白表达量。结果 HE染色显示,A组细胞形态结构正常,B组H9c2细胞形态结构异常,横纹模糊,可见大量点状坏死灶,间质水肿明显,炎性细胞浸润明显; C、D、E组H9c2细胞病理改变较B组显著改善,随着花旗松素剂量增大,H9c2细胞病理改善越明显。B组H9c2细胞存活率、IκB-α蛋白表达量较A组明显下降(P 0. 05); C、D、E组H9c2细胞存活率、IκB-α蛋白表达量较B组明显升高(P 0. 05),呈剂量依赖性。B组H9c2细胞凋亡率、NF-κB蛋白表达量较A组明显升高(P 0. 05); C、D、E组H9c2细胞凋亡率、NF-κB蛋白表达量较B组明显下降(P 0. 05),呈剂量依赖性。结论花旗松素通过抑制NF-κB信号通路对缺氧复氧诱导H9c2心肌细胞损伤起到保护作用,并这种作用呈剂量依赖性,这可为心肌缺血再灌注损伤的防治提供新的方向。     

高压氧对缺氧/复氧模型下大鼠骨髓间充质干细胞的影响及其相关机制

目的:探讨高压氧对缺氧/复氧模型下大鼠骨髓间充质干细胞的影响及其相关机制。方法:选取3—4周龄SD雄性大鼠,采用全骨髓贴壁法培养至P3代,随机分为正常组A(细胞置于常规培养箱内培养)、缺氧/复氧组B(置于95%N2、5%CO_2密闭培养箱中培养9h,复氧6h)、缺氧/复氧+高压氧组C(90%O_2,2.5ATA、90min)、缺氧/复氧+高压氧+YC-1组D,实验组其余时间处理和正常组相同。A、B、C、D组均于处理结束12h后行CCK-8比色法、流式细胞仪检测细胞存活率及凋亡率。Western blot检测HIF-1α、β-catenin、LEF-1蛋白表达水平。结果:(1)与A组相比,缺氧/复氧后B、C、D组细胞存活率明显降低,差异具有显著性意义(P0.05),给予高压氧后C组存活率比B组升高,D组存活率较C组降低(P0.05)。(2)实验组B、C相比,C组中HIF-1α、β-catenin、LEF-1蛋白表达水平升高(P0.05)。(3)实验组C、D组相比,给予YC-1阻断剂后HIF-1α、β-catenin、LEF-1蛋白表达减少(P0.05)。结论:高压氧能够提高缺氧环境下骨髓间充质干细胞存活率,其机制可能与调控HIF-1α介导的Wnt通路有关。     

三种不同方法检测β-咔啉类生物碱所致的人胃癌SGC-7901细胞凋亡

目的比较分析目前常用的三种检测细胞凋亡方法在不同β-咔啉类生物碱浓度条件下所致人胃癌SGC-7901细胞凋亡中的运用。方法将生长状态良好的细胞按不同的给药浓度分为A组40μg／ml,B组20μg／ml,C组10μg／ml,D组51xg／ml,E空白对照组,作用24h、48h。分别用MTT法、Hoechest33258细胞核染色法、流式细胞术检测细胞凋亡。结果MTF法结果显示,A组、B组、C组、D组与E组相比较,生长抑制率差异有统计学意义fP〈O．01）;Hoechest33258细胞核染色法显示,E组细胞核浓染、边集、碎裂较少,其他组细胞核均有不同程度的改变,A组、B组、C组、D组与E组相比较,凋亡核百分比差异有统计学意义伙0．05）;流式细胞仪检测结果显示,A组、B组、C组、D组与E组细胞凋亡率相比有统计学差异（P〈0．01）。结论β-咔啉类生物碱能引起人胃癌SGC-7901细胞凋亡。     

低强度脉冲超声对大鼠膝骨关节炎软骨细胞内质网应激相关Caspase-12表达的影响

目的:通过研究低强度脉冲超声(low intensity pulsed ultrasound,LIPUS)对大鼠膝骨关节炎(osteoarthritis,OA)软骨细胞内质网应激相关Caspase-12表达的影响,探讨低强度脉冲超声对骨关节炎的作用机制。方法:体外培养大鼠膝关节软骨细胞,并用IL-1β进行骨关节炎造模。取3代以内软骨细胞随机分为空白对照组(A组),OA模型对照组(B组),OA+LIPUS治疗组(C组),OA+磷酸盐缓冲液(PBS)对照组(D组),OA+4-苯基丁酸(4-PBA)组(E组),OA+4-苯基丁酸(4-PBA)+LIPUS治疗组(F组)。超声治疗参数为3MHz,20%,0.1W/cm2,20min/d,治疗7天。采用HE染色观察细胞形态,免疫细胞化学染色检测胞质Col2的表达,Western-blot检测MMP-13、Bax、Caspase-12蛋白水平。结果:①HE染色结果显示与A组对比,B、D组细胞数目最少,形态最差;C组较B组细胞数目及形态有明显改善;与D组对比,E、F组细胞数目增多,细胞形态可。②Col2免疫细胞化学染色,平均光密度值(AOD值)进行比较,B组与A组对比AOD值明显降低;C组与B组对比AOD值有明显的升高;D组、B组比较差异无显著性意义;E组较D组AOD值显著升高;F组、E组AOD值差异无显著性意义。③蛋白印迹检测MMP-13、Bax、Caspase-12蛋白表达水平,B组与A组比较蛋白表达增多(P0.05);D组与B组比较差异无显著性意义;E组与D组比较蛋白表达降低(P0.05);F组与E组比较差异无显著性意义。结论:低强度脉冲超声可通过抑制骨关节炎软骨细胞内质网应激相关的Caspase-12凋亡途径,减少软骨细胞凋亡,延缓OA的发生发展。     

芍药苷治疗重症急性胰腺炎的实验研究

目的观察芍药苷对重症急性胰腺炎(SAP)大鼠的治疗效果及对核因子kappaB(NF-κB)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)表达的影响。方法 SD大鼠40只随机分为5组:正常对照组(A组)、急性胰腺炎(AP)模型组24h点(B组)、AP模型组72h点(C组)、芍药苷治疗组24h(D组)和芍药苷治疗组72h(E组),每组8只。采用L-精氨酸腹腔内注射的方法诱发SAP模型,造模后立即灌胃生理盐水(B、C组)、芍药苷溶液(D、E组),分别于造模后24、72h时间点处死各组大鼠。采血检测血清淀粉酶、TNF-α、IL-6;取胰腺组织分2份,HE染色行光镜检查、WesternBlot法检测NF-κBp65蛋白表达。结果造模24h后与A组比较,B、D组大鼠血清淀粉酶均升高(P均<0.05),但D组淀粉酶水平明显低于B组(P<0.05);造模后72h,C、E组血清淀粉酶水平均下降至接近A组水平(P均>0.05)。D、E组较同时间点B、C组的病理改变和病理学评分均明显减轻(P均<0.05)。血清TNF-α和IL-6的水平分别为D组:(10.45±1.90)pg/ml和(610.38±106.19)pg/ml,E组:(9.93±1.63)pg/ml和(598.13±83.77)pg/ml;均明显低于同时间点的B组[(20.53±4.16)pg/ml,(1255.75±118.82)pg/ml,P均<0.05]与C组[(23.85±5.59)pg/ml,(1366.33±163.16)pg/ml,P均<0.05]。D、E组较同时间点B、C组NF-κBp65/β-actin的比值明显减少[D组与B组相比,(0.23±0.044)vs(0.71±0.029),P<0.05;E组与C组相比,(0.04±0.006)vs(0.65±0.026),P<0.05]。结论芍药苷对SAP大鼠治疗作用的机制可能与其抑制NF-κB活化,在整体水平上抑制细胞因子基因表达,使机体免受过量细胞因子的损伤等因素有关。     

大黄素对大鼠急性脊髓损伤后继发脊髓水肿的影响

目的探讨大黄素对大鼠急性脊髓损伤后脊髓水肿的影响及其机制。方法将180只健康雌性Sprague-Dawley大鼠随机分为假手术组(A组),模型组(B组),大黄素低剂量组(C组)、中剂量组(D组)和高剂量组(E组),每组36只。采用Allen法制作大鼠脊髓损伤模型,术后3 d、7 d、14 d及28 d,BBB评分及斜板实验观察大鼠运动功能恢复。术后3 d,HE染色观察脊髓组织病理变化,干湿重法检测脊髓组织含水量,伊文思蓝(EB)染色检测血脊髓屏障(BSCB)通透性,RT-PCR和Western blotting检测水通道蛋白-4(AQP-4)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)m RNA和蛋白表达。结果 BBB评分及斜板实验结果显示,术后7 d、14 d、28 d,C组、D组和E组均优于B组(P0.05),E组最佳(P0.05)。术后3 d,HE染色显示,B组损伤节段内有大片出血灶,神经细胞肿胀、破坏,大量炎性细胞浸润,组织间隙增宽,水肿严重,C组、D组和E组上述病理改变改善,其中E组最明显;B组脊髓组织含水量较A组增高(P0.05),D组、E组脊髓组织含水量低于B组和C组(P0.05),E组低于D组(P0.05);B组EB含量高于A组(P0.05),C组、D组和E组EB含量均低于B组(P0.05);C组、D组和E组AQP-4、MMP-2 m RNA和蛋白表达均低于B组(P0.05),E组最低(P0.05)。结论大黄素能减轻大鼠急性脊髓损伤后的脊髓水肿,促进肢体功能康复,这可能与大黄素下调损伤后脊髓组织AQP-4和MMP-2表达,降低BSCB通透性有关。     

实验性脑出血血肿周围组织细胞凋亡的研究

目的探讨脑出血大鼠血肿周围组织细胞凋亡的发生、发展情况。方法64只SD大鼠被随机分为2组,实验组（56只）采用胶原酶诱导大脑尾状核脑出血模型,对照组（8只）为假手术组,实验组分为术后6h、12h、24h、48h、72h、7d、14d7个时相点,运用TUNEL、SP技术和电子显微镜检测血肿周围组织中细胞凋亡及caspase-3蛋白表达。结果TUNEL阳性细胞数在实验组6h时可见,24～48h表达明显,与对照组相比有显著性差异（P〈0.05）。caspase-3蛋白表达规律与TUNEL一致,但高峰时间早于TUNEL。透射电镜可见细胞凋亡形态学改变。结论脑出血后血肿周围组织存在神经细胞凋亡,且与caspase-3蛋白表达有关。     

再生障碍性贫血患者血清对32D细胞凋亡及磷酸化蛋白激酶Cε表达的影响

目的 观察蛋白激酶Cε(PKCε)在再生障碍性贫血(AA)患者血清体外诱导小鼠髓系前体细胞(32D细胞)凋亡中的作用.方法 重型AA(SAA)患者血清、非重型AA(NSAA)患者血清及正常对照者血清分别与小鼠32D细胞孵育,用流式细胞术检测细胞凋亡指数,用蛋白免疫印迹法检测磷酸化PKCε(pPKCε)的表达.结果 血清孵育32D细胞0、12、24、36及48 h,饥饿4 h,SAA组和NSAA组pPKCε表达在24 h上升到最高水平,与正常对照组相比较,差异有统计学意义(P＜0.05),血清孵育32D细胞24 h饥饿4 h后,SAA组pPKCε表达水平(0.90±0.10)较NSAA组(0.64±0.08)和正常对照组(0.54±0.08)明显上调(P值均＜0.05),NSAA组较正常对照组pPKCε表达水平也明显增加(P＜0.05),SAA组细胞凋亡率[(4.05±1.05)%]较正常对照组[(2.45±0.51)%]明显增加(P＜0.05),NSAA组[(3.24±0.56)%]较正常对照组无明显增加(P＞0.05).SAA组经同一份血清孵育的细胞的凋亡率与pPKCε表达水平之间有明显相关性(r=0.869,P＜0.05).结论SAA和NSAA患者血清均可诱导32D细胞pPKCε的表达,前者可导致32D细胞凋亡,后者对32D细胞凋亡无明显影响.