肿瘤转移抑制因子CD9/MRP-1基因在小鼠围着床期子宫内膜的动态表达

目的:探讨肿瘤转移抑制基因(CD9)/运动相关蛋白(MRP-1)mRNA和蛋白在胚胎着床过程中的作用。方法:应用RT-PCR和免疫组化技术观察CD9/MRP-1mRNA和蛋白在早孕和假孕小鼠子宫中的表达规律。结果:早孕d1-4小鼠子宫组织均有CD9/MRP-1mRNA表达,且d4表达最多;其蛋白主要表达在d1-4的子宫内膜上皮细胞,且早孕d2-4CD9/MRP-1在子宫基质细胞散在阳性表达。假孕d1-8小鼠子宫组织均有CD9/MRP-1mRNA表达,假孕d5表达开始增加,至d6达到峰值。而CD9/MRP-1蛋白在假孕d1-8子宫内膜腺上皮均有表达,而子宫内膜腔上皮均无表达。假孕d2-5,子宫基质细胞出现散在阳性表达。结论:①CD9/MRP-1在早孕小鼠子宫中呈动态表达,提示它在胚胎精确侵袭子宫内膜的调节中发挥作用。②CD9/MRP-1在妊娠小鼠子宫的表达是非胚胎依赖性的。     

TRAIL在小鼠胚胎着床过程中子宫内膜的表达

目的:检测TRAIL在小鼠胚胎着床过程中子宫内膜的表达,探讨它在蜕膜细胞凋亡中的作 用。方法:采用RT-PCR及免疫组化技术检测妊娠d 1-8小鼠子宫组织TRAILmRNA及蛋白的表 达情况。结果:妊娠d 1-8的小鼠子宫组织均有TRAIL mRNA的表达,且着床期间的表达较着床前 明显增加(P<0．05)。妊娠d 1-3,小鼠子宫内膜无TRAIL蛋白表达;妊娠d 4,TRAIL表达在小鼠胚 胎定位、黏附点的子宫内膜腔上皮细胞;妊娠d 5-6,TRAIL定位于胚胎着床点附近的蜕膜细胞中; 妊娠d 7-8,TRAIL表达在与子宫蜕膜邻近的胚胎滋养层细胞中。结论:在小鼠胚胎着床过程中, TRAIL诱导子宫内膜腔上皮细胞凋亡可能是胚胎跨越上皮屏障的重要机制之一,且TRAIL诱导的 蜕膜细胞和胚胎滋养层细胞的凋亡在滋养层细胞对子宫内膜的适度侵入过程中起重要作用。     

核因子-κB在小鼠胚泡着床前后子宫表达的初步研究

探讨核因子-κB(NF-κB)在小鼠胚泡着床过程中是否存在的短暂激活。方法:采用免疫组织化学检测小鼠子宫内膜NF-κB的亚基p65蛋白的定位和表达,Western印迹法检测子宫内膜NF-κB的抑制性蛋白IκBα的降解。结果:p65在小鼠胚胎着床前后子宫内膜均有表达,其部位主要在腔上皮细胞和腺上皮细胞的胞浆部分,基质细胞和子宫肌层也有微弱表达。妊娠后子宫内膜p65的表达增加,妊娠d5达最高值,d8仍然维持较高水平;而d5IκBα的降解最明显。结论:NF-κB可能通过其短暂激活来参与调节小鼠胚泡着床。     

肿瘤转移抑制因子CD82/KAI1在假孕小鼠子宫的表达及其对小鼠胚胎着床的影响

目的:研究CD82/KAI1mRNA及蛋白在假孕d1-8小鼠子宫中的表达规律,以及CD82/KAI1抗体对小鼠胚胎体外发育及着床的影响。方法:用RT-PCR及免疫组织化学技术观察CD82/KAI1mRNA及蛋白在假孕小鼠子宫的表达规律。将8-细胞小鼠胚胎培养于含不同浓度CD82/KAI1抗体的培养液中,观察囊胚形成及脱透明带的情况。妊娠d4小鼠宫角注射CD82/KAI1抗体,于妊娠d8观察小鼠胚胎植入数量。结果:①CD82/KAI1mRNA在假孕d1-8小鼠子宫中均有表达,于d4、d5表达最丰富。CD82/KAI1蛋白在假孕d1-8的子宫基质细胞及腺上皮细胞均有表达,假孕d1-4腔上皮细胞无表达,假孕d5子宫腔上皮细胞出现弱阳性表达,从d6开始子宫腔上皮细胞表达逐渐增强。②一定浓度的CD82/KAI1抗体可明显抑制囊胚的形成率(1∶400,P<0.05)和脱带率(1∶800,P<0.05)。③宫角注射一定量的CD82抗体可以显著提高小鼠胚胎的着床数(8.35±0.17vs4.52±0.24,P<0.05)。结论:CD82/KAI1在妊娠小鼠子宫的表达是非胚胎依赖性的。CD82/KAI1在小鼠胚胎发育和着床过程中发挥重要作用。     

HOXA10的辅因子Meis1、Pbx1在人子宫内膜中的表达

目的:探讨HOXA10的两个辅因子Pbx1和Meis1在人正常子宫内膜中的表达及其变化规律。方法:采用原位杂交进行组织学定位,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)进行半定量,在mRNA水平上检测人正常月经周期子宫内膜中Pbx1和Meis1的表达水平。结果:Meis1在子宫内膜基质细胞和腺上皮细胞均有表达,其中腺上皮细胞的表达高于基质细胞;增生期Meis1仅有弱表达,分泌期显著增加(P<0.05),以分泌中期表达最强(P<0.05)。在整个月经周期中并未检测到Pbx1的表达。结论:Meis1作为HOXA10的辅因子,在人正常子宫内膜中规律性的表达,可能对HOXA10介导的胚胎着床发挥着重要作用。     

不同条件下小鼠围着床期子宫内膜整合素α_v和Le~y寡糖的表达

目的:探讨促排卵药、胚胎本身及孕后激素等条件对小鼠子宫内膜整合素av和Ley寡糖的表达及对着床窗开放的影响。方法:将成年雌鼠分为对照和实验两大组。对照组为自然受孕;实验组为用促排卵药后受孕,其中一部分为假孕,另一部分为事先行一侧输卵管结扎。各组分别于孕2-7 d取子宫标本2份,一份石蜡包埋行HE染色和免疫组化染色测定Ley寡糖,另一份于-80℃保存,冰冻切片行免疫组化染色测定整合素av。结果:①对照组于孕7 d,大部分小鼠子宫外观即见明显胚胎着床,显微镜下从孕5 d起出现子宫内膜间质的蜕膜反应,但实验组无1例有此变化。②整合素av在小鼠子宫内膜腺上皮细胞胞浆内表达。对照组的表达于孕4 d达高峰,而各实验组的表达高峰均推迟1-2 d,且表达水平较对照组明显减弱(P <0.05)。结扎侧和未结扎侧子宫内膜整合素av的表达高峰无明显差异。③Ley寡糖在小鼠着床期表达于子宫内膜腔上皮和腺上皮表面,其表达两组间无明显差异,不同妊娠天数之间的表达亦无明显差异。在对照组,于孕4 d开始Ley寡糖在子宫内膜间质有表达,孕6 d达高峰,而实验组未见一定的规律。结论:①小鼠子宫内膜腺上皮细胞胞浆内整合素av的表达与子宫内膜着床窗的开放一致。②促排卵药能抑制小鼠子宫内膜着床窗期整合素av的表达,延迟着床窗的开放;孕     

mmu-miR-141在早孕小鼠胚胎着床前、后子宫内膜中的表达及作用

目的:探讨mmu-miR-141在早孕小鼠胚胎着床前、后子宫内膜组织中的表达及作用。方法:荧光定量PCR(FQ-PCR)及原位杂交检测早孕小鼠胚胎着床前、后子宫内膜mmu-miR-141的表达;MTT和流式细胞术检测孕第4日(d 4)子宫内膜基质细胞被mmu-miR-141抑制剂作用72 h后其细胞活力和细胞凋亡情况。结果:mmu-miR-141在小鼠胚胎着床后(d 6)子宫内膜组织中的表达明显低于着床前(d 4)(P<0.05),且表达于基质细胞;其表达下调能使基质细胞增殖活力下降(P<0.05),细胞凋亡增加(P<0.01)。结论:mmu-miR-141通过调控子宫内膜基质细胞的增殖或凋亡,在早孕小鼠胚胎着床前、后的子宫内膜组织中发挥重要的作用。     

Meis1在围着床期小鼠子宫内膜中的表达

目的:探讨Meis1在围着床期小鼠子宫内膜中的作用。方法:采用免疫组织化学定位检测Meis1在小鼠子宫内膜中的表达;采用Real-time RT-PCR和免疫印迹方法,分别在mRNA和蛋白水平定量检测Meis1在围着床期小鼠子宫内膜中的表达水平。结果:免疫组织化学结果显示,Meis1蛋白主要表达于小鼠子宫内膜腺上皮细胞的细胞膜和胞质以及基质细胞和蜕膜细胞的细胞核中,在围着床期小鼠子宫内膜中的表达随妊娠天数的增加而增加,着床后在基质和蜕膜中的表达增强;在孕第4日显著增加,孕第5日达高峰,孕第6日表达下降。Real-time RT-PCR和免疫印迹结果显示,Meis1的表达随妊娠天数的增加逐渐增强,孕第4日明显增强,孕第5日达高峰,孕第6日开始下降。结论:Meis1在围着床期小鼠子宫内膜中呈规律表达,与小鼠着床窗吻合,提示Meis1是调控围着床期子宫内膜容受性的重要因子。     

CON43、CON26蛋白在子宫内膜异位症中的表达及意义

目的:探讨间隙连接蛋白(CON)43、CON26在子宫内膜异位症中的表达及意义。方法:对20例子宫内膜异位症(内异症)内膜用免疫组化法检测CON43和CON26蛋白的表达,并与21例其他良性疾病子宫的内膜进行比较。结果:CON43蛋白主要在内膜腺上皮细胞膜和细胞浆中表达,而CON26阳性染色出现在子宫内膜腺上皮细胞和基质细胞的细胞浆中,而在细胞核中无阳性染色。内异症组中CON43和CON26蛋白表达均较对照组显著降低。结论:由CON43和CON26蛋白介导的子宫内膜各种细胞间的间隙连接,在细胞间的物质和信号的传递中起重要作用。子宫内膜异位症中CON43和CON26蛋白表达的降低,可能导致腺上皮间、基质细胞间以及腺上皮与基质细胞间的物质和信号传递减低或缺失,可能在内膜细胞的游走、粘附于腹膜中起一定作用。     

Survivin在早孕小鼠子宫内膜中的表达

目的:探讨Survivin在早孕小鼠子宫内膜中的动态表达及在胚胎着床中的作用。方法:用FQ-PCR及免疫组化方法分别检测未孕及妊娠d2-7各组小鼠子宫内膜Survivin基因和蛋白的表达。结果:FQ-PCR检测妊娠组Survivin mRNA的表达明显高于未孕组(P<0.01),并且随着妊娠天数的增加子宫内膜Survivin mRNA的表达逐渐增加,到孕d6达到高峰,随后下降,但孕d7仍明显高于未孕组(P<0.01)。免疫组化检测Survivin蛋白在子宫内膜的表达规律与FQ-PCR结果一致。结论:早孕小鼠子宫内膜着床期Survivin mRNA和蛋白均高表达,然后下降,提示Survivin可能通过抗细胞凋亡,促细胞增殖和血管形成的作用,参与胚胎着床。     

月经周期中子宫内膜内皮素及其受体的研究

评价内皮素在内膜生殖生理中的作用,方法利用免疫组织化学和分子原位杂交交结合计算机辅助图象分析技术,检测２３例因良性疾病而行子宫切除术的子宫内膜ＥＴ肽、ＥＴ受体及其两种亚型（ＥＴａＲ、ＥＴｂＲ）的ｍＲＮＡ表达定位、周期性变化。结果在整个月经周期中子宫内膜ＥＴ肽和ＥＴｍＲＮＡ表达有明显的周期性变化,分泌期表达强于增殖期,分泌晚期腺上皮表达最高。基质表达弱于腺上皮,并无明显的周期性变化。ＥＴａＲ和ＥＴｂ     

Differential expression of placental villous angiopoietin-1 and -2 during early, mid and late baboon pregnancy

Although vascular endothelial growth factor (VEGF), angiopoietin-1 (Ang-1) and Ang-2 have important roles in angiogenesis, very little is known about the regulation of these factors in the villous placenta during human pregnancy. In the present study, to investigate whether placental expression of Ang-1, Ang-2 and VEGF was altered in a cell-specific manner with advancing baboon gestation, the mRNA levels of these growth factors were determined by RT-PCR in cells isolated by Percoll gradient centrifugation from and protein localization assessed by immunocytochemistry in the villous placenta at early (day 60), mid (day 100) and late (day 170, term is 184 days) baboon gestation. Mean (+/-SE) Ang-1 mRNA levels, relative to 18S rRNA, in villous syncytiotrophoblast (3.92+/-0.68) and cytotrophoblast (1.31+/-0.31) cell fractions were highest on day 60 of gestation, then decreased by approximately 2.5-fold (P<0.05) to 1.39+/-0.29 and 0.49+/-0.07, respectively, on day 170. Moreover, Ang-1 mRNA levels in the villous stromal cells and Ang-2 mRNA levels in all placental villous cell fractions were similar on days 60, 100, and 170 of gestation. In contrast to Ang-1 and Ang-2, placental villous cytotrophoblast VEGF mRNA levels were increased 2.94-fold (P<0.05) between mid (0.67+/-0.15) and late (1.97+/-0.49) gestation. A corresponding decrease in Ang-1, absence of change in Ang-2, and increase in VEGF protein immunocytochemical expression were exhibited in placental trophoblast with advancing baboon pregnancy. Ang-1/Ang-2 and the angiopoietin Tie-2 receptor were expressed in vascular endothelial cells of the villous placenta, indicating that these blood vessel cells are a major site of ligand-receptor interaction for angiogenesis during primate pregnancy. We conclude that there is a cell-specific differential change in placental villous trophoblast expression of VEGF, Ang-1, and Ang-2 which we propose is important in regulating angiogenesis in the villous placenta during primate pregnancy.     

Expression of galectin-3 in mouse endometrium and its effect during embryo implantation

This study investigated the expression pattern of galectin-3 (Gal-3) in mouse endometrium during early pregnancy and its function during embryo implantation. The expression of Gal-3 was measured at the mRNA level using real-time PCR and at the protein level using immunohistochemistry and Western blotting. The expression of Gal-3 mRNA and protein in the pregnant group was higher than in the non-pregnant group, and mRNA and protein expression reached their maximum levels on days 4 and 2, respectively. Immunohistochemistry results showed that Gal-3 protein presented in luminal epithelium and glandular epithelium and reached its maximum on days 6–8 and days 2–4 after pregnancy, respectively. The number of embryos implanted decreased substantially when Gal-3 was knocked down in mouse endometrium. In conclusion, increased Gal-3 expression after pregnancy is required for embryo implantation.     

HOXA10基因在子宫内膜组织中的表达及与不孕的关系

目的　探讨HOXA10基因在正常育龄妇女及不明原因不孕患者子宫内膜中的表达 ,在着床过程中的作用及与不孕的关系。方法　采用原位杂交和逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)技术 ,检测 5 2例正常育龄妇女及 38例不明原因不孕患者子宫内膜组织中HOXA10基因mRNA的表达。其中 ,正常育龄妇女子宫内膜周期为 10例增殖早期、10例增殖晚期、9例分泌早期、16例分泌中期、7例分泌晚期 ,不明原因不孕患者子宫内膜周期为增殖早期 7例、增殖晚期 8例、分泌早期 6例、分泌中期 11例、分泌晚期 6例。结果　 (1)HOXA10基因mRNA在正常育龄妇女子宫内膜腺体及间质中均有表达。原位杂交法检测 (以显色区灰度阳性单位表示 )显示 ,分泌中期腺体为 5 6 9± 0 5 7、间质为 7 48± 0 6 7,分泌晚期腺体为 5 99± 0 40、间质为 7 98± 1 0 8,显著高于增殖早期 (腺体 3 0 4± 0 30 ,间质3 2 5± 0 31)、晚期 (腺体 3 35± 0 2 0 ,间质 3 2 0± 0 37)和分泌早期 (腺体 3 0 7± 0 2 6 ,间质 3 18± 0 2 7)(P <0 0 1) ;分泌中、晚期间质表达高于腺体 (P <0 0 1)。RT PCR法检测显示 ,HOXA10基因mRNA表达 ,分泌中期为 (5 7 0± 3 4) %、晚期为 (5 6 2± 2 9) % ,显著高于增殖早期的 (31 8± 2 6 ) %、晚期的(32 2± 2 3) %和     

Expression of heparanase and angiopoietin-2 in patients with endometriosis

OBJECTIVE: The objective was to investigate the expression of heparanase (Hpa) and angiopoietin-2 (Ang-2) in endometriosis. STUDY DESIGN: In ectopic and eutopic endometrium of patients undergoing laparoscopy for endometriosis (n=86) and in normal endometrium of patients undergoing laparoscopic tubal ligation or hysteroscopic resection because of uterus septus (n=30), we determined Hpa and Ang-2 gene expression by RT-PCR. To support the mRNA data, the expression of Hpa and Ang-2 protein was measured by Western blot analysis. Finally, Hpa and Ang-2 in these tissues was localized by immunohistochemical staining. RESULT(S): The positive rate of Hpa and Ang-2 mRNA in ectopic and eutopic endometrium in the study group was significantly higher than that in normal endometrium in the control group. In the study group, ectopic and eutopic endometrium expressed a higher positive rate of Hpa and Ang-2 protein, whereas in the control group, normal endometrium expressed a lower positive rate of Hpa and Ang-2 protein. In eutopic and ectopic endometrium, there was balanced expression between Hpa and Ang-2. Both Hpa and Ang-2 showed a balanced expression between eutopic and ectopic endometrium. In ectopic endometrium, strong staining for Hpa and Ang-2 was observed both in epithelial cells and in stromal cells, but in eutopic endometrium, Hpa and Ang-2 were mainly expressed in epithelial cells. CONCLUSION: The higher expression of Hpa and Ang-2 in ectopic and eutopic endometrium may play an important role in the pathogenesis and development of endometriosis.     

表皮生长因子受体在子宫内膜、早孕蜕膜及滋养细胞中的表达

目的了解表皮生长因子受体（ＥＧＦＲ）在子宫内膜细胞分化及发育中的作用。方法采用免疫组织化学及逆转录聚合酶链反应（ＲＴＰＣＲ）技术测定５８例正常子宫内膜（３２例增生期,２６例分泌期）与２６例早孕蜕膜。结果ＥＧＦＲ存在于正常子宫内膜、早孕蜕膜腺体及间质细胞的细胞膜、核膜及胞浆内,分布均匀。ＥＧＦＲ还位于早孕蜕膜腺体及间质细胞核内。正常子宫内膜ＥＧＦＲ的表达,腺体部分高于间质部分（Ｐ＜０．０５）,ＥＧＦＲ在增生期及分泌期子宫内膜腺体的表达差异无显著性（Ｐ＞０．０５）,但ＥＧＦＲ在早孕蜕膜组织中的表达明显高于增生期及分泌期（Ｐ＜０．０５）。ＥＧＦＲ在间质细胞的表达,早孕蜕膜高于分泌期内膜,而增生期内膜则表达最低（Ｐ＜０．０５）。ＥＧＦＲｍＲＮＡ的表达从弱到强依次为增生期、分泌期、蜕膜、滋养细胞,增生期与分泌期比较,差异无显著性（Ｐ＞０．０５）,早孕蜕膜较分泌期及增生期明显增加（Ｐ＜０．０５）,滋养细胞ＥＧＦＲｍＲＮＡ的表达明显高于增生期、分泌期及早孕蜕膜（Ｐ＜０．０５）。结论ＥＧＦＲ存在于各期子宫内膜中,其表达在正常月经周期中无明显变化,但在早孕蜕膜、滋养细胞中的表达明显高于增生期及分泌期内膜