EB病毒潜伏膜蛋白1对鼻咽癌CNE1细胞增殖的影响

目的探讨EB病毒潜伏膜蛋白1（LMP1）对人高分化鼻咽癌CNE1细胞增殖的影响。方法采用电穿孔基因转染技术。将带有绿色荧光蛋白GFP报道系统的EB病毒LMP1基因真核表达质粒导入CNE1,以载体质粒转染及CNE1细胞为对照组,用免疫组化检测LMP1蛋白的表达;用细胞体外增殖实验检测细胞OD比值;用裸小鼠成瘤实验观察移植瘤体积倍增时间和生长率。结果内动物实验细胞移植后CNE1GL组潜伏期缩短,第7、8、9周时,其平均肿瘤体积生长显著高于对照组（P〈0.05）;体外细胞增殖实验3组细胞OD比值差异无显著性（P〉0.05）。结论EBV-LMP1对CNE1细胞的体内增殖能力可能有促进作用。     

上调Twist基因对人结肠癌SW480细胞增殖凋亡及侵袭能力的影响

目的:上调人结肠癌SW480细胞株中Twist基因的表达,观察其对细胞增殖、凋亡及侵袭能力的影响。方法:将高表达Twist基因的质粒和空载质粒稳定转染SW480细胞,分别命名为转染组和对照组,MTT法、细胞划痕实验和Matrige1侵袭实验分别检测肿瘤细胞体外增殖、迁移及侵袭能力的变化。FCM检测细胞周期及凋亡情况。将肿瘤细胞接种至裸鼠皮下,对比转染前后肿瘤细胞的成瘤情况。结果:从第4天开始,转染组SW480细胞生长速度明显高于对照组(P<0.05):转染组SW480细胞的增殖指数(PI)和S期细胞比例[(61.279±1.709)%,(33.171±3.154)%]均高于对照组[(26.142±1.518)%,(14.112±2.137)%](P<0.05);转染组的细胞凋亡率(6.83I±1.624)%低于对照组(12.223±1.733)%(P<0.05);划痕24 h及48 h时后转染组细胞迁移率[(40.06±5.56)%,(75.77±8.06)%]均高于对照组[(25.25±2.65)%,(35.37±6.79)%](P<0.05);Matrige1侵袭实验结果显示转染组侵袭细胞个数明显高于对照组(p<0.05);将两组细胞分别接种裸鼠,16 d左右可见肿瘤结节,转染组肿瘤体积及瘤重均大于对照组(P<0.05)。结论:上调Twist基因可提高SW480细胞体外增殖、迁移和侵袭能力,降低SW480细胞凋亡率。     

汉黄芩素对鼻咽癌CNE2细胞增殖及凋亡的影响

目的 探讨汉黄芩素对鼻咽癌CNE2细胞增殖和凋亡的影响及其可能的作用机制。方法 采用不同浓度（2.5 μmol/L、5.0 μmol/L、10.0 μmol/L、20.0 μmol/L）汉黄芩素作用鼻咽癌CNE2细胞,以溶剂为对照组。采用实时无标记细胞功能分析仪监测细胞增殖情况,双荧光法检测细胞凋亡情况,Western blot法检测PCNA、Survivin、XIAP、Bcl-2蛋白表达水平。结果 不同浓度（2.5 μmol/L、5.0 μmol/L、10.0 μmol/L、20.0 μmol/L）汉黄芩素作用24 h后CNE2细胞增殖抑制率依次为20.3%、23.7%、33.4%、40.9%,IC₅₀为42.41 μmol/L;36 h依次为18.0%、22.0%、36.1%、40.5%,IC₅₀为34.46 μmol/L;48 h依次为7.4%、20.2%、35.0%、40.9%,IC₅₀为22.81 μmol/L。与溶剂对照组比较,10.0 μmol/L、20.0 μmol/L汉黄芩素组细胞凋亡率均升高（t=23.710,P=0.001;t=43.934,P<0.001）。20.0 μmol/L汉黄芩素处理鼻咽癌CNE2细胞48 h后,与溶剂对照组比较,Bax蛋白表达水平上升（P<0.05）,Survivin、XIAP、Bcl-2蛋白表达水平下降（P<0.05）。 结论 汉黄芩素可抑制鼻咽癌CNE2细胞增殖并诱导其凋亡,可能通过促进Bax蛋白表达并抑制Survivin、XIAP、Bcl-2蛋白表达发挥作用。     

抗VEGF发夹状核酶基因对人鼻咽癌细胞株VEGF表达及细胞增殖的影响

目的 探讨抗血管内皮生长因子发夹状核酶基因对人鼻咽低分化鳞癌细胞株CNE—2的VEGF表达及其细胞增殖的影响。方法 采用脂质体介导法将抗VEGF发夹状核酶基因真核表达载体转染CNE-2细胞；RNA斑点杂交检测核酶基因在CNE-2细胞中的表达；免疫组化、间接免疫荧光染色及流式细胞仪结合免疫荧光检测转染前后CNE-2细胞中VEGF表达；MTT法、细胞贴壁克隆形成实验、软琼脂克隆形成实验及流式细胞仪进行细胞周期分析，观察其对CNE-2细胞增殖的影响。结果 转染后的CNE—2细胞VEGF表达明显降低；细胞生长减慢，细胞贴壁克隆形成及软琼脂克隆形成率明显降低；Go／G1期细胞显著增多，S期细胞显著减少（P〈0．01）。结论 抗VEGF发央状核酶基因可显著抑制CNE-2细胞的VEGF表达和ENE-2细胞增殖。     

p16基因对鼻咽癌细胞系CNE-2增殖凋亡的影响

目的 研究ｐ１６基因对人鼻咽癌细胞系ＣＮＥ－２细胞增殖、凋亡的影响。方法 采用脂质体介导的基因转染方法,将野生型ｐ１６基因、空载体转入该基因突变的ＣＮＥ－２细胞中,同时设置不加任何质粒的ＣＮＥ－２细胞作为对照。结果 脂质体转染、Ｇ４１８筛选所获得的抗性克隆,经免疫组化检测证实转入ｐ１６基因的ＣＮＥ－２细胞有ｐ１６蛋白表达,细胞生长速度明显减慢;ＦＣＭ检测显示,细胞周期主要阻滞在Ｇ１期,Ｓ期细胞明显     

苦参碱对鼻咽癌细胞CNE1-GL增殖及转移相关能力的影响

目的 研究苦参碱对人鼻咽癌细胞系CNE1-GL增殖及转移相关能力的影响及其作用机制.方法 以MTT法检测苦参碱对人鼻咽癌CNE1-GL细胞增殖及对细胞外基质黏附能力的影响;Transwell小室法检测其对CNE1-GL细胞侵袭重组人工基膜能力的影响;免疫细胞化学方法检测药物作用前后CNE1-GL细胞EBV-LMP1蛋白的表达.结果 苦参碱对CNE1-GL细胞的增殖及对细胞外基质的黏附能力有明显的抑制作用,该抑制效应随苦参碱浓度增加和作用时间延长而增加;1.5 g/L苦参碱能明显抑制CNE1-GL细胞体外侵袭人工基膜能力,抑制率达(42.51±11.06)%,作用于CNE1-GL细胞24 h后EBV-LMP1蛋白的表达明显下调.结论 苦参碱能抑制CNE1-GL细胞的增殖能力和转移能力,其抗肿瘤转移的机制与EBV-LMP1蛋白表达的改变有关.     

鼻咽癌细胞SUNE中EBV—LMP1基因对上皮细胞增殖的影响

目的 研究鼻咽癌细胞系ＳＵＮＥ中ＥＢＶ－ＬＭＰ１基因对上皮细胞增殖的影响,探索ＬＭＰ１在鼻咽癌发生中所起的作用。方法 用ＬＭＰ１基因真核表达质粒转染人胚肾上皮细胞,检测ＬＭＰ１的表达,观察细胞在软琼脂中的集落形成能力,ＭＴＴ吸收能力以及ＰＣＮＡ的表达情况。结果 被ＬＭＰ１基因转染的细胞生长旺盛,能在软琼脂中形成多个集落,ＭＴＴ吸收能力增强,ＰＣＮＡ的表达水平增高。结论 ＬＭＰ１基因能明显改变上皮细     

p16基因的表达上调对鼻咽癌细胞恶性表型的影响：p16基因在鼻咽癌中的改变

探讨上调Ｐ１６基因的表达对鼻咽癌细胞恶性表型逆转的作用,为Ｐ１６基因在处鼻咽癌发病过程中具有一定的作用提供直接的语气方法,本文采用电穿孔的方法向Ｐ１６基因表达下调的鼻咽癌细胞系ＨＮＥ１中导入全长野生型的Ｐ１６ｃＤＮＡ,通过Ｇ４１８筛选获得可以稳定传代的转当细胞系,对其中４个转染细胞系以ＰＣＲ和Ｎｏｒｈｅｒｎ杂交鉴定转染细胞系中外源Ｐ１６ｃＤＮＡ整合以及Ｐ１６基因表达的状况,并借助比较细胞倍增时间,     

RNAi沉默RABGEF1基因对人卵巢癌细胞增殖的影响

目的:探讨沉默RABGEF1基因对人卵巢癌细胞(SK-OV-3细胞)增殖的影响.方法:通过小干扰RNA技术沉默SK-OV-3细胞的RABGEF1基因表达,用实时荧光定量RT-PCR法鉴定细胞内RABGEF1基因的表达水平,培养RABGEF1基因被沉默的SK-OV-3细胞,计数不同时间点的细胞数,分析RABGEF1基因对人卵巢癌细胞增殖的影响.结果:实时荧光定量RT-PCR法检测显示所构建的4个siRNA表达载体对RABGEF1基因表达的沉默率分别为52.5％、58.1％、76.2％和87.7％.将RABGEF1基因表达沉默率为87.7％的SK-OV-3细胞继续培养,计数显示细胞数目较未沉默基因减少(P＜0.05).结论:应用RNAi技术沉默RABGEF1基因可抑制SK-OV-3细胞的增殖,提示RABGEF1基因可能参与卵巢癌的发生发展.     

定量研究EB病毒潜在膜蛋白对人鼻咽癌细胞系CNE1的作用

目的研究ＥＢ病毒ＬＭＰ对人高分化鼻咽癌细胞株ＣＮＥ１细胞形态及ＤＮＡ含量的影响。方法采用电穿孔基因转染技术,将重组ＥＢＶ┐ＬＭＰ表达质粒转染鼻咽癌细胞株ＣＮＥ１细胞。以载体质粒转染及ＣＮＥ１细胞为对照,用免疫荧光和图像分析方法,观察细胞ＬＭＰ表达、细胞形态及ＤＮＡ含量的变化。结果ＬＭＰ表达质粒转染后细胞浆及细胞膜ＬＭＰ强阳性表达。形态定量及ＤＮＡ含量测定表明,ＬＭＰ表达后,ＣＮＥ１细胞明显变小（Ｐ＜０．０１）,核浆比显著增大（Ｐ＜０．０１）,核浆的变化主要由胞浆面积的增减所致,而与核面积的改变则无明显正比关系;ＤＮＡ含量明显增高（Ｐ＜０．０１／０．０５）,且倍体分布更分散而右移。结论ＬＭＰ对ＣＮＥ１细胞生长有明显的促进作用,可致细胞恶性程度增高且分化受抑,有向低分化鳞癌发展倾向,提示ＬＭＰ在ＮＰＣ的发生发展过程及其演进中可能起重要作用     

p53基因对鼻咽癌细胞株CNE－3裸鼠致瘤抑制作用的研究

分别将野生型和突变型ｐ５３基因导入鼻咽癌的体外培养细胞系ＣＮＥ－３．裸鼠致瘤试验表明，导入野生型ｐ５３基因的细胞系，肿瘤生长速度明显低于对照细胞系及导入突变型ｐ５３基因的细胞系；导入突变型ｐ５３基因的细胞系肿瘤生长速度最快；导入野生型ｐ５３基因的细胞系肿瘤生长速度最慢，而且肿瘤出现时间也较导入突变型ｐ５３的细胞及对照细胞晚１～２周。这说明野生型ｐ５３基因能有效地抑制肿瘤的生长，而实变型ｐ５３基因则可以促进肿瘤生长。这是首次有关ｐ５３基因对鼻咽癌细胞作用的报道。这一研究更进一步说明了ｐ５３基因的功能，对于鼻咽癌发生机理的探讨以及肿瘤的防治具有重要意义。     

转染hEndostatin基因对CNE2细胞株裸鼠移植瘤生长的影响

背景与目的：肿瘤的生长、转移是血管生成依赖性的,血管生成抑制剂有望通过抑制肿瘤血管生成及诱导肿瘤细胞凋亡,有效地抑制肿瘤的生长和转移。本文旨在探讨转染人内皮抑素基因hEndostatin对人鼻咽癌细胞株CNE2裸鼠移植瘤生长的影响。方法：采用脂质体介导法,分别将pBlast-hIL-hEndostatin、pBlast-hEndostatin和pBlast-MCS质粒导入人鼻咽癌细胞株CNE2,MTT法在体外检测转导细胞表达的hEndostatin的活性,并在体内实验中观察转导的CNE2细胞在裸鼠上的致瘤性的差异。结果：转染pBlast-hIL-hEndostatin的CNE2细胞的上清能显著抑制血管内皮细胞ECV304的生长,其在裸鼠体内形成的瘤组织重量和体积均显著低于对照组（P＜0．01）,生长速度明显慢于对照组细胞。结论：转染hEndostatin基因能有效抑制CNE2细胞在裸鼠体内的生长。     

亚砷酸对人鼻咽癌细胞增殖的抑制作用

目的观察亚砷酸对人鼻咽癌细胞株CNE1的生长抑制作用并初步探讨其机理.方法用不同浓度亚砷酸处理人鼻咽癌细胞株CNE1,MTT法观察不同浓度亚砷酸作用不同时间后对CNE1细胞生长的影响,流式细胞仪分析不同条件作用后CNE1细胞周期动力学改变,免疫组化法检测增殖细胞核抗原(PCNA)阳性细胞.结果亚砷酸明显抑制人鼻咽癌细胞株CNE1细胞的增殖,24、48、72 h的IC50值分别为3.12、0.65、0.12 μg/mL;其作用随亚砷酸浓度增加和作用时间延长而增加;G2/M期逐渐增多;随着亚砷酸浓度增加,PCNA阳性细胞平均灰度值逐渐下降,P<0.05.结论亚砷酸可明显抑制人鼻咽癌细胞株CNE1的生长,调控DNA合成及细胞增殖的PCNA蛋白合成降低可能是亚砷酸的作用机制之一.     

外源性TNF基因对人肝癌细胞生长的影响

采用比利时Gent大学的质粒PATHNF(内含人TNF-α-cDNA),以及英国伦敦大学的重组逆转录病毒载体pRUFneo.将人TNF基因克隆到重组逆转录病毒载体pRUFneo,构建了含人TNFL-a基因重组逆转录病毒载体RUF-TNF.将RUF-TNF转染包装细胞FlyA13,经G41筛选获得稳定分泌含人TNF基因重组逆转录病毒的细胞株FlyRUFN14.FlyRUFN14产生的病毒上清液能直接转染靶细胞Saos-2.采用这一基因转移系统,将TNF基因转染到两株人肝癌细胞株SMMG-7721及BEL-7404,获得转基因肝癌细胞SMMC-7721 TNF及BEL-7404TNF.TNF基因对人肝癌细胞生长的影响采用细胞学实验及裸鼠实验两种方法进行研究.①细胞学实验:将转基因肝癌细胞SMMC-7721TNF及BEL-7404TNF作为实验组,原来的未转基因肝癌细胞株SMMC-7721及BEL-7404作为对照组,用MTT法研究两组的生长速度.结果:转基因肝癌细胞SMMG-7721TNF及BEL-7404TNF的生长速度明显慢于未转基因肝癌细胞,差别有显著意义(P<0.01).②裸鼠实验:     

重组TFAR19蛋白对鼻咽癌CNE 1细胞端粒酶活性和细胞凋亡的影响

目的：研究重组TFAR19（TF-1 cell apoptsis-related gene 19）蛋白对鼻咽癌细胞株CNE-1端粒酶活性及端粒酶逆转录酶（hTERT）mRNA表达的影响，探讨重组TFAR19蛋白促CNE．1细胞凋亡的作用机制。方法：将不同浓度的高纯度重组TFAR19蛋白分别和人类鼻咽癌细胞株CNE-1共同培养后，通过7-AAD及Annexin V-PE标记进行流式细胞术分析，检测TFAR19蛋白对细胞的促凋亡效应；PT-PCR法比较试验组和对照组CNE-1细胞株端粒酶hTERTmRNA的表达水平；TRAP-银染法检测重组TFAR19蛋白作用下CNE．1细胞株端粒酶活性的改变。结果：（1）一定浓度的TFAR19蛋白在未加载体的情况下，可促进细胞凋亡，加入5、10、15、20、30mg／L的TFAR19蛋白后，CNE-1细胞的凋亡率分别是：15．26％，29．48％，37．11％，54．20％，72．36％。阳性对照组（凋亡诱导剂stuanrosporin处理）与阴性对照组（PBS处理）的细胞凋亡率分别是98．37％、13．40％。（2）试验组与对照组CNE-1细胞株端粒酶hTERTmRNA表达无显著差异。（3）与20mg／L以上浓度的重组TFAR19蛋白共同培养后，CNE-1细胞株端粒酶活性明显降低。结论：重组TFAR19蛋白在较高浓度下可降低鼻咽癌细胞株CNE-1的端粒酶活性，明显促进肿瘤细胞凋亡。     

KAI1基因对人鼻咽癌细胞株HNE-1增殖、侵袭及转移能力的影响

目的:研究转移抑制基因KAI1对人鼻咽癌细胞体外增殖、侵袭及转移能力等生物学效应的影响.方法:通过腺病毒载体将KAI1基因转染人鼻咽癌细胞株HNE-1, RT-PCR法检测转染效果; MTT法检测鼻咽癌细胞转染KAI1基因后体外增殖能力的变化;FCM法检测细胞生长周期分布; Transwell侵袭小室检测细胞侵袭能力的改变;细胞同质黏附实验检测细胞黏附力的变化.结果:当腺病毒载体 rAd-KAI1效价为 30 MOI时,对HNE-1细胞的转染率可达92%;转染48 和72 h 时,rAd- KAI1转染组细胞的增殖明显受到抑制,抑制率分别为17%和30%;G0/G1期细胞数量较对照组增多,S期细胞数量减少;转染组的穿膜细胞数为(52.5±4.2)个,明显低于对照组的(167.4±3.5)个,差异有统计学意义(P<0.05);转染组的细胞同质黏附作用高于对照组(P<0.05).结论:腺病毒载体成功介导了抑癌基因KAI1转染进入鼻咽癌HNE-1细胞,并取得较高的转染率.KAI1基因可能通过阻滞HNE-1细胞生长周期,从而抑制细胞增殖.KAI1基因能够抑制HNE-1细胞侵袭能力,其机制可能为KAI1基因增强了鼻咽癌细胞的黏附力所致.     

EB病毒潜伏膜蛋白对鼻咽癌细胞体内外增殖力的影响

 目的:研究EBVLMP对人高分化鼻咽癌细胞株CNE1体内外增殖能力的影响。方法:以人高分化鼻咽癌细胞株(CNE1)为对象,采用电穿孔基因转染技术,将重组EBVLMP表达质粒转染CNE1细胞。以载体质粒转染及CNE1细胞为对照,用细胞体外增殖实验、细胞软琼脂克隆形成率测定、流式细胞术、PCNA检测和裸鼠成瘤实验,观察细胞增殖能力的变化。结果:结晶紫染色法检测体外细胞增殖,结果表明,A比值实验组高于空白组及阴性对照组(P<0.01);实验组细胞软琼脂克隆形成率显著高于空白组及阴性对照组(P<0.01);FCM法测定细胞周期,实验组S期细胞比空白组及阴性对照组显著增高,S期细胞达349%;PCNA免疫组化染色,实验组细胞PCNA阳性率明显高于空白组及阴性对照组(P<0.01)。CNE1及转染细胞系裸小鼠移植结果表明,LMP表达细胞系移植瘤潜伏期、体内倍增时间明显缩短(P<0.01),成瘤率、瘤重显著增高(P<0.01/0.05)。结论:EBVLMP对CNE1细胞体内外增殖能力有明显的促进作用,提示LMP在NPC细胞演进过程中可能起重要作用,为进一步深入研究提供了依据。     

pEGFP －N1－NPRL2真核表达载体的构建及其对人鼻咽癌细胞增殖的影响

目的：构建 pEGFP －N1－NPRL2真核表达载体并观察其对鼻咽癌细胞株 CNE1体外增殖的影响。方法：提取 CNE1细胞中总 RNA,RT －PCR 扩增 NPRL2并克隆至 pEGFP －N1载体,鉴定出阳性克隆送测序,以重组质粒转染 CNE1细胞。通过 Western blot 检测转染细胞中 NPRL2蛋白的表达,CCK －8法检测细胞增殖的变化。结果：成功构建了 pEGFP －N1－NPRL2真核表达载体,Western blot 法检测到 NPRL2蛋白的表达, CCK －8法检测发现 NPRL2能够明显抑制肿瘤细胞增殖（P ＜0．05）。结论：成功构建 pEGFP －N1－NPRL2真核表达载体并转染至 CNE1细胞,NPRL2可抑制肿瘤细胞的增殖。