氧化砷通过线粒体跨膜电位下降与激活Caspase-3诱导多发性骨髓瘤细胞凋亡

目的　探讨氧化砷 (As2 O3)是否诱导多发性骨髓瘤细胞凋亡与其可能机制。方法　以两株多发性骨髓瘤细胞系RPMI82 2 6和U2 66为体外模型。以细胞形态学观察、流式细胞仪检测亚G1期细胞含量以及DNA凝胶电泳判定细胞凋亡。通过检测胞内Rhodamine12 3染色强度来判定线粒体跨膜电位。通过Western印迹分析蛋白表达。结果　 0 1- 0 5μmol LAs2 O3抑制RPMI82 2 6与U2 66细胞系生长 ,2 0 μmol LAs2 O3 诱导两株细胞凋亡 ,而 1 0μmol LAs2 O3抑制细胞生长同时也诱导部分细胞凋亡。As2 O3诱导的细胞凋亡伴随线粒体跨膜电位下降与细胞凋亡 ,而二巯基苏糖醇 (二巯基还原剂 )则部分抑制以上效应。虽然全反式维甲酸 (ATRA)诱导RPMI82 2 6细胞凋亡 ,但是它与As2 O3无协同效应。结论　不同深度As2 O3可抑制多发性骨髓瘤细胞生长与诱导细胞凋亡。线粒体是As2 O3 诱导细胞凋亡的重要且共同的“靶子”。     

半乳糖受体介导的c-myc反义核酸联合三氧化二砷对人肝癌细胞的增殖抑制作用

目的　探讨Gal-PEI-c -mycASODN与三氧化二砷 (As2 O3 )联合应用对人肝癌Bel- 74 0 2细胞增殖的影响。方法　As2 O3 分别或联合Gal-PEI-c -mycASODN与人肝癌Bel- 74 0 2细胞共孵育 4 8h ,台盼蓝染色法检测细胞增殖的变化 ,流式细胞仪分析细胞亚二倍体百分率。结果　 0 5 μmol/LAs2 O3 和Gal-PEI-ASODN(含A SODN 0 12 5 μmol/L)均不能抑制Bel- 74 0 2细胞增殖 ,0 5 μmol/L的As2 O3 联合Gal-PEI-ASODN(含ASODN 0 12 5μmol/L)对Bel- 74 0 2细胞增殖有明显抑制作用 (P <0 0 5 ) ,与 4 μmol/LAs2 O3 产生的抑制作用相当 ;1 0 μmol/LAs2 O3 不引起Bel- 74 0 2细胞凋亡 ,但联合Gal-PEI-ASODN(含ASODN 0 2 5 μmol/L)即导致Bel - 74 0 2细胞凋亡。结论　Gal-PEI-ASODN联合As2 O3 能明显提高肝Bel- 74 0 2细胞对As2 O3 的敏感性 ,抑制Bel- 74 0 2细胞增殖 ,促进细胞凋亡。     

影响亚砷酸治疗急性早幼粒细胞白血病疗效的相关因素分析

目的研究影响亚砷酸(As2O3)治疗急性早幼粒细胞白血病(APL)疗效的相关因素。方法通过Logistic回归分析对162例患者初诊时外周血白细胞(WBC)计数、血清乳酸脱氢酶(LDH)水平、染色体异常等可能影响As2O3疗效的因素进行评价。结果162例患者中完全缓解(CR)率为72%;部分缓解(PR)率为13.6%。初诊时WBC数、LDH水平比较高,无(t15,17)(q22,q21)染色体易位或PML/RARα融合基因的APL患者应用As2O3治疗缓解率比较低;而存在(t15,17)(q22,q21)染色体易位或PML/RARα融合基因、联合全反式维甲酸(ATRA)使As2O3治疗APL的缓解率明显提高。结论初诊时WBC计数、LDH水平、有无(t15,17)(q22,q21)染色体易位或PML/RARα融合基因、联合全反式维甲酸是影响As2O3治疗APL患者疗效的重要的独立因素。     

维甲酸促进三氧化二砷诱导的细胞凋亡作用

目的:观察三氧化二砷(As2O3)对非急性早幼粒细胞性白血病(acute prom y elocytic leukemia, APL)急性髓性白血病细胞的体外作用以及维甲酸(retinoic acid, R A )与As2O3之间的相互作用.方法:用维甲酸敏感(HL-60S)及维甲酸耐药(HL-60R)急性髓性白血病细胞株HL-60作为体系, 应用细胞计数及台盼蓝试验观察细胞活力及生长.采用细胞形态、DNA 片段梯度、末端核苷酸酶标记及流式细胞法观测细胞凋亡.结果: As2O3(0.5～4 μmol·L-1)抑制 HL -60R细胞生长,抑制能力与As2O3浓度及作用时间呈正相关;RA不仅促进HL-60S而且促进HL-60R 对As2O3的敏感性.结论:As2O3对细胞的抑制作用不局限于PML/RARα阳性细胞;As2O3可能对非APL急性髓性白血病有治疗作用 ,RA 与As2O3合用可能发挥更佳效果.     

三氧化二砷对前列腺癌细胞PC-3凋亡抑制蛋白XIAP表达的影响

[目的]探讨三氧化二砷(As2O3)对前列腺癌细胞株PC-3细胞增殖、细胞凋亡及X染色体连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)表达的影响.[方法]取对数生长期PC-3细胞,分别经0.5,1.0,2.0μmol/L As2O3处理,采用四甲基偶氮唑蓝比色法检测细胞生长抑制作用;流式细胞仪检测细胞凋亡率;蛋白质印迹法及实时荧光定量PCR检测XIAP蛋白表达及XIAP mRNA表达的变化.[结果]0.5,1.0,2.0μmol/LAs2O3均可抑制PC-3细胞增殖,在处理24,48,72h后,细胞生长抑制率间差异具有统计学意义(P<0.01).检测0.5,1.0,2.0μmol/L As2O3处理48h的PC-3细胞株细胞凋亡率分别为11.47%±1.81%,38.47%±1.60%,58.93%±3.35%,相比较差异具有统计学意义(P<0.01).As2O3处理48h时0.5,1.0,2.0μmol/L As2O3组的XIAP mRNA表达水平分别为0.67±0.12,0.25±0.15,0.03±0.01,各组间差异均具有统计学意义(P<0.05).[结论]As2O3可抑制PC-3细胞增殖,诱导细胞凋亡,此作用可能与As2O3抑制PC-3细胞XIAP基因的表达有关联.     

急性早幼粒细胞白血病细胞形态学与基因异质性关系的研究

上海第二医科大学附属瑞金医院血液学研究所,对50例经形态学诊断为急性早幼粒细胞白血病(APL)的患者进行了细胞遗传学、分子生物学及用全反式维甲酸(ATRA)治疗反应的观察。 结果表明,50例中45例有典型的染色体易位t(15;17)及早幼粒细胞白血病基因/维甲酸受体α(PML/RARα)融合基因(PML RARα 型APL),用ATRA治疗显效;另3例为三种基因异质型,分别为早幼粒细胞锌指蛋白基因(PLZF) RARα 型APL、PML-RARα 型APL和PML-RARα-型APL,经ATRA治疗均无反应,其余2例经形态学仔细复核,分别属M_(2α)和M_(5b),前者用ATRA治疗有效,后者无效。作者认为,APL为不均一性疾病,形态学是确诊APL的重要依据,少数患者应依     

三氧化二砷对耐药MR_2细胞谷胱甘肽S转移酶作用的研究

目的 :探讨三氧化二砷 (As2 O3 )对耐药急性早幼粒细胞白血病 (APL)MR2 细胞谷胱甘肽S转移酶的作用。　方法 :以耐维甲酸 (RA)早幼粒细胞白血病细胞株MR2 为研究对象 ,以非耐药早幼粒细胞白血病NB4 为对照组 ,用免疫组化法观察谷胱甘肽S转移酶 (GST)的表达。　结果 :MR2 细胞GSTπ表达 (6 0 .4± 4.0～ 6 6 .5± 4.4)较NB4 细胞(2 8.3± 5 .6～ 31.2± 5 .1)明显增强 (P <0 .0 5 )。 0 .5～ 2 .0 μmol/LAs2 O3 能显著降低MR2 细胞GSTπ表达 (P <0 .0 5 ) ,而对GSTα、GSTμ无影响。　 结论 :GSTπ表达的下调 ,可能是As2 O3 克服耐药的敏感性指标 ,而GSTα、GSTμ则否。全反式维甲酸 (ATRA)可能是GSTπ催化作用的底物。     

三氧化二砷对人大肠癌细胞生长的抑制作用

目的探讨不同浓度的三氧化二砷对人大肠癌细胞株CCL-187细胞生长抑制率的影响。方法大肠癌细胞株CCL-187分别与1·0,2·5μmol/LAs2O3共同孵育1~6d,电镜下观察细胞形态学变化,MTT法计算细胞生长抑制率。结果MTT法显示1·0,2·5μmol/LAs2O3均能抑制大肠癌CCL-187细胞的生长增殖,且具有时间依赖性。As2O3对CCL-187细胞增殖的抑制程度随As2O3浓度的加大而加强。透射电镜显示:1·0μmol/LAs2O3促进细胞分化,但2·5μmol/LAs2O3能诱导细胞凋亡。结论不同浓度的三氧化二砷对人大肠癌CCL-187细胞生长均可产生抑制作用,作用机制为1·0μmol/LAs2O3促进癌细胞分化,而2·5μmol/LAs2O3则诱导细胞凋亡。     

三氧化二砷与维甲酸联合作用在NB4,MR2细胞系中的体外研究

目的：观察三氧化二砷(As2O3)和全反式维甲酸(ATRA)联合作用对NB4，MR2不同亚型急性早幼粒白血病细胞株，诱导分化、增殖、凋亡的影响。方法:以NB4，MR2为体外模型，利用细胞生长曲线、台盼蓝拒染法、MTT法、NBT、细胞形态Wrigh‘s-Gimesa染色，观察细胞增殖、分化、凋亡的相互作用。结果：NB4细胞株：0．5μmol/L As2O3与10^-6mol/L ATRA对细胞增殖、分化、凋亡呈现拮抗，而0．5μmol/L As2O3与(10^-7--10^-8mol/L)ATRA呈现协同；MR2细胞株：0．5μmol/L As2O3与10^-6mol/L ATRA对细胞增殖、分化、凋亡呈现协同。结论：As2O3与全反式维甲酸协同效应呈现不同细胞、剂量的特异性，MR2细胞株协同效应明显强于NB4细胞株。     

三氧化二砷对乳癌细胞系MDA-MB-468雌激素受体表达的影响

目的:探讨三氧化二砷(As2O3)对人雌激素受体α(ERα)阴性的乳癌细胞株MDA-MB-468进行药物诱导后ERα启动子CPG岛的甲基化状态及蛋白的变化。方法:常规培养MDA-MB-468细胞,采用MTT法检测0.5、1.0、2.0、4.0、8.0和16.0mmol/LAs2O3分别处理24、48和72h后细胞的生长抑制率,甲基化特异性PCR检测1.0、2.0、4.0μmol/LAs2O3处理72h后MDA-MB-468细胞ERα启动子CpG岛的甲基化状态,Westernblot检测1.0、2.0、4.0μmol/LAs2O3处理72h后MDA-MB-468细胞ERα蛋白的表达情况。结果:As2O3可抑制MDA-MB-468细胞增殖,其作用呈时间和剂量依赖性(F浓度=375.603,F时间=474.827,P<0.001)。经1.0、2.0、4.0μmol/LAs2O3处理后的MDA-MB-468细胞启动子CpG岛甲基化水平降低,ERα蛋白重新表达。结论:As2O3明显抑制MDA-MB-468增殖,适当浓度As2O3能诱导ERα去甲基化,使ERα阴性的MDA-MB-468细胞恢复表达ERα。     

白血病细胞株耐药与核因子κB蛋白质诱导表达的关系

目的:探讨慢性粒细胞性白血病细胞K562与其耐药株K562/ADR细胞中IκB-α和NF-κB的表达,以及三氧化二砷(As2O3)诱导白血病细胞凋亡的关系.方法:应用不同浓度的As2O3诱导K562和K562/ADR细胞凋亡,以Western-blot免疫印迹电泳检测NF-κB、IκB-α的表达,流式细胞术检测细胞凋亡及分析IκB-α的阳性表达率变化.结果:As2O3诱导K562/ADR细胞凋亡率明显低于K562细胞,当As2O3浓度为1 μmol/L时,两种细胞凋亡率分别是(6.33±1.51)%、(13.25±1.83)%,当As2O3浓度增高到4 μmol/L时,细胞凋亡率则分别为(8.00±1.47)%、(50.56±8.62)%(P＜0.05).在K562细胞胞浆中,IκB-α阳性表达率则由(88.07±0.99)%减少到(49.21±0.95)%(P＜0.01),胞核中P65量逐渐增加;而K562/ADR细胞中无明显变化.结论:As2O3可诱导K562细胞凋亡,伴有IκB-α的降解及NF-κB的激活;K562/ADR细胞NF-κB表达增加,对As2O3诱导的反应无明显改变.     

Arsenic trioxide inhibits p-glycoprotein expression in multidrug-resistant human leukemia cells that overexpress the MDR1 gene

Objective To investigate the effects of arsenic trioxide (As2O3) on the apoptosis and p-glycoprotein (P-gp) expression of multidrug-resistant human leukemia cells.Methods Human multidrug-resistant leukemia cell line K562/ADM overexpressing the MDR1 gene, was used as the target cells. The cell proliferating activity was assessed using the MTT colorimetric assay. Cytomorphology was investigated under light, confocal and electron microscopes. DNA fragmentation was examined using agarose gel electrophoresis, while p-gp expression, cell cycle status and sub-G1 cells were determined using flow cytometry.Results Zero point five to 20 μmol/L As2O3 inhibited the proliferation of K562/ADM cells, and K562/ADM cells were more sensitive to As2O3 than the parental K562 cells. As2O3-induced apoptosis of K562/ADM cells was determined by the observance of typical morphological changes and the appearance of DNA ladder and sub-G1 cell populations. As2O3 significantly inhibited the P-gp expression of K562/ADM cells, and synergistically enhanced the sensitivity of the drug-resistant cells to adriamycin.Conclusions As2O3 induces growth-inhibition and apoptosis, down-regulates P-gp expression and exerts a synergistic effect in combination with adriamycin in multidrug-resistant leukemia cells.     

三氧化二砷及全反式维甲酸对白血病NB4细胞PML/RARA融合基因的影响

目的探讨在NB4细胞增殖过程中PML/RARA融合基因表达的情况,并用三氧化二砷(As2O3)和/或全反式维甲酸(All trans retinoic acid,ATRA)干扰后观察目的基因的变化。方法用As2O3(1×106 mol/L)或/和ATRA(1×106 mol/L)干扰体外培养成熟的NB4细胞,后用real/Time PCR检测PML/RARA融合基因的相对表达量。结果ATRA及As2O3均使PML/RARA融合基因表达抑制,但双药联用无明显协同作用(P<0.05)。As2O3对PML/RARA融合基因表达抑制较同剂量ATRA强。结论 ATRA及As2O3均能下调PML/RARA融合基因。As2O3对PML/RARA融合基因的下调作用及对NB4细胞的增殖抑制均比同剂量的ATRA强。双药联用与单药干预,无叠加效应。     

STUDY ON EFFECTS OF QUERCETIN ON PML GENE AND PROTEIN IN LEUKEMIA CELL LINES

Objective To investigate the effect of quercetin on PML gene and protein expression andlocalization in leukemia cell lines. Methods Cell morphology was assayed by Wright's stain and fluorescence stain, and PML mRNA expression by RT-PCR , PML protein localization by immuno-fluorescence. Results NB4 and HL-60 cells differentiated morphologically after treatment with all-trans-retinoic acid (ATRA) while K562 cells did not differentiate. Typical apoptosis was found in each cell line after treatment with quercetin. Immuno-fluorescence analysis showed , after treatment with ATRA , the fusion protein disappeared in NB4 cells and PML protein relocated , while HL-60 and K562 cells had no difference from control cells. After treatment with quercetin, the fusion protein disappeared in NB4 cells, PML protein relocated, then degraded. In HL-60 cells and K562 cells, PML protein also located and then degraded . The expression of PML mRNA was not changed in all three cell lines after treatment with ATRA or quercetin. C     

ATRA和雄黄对白血病细胞PML基因及蛋白表达的影响

目的探讨PML基因及蛋白在白血病细胞中的表达和细胞内分布定位。方法经ATRA、雄黄处理后的NB4、HL-60、K562细胞为研究对象,细胞形态学观察采用Wright’s染色法及荧光染色法;PML蛋白细胞内分布定位采用免疫荧光技术;PMLmRNA表达采用RT-PCR法。结果 1.ATRA处理后,NR4和HL-60细胞形态学上出现分化表现,K562细胞无变化;经雄黄处理后,各组细胞形态学上均出现凋亡特征性改变。2.ATRA处理后,NB4细胞内融合蛋白降解,PMl蛋白恢复定位,HL-60、K562细胞内PML蛋白定位分布无变化;雄黄处理后NB4细胞内融合蛋白降解,PML聚积于POD结构,随后降解;在HL-60及K562细胞,PML发生相似改变。3.ATRA、雄黄处理后各组细胞PMLmRNA表达均无显著影响。结论在不同诱导剂刺激下,PML基因在蛋白水平参与细胞终末分化及诱导白血病细胞凋亡机制;PML蛋白在POD中发挥诱导凋亡控制细胞生长的作用。     

塞来昔布对K562白血病细胞的细胞毒作用及与伊马替尼的协同效应

目的 研究塞来昔布（Celecoxib）对K562细胞增殖、早期凋亡的影响及Rb蛋白质（PRb）、P27^Kip蛋白质表达变化,观察Celecoxib和伊马替尼联用对K562细胞增殖抑制和凋亡诱导是否具有协同效应.方法将K562细胞用不同浓度的Celecoxib（0、10、20、40、80及160μmol/L）作用36 h,四甲基偶氮唑盐比色法（MTT法）测定细胞活力;磷脂结合蛋白Ⅴ分析检测K562细胞早期凋亡;Western印迹检测不同浓度Celecoxib对K562细胞PRb和P27^Kip蛋白质表达的影响;用40 μmol/L Celecoxib、0.2μmol/L伊马替尼分别或联合作用K562细胞,观察药物对细胞活力和凋亡诱导是否具有协同作用.结果Celecoxib能明显抑制细胞活力,并呈药物剂量依赖性：随着Celecoxib浓度增高,K562细胞凋亡百分率相应增高,在160μmol/L浓度,凋亡率达25.92%,蛋白质印迹结果显示,Celecoxib可使K562细胞PRb蛋白质表达呈浓度依赖性下调;P27^Kip蛋白质呈浓度依赖性上调.Celecoxib与伊马替尼联用,抑制K562细胞活力为对照组的27.68%.结论Celecoxib能以浓度依赖性方式抑制K562细胞增殖,诱导细胞凋亡;其抗增殖效应可能与PRb表达下调及P27^Kip表达上调有关.Celecoxib与伊马替尼联用,在抗白血病细胞增殖作用上具有显著的协同效应.     

选择性抑制转录核因子κB活性对白血病K562细胞生存素表达的影响

目的探讨高选择性的蛋白酶抑制药MG132诱导的K562细胞凋亡及其对转录核因子KB（NF-κB）活性和抗凋亡蛋白生存素（Survivin）表达的影响。方法采用细胞形态学观察和流式细胞术检测细胞凋亡,免疫细胞化学和Western印迹分析NF-KB的活性和Survifin的表达。结果不同浓度的MG132作用24h后可诱导K562细胞凋亡,呈剂量依赖效应。NF-κB和Survivin在K562细胞中异常高表达,MG132作用后均明显下调。2、4、6、8μmol／LMG132作用于K562细胞24h后,NF-κB活性分别下调至作用前的75．0％±3．7％、59．9％±5．3％、45．4％±5．7％和25．0％±4．2％,而Survivin蛋白表达分别下调至作用前的90．9％±10．1％、66．7％±5．2％、45．4％±5．7％和30．3％±6．6％,NF-κB活性降低的同时Survivin蛋白的表达也下调,两者密切相关（Pearson相关系数0．989,P〈O．01）。结论MG132可有效地抑制NF-κB的活性,诱导K562细胞发生凋亡,同时抗凋亡蛋白Survifin的表达也随之下调。     

Celecoxib对羟基脲抗K562细胞增殖作用的增敏效应和机制

目的：确定celecoxib对羟基脲的抗K562细胞增殖作用是否存在增敏效应并探讨其分子机制。方法：用低剂量celecoxib(40 μmol/L)、羟基脲(10 mmol/L)以及二者合用分别干预K562细胞,用MTT试验、DNA裂解片段分析、Western印迹及RT PCR技术分析药物对K562细胞增殖、凋亡的影响和机制。结果：40 μmol/L celecoxib与10 mmol/L羟基脲共同干预K562细胞,较之单用低剂量的Celecoxib或羟基脲抑制K562细胞增殖活力和诱导细胞凋亡效应更明显。Celecoxib联合羟基脲可明显抑制K562细胞环氧化酶 2（COX 2）蛋白和 mRNA表达。结论：Celecoxib对羟基脲的抗K562细胞增殖作用具有增敏效应,其机制可能与药物下调K562细胞COX 2表达有关。     

低氧环境下三氧化二砷对人肺癌细胞增殖和凋亡的作用

目的：观察常氧和低氧环境下不同浓度的三氧化二砷（arsenic trioxide．As2O3）对人肺腺癌细胞A549增殖和凋亡的影响。 方法：在常氧（21％O2）和低氧（5％O2）环境下对人肺腺癌细胞A5-19进行体外培养，采用0、1、2、4μmol/L As2O3分别作用A549细胞12、24和48h，甲基噻唑基四唑（methyl thiazolyl tetrazolium,MTT）法检测A519细胞增殖抑制率；膜连蛋白V（Annexin V）／碘化丙啶（propidium iodide．PI）双标记法检测细胞凋亡。 结果：常氧和低氯环境下．1、2、4μmol／L As2O3均能显著抑制A549细胞增殖,促进细胞凋亡，且会随As2O3浓度的升高和作用时间的延长而增强；该作用在两种环境下的差异无统计学意义。结论：As2O3可抑制A549细胞增殖和促进细胞凋亡；在低氧环境和常氧环境下对A549细胞具有同样的细胞毒性作用。