间断低剂量二乙基亚硝胺诱导C57BL/6J小鼠肝癌模型

[目的]建立C57BL/6J小鼠诱发性肝癌模型。[方法]C57BL/6J小鼠40只,随机分为4组:对照组、DEN1组、DEN2组、DEN3组。DEN1组及DEN3组小鼠于实验第1天腹腔注射二乙基亚硝胺溶液,剂量为20 mg/kg,对照组和DEN2组小鼠腹腔注射同体积PBS溶液。实验第5周,DEN2组和DEN3组小鼠的饮水中添加浓度为10 mg/L的二乙基亚硝胺,连续饮用4周后,改为正常饮水;实验第16周,处死各组动物,计算小鼠肝脏指数,观察各组小鼠肝脏大体及镜下改变。[结果]对照组和DEN1组小鼠肝脏无肉眼可见的癌结节,肝癌发生率为0;DEN2组有2只小鼠发现肝脏有单个微小结节,肝癌发生率为20%;DEN3组小鼠肝脏均有大小不等的多个白色癌结节,肝癌发生率为100%,病理组织切片显示为肝细胞癌。[结论]间断低剂量二乙基亚硝胺能够快速诱导C57BL/6J小鼠肝细胞癌模型。     

C57BL/6小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎模型的建立

目的:建立实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)的小鼠模型,为探讨多发性硬化的免疫病理机制和实验性治疗提供依据.方法:C57BL/6小鼠40只,分为3组.EAE组25只,采用皮下注射完全弗氏佐剂与300 μg MOG35-55制备的乳化抗原,辅以腹腔注射109个/ml百日咳疫苗的方法诱导发病;佐剂组8只,用生理盐水代替抗原肽制备免疫乳剂,余同EAE组;正常对照组7只,仅注射生理盐水.采用H-E和LFB染色的方法观察小鼠EAE模型的组织学改变.结果:从免疫后11 d开始,EAE组小鼠有22只陆续出现EAE临床症状,发病率为88%.佐剂组与正常对照组小鼠均未出现临床神经系统症状.光镜下可见EAE组小鼠的大脑和脊髓组织中有大量的炎性细胞浸润,白质脱髓鞘改变明显.结论:此种造模方法简单可行,模型稳定,可在国内广泛推广.     

二乙基亚硝胺联合四氯化碳诱发C57BL/6小鼠肝癌模型

目的通过建立C57BL/6小鼠化学诱发性肝癌模型模拟肝癌发生发展进程探索肝癌发生机制。方法选取110只C57BL/6小鼠,随机分为对照组(30只)和模型组(80只),对照组小鼠无处理,模型组通过灌胃给药CCl4联合腹腔注射DEN的方法建立肝癌模型;持续测量小鼠体重,不同时间节点解剖小鼠观察肝形态、测定静脉血血清中肝功能相关酶的水平、观察肝组织病理学变化。结果与对照组相比,模型组小鼠体重逐渐降低,肝形态失常,血清中肝功能相关酶ALT、AST升高,有明显的肝癌组织病理学改变。结论二乙基亚硝胺(DEN)联合四氯化碳(CCl_4)可诱发C57BL/6小鼠肝癌,为研究肝癌发生发展的分子机制提供可靠的动物模型。     

C57BL/6小鼠非酒精性脂肪肝模型的建立研究

目的:利用D12492高脂饲料建立小鼠非酒精性脂肪肝（NAFLD）模型,为NAFLD的研究提供参考依据。方法:选用健康雄性C57BL/6小鼠40只,随机分组,正常组20只采用普通饲料喂养,模型组20只采用高脂饲料喂养,建立NAFLD模型。分别在第4周、第8周、第12周、第16周进行体质量、肝质量、肝组织匀浆检测,观察血清丙氨酸氨基转移酶、总胆固醇、低密度脂蛋白及肝脏三酰甘油等指标变化,并进行肝脏病理学检查。结果:模型组小鼠体质量从第4周开始高于正常组小鼠（P<0.05~P<0.01）,而肝脏质量从第8周开始高于正常组小鼠（P<0.05）;与正常组小鼠比较,从第8周模型组小鼠丙氨酸氨基转移酶增高（P<0.05~P<0.01）;各时间点模型组血清总胆固醇、低密度脂蛋白均高于正常组（P<0.05~P<0.01）;从第12周模型组小鼠肝组织三酰甘油含量升高（P<0.05和P<0.01）。肝组织HE染色示:从第12周模型组小鼠肝组织见脂肪变,并散布全肝,肝细胞肿胀,细胞质易见脂肪空泡,肝细胞有炎性改变;至第16周模型组小鼠肝脏脂肪变性较前严重,且出现大量炎细胞的浸润。结论:通过高脂饮食诱导的非NAFLD小鼠模型是理想的动物模型,方法简单,重复性强,可为NAFLD的机制研究及药物治疗提供稳定的动物模型。     

不同剂量H22肝癌细胞株对C57BL/6J小鼠原位肝癌造模的影响研究

目的:比较不同剂量H22传代小鼠腹水细胞构建原位肝癌移植模型小鼠的成瘤率、腹水率及存活率,以期构建和完善该模型。方法:115只C57BL6/J小鼠随机分为三组(10μL组、20μL组、30μL组),选取浓度为1×1013/m L的H22传代小鼠腹水细胞沿肝长轴直接注射接种到肝脏实质内,每组分别于第10、20 d随机选取15只给予麻醉后脱颈椎处死,肝脏称重,测量瘤体体积及重量,观察肝脏外观及病理学改变,每组预留5只观察其存亡天数,计算成瘤率、腹水率及存活率。结果:115只模型小鼠有114只均可见肿瘤,成瘤率99%;10μL组腹水率7%,20μL组腹水率46%,30μL组腹水率63%。结论:使用10μL浓度为1×1013/m L的H22传代小鼠腹水细胞悬液建立小鼠原位肝癌模型,其成瘤率高,腹水率低,存活时间较长,是较为理想的肝癌小鼠模型。     

C57BL／6小鼠免疫性肝损伤模型复制

为了建立与人类慢性肝炎病理机制更为接近的动物模型，通过免疫手段，用Ｃ５７ＢＬ／６近交系小鼠肝脏提取物与完全佛氏佐剂混合做为抗原，对同种小鼠背部肌肉注射，共８周。结果，经过免疫损伤的小鼠肝脏出现了特异性的免疫荧光复合物，以及肝细胞的肿胀、嗜酸性变、灶性坏死、炎细胞浸润，甚至严重的肝细胞坏死，其病变特点与人类慢性肝炎非常接近。认为是研究人类病毒性肝炎和自身免疫性肝炎比较理想的动物模型。     

体外诱导C57BL/6小鼠CIK细胞研究

目的:诱导培养C57BL/6小鼠CIK细胞,并检测其对肿瘤细胞杀伤作用。方法:使用三种细胞因子及抗CD3单抗体外诱导C57BL/6小鼠脾细胞,用CCK-8试剂检测对肿瘤细胞杀伤作用。结果:培养出的CIK细胞主要为CD8+NK1.1+细胞,对肿瘤细胞有较强杀伤作用。结论:成功诱导出C57BL/6小鼠CIK细胞。     

艰难梭菌感染C57BL/6小鼠模型的建立方法研究

目的 建立C57BL/6小鼠抗菌药物诱导艰难梭菌感染模型,为更有效地认识人类艰难梭菌感染性疾病的发病机制及治疗措施提供依据。方法 C57BL/6小鼠经抗菌药物混合液预处理3天后,进行克林霉素腹腔注射。之后给予高、中、低浓度艰难梭菌ATCC43255悬液灌胃,建立艰难梭菌感染诱导肠损伤和结肠炎的CDI模型。观察小鼠的病死率,平均相对体重、结肠组织病理学评分和粪便艰难梭菌A&B毒素变化。结果 小鼠经抗菌药物处理和艰难梭菌灌胃后,出现腹泻,体重下降,粪便艰难AB毒素检测阳性。结肠病理切片可见炎性细胞浸润和组织坏死等结肠炎表现。随着灌胃菌液浓度的增加,小鼠症状越重,粪便毒素值越高。造模后存活下来的小鼠即使再次给予艰难梭菌灌胃也不再出现症状。结论 C57BL/6小鼠艰难梭菌感染模型与人类CDI病程变化相似,可进一步用于CDI防治措施的研究。     

C57BL/6小鼠骨癌痛模型的制备与评价

目的:探讨用Lewis肺癌细胞系制备C57BL/6小鼠股骨癌痛动物模型的可行性.方法:选用体质量18～20 g雄性C57BL/6小鼠60只,随机分为4组(n=15).实验组接种Lewis肺癌细胞2×106个;热灭活组接种相同数目并热灭活的Lewis肺癌细胞;PBS组接种等客积的PBS液;空白对照组只做假手术,不注入任何溶液.分别于接种前及接种后第7天起隔日观察小鼠自发痛行为及测定机械触诱发痛.术后第7,15,23天,将小鼠麻醉后行双侧后肢X线摄片,评估肿瘤诱发的骨组织破坏程度.每次摄片后,取小鼠术侧后肢行HE染色,光镜下观察骨质破坏情况.结果:实验组接种后第11天左右出现明显自发痛行为,表现为自发抬足时间延长;接种后第13天左右出现明显的触诱发痛,表现为50%缩足阈值明显下降,且持续整个观察期.术后23 d放射学结果显示,肿瘤细胞充满骨髓腔,且穿破骨皮质向外生长,侵犯周围肌肉组织.结论:C57BL/6小鼠股骨骨髓腔接种Lewis肺癌细胞能够成功制备小鼠骨癌痛模型,且此模型与人类骨癌痛高度相似.     

不同浓度H22肝癌细胞株对C57BL/6J小鼠原位肝癌造模差异的影响

目的:使用H22肝癌细胞株建立C57BL/6J小鼠原位肝癌模型,比较不同浓度H22肝癌细胞悬液对C57BL/6J小鼠原位肝癌造模成瘤率、肿瘤病理学特征及其体重变化情况的影响。方法:将66只C57BL/6J小鼠随机分为4个组,分别对应1×10~6、1×10~8、1×10~(10)、1×10~(12)4个细胞浓度。在无菌条件下,将不同浓度的H22肝癌细胞悬液注入60只C57BL/6J小鼠的肝左叶。从注射之日起,连续21 d测量小鼠体重,于第21 d时脱颈椎处死,测肝脏的重量,并行肝脏外观及病理组织学观察。结果:1×10~6、1×10~(10)、1×10~(12)组成瘤率40%(6/15),1×10~8组为27%(4/15)。病理检查证实为肝细胞性肝癌。结论:不同浓度H22肝癌细胞株对成瘤影响差异不明显,造模中可根据实际情况自行选择。     

Establishment of a C57BL/6N mouse model of giardiasis

建立人源蓝氏贾第鞭毛虫C57BL/ 6N小鼠动物感染模型。方法　用分离自河北和江苏两地蓝氏贾第鞭毛虫感染者的包囊 (河北株 ,CD和徐州株 ,XZ)分别感染两组C57BL/6N小鼠 ,收集受染鼠粪便 ,用蔗糖梯度离心法分离纯化包囊 ,计算排囊数量 ,分析排囊规律 ;观察小肠病理组织学改变。结果　C57BL/ 6N小鼠对此 2株蓝氏贾第鞭毛虫具有很高的易感性 ,接受具有活力的 1× 1 0 4 个包囊 /只的 3 6只小鼠 ,均获得感染 ,其中呈间歇性排囊者为 3 2只 ( 88 9% ) ,连续性排囊者 4只 ( 1 1 1 % )。排囊潜伏期为接种后第3d ,高峰期为第 6d。 2小时所排粪便含包囊数最高可达 2 3× 1 0 7个 /g粪。小肠粘膜出现表面分泌物增加 ,间质充血、水肿 ,炎性细胞浸润 ,粘膜坏死脱落等病理变化。结论　C57BL/ 6N小鼠可作为建立蓝氏贾第鞭毛虫感染的良好动物模型     

幽门螺杆菌感染的C57BL/6 CD177基因敲除小鼠模型建立

目的建立幽门螺杆菌（Helicobacter pylori, Hp）感染的C57BL/6 CD177基因敲除（CD177 gene knock-out, CD177 KO）小鼠模型,为进一步进行相关研究奠定基础。方法屏障环境中饲养的无特定病原生物（specific pathogen free, SPF）C57BL/6野生型（wild type, WT）小鼠及CD177基因敲除小鼠各22只,雌雄各半,野生型及CD177基因敲除小鼠各自随机分成2组: 野生型小鼠Hp悉尼菌株（SS1）灌胃组（HpSS1 WT组）10只、野生型小鼠Hp49503株灌胃组（Hp49503 WT组）10只、CD177基因敲除小鼠Hp悉尼株灌胃组（HpSS1 KO组）10只、CD177基因敲除小鼠Hp49503株灌胃组（Hp49503 KO组）10只,另设WT及KO空白对照各1组,各自相应对照组小鼠每组随机各2只,共6组。每组小鼠均禁食12 h后按HpSS1组和Hp49503分组分别予各自菌株的菌液予灌胃。灌胃2周后颈椎脱臼法处死小鼠,取小鼠胃黏膜组织,分别行快速尿素酶实验、病理切片常规H-E染色及特殊组化Warthin-Starry银染色,观察Hp在小鼠胃腔内定植,胃黏膜炎症细胞构成及炎症变化等病理组织学变化情况。结果无论HpSS1株还是Hp49503株在C57BL/6 WT及CD177KO小鼠胃窦隐窝可观察到细菌定植,胃黏膜及胃黏膜下层可见炎症细胞浸润。结论成功建立了Hp感染诱发C57BL/6 CD177KO小鼠胃炎模型。     

C57 BL/6J小鼠肝脏中mPer1基因CpG岛甲基化分析

目的 建立分析C57 BL/6J小鼠肝脏组织mPer1基因启动子区甲基化状态的亚硫氢酸修饰法,检测mPer1表达峰、谷对应的甲基化状态.方法 利用实时定量PCR方法检测mPer1基因表达时相特点,并利用亚硫氢酸修饰法对小鼠肝脏组织mPer1基因启动子区域CpG岛和E-box甲基化情况进行了研究.结果 C57 BL/6J小鼠肝脏组织mPer1基因表达有显著波动性,表达高峰位于ZT13.低谷位于ZT01.序列分析显示mPer1基因启动子区含有CpG岛,并且该CpG岛覆盖与mPer1波动性表达密切相关的顺式元件E-box1和E-box2.亚硫氢酸修饰测序结果 显示,mPer1基因启动子区CpG岛和E-box均呈低甲基化或非甲基化状态.不同时间点mPer1基因CpG岛甲基化频率无显著变化(P=0.458).结论 肝脏中mperl基因启动子区CpG岛和E-box均为开放状态,可以与时钟相关转录因子结合.甲基化不参与调节mPer1基因的节律性表达.     

一种C57BL/6小鼠的dMCAO模型建立及评估*

目的: 运用电凝法制备C57BL/6小鼠远端大脑中动脉闭塞(Distal middle cerebral artery occlusion,dMCAO)模型,完善急性缺血性脑卒中(Stroke)的小鼠模型方案。方法: 54只雄性8～10周龄的C57BL/6小鼠,随机数字表法分为正常组6只,假手术组6只,dMCAO模型组42只。造模采用双电凝一侧大脑中动脉皮层支,同时结扎同侧颈总动脉。评估小鼠造模3 d、7 d存活率与7 d造模成功率;造模7 d采用2,3,5-三苯基四唑氮(Triphenyltetrazolium Chloride,TTC)染色评估脑梗死体积占比、激光微循环血流成像仪评估脑血流情况;造模3 d、7 d转棒实验评估小鼠运动协调能力。结果: 3 d和7 d正常组与假手术组存活率100 %,dMCAO模型组3 d和7 d平均存活率分别为83.35 %、78.43 %,dMCAO模型组造模成功率为66.7 %;通过TTC染色评估模型小鼠梗死体积,正常组与假手术组梗死体积占比为0 %,dMCAO模型组(6只)梗死体积占比为(18.22±0.89) %,95 %可信区间(17.28,19.15) %。通过激光微循环血流成像仪评估模型小鼠脑血流,正常组与假手术组两侧脑血流占比之间差异无统计学意义。dMCAO模型组(6只)梗死侧脑血流较对侧降低占比(53.85±1.22) %,95 %可信区间(52.57,55.13) %;通过转棒实验的在棒时间评估模型小鼠3 d和7 d运动能力,正常组与假手术组3 d、7 d在棒时间差异无统计学意义,dMCAO模型组(6只)与假手术组相比明显降低,差异有统计学意义(P＜0.05)。结论: 通过双电凝一侧大脑中动脉同时结扎同侧颈总动脉可以建立可靠的C57BL/6小鼠dMCAO模型。     

C57BL／6N小鼠清髓性60Co照射剂量探讨

目的:探讨C57BL/6N小鼠的清髓性60Co照射剂量,为建立造血干细胞移植移植物抗宿主病模型奠定基础。方法:33只C57BL/6N小鼠按接受60Co照射剂量的不同分为8组,评估不同照射剂量对C57BL/6N小鼠的影响,拟定清髓性照射剂量。结果:照射剂量≥9 Gy组与8 Gy组小鼠死亡时的白细胞数值差别显著(P<0.01),≥9 Gy组均死于造血衰竭,并且随着照射剂量的加大,生存期缩短,而8 Gy组长期存活;达造血衰竭的时间及体重降低的最大值各组间亦有差别(分别为P<0.01,P<0.05),随着照射剂量的加大,达造血衰竭的时间缩短,体重降低的最大值增加。结论:在剂量率1.74 Gy/m in时,C57BL/6N小鼠的最小清髓性60Co照射剂量为9 Gy。     

C57BL/6小鼠和C57BL/6 FMR1基因敲除小鼠行为学实验研究

目的:通过水迷宫实验、自主活动实验、听源性惊厥实验和悬尾实验来研究C57BL/6小鼠和C57BL/6 FMR1基因敲除小鼠的行为学差异.方法:通过胚胎复苏获得3只雌性杂合的C57BL/6 FMR1基因敲除小鼠后与C57BL/6小鼠进行繁殖,最终得到纯合的雌性和雄性C57BL/6 FMR1基因敲除小鼠各10只进行行为学实...     

Lewis全细胞肿瘤疫苗防治C57BL/6小鼠Lewis肺癌的实验研究

目的探讨Lewis全细胞肿瘤疫苗对小鼠Lewis肺癌的防治作用。方法用Lewis全肿瘤疫苗免疫C57小鼠4次,其中首次免疫用含弗氏佐剂油剂疫苗,第4次免疫的同时在小鼠右腋下接种Lewis肺癌细胞,定期观察小鼠成瘤情况及小鼠免疫状态变化。用流式细胞术检测疫苗组和对照组小鼠外周血CD4 T细胞,CD8 T细胞及CD19 B细胞百分比,以及CD4/CD8的变化。结果疫苗组与对照组小鼠成瘤率、成瘤时间、肿瘤大小差异均无显著性;疫苗组与对照组相比,其外周血CD4 、CD8 T淋巴细胞亚群的百分比差异无显著性,CD4/CD8比值的差异也无显著性,疫苗组外周血CD19 B淋巴细胞百分比略高于对照组,差异有显著性(P=0.014)。结论用Lewis肿瘤全细胞疫苗不能提高C57BL/6小鼠的T淋巴细胞免疫功能,可以提高其B淋巴细胞免疫,但不能使小鼠获得有效的免疫保护。     

利用超数排卵技术进行优化C57BL/6J小鼠生物净化体系的研究

目的以近交系C57BL/6J小鼠为实验对象,通过注射不同剂量的孕马血清促性腺激素(PMSG)和人绒毛膜促进腺激素(hCG)对小鼠进行超数排卵、体外授精和胚胎移植,确定最佳超排剂量,从而完善以C57BL/6J小鼠为背景的转基因小鼠的生物净化体系。方法将5周龄的C57BL/6J雌鼠进行5 IU、10 IU、7.5 IU、15 IU四个剂量组的超数排卵,通过超数排卵与剖宫取胎、胚胎移植两种净化方法相结合,确定C57BL/6J小鼠的净化方法所需的最佳剂量。结果剖宫取胎方法中,注射5 IU剂量组的C57BL/6J小鼠超排后合笼见栓率最高,为(89.00±19.05)%,产仔数和见栓率与其它三组均差异不显著;胚胎移植方法中,10 IU剂量组平均卵母细胞数为30.33±0.89枚,平均体内2-细胞胚胎数为23.78±0.19枚,均显著高于其它三组。结论剖宫取胎法生物净化时,5 IU剂量组可以提高C57BL/6J小鼠的交配成功率;胚胎移植法生物净化时,10 IU剂量组可以获得最多的体内和体外2-细胞胚胎,为C57BL/6J小鼠最佳超排剂量。     

CpG ODN对小鼠哮喘模型气道高反应性及炎症影响的研究

目的探讨免疫刺激序列CpG寡聚脱氧核苷酸（ODN）对小鼠哮喘模型气道高反应性（AHR）及炎症过程的影响。方法雌性C57BL／6J小鼠30只,随机分为正常对照组（A组）、模型组（B组）、CpGODN预防组（C组）、CpGODN治疗组（D组）及布地奈德治疗组（E组）,建立小鼠哮喘模型。采用有创体积描记法对小鼠进行肺功能及AHR检测;采集血、肺组织及支气管肺泡灌洗液（BALF）标本,对BALF行细胞总数计数及嗜酸粒细胞（EOS）绝对值计数,ELISA法测定血清和BALF中细胞因子IL一4、IFN—γ水平。结果B组BALF中细胞总数、EOS绝对值计数和EOS占细胞总数的百分比（EOS％）均显著高于A组（均P〈001）,C、D、E组均显著低于B组（均P〈0．01）,但仍显著高于A组（P〈0．05或0．01）。B组气道阻力增加幅度（Raw％）和肺顺应性下降幅度（Cdyn％）均显著高于A组（P〈0．01）;C、D、E组较B组显著降低（均P〈0．01）;C、D、E组肺组织炎症程度改变不一,明显比B组减轻。B组血清和BALF中IL-4的水平显著高于A组（P〈0．01）,而BALF中IFN—γ的水平显著低于A组（P〈0．01）。结论CpGODN在致敏阶段及致敏后均能明显改善哮喘肺组织炎症,降低BALF中细胞总数及EOS％;降低AHR;调节Th1/Th2细胞因子的平衡。致敏后CpGODN干预优于致敏阶段的干预。