ELISA竞争法测定人尿金属硫蛋白的初步应用

探讨应用ELISA竞争法测定正常人尿金属硫蛋白含量的价值。 [方法 ]应用ELISA法测定了2 0～ 2 3岁健康在校大学生 93份 (男 49,女 44 )晨尿样品的MT。 [结果 ]本法的检测下限为 2 5ng/ml,操作内和操作间的变异系数分别为 2 2 5 %和 1 19% ,回收率为 97 6 %～ 10 0 0 % ;人尿MT含量为 (6 86± 6 0 2 )ng/ μmol肌酐。 [结论 ]本法具有较好的精密度和准确度 ;大学生尿MT含量无性别差异。     

镉、锌与金属硫蛋白抗体对金属硫蛋白的竞争结合

[目的]通过镉、锌与金属硫蛋白抗体（MT-Ab）对金属硫蛋白（MT）的竞争结合,探讨MT-Ab在镉致肾损伤过程中的作用机制。[方法]根据不同的实验处理分组,每组包含0、5、10、20、40mg／mL 5个不同实验浓度亚组。采用竞争ELISA法,按波长490nm处的光密度值判断竞争结合的程度。[结果]实验所用包被MT质量浓度为1μg／mL,MT-Ab浓度为32U。随着实验镉、锌离子浓度增加,光密度值下降。[结论]镉、锌与MT-Ab对MT的结合存在着竞争作用,MT-Ab可使CdMT解离产生游离镉离子,从而导致肾损伤效应。     

金属硫蛋白的α、β结构域与铅结合形式及稳定性的研究

为研究金属硫蛋白与铅的相互作用 ,从基因工程菌 (BL2 1菌 )中分别提取并纯化结合了镉的金属硫蛋白α和β结构域 ,用酸解的方法脱去蛋白中的金属镉 ,然后用Sephadex G2 5纯化分别得到脱金属的α和 β结构域硫蛋白 (apo α MT和apo β MT)。在apo α MT和apo β MT中分别加入不同比例的铅 ,待反应完全后 ,用紫外吸收光谱法研究它们的巯基金属簇结构。经紫外吸收光谱图研究证明 :α结构域与铅反应可产生两种形式的结合物 ,一种为结合 4个铅的MT(Pb4 α MT) ,另一种则为结合 7个铅的MT(Pb7 α MT) ,而 β结构域与铅反应仅生成一种结合 3个铅的产物 (Pb3 β MT)。同时 ,通过与DTNB反应测定了它们的速率常数 ,结果表明结合了 4个铅的α结构域比另外两个产物的稳定性好。该研究对进一步探讨金属硫蛋白与铅反应的机理及其排铅功能提供了有力的证据。     

金属硫蛋白降低铅致新生仔鼠脑组织的氧化损伤

目的　应用金属硫蛋白基因敲除小鼠模型 ,研究孕鼠铅暴露 ,新生仔鼠脑组织氧化损伤与金属硫蛋白 (MT)间的关系。方法　采用整体动物实验 ,于金属硫蛋白基因敲除小鼠 [MT(- / - ) ]和野生型小鼠[MT(+/ +) ]孕第 0天至妊娠结束进行醋酸铅灌胃染毒 ,仔鼠出生后第 1天处死 ,取脑组织测定丙二醛(MDA)、还原型谷胱甘肽 (GSH)含量及超氧化物歧化酶 (SOD)活力 ,同时测定脑组织中MT的含量。结果　宫内铅暴露使MT (+/ +)及MT (- / - )新生仔鼠脑组织MDA含量升高 ,SOD活力降低 ,与染铅剂量间存在明显的剂量 -效应关系 (P <0 0 1)。相同醋酸铅染毒剂量间比较结果显示 ,对照组、低及中剂量染铅组MT (- / - )仔鼠脑组织MDA含量明显高于MT (+/ +)仔鼠 ,差异具有显著性 (P <0 0 1)。随染铅剂量的增加 ,MT (+/ +)仔鼠脑组织GSH含量单向性升高 ;而MT (- / - )仔鼠脑组织GSH含量的变化为非单向性 ,表现为低、中剂量升高 ,高剂量时下降的趋势。高剂量染铅组MT (+/ +)仔鼠脑组织MT含量明显高于对照组 (P <0 0 1)。结论　MT在体内铅的转运、代谢乃至解毒方面具有一定作用 ,MT的缺乏可使铅引起的脑组织脂质过氧化反应增强 ,进一步加重铅的神经发育毒性。     

金属硫蛋白检测方法研究进展

金属硫蛋白(Metallothioneins,MT)是指一类低相对分子质量(约为6000～7000 u),富含巯基(-SH)基团(每个MT分子的半胱氨酸约占其氨基酸总量的30%),不含芳香氨基酸,能结合大量金属离子的热稳定蛋白。它们具有非常保守的一级结构和相似的立体结构,在体内参与微量金属的储存、运输和代谢,并     

锌或铜诱导肝脏金属硫蛋白结合锌镉比值与铜镉比值的研究

[目的]观察镉（Cd）染毒后锌（Zn）或铜（Cu）诱导肝脏金属硫蛋白（MT）结合锌镉比值（Zn／Cd）与铜镉比值（Cu／Cd）的关系及其意义。[方法]将28只雄性Wistar大鼠随机分为7组,每组4只,分别为：空白对照组（0）,不做任何处理;非预处理组（A1、A2）,皮下注射生理盐水;Zn处理组（B1、B2）,皮下注射ZnCl2（每千克体重染Zn 25mg）;Cu处理组（C1、C2）,皮下注射CuSO4（每千克体重染Cu 12.5mg）。预处理24h后,为实验组动物皮下注射镉．金属硫蛋白（CdMT,Cdmetallothionein）,造成Cd急性中毒,其中A1、B1、C1组每千克体重染Cd0．1mg,A2、B2、C2组每千克体重染Cd0．4mg。24h后处死,取肝脏,制备匀浆。离心后取上清液,加入SephadexG-75色谱层析柱。[结果]空白对照组动物肝脏中与MT结合的最主要金属元素是Zn,而Cd、Cu含量在检测限以下;与前者相比,A1、A2组动物肝脏MT和Cd含量随染毒剂量增加而升高,且A1、A2组肝脏MT中Zn／Cd值分别为20．0和10．0;B1、B2组肝脏MT中Zn／Cd值分别为20．8和20．3,Cu离子未检出;C1、C2组肝脏MT的Cu／Cd值分别为80．0和36．5,Zn含量下降明显。[结论]不同剂量Cd染毒后,Zn或Cu诱导动物肝脏MT中金属含量比例存在差异,Cu／Cd值高于Zn／Cd值,即与MT结合的Cd相比,Cu更易取代与MT结合的Zn。另外,肝脏中非MT结合Zn也是影响与MT结合的金属离子稳态的重要因素。     

金属硫蛋白与铅致子代鼠肝组织氧化损伤的关系

目的　应用金属硫蛋白 (MT)基因敲除小鼠及野生型小鼠模型 ,探讨孕期铅暴露 ,新生子代鼠肝组织氧化损伤与MT间的关系。方法　采用整体动物实验 ,于金属硫蛋白基因敲除小鼠 [MT( -/ -) ]和野生型小鼠 [MT( +/ +) ]孕第 0天至妊娠结束进行醋酸铅灌胃染毒 ,染毒剂量分别为 0、10、3 0、90mg/kg(对照、低、中、高剂量组 ) ,子鼠出生后第 1天处死 ,取肝组织测定丙二醛 (MDA)、还原型谷胱甘肽 (GSH)含量及超氧化物歧化酶 (SOD)活性 ,同时测定肝组织中MT的含量及母鼠血铅含量。结果　宫内铅暴露使MT( +/ +)及MT( -/ -)新生子鼠肝组织MDA升高 ,SOD活性降低 ,与染铅剂量组间存在显著的剂量 效应关系 (P <0 0 1)。相同铅染毒剂量组间比较结果显示 ,对照组、低及中剂量染铅组MT( -/ -)子鼠肝组织MDA含量显著高于MT( +/ +)子鼠 ,差异具有显著性 (P <0 0 1)。随染铅剂量的增加 ,MT( +/ +)子鼠肝组织GSH含量单向性升高 ;而MT( -/ -)子鼠肝组织GSH含量的变化为非单向性 ,表现为低、中剂量升高 ,高剂量时下降的趋势。低及高剂量染铅组MT( +/ +)子鼠肝组织MT含量显著高于对照组 (P <0 0 1)。相同染铅剂量MT( -/ -)母鼠血铅水平显著高于MT( +/ +)母鼠 (P <0 0 1)。结论　MT的缺乏可使经孕期铅暴露的新生子鼠肝组织脂     

金属硫蛋白对铅中毒儿童临床干预观察研究

[目的]验证口服含金属硫蛋白制剂干预铅中毒儿童的效果,观察铅中毒儿童体内血Cu、Zn、Ca、Mg、Fe各元素浓度水平及金属硫蛋白制剂干预治疗后各元素的变化. [方法]采用原子吸收光谱法对血铅及微量元素测定,选择门诊检验血铅≥100 μg/L(1 μg/L=0.00 483 μmol/L)的铅中毒儿童,同时检测血中Pb、Cu、Zn、Ca、Mg、Fe各元素浓度,给予含金属硫蛋白制剂(湛江市索奇生物技术有限公司生产的索奇MT生物饮品),服用30 d,停服后15 d复查血铅及上述有关元素. [结果]结果显示,用含金属硫蛋白口服制剂干预治疗低水平铅中毒儿童,干预前后儿童体内Pb、Zn、Ca、Mg、Fe各元素浓度差异有非常显著性(P<0.01). [结论]血铅≥100 μg/L的铅中毒儿童,体内Fe、Zn、Ca、Cu元素浓度失衡;口服含金属硫蛋白制剂,可调节体内这四种元素浓度的平衡并可明显降低血铅浓度,有效率达100%.     

金属硫蛋白与镉中毒

金属硫蛋白（Metallothion，in，简称MT）是一种低分子量（6000～10000）蛋白质，具有高金属含量（每分子含7～12个金属分子），金属通过硫酯键与蛋白结合。氨基酸组合中约含23％～33％半胱氨酸，通过形成金属硫键选择性的结合半脱氨酸无二硫键及芳香族氨基酸和组氨酸。MT被发现以来，围绕着与镉毒性的关系做了许多研究工作，发现MT的亲金属性使生物体接触铜后引起一系列特殊的生物学效应，如有特定的靶器官，生物半减期长，药物促排困难，干扰体内必需微量元素的平衡等。本文就MT与Cd的吸收、转运、中毒与解毒以及铜与其它微量元素的关…     

金属硫蛋白及其在镉接触评价中的应用

金属硫蛋白(MT)是一类低分子量、富含半胱氨酸的金属结合蛋白家族。MT主要与重金属解毒及细胞内微量元素锌、铜的储存、运输和代谢有关。本文主要对MT基因结构、调控、诱导及在镉接触评价中的应用进行综述。     

不同pH值条件下兔肝金属硫蛋白与铜(Ⅱ)结合的研究

目的 研究不同pH值条件下兔肝金属硫蛋白(MT)与铜(Ⅱ)结合情况.方法 向2ml(pH值为3,4,5,6,7)的兔肝锌-金属硫蛋白溶液加入9.2×10-4 mol/L硫酸铜溶液0.2 ml.在200～300 nm波长下测定相应pH值Zn-MT溶液及其加入硫酸铜后与铜(Ⅱ)结合的紫外吸收情况.采用半透膜透析的方法除去过...     

锌诱导肾脏Ⅰ型金属硫蛋白改善糖尿病大鼠肾脏氧化应激

<正>锌是金属硫蛋白(metallothionein,MTs)基因表达的诱导因子[1]。MTs是富含半胱氨酸、可诱导的、多功能、小分子量金属结合蛋白,在抗氧化、维持微量元素自稳态、重金属解毒等方面有重要作用[2]。本研究以口服硫酸锌诱导糖尿病大鼠肾脏MT-1基因表达,探讨其对糖尿病肾病的保护作用。     

竞争性ELISA法检测人尿金属硫蛋白方法的改进及应用

[目的]改进检测人尿金属硫蛋白（UMT）的竞争性酶联免疫吸附法（ELISA），探讨应用该法测定人尿样标本UMT含量的价值。[方法]分离纯化人肝脏金属硫蛋白（HMT），制备抗金属硫蛋白单克隆抗体（McAb），利用待测样品中MT与包被MT竞争结合McAb的原理，建立竞争性ELISA，并检测健康在校大学生298份尿样中的UMT含量。[结果]竞争性ELISA对人UMT最低检出限为9ng／mL，组内和组间的变异系数分别为1．78％一6．72％和5．45％～13：26％，样品的回收率为99．69％～107．25％。尿样检测结果显示运动后UMT含量为（19．73±8．65）ng／μmolCr较运动前的（10．58±5．62）ng／μmolCr明显增加（P〈0．05）；吸烟群体UMT含量为（86．58±30．96）ng／μmolCr，显著高于不吸烟人群[（14．73±6．57）ng／μmolCr]（P〈0．05）。[结论]本法对于检测人UMT具有较好的精密度和准确度，可用于人UMT检测；运动后UMT水平显著升高，吸烟者UMT明显高于正常对照。     

金属硫蛋白对镍致小鼠肝损伤的保护作用

目的探讨金属硫蛋白对镍致小鼠肝损伤的保护作用及其机制。方法利用硫酸镍染毒复制小鼠肝损伤的模型,然后腹腔注射不同剂量的金属硫蛋白7 d,检测肝脏器系数、肝功能及肝组织脂质过氧化等指标,并行肝组织病理学观察。结果肝损伤模型组与金属硫蛋白(MT)保护组小鼠肝脏器系数差异有统计学意义(P<0.05),随着MT剂量的增加,肝脏器系数逐渐降低(P<0.05);MT保护组肝细胞炎性浸润、水肿及坏死明显减轻,肝窦结构有恢复;MT保护组小鼠血清AST、ALT、GGT及总胆汁酸均低于损伤模型组(P<0.05),肝组织MDA、GSH低于损伤模型组(P<0.05),而SOD、GSH-Px活性则高于损伤模型组(P<0.05),并均有较强的剂量依赖关系。结论金属硫蛋白对镍致小鼠肝损伤有保护作用,保护机制可能与减轻氧化损伤有关。     

金属硫蛋白对急性化学性肝损伤的保护作用研究

[目的]研究含金属硫蛋白(metallothionein,MT)蛋奶粉对CCl4致大鼠急性肝损伤的保护作用。[方法]70只Wistar大鼠随机分为正常对照组10只、模型组20只、低和高剂量MT蛋奶粉治疗组各20只。低和高剂量MT蛋奶粉治疗组大鼠以含MT蛋奶粉灌胃1周,然后对除正常对照组以外的大鼠复制CCl4肝损伤模型,于造模当日,正常对照组和模型组大鼠用蒸馏水,治疗组用含MT蛋奶粉连续灌胃2周后,断头处死大鼠,观察各组大鼠血清酶类含量的变化和肝脏过氧化物质和抗氧化酶类(SOD、CAT)和GSH含量的变化。[结果]与正常对照组相比,模型组大鼠血清中ALT、AST、GGT和ALP含量显著升高(P<0.01),而含MT蛋奶粉治疗组大鼠血清中ALT、AST、GGT和ALP含量均显著低于模型组,尤其以高剂量组为显著(P<0.01)。含MT蛋奶粉组大鼠肝脏MDA含量显著低于模型组(P<0.01),抗氧化酶类SOD活性和抗氧化物质GSH含量显著高于模型组(P<0.05或P<0.01),对CAT活性并无显著性影响。[结论]含MT蛋奶粉对CCl4造成的大鼠急性肝损伤具有一定程度的保护作用。     

金属硫蛋白医学研究进展

金属硫蛋白(MT)是一类广泛存在于生物界的金属结合蛋白,因其功能独特,近年来对MT的研究日益受到重视。对MT的分子结构、性质、参与体内微量元素代谢、解除重金属的毒性、清除体内自由基、抗氧化损伤、防止机体衰老、应激能力等生物学功能进行了阐述,并对MT与肿瘤和其它疾病的关系等方面的研究进行了综述,并提出了MT研究中存在的问题及展望。     

重复性注射镉金属硫蛋白诱导小鼠肾脏金属硫蛋白基因的表达

目的　探讨重复性注射镉金属硫蛋白(CdMT)对小鼠肾脏金属硫蛋白(MT)基因表达的影响。方法　以β-actin为内参照,采用半定量RT-PCR方法检测重复性CdMT染毒后小鼠肾脏MT1和MT2基因的表达水平及与染镉剂量和肾皮质镉含量之间的相关性。结果　随着CdMT剂量的增加,MT1、MT2基因的表达水平都相应升高,当CdMT染毒总剂量达到0.60mg/kg时,肾皮质中MT1、MT2基因的表达水平分别为1.60±0.12及1.44±0.05,与相应的对照组(1.22±0.16及0.92±0.12)相比,均明显升高,差异有显著性(P<0.05,P<0.01);肾皮质中MT1及MT2基因表达水平分别与肾皮质中镉的含量呈正相关,其相关系数分别为r=0.72(P<0.01)及r=0.71(P<0.01)。结论　镉对MT1及MT2基因表达具有较强的诱导能力;肾皮质中MT1和MT2基因表达的变化趋势基本相同     

环境镉接触人群尿镉—金属硫蛋白的改变

目的　探讨环境镉接触人群尿镉 金属硫蛋白 (Cd MT)的变化。方法　调查了 90名居住在含镉污水灌溉区 3 0年以上的居民尿中尿镉、尿Cd MT和尿肌酐的变化。结果　尿镉和尿Cd MT分别为 ( 5 17± 2 40 ) μg/g·cre和 ( 6 42± 2 3 5 ) μg/g·cre ;尿镉与尿Cd MT之间密切相关 ,且有一定的剂量反应关系。结论　尿Cd MT可作为慢性镉接触引起的肾损害的一个早期监测指标。     

注射用鼠神经生长因子联合重复经颅磁刺激对自闭症患儿金属硫蛋白-2A金属硫蛋白3水平的影响

目的探讨对自闭症患儿通过注射用鼠神经生长因子与重复经颅磁刺激联合对金属硫蛋白-2A、金属硫蛋白3(MT3蛋白)水平的影响。方法采集106例台州市第一人民医院2019年3月—2021年3月诊治的自闭症患儿为研究对象,分为对照组、观察组各53例。对照组通过重复经颅磁刺激治疗,观察组给予注射用鼠神经生长因子与重复经颅磁刺激联合治疗。检测两组的金属硫蛋白-2A、MT3蛋白、脑源性神经营养因子(BDNF)、血清指标谷氨酸(Glu)、微量元素锌、铜、维生素D及维生素E水平,通过孤独症行为量表(ABC)和儿童孤独症评定量表(GARS)对临床疗效进行评估,统计两组头疼、恶心及嗜睡出现情况。结果治疗后观察组MT3蛋白(925.78±92.78 vs.811.98±80.98)ng/L、BDNF(172.34±17.56 vs.150.93±15.74)μg/L、微量元素锌(14.50±1.40 vs.12.02±1.21)μmol/L、维生素D(62.78±6.78 vs.56.89±5.69)nmol/L、维生素E(11.78±1.80 vs.9.14±0.91)μg/ml水平高于对照组(P<0.05),金属硫蛋白-2A(711.15±70.22 vs.800.12±80.25)ng/ul、Glu(15.47±1.48 vs.19.78±1.98)mmol/L、微量元素铜(16.24±1.67 vs.20.15±2.15)μmol/L水平、ABC评分(36.50±3.40 vs.42.02±3.21)分、GARS评分(30.24±3.07 vs.33.15±3.15)分低于对照组(P<0.05)。观察组治疗有效率高于对照组94.34 vs.69.81)%,差异有统计学意义(P<0.05),观察组治疗不良反应发生率略高于对照组(5.66 vs.3.77)%,差异无统计学意义(P>0.05)。结论注射用鼠神经生长因子与重复经颅磁刺激联合治疗可提高自闭症患儿MT3蛋白水平,金属硫蛋白-2A水平下降,微量元素、维生素异常及临床症状改善。     

微量元素对金属硫蛋白基因表达的调控

研究表明，锌、铜、镉等多种微量元素可能影响机体金属硫蛋白（MT）的表达。作为MT激活剂的金属调节元素（MREs）与金属调节蛋白相互作用，可启动MT基因的转录。但微量元素调控MT基因表达的机制待进一步研究证实。