人骨髓来源间充质干细胞对新生大鼠高氧肺损伤干预作用的研究

目的 研究人骨髓来源间充质干细胞对新生大鼠高氧肺损伤的干预作用.方法 采用贴壁选择法分离、培养、扩增hMSCs,并予BrdU进行标记;32只3日龄SD大鼠随机分为A、B、、C、D4组,每组8只;A组:高氧暴露+hMSCs注射组,B组:空气暴露+hMSCs注射组,C组:高氧暴露对照组,D组:空气暴露对照组.A、C组:高氧(95%)暴露后7 d,腹腔分别注射含5×105 MSC的磷酸盐缓冲液(PBS)、单纯的PBS 50 μl,B、D组:空气暴露后7 d,腹腔分别注射含5×105 hMSCs的PBS、单纯的PBS 50 μl.注射后3 d处死全部动物取肺组织,ELASA法检测肺组织匀浆TNFα、TGFβ1水平;免疫组织化学方法检查肺组织BrdU积分情况,HE染色观察肺组织学形态学结构,做辐射状肺泡计数(RAC);RT-PCR方法检测各组肺组织Alu序列表达情况.结果 (1)A、B、C、D 4组TNFα水平分别为142.933±24.017,79.033±11.573,224.088±41.915,76.500±10.373(F=59.970,P=0.000);而TGFβ1水平分别为1726.484±91.086,1530.359±173.441,2047.717±152.057,1515.777±131.049(F=24.977,P=0.000).(2)RAC值分别为11.145±1.331,13.941±0.985,9.595±0.672,14.819±1.080(F=43.234,P=0.000).(3)RT-PCR检测显示A、B组均有Alu序列表达,而C、D组均未见Alu序列表达.免疫组织化学显示A、B组均有BrdU阳性染色细胞,BrdU积分分别为0.230±0.026,0.190±0.015,t=3.769,P=0.002;C、D组均未见阳性染色细胞.结论 新生大鼠腹腔注射hMSC后肺组织有hMSCs定植,且与暴露的条件相关;hMSCs可改善新生大鼠因高氧引致的肺组织损伤.     

高氧诱导肺损伤新生小鼠肺组织中长链非编码RNANANCI的表达及对NKX2.1的调控作用

目的探讨长链非编码RNA NANCI在高氧诱导肺损伤新生小鼠肺组织中的表达变化及对NKX2.1的调控作用。方法采用随机分组法将48只C57BL/6J新生小鼠随机分为空气组和高氧组,每组24只,各组再随机分为生后7 d组、14 d组、21 d组,每组8只。空气组置于室内环境(Fi O2=21%)中饲养,高氧组置于高氧箱(保持氧浓度95%)中饲养,在各时间点分别处死两组动物后收集肺组织标本。采用苏木精-伊红染色法观察小鼠肺组织病理变化;采用RT-q PCR及Western blot技术分别检测NANCI、NKX2.1的m RNA和蛋白表达水平。结果空气组新生小鼠肺组织NANCI和NKX2.1的m RNA表达水平7 d最高(P0.05),14 d与21 d呈同水平表达。与空气组比较,高氧组肺组织肺泡化程度降低,辐射状肺泡计数(RAC)减少(P0.05),且高氧组RAC值随高氧处理时间延长逐渐降低(P0.05)。各时间点高氧组NANCI m RNA、NKX2.1 m RNA及其蛋白表达水平均低于空气组(P0.05),且随高氧处理时间延长逐渐降低(P0.05)。NKX2.1与NANCI表达呈正相关(r=0.585,P=0.003);两者与高氧组RAC水平均呈正相关(分别r=0.655、0.541,P0.05)。结论 NANCI可能主要参与未成熟肺组织发育;肺组织损伤程度随高氧暴露时间的延长逐渐加重,且NANCI及NKX2.1水平与肺损伤程度相关,提示NANCI/NKX2.1靶基因信号通路可能参与新生小鼠高氧肺损伤过程。     

硫氧还蛋白及其还原酶在新生鼠高氧肺损伤中的表达

目的 研究硫氧还蛋白(Trx)及其还原酶(TR)在早产新生鼠高氧肺损伤的肺组织中的表达变化及意义.方法 早产新生SD大鼠,生后第一天随机分为空气组和高氧组.每组64只.两组分别于高氧或空气暴露后第4、7、10、14天提取肺组织总RNA,采取半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)测定Trx和TR mRNA表达;同时采用HE染色观察肺组织病理学变化,并进行辐射状肺泡计数(RAC).结果 病理学观察显示:与对照组比较,高氧组肺组织出现明显肺泡炎性改变和肺发育滞后,同时RAC值亦较空气组显著减少(P＜0.05).高氧暴露各组Trx、TR mRNA表达较空气组均明显增强(P＜0.05),且二者表达强度分别于第10天和第7天达高峰.结论 高氧上调肺组织Trx、TR表达;肺组织Trx系统表达增高可能在早产鼠高氧肺损伤的发病过程中发挥重要保护作用.     

泛素-蛋白酶体途径在高体积分数氧肺损伤大鼠早期的激活

目的 探讨高体积分数氧(高氧)暴露早期大鼠肺损伤情况,以及泛素-蛋白酶体途径是否激活.方法 实验采用完全随机设计,SD大鼠20只随机分为高氧组和空气组,每组10只.空气组大鼠持续吸入空气(氧体积分数210 ml/L)72 h;高氧组大鼠持续吸入高氧(氧体积分数950 ml/L)72 h制备高氧肺损伤模型.并视肺形态学变化并确定大体病理分级,肺损伤病理评分;测定肺湿/干质量比值.免疫组织化学方法和Western blot方法检测肺组织泛素化蛋白的表达和蛋白酶体20 s的活性,评价泛素-蛋白酶体途径激活情况.结果 1.成功复制高氧肺损伤大鼠模型.2.大鼠高氧暴露后,出现明显肺水肿,肺湿/干质量比值增高(P=0).3.高氧组大鼠高氧暴露72 h肺组织鲜红色,饱满状,表面有点片状出血或局灶状出血,胸腔有少量积液.高氧组大体病理分级与空气组比较差异有显著性(P=0.005).光镜观察高氧组肺泡上皮肿胀,肺泡壁增宽,毛细血管扩张和充血,肺泡间质和肺泡腔水肿明显,肺泡内炎性细胞增多.高氧组肺损伤病理评分较空气组显著增高(P=0).4.免疫组织化学和Western blot结果均显示大鼠高氧暴露72 h肺组织泛素化蛋白表达显著增强(P=0).5.高氧组蛋白酶体20 s活性较空气组明显升高(P=0).结论 高氧暴露72 h对大鼠肺脏有明显损伤,弥散性肺泡上皮细胞、肺血管内皮细胞损伤,肺内炎性反应细胞浸润伴肺水肿为主要病理学改变.高氧暴露早期大鼠肺组织泛素-蛋白酶体途径激活,并参与肺损伤病理生理过程.     

高氧对新生大鼠肺血管发育及肺组织血管生成素1表达的影响

目的 观察持续吸入85％氧气对新生大鼠肺血管发育和肺组织血管生成素1(Ang-1)表达的影响,探讨高氧肺损伤新生大鼠的肺血管发育情况及可能的发生机制.方法 将96只新生SD大鼠在生后6h内,随机分为高氧组和空气组,高氧组将大鼠置于自制密闭氧箱,FiO2=0.85.在实验3、7、14d每组各随机取16只处死,采集标本.采用HE染色进行肺组织形态学分析,放射状肺泡计数评价肺泡化程度,肺动脉钡剂造影及肺动脉密度检测评价肺血管的发育,免疫组织化学法检测肺组织Ang-1的表达,荧光定量PCR和Western blot技术检测肺组织Ang-1的mRNA和蛋白表达水平.结果 (1)新生大鼠高氧暴露14 d,肺组织的病理表现与早产儿支气管肺发育不良(BPD)的病理表现相似.(2)高氧组7 d RAC值显著低于空气组[(10.55±0.13):(11.74 ±0.19),P＜0.05],在14d时差异更显著[(12.47±0.05):( 15.03±0.16),P＜0.01].(3)肺动脉钡剂造影显示,高氧组14 d大鼠肺动脉主干变细,肺小动脉显影减少,肺动脉密度显著低于空气组[(3.55±0.09):(6.03±0.16),P＜0.05].(4)免疫组化染色显示,高氧组7d和14 d,肺组织Ang-1的表达均显著低于同时间点空气组[ (4.27±0.34):(3.10 ±0.29),P＜0.05,(5.65±0.49)∶(3.21±0.28),P＜0.01].(5)荧光定量PCR及Western blot结果显示,高氧组7d和14 d,Ang-1的mRNA水平显著低于空气组[(0.85±0.14)∶(0.44±0.21),P＜0.05,(0.87±0.24)∶(0.24±0.05),P＜0.01],Ang-1的蛋白水平也显著低于空气组[(0.88±0.31)∶(0.41 ±0.12),P＜0.05,(0.90 ±0.29):(0.21 ±0.06),P＜0.01].结论 持续吸入高浓度氧导致新生大鼠的肺血管发育障碍,Ang-1的表达下调可能参与了早产儿BPD血管发育受阻的发生机制.     

rh-CCSP对高氧暴露下新生大鼠肺损伤的影响

目的研究rh-CCSP对高氧暴露下新生大鼠肺损伤的影响,探讨高氧肺损伤的可能机制。方法将生后1 d的Wistar大鼠80只,随机分为4组。Ⅰ组:空气组;Ⅱ组:高氧组;Ⅲ组:空气+rh-CCSP组;Ⅳ组:高氧+rh-CCSP组。Ⅱ组和Ⅳ组大鼠持续暴露于85%O2中,Ⅰ组和Ⅲ组大鼠呼吸空气。Ⅲ组和Ⅳ组大鼠从出生第2天始每天雾化吸入rh-CCSP,rh-CCSP用双蒸水稀释,其浓度为1 mg/ml,每次雾化吸入10 min。于高氧暴露后7 d、14 d取肺组织,HE染色后测定肺泡辐射状计数(RAC值)和形态定量分析,用免疫组化方法检测肺表面活性物质相关蛋白A(SP-A)表达,用TUNEL方法检测肺细胞凋亡。结果Ⅱ组RAC值较I组明显减少,差异有统计学意义(P<0.01);Ⅳ组的RAC值与Ⅱ组相比,明显增高,差异有统计学意义(P<0.01)。Ⅱ组肺泡面积比较Ⅰ组明显增多,差异有统计学意义(P<0.01);Ⅳ组的肺泡面积较Ⅱ组明显减少,差异有统计学意义(P<0.01)。高氧暴露7 d时Ⅱ组肺组织细胞凋亡指数51.22±2.17明显高于Ⅰ组的21.39±3.18,差异有统计学意义(P<0.01);Ⅳ组的细胞凋亡指数28.98±3.86明显低于Ⅱ组,差异有统计学意义(P<0.01)。高氧暴露14 d时空气组和高氧组比较SP-A表达减弱(U=2.191,P<0.05);高氧+rh-CCSP组和高氧组比较,SP-A表达增强(U=2.048,P<0.05)。结论高氧暴露后肺内CCSP表达下降,阻碍肺泡发育,补充rh-CCSP可有效抑制肺细胞凋亡,还能增加肺内SP-A分泌,减轻肺损伤,可预防和治疗BPD的发生。     

高浓度氧对新生鼠肺血红素加氧酶-1蛋白表达的影响

目的　探讨高浓度氧对新生鼠肺损伤及肺血红素加氧酶 1(HO 1)蛋白表达的影响。方法　将生后 4～ 7d新生SD大鼠 5 7只随机分为 0、2 4、4 8、72h空气对照组和 2 4、4 8、72h高氧暴露组 ,分别置于空气中和常压高氧舱 (氧浓度 92 %～ 94 % )中 ,后断头处死后取肺组织 ,对肺组织切片在光镜、电镜下进行病理组织学观察 ,对肺组织湿 /干重比值进行比较 ,采用免疫组织化学分析对HO 1蛋白表达进行半定量及定位分析。结果　高氧组与空气对照组比较 ,肺组织有明显水肿、出血和炎症 ,电镜下观察病变主要在毛细血管内皮细胞 ;高氧 72h组肺组织湿 /干重比值 (7.97± 1.18)较 72h空气对照组 (6 .4 0± 0 .37)明显升高 (P <0 .0 5 ) ;高氧 72h组肺组织HO 1蛋白表达 (0 .5 0 4± 0 .0 6 2 )较 72h空气对照组 (0 .345± 0 .0 2 4 )明显升高 (P <0 .0 1) ;高氧暴露组HO 1蛋白呈强阳性表达 ,主要分布在支气管、肺泡上皮细胞和肺泡巨噬细胞。结论　高浓度氧可引起新生鼠肺损伤 ,且高浓度氧可引起新生鼠肺HO 1蛋白表达上调 ,证明HO 1参与新生鼠高氧肺损伤的病理生理过程     

地塞米松对高氧肺损伤新生大鼠肺水通道蛋白1表达的影响

目的 探讨地塞米松对新生大鼠高氧肺损伤时水通道蛋白1(AQP1)表达的影响及其对肺损伤的可能保护机制.方法 新生Wistar大鼠32只随机分为空气组、高氧组、空气+地塞米松组、高氧+地塞米松组.第3天取肺组织,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫组织化学法检测AQP1的mRNA表达和分布变化;并对肺湿/干重比(W/D)、支气管肺泡灌洗液(BALF)中的蛋白含量、肺通透指数及组织病理学改变进行对比分析.结果 高氧暴露第3天肺组织出现出血、炎性细胞浸润和水肿,肺W/D、BALF蛋白含量、肺通透指数明显升高;地塞米松干预组肺损伤程度减轻,测定值降低.空气组、高氧组、高氧+地塞米松组AQP1 mRNA相对吸光度比值分别为0.70±0.04、0.42±0.03、1.04±0.04,各组间差异有显著性(P<0.05);与空气组相比,高氧组AQP1 mRNA表达明显降低,高氧+地塞米松组AQP1 mRNA表达显著上调;AQP1蛋白表达与其mRNA变化一致.结论 高氧肺损伤时大鼠肺AQP1表达下调;地塞米松干预对肺损伤有保护作用,上调肺AQP1的表达可能是其作用机制之一.     

重组人促红细胞生成素对新生鼠慢性高氧肺损伤防治的作用

目的探讨重组人促红细胞生成素(rhEPO)对新生鼠慢性高氧肺损伤防治的机制。方法新生Waster大鼠生后随机分组Ⅰ空气对照组;Ⅱ空气 rhEPO组;Ⅲ高体积分数氧对照组;Ⅳ高体积分数氧 rhEPO组。Ⅲ、Ⅳ组暴露高体积分数氧中(FiO285%),Ⅱ、Ⅳ组于生后d0和d2予rhEPO注射液1200U/kg,背部皮下注射。在实验d14观察生存率、体质量、肺质量、肺组织病理改变、放射状肺泡计数(RAC),免疫组织化学法检测肺组织血管内皮标志-CD31及血管内皮生长因子(VEGF)水平。结果Ⅳ组病理改变减轻,生存率提高,体质量、肺质量、RAC和肺微血管数目高于Ⅲ组[(25.88±2.59)vs(18.8±3.93)P<0.001;(0.37±0.07)vs(0.25±0.05)P<0.001;(7.37±0.93)vs(5.03±1.2)P<0.001;(4.1±1.3)vs(2.1±1.3)P<0.001],肺组织VEGF表达增加(P<0.001)。结论rhEPO对慢性高氧肺损伤有保护作用,机制可能与其保护并促进肺微血管形成并增加VEGF的表达有关。     

丹参提取物和超氧化物歧化酶对新生大鼠高氧肺损伤的防治作用

目的 探讨并比较丹参提取物764-3和人工合成的超氧化物歧化酶(SOD)对高氧暴露14 d新生大鼠高氧肺损伤的早期预防及晚期治疗作用.方法 采用Sprague Dawley新生大鼠建立高氧肺损伤模型.分别用SOD和丹参提取物在出生后1～7 d和7～14 d两个不同时间段进行干预,比较高氧对照组、空气对照组、SOD干预组和丹参提取物干预组肺系数、丙二醛(MDA)含量、SOD活性、辐射状肺泡计数(RAC)及肺细胞凋亡指数(AI).结果 除了丹参提取物预防组的AI高于SOD预防组(P＜0.05或P＜0.01)及SOD治疗组SOD活性高于丹参提取物治疗组外,丹参提取物和SOD对大鼠体重、肺系数、MDA含量及RAC影响的差异,均无统计学意义(P＞0.05),且两组的肺系数、MDA含量和AI均低于高氧预防对照组(P＜0.01),体重、SOD活性和RAC则高于高氧预防对照组(P＜0.05或P＜0.01).结论 丹参提取物与SOD一样对新生大鼠高氧肺损伤有一定的预防及治疗作用.     

术中判断肠活力三种方法的比较

术中准确地评价肠活力是外科医师面临的一个普遍问题。应用兔肠缺血模型，比较静脉荧光素、表面血氧测定和激光多普勒三种技术判断肠活力的精确性。结果：诊断效率静脉荧光素法为７８％，表面血氧测定为６８％，激光多普勒为９５％。后者精确度显著优于前二者，且操作简便、迅速，具有临床应用前景。     

早产儿视网膜病的危险因素分析及随访调查

研究早产儿视网膜病(retinopathy of prematurity,ROP)的发生率、高危因素、治疗与随访情况。方法对2005年7月-2007年12月温州医学院附属第一医院NICU收治的符合ROP筛查标准的早产儿,于生后2周开始由资深眼科医师开始行间接眼底镜检查眼底,并进行随访。结果434例早产儿中ROP的发生率为5.5%(24/434例),24例ROP中Ⅰ期19例,Ⅱ期3例,Ⅲ期2例。Ⅲ期阈值病变者行激光光凝治疗,全部患儿均恢复正常。对434例早产儿行单因素分析得出,胎龄、出生体重、住院时间、吸氧、吸氧浓度、吸氧时间、呼吸暂停、新生儿肺透明膜病(RDS)、肺表面活性剂(PS)的应用、机械通气、输血、光疗时间、感染与ROP的发生有相关性(P<0.05)。Logistic回归分析显示胎龄、出生体重、胎数、吸氧时间、光疗时间、代谢性酸中毒、母亲妊高症、颅内出血是影响ROP发生的主要因素。结论早产是ROP的根本原因,防治各种并发症、合理的氧疗是预防ROP的关键。建立完善有效的ROP筛查制度,早期发现、早期治疗ROP,可改善ROP的预后。     

Spectrum of clinical presentations of vein of Galen aneurysm

Aneurysm of the vein of Galen is a rare intracranial vascular malformation. It is known to have diverse manifestations and varying severity. Four cases with different modes of presentation and outcome are reported. A mortality of 50 per cent was encountered. Among the survivors, one had neurologic sequelae whereas the other had attained age-appropriate developmental milestones. The former was a rare case of spontaneous thrombosis of the aneurysm while the latter was a boy who underwent therapeutic embolization.     

主动脉缩窄的治疗研究进展

主动脉缩窄(coarctation of aorta,CoA)是主动脉的局限性狭窄,狭窄最常见于峡部,是一种常见的先天性心血管畸形,占所有先天性心脏病的5％ ～8％.缩窄导致上肢血压升高,下肢血压降低,并可引起心功能下降,未经治疗的CoA预后不佳.治疗方式包括外科治疗及经皮介入治疗,不同治疗方式的并发症发生率不同,术后长期监测其并发症、心功能是评估预后的重要指标.该文对主动脉缩窄的治疗方式及术后并发症、心功能情况的研究进展作一综述.     

Outcome of the Treatment of Inborn Errors of Metabolism

The use of specific dietary restrictions, cofactor administration, mobilisation of insoluble substances, environmental modifications, product replacement and selective enzyme inhibition are now established for the treatment of some inborn errors of metabolism. There is no generally accepted application for enzyme administration, cytopharmacology (manipulation of the cytoskeleton) or for cell transplantation except for bone marrow transplantation in disorders where the bone marrow is primarily at fault. The other uses of bone marrow transplantation which have been proposed require further evaluation. Results of recent research suggest that the scope of this approach is gradually being widened. There is also scope for development in the field of organ transplantation taking advantage of recent technical¹ and immunological progress. The treatment of inborn errors of metabolism by genetic modification is not yet on a practical clinical level; more laboratory and animal studies are needed before this can be attempted in man. Adenosine deaminase deficiency appears to be the disease in which this will be first attempted using a retroviral vector to insert the gene into the genome of pluripotential bone marrow cells.     

小儿法洛四联症根治术106例临床分析

目的探讨小儿法洛四联症根治术的特点,以提高手术疗效。方法对1998-02—2005-07在河南省郑州市第七人民医院接受法洛四联症根治术的106例患儿的临床资料进行回顾性分析。结果治愈103例,死亡3例,病死率为2.9%。术后随访率100%,随访3～93个月,无晚期死亡。全部病例心功能皆恢复至Ⅰ或Ⅱ级(NYHA)。结论绝大部分法洛四联症患儿可施行一期根治术,提高手术成功率的关键在于合理的体外循环灌注、严密修补室间隔缺损和恰当疏通右室流出道。     

Reliability of subjective estimates of exercise capacity after total repair of tetralogy of Fallot

Sixty-nine patients (age 10 × 3.5 years, median 9.7 years) operated on for tetralogy of Fallot, underwent excercise testing 5.1 × 2.5 years after total correction. Aerobic capacity was assessed by the ventilatory threshold method. After the exercise test, parents completed a validated standardized questionnaire to evaluate the habitual level of physical activity of their child. They were then asked to place their child into one of three groups, describing their child's activity level, compared to normals (below average, average and above average). In the average and above-average groups, 73% and 65% of the patients were misclassified when compared to objective exercise testing. However, in the below-average group, no misclassifications were found. Subjective estimates of activity level, and consequently exercise tolerance, were poorly associated with objective measurements of exercise performance in these patient groups. Our results question the reliability of self-reported estimates of physical activity level and consequently exercise capacity in children after surgical correction of tetralogy of Fallot.     

早产儿脑病研究进展

早产儿脑病是复杂的原发性脑损伤和继发性脑发育异常疾病.过去几年对该病有了较为深刻的认识,该文就最新的有关早产儿脑病概念演变,脑损伤后的细胞分子机制和损伤后发育障碍,尤其是活化小胶质细胞介导的少突胶质细胞损伤机制、神经/髓鞘受损和丘脑、板层下神经元及大脑皮层的受损机制或发育成熟障碍进行综述,以便对该病有更深刻的认识.     

婴幼儿法乐四联症手术治疗近期疗效的影响因素

目的 探讨影响婴幼儿法乐四联症手术治疗近期疗效的各相关因素.方法 将2003年8月至2011年2月经作者一期手术纠治的117例年龄≤3岁的法乐四联症患儿分为疗效良好、疗效较差两组.分析手术时患儿年龄、体重、术前HCT值、McGoon指数、EDVI、主动脉阻断时间、转流时间、室间隔缺损大小、升主动脉与肺动脉干直径比、...