黄芩茎叶总黄酮抗高糖致血管平滑肌细胞增殖作用及其机制研究

目的 观察黄芩茎叶总黄酮（SSTF）对高浓度葡萄糖（HG）刺激的血管平滑肌细胞（VSMCs）增殖的抑制作用及可能的机制。方法 体外培养大 鼠胸主动脉VSMCs,HG诱导其增殖,观察SSTF对细胞增殖及迁移、细胞周期、醛糖还原酶（AR）mRNA及AR蛋白表达的影响。结果 与模型组比较,SSTF明显抑制HG诱导的VSMCs 增殖及迁移,抑制细胞周期进程（P＜ 0.05,P＜ 0.01）,并呈时间和剂量依赖趋势;SSTF显著抑制细胞AR mRNA及AR蛋白表达（P＜ 0.05,P＜ 0.01）。结论 SSTF对HG刺 激的VSMCs增殖具有抑制作用,可能与降低AR表达有关。     

大蒜素抑制胰岛素诱发血管平滑肌细胞增殖和迁移实验研究

目的:探讨大蒜素(allicin)抑制胰岛素(insulin)诱导的血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖和迁移及其作用机制。方法:采用组织贴块法培养大鼠的VSMCs,并进行平滑肌α-肌动蛋白(α-SMA)免疫荧光鉴定,取3~5代细胞进行实验。建立胰岛素刺激的VSMCs模型。实验分5组:对照组、胰岛素组、大蒜素组、ERK抑制剂PD98059组、大蒜素+PD98059组。噻唑蓝(CCK8)比色法检测VSMCs的增殖;细胞计数法检测VSMCs的迁移;免疫印迹实验(Western blotting)测定total ERK,PhosphoERK(p-ERK),PCNA蛋白表达的情况。结果:原代培养的VSMCs生长良好,光镜下呈长梭形及“峰与谷”样生长。α-SMA免疫荧光显示培养的细胞具有典型的VSMCs特征。胰岛素能刺激VSMCs的增殖和迁移,且以100 nmol·L-1浓度时效果最明显。大蒜素预处理能显著抑制胰岛素刺激的VSMCs的增殖和迁移,且呈剂量依赖性。PD98059、大蒜素+PD98059预处理亦能显著抑制胰岛素刺激的VSMCs的增殖和迁移。胰岛素可明显促进VSMCs表达p-ERK,PCNA蛋白。大蒜素能显著抑制VSMCs表达p-ERK,PCNA蛋白,且呈剂量依赖性。结论:大蒜素能显著抑制胰岛素诱导的VSMCs的增殖与迁移,其作用机制可能是抑制ERK信号通路的激活。     

24-乙酰泽泻醇A对ox-LDL诱导大鼠VSMCs增殖影响的机制研究

24-乙酰泽泻醇A作为泽泻的主要组成部分有抗动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)作用且AS与血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)增殖密切相关,故该研究通过活体取材及培养大鼠腹主动脉VSMCs,50 mg·L-1ox-LDL诱导VSMCs建立细胞增殖模型,探讨24-乙酰泽泻醇A对ox-LDL诱导大鼠VSMCs增殖影响的作用机制。不同浓度24-乙酰泽泻醇A(5,10,20 mg·L-1)干预细胞增殖模型12,24,48 h,MTT检测VSMCs增殖情况,Western blot法检测VSMCs PCNA,cyclin D1,cyclin E,p21,p27蛋白表达的变化,RT-PCR检测VSMCs PCNA,p21和p27 mRNA表达情况。MTT结果显示ox-LDL诱导VSMCs的增殖(P0.05);ox-LDL促进VSMCs PCNA,cyclin D1,cyclin E蛋白表达的增加(P0.05),抑制p21,p27蛋白及mRNA的表达(P0.05);24-乙酰泽泻醇A可显著抑制ox-LDL诱导VSMCs的增殖(P0.05)及PCNA,cyclin D1,cyclin E蛋白表达,同时提高p21,p27蛋白及mRNA的表达量(P0.05),该现象随着24-乙酰泽泻醇A浓度的增加作用越明显。24-乙酰泽泻醇A可抑制ox-LDL诱导大鼠VSMCs的增殖,其机制可能通过抑制VSMCs细胞周期蛋白(cyclin D1,cyclin E,p21,p27蛋白等)表达有关。     

松油烯-4-醇通过调控KLF4/NF-κB信号通路抑制高糖诱导的VSMCs增殖作用研究

研究松油烯-4-醇(terpinen-4-ol, T4O)对高糖(HG)诱导的血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖的抑制作用，以及对Krüppel样因子4(Krüpple-like factor 4,KLF4)表达和NF-κB信号通路的影响。预先给予T4O预孵育2 h后，加入HG共孵育48 h诱导VSMCs损伤模型。MTT法检测VSMCs增殖；流式细胞仪检测细胞周期；划痕实验检测细胞迁移率；ELISA法检测VSMCs上清液中白细胞介素(IL)-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量；Western blot检测增殖细胞核抗原PCNA、周期相关蛋白Cyclin D1,以及KLF4和炎症相关蛋白NF-κB p-p65、IL-1β和IL-18的表达水平。siRNA-KLF4转染实现KLF4在VSMCs的沉默表达，观察T4O对HG诱导VSMCs细胞周期及上述蛋白表达水平的影响。结果显示，与HG组比较，不同剂量的T4O干预给药可明显抑制HG诱导的VSMCs增殖，增加G₁期细胞百分比、降低S期细胞百分比，抑制细胞迁移能力，下调HG诱导的PCNA和Cyclin D1蛋白表达水平；...     

氧化苦参碱抑制胰岛素诱导人结肠癌HT-29细胞的增殖及迁移作用

目的:利用胰岛素培养人结肠癌细胞HT-29,体外模拟糖尿病患者体循环中高胰岛素环境,研究氧化苦参碱(OMT)对胰岛素诱导的人结肠癌HT-29细胞增殖和迁移的影响。方法:采用噻唑蓝(MTT)比色法和平板克隆实验检测OMT(2,4,8 mmol·L~(-1))对胰岛素诱导HT-29的增殖作用,倒置显微镜观察该模型下细胞形态的变化;通过划痕修复实验评价OMT对胰岛素诱导的HT-29迁移能力,流式细胞术Annexin V/碘化丙啶(PI)双染实验检测该模型中HT-29细胞周期与凋亡的变化;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测细胞周期相关蛋白的表达以及细胞迁移相关蛋白的表达。结果:MTT比色法、平板克隆及划痕修复实验均显示,与空白组比较,胰岛素能促进人结肠癌HT-29细胞的增殖和迁移(P 0. 05);选择2,4,8 mmol·L~(-1)OMT处理细胞24 h,与胰岛素组比较,OMT 4,8 mmol·L~(-1)明显抑制其增殖作用(P 0. 05),可诱导HT-29细胞发生G_0/G_1期阻滞(P 0. 05),8 mmol·L~(-1)OMT下调细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)和周期蛋白依赖性激酶4(CDK4)表达(P 0. 05),上调周期负调节蛋白p27水平(P 0. 05);此外,划痕修复实验结果显示,与胰岛素组比较,OMT各浓度组均能抑制胰岛素诱导的细胞迁移作用(P 0. 05),其机制可能与增加黏附蛋白(E-cadherin)(P 0. 05)和降低波形蛋白(Vimentin)(P 0. 05)相关。结论:OMT能抑制胰岛素诱导的人结肠癌HT-29细胞增殖及迁移作用,其作用机制可能与调控细胞周期及迁移相关蛋白有关。     

白藜芦醇通过TRPC1抑制血管平滑肌细胞增殖作用研究

目的研究白藜芦醇(Resveratrol,RSV)通过瞬时受体电位C1通道(transient receptor potential canonical-channel 1,TRPC1)来抑制血管平滑肌细胞(Vascular smooth muscle cells,VSMCs)增殖的机制。方法采用血管环培养法观察RSV对胎牛血清(fetal calf serum,FBS)诱导的血管壁损伤的影响;MTT法检测RSV对VSMCs增殖的影响;q PCR法检测RSV对TRPC1 m RNA表达的影响;Western Blot法检测RSV对TRPC1蛋白表达的影响。结果与模型组比较,RSV在20~200μmol·L~(-1)范围内,可改善高血清诱导的血管壁损伤和管壁增厚现象;RSV可降低FBS诱导的VSMCs增殖(P0.01),以200μmol·L~(-1)浓度最为显著,此作用可被TRPC1抑制剂SKF96365所阻断;RSV各浓度组的TRPC1 m RNA及蛋白相对表达量显著降低(P0.01)。结论 RSV抑制VSMCs的增殖可能通过影响TRPC1靶点来实现。     

ERK1/2信号通路参与美洲大蠊提取物诱导肝癌细胞凋亡的研究

目的:观察美洲大蠊提取物抗肝癌细胞的凋亡作用是否与胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)介导的凋亡通路有关。方法:以人肝癌SMMC-7721细胞株为研究对象,MTT法检测肿瘤细胞抑制率; Annexin V-FITC/PI染色观察细胞凋亡情况; JC-1染色观察线粒体膜电位情况;蛋白免疫印迹(Western blotting)法检测细胞核内凋亡诱导因子(AIF)、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)、大鼠肉瘤蛋白(Ras)、快速反应肉瘤蛋白(Raf)、磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)蛋白表达。结果:与阴性对照组相比,40、80μg/ml的美洲大蠊提取物可不同程度地抑制SMMC-7721细胞的增殖,诱导其凋亡,降低线粒体膜电位。Western Blot结果显示,与阴性对照组相比美洲大蠊提取物可使核AIF、caspase-3表达增多,而ERK1/2通路的Ras、Raf、p-ERK蛋白表达均有不同程度降低。ERK1/2抑制剂PD98059在抑制ERK1/2信号通路的同时,抑制了SMMC-7721增殖,诱导其凋亡。结论:美洲大蠊提取物诱导SMMC-7721细胞凋亡,抑制其增殖,机制可能与下调Ras/Raf/ERK1/2信号通路有关。     

益气解毒方通过MAPK/ERK信号通路抑制鼻咽癌细胞增殖

该文研究益气解毒方水提物对人鼻咽癌CNE2细胞增殖的抑制作用,并初步探讨其作用机制,为益气解毒方的临床应用提供新的理论依据。用不同质量浓度(0.125,0.25,0.5,1.0 g·L~(-1))的益气解毒方水提物、阳性对照药(顺铂,4.0 mg·L~(-1))、抑制剂PD98059(50μmol·L~(-1))、激活剂isoproterenol hydrochloride(ISO,20μmol·L~(-1))、激活剂ISO+益气解毒方水提物0.5 g·L~(-1)处理CNE2细胞,使用实时无标记细胞功能分析仪(RTCA)和CCK-8法检测细胞增殖活性,并计算出半数抑制浓度(IC50),用荧光双染流式细胞仪PI染色检测药物作用后细胞周期分布情况;Western blot法检测周期相关蛋白和MAPK/ERK信号通路相关蛋白的表达水平。RTCA和CCK-8法检测结果显示,与正常培养组比较,益气解毒方水提物能够有效抑制CNE2细胞增殖(P0.01),呈剂量和时间依赖性,48 h IC50为0.5 g·L~(-1);细胞周期结果显示,水提物处理48 h后,G0/G1期比例降低,G2/M期比例增加,阻滞细胞周期于G2/M期(P0.01);Western blot实验结果显示,经过不同浓度水提物处理48 h后,细胞周期相关蛋白cyclin D1,cyclin D3,CDK2表达下调,MAPK/ERK信号通路相关蛋白p-c-Raf,p-MEK,p-ERK1/2表达明显下调,与对照组相比差异具有统计学意义(P0.05);在此基础上,加入MAPK/ERK信号通路的激活剂和抑制剂,结果显示,加入激活剂ISO,细胞增殖明显高于正常培养组,周期相关蛋白cyclin D1,cyclin D3,CDK2表达量均提高,同时,该信号通路关键蛋白p-c-Raf,p-MEK,p-ERK1/2的表达量也相对上升;而加入抑制剂PD98059后,细胞增殖明显低于正常培养组,相应蛋白的表达量亦降低,与对照组相比差异明显(P0.05)。益气解毒方水提物主要通过下调MAPK/ERK信号通路关键蛋白p-c-Raf,p-MEK,p-ERK1/2的表达,阻滞细胞周期,抑制CNE2细胞增殖。     

秦皮甲素通过抑制Ras/ERK通路诱导人肺癌细胞A549凋亡

目的探讨秦皮甲素通过抑制Ras/ERK通路诱导人肺癌细胞A549凋亡的作用。方法 MTT法检测肺癌细胞A549的增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,分光光度法检测半胱氨酸蛋白酶caspase3、8、9的活性,免疫印迹法检测K-Ras、细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)、磷酸化细胞外信号调节激酶1/2(p-ERK1/2)蛋白表达的变化。结果秦皮甲素可抑制人肺癌细胞A549的增殖,IC50值为0.4 mmol/L,并诱导凋亡;caspase3和caspase9表达增强,caspase8表达无明显改变。p-ERK1/2和K-Ras蛋白表达减弱,而ERK1/2蛋白表达无明显变化。结论秦皮甲素通过显著抑制K-Ras的表达和ERK1/2的磷酸化水平诱导人肺癌细胞A549凋亡。     

半夏有效成分大黄酚对肿瘤坏死因子-α诱导人脑微血管内皮细胞的作用机制

目的:研究半夏有效成分大黄酚对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导人脑微血管内皮细胞(HBMEC)的作用机制。方法:体外培养HBMEC,用TNF-α诱导HBMEC造模,将细胞分为正常组、模型组、大黄酚组、依达拉奉组。采用噻唑蓝比色(MTT)法检测大黄酚对HBMEC增殖能力的影响,用逆转录PCR法(RT-PCR)检测TNF-α,白细胞介素-6(IL-6),IL-8 mRNA的表达,用酶联免疫吸附法(ELISA)检测TNF-α,IL-6,IL-8,磷酸化氨基末端蛋白激酶(p-JNK)和磷酸化细胞外调节蛋白激酶(pERK)的含量,用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测p-JNK,total JNK,p-ERK和total ERK的蛋白表达。结果:在256μmol·L~(-1)浓度时,大黄酚对HBMEC细胞有明显的抑制作用(P0.01)。与模型组比较,在64~128μmol·L~(-1)浓度时,大黄酚对模型细胞生长有明显的促进作用(P0.05);大黄酚组TNF-α,IL-6,IL-8 mRNA表达明显下降(P0.01);大黄酚组TNF-α,IL-6,IL-8,p-JNK和p-ERK的含量明显减少(P0.05);大黄酚组磷酸化JNK/JNK,磷酸化ERK/ERK表达明显下降(P0.05)。结论:半夏有效成分大黄酚具有抑制TNF-α诱导HBMEC损伤作用,可能是通过下调ERK/JNK信号通路减少炎症相关因子TNF-α,IL-6和IL-8的表达。     

染料木黄酮对人卵巢癌裸鼠移植瘤影响的实验研究

目的:探讨植物雌激素染料木黄酮对人卵巢癌HO-8910PM细胞裸鼠移植瘤的影响。方法:体外培养人卵巢癌HO-8910PM细胞,裸鼠皮下接种HO-8910PM细胞建立裸鼠移植瘤动物模型,随机分为对照组和3个染料木黄酮治疗组,治疗组分别给予5,25,50 mg.kg^-1染料木黄酮。治疗4周后,应用流式细胞术(FCM)检测各组裸鼠移植瘤细胞周期时相和凋亡率,免疫组化技术检测凋亡基因bcl-2,Fas,FasL蛋白的表达情况,并通过电镜进行形态学观察。结果:50 mg.kg^-1染料木黄酮治疗组裸鼠移植瘤明显小于对照组,肿瘤细胞G₀-G_l期比例升高明显,S期细胞比例显著降低(P<0.01),移植瘤细胞凋亡率为(15.14±2.27)%,明显高于对照组(3.12±1.12)%(P<0.01);移植瘤细胞bc1-2蛋白表达水平明显下降,而Fas蛋白表达水平升高,与对照组比较,均有显著性差异(P<0.05)。电镜观察50 mg.kg^-1染料木黄酮治疗组可见凋亡细胞明显增多。结论:染料木黄酮通过调节移植瘤细胞周期分布和凋亡基因,抑制卵巢癌细胞增殖,诱导细胞凋亡。     

三七总皂苷和淫羊藿苷组分配伍对高糖培养成骨细胞增殖功能的影响

目的:观察三七总皂苷和淫羊藿苷组分配伍对高糖条件下成骨细胞增殖功能的影响.方法:取3～5代成骨细胞进行试验,成骨细胞(OB)密度为1×105个/mL,观察葡萄糖(Glu)浓度分别为20,40,60 mmol·L-1时成骨细胞的生长情况.三七总皂苷和淫羊藿苷质量浓度为10,20,50,100 mg·L-1,采用MTT法观察单剂量药物及其配伍对高糖条件下成骨细胞的增殖抑制的改善情况.结果:与对照组相比,60 mmol· L-1 Glu的高糖环境对于OB的增殖有明显的抑制作用(P ＜0.05,P＜0.01);三七总皂苷和淫羊藿苷在质量浓度为10,20,50 mg·L-1时对高糖引起的OB增殖抑制具有显著改善作用(P ＜0.05,P＜0.01),组分配伍比例三七总皂苷:淫羊藿苷为50 mg·L-1∶20 mg·L-1时,对高糖条件下成骨细胞增殖抑制具有明显的改善作用(P＜0.01).结论:从对高糖条件下成骨细胞增殖抑制改善作用的角度证实了三七总皂苷和淫羊藿苷组分配伍的合理性.     

骨碎补提取物促小鼠成骨细胞株MC3T3-E1细胞增殖、分化和钙化作用的研究

目的 :探讨中药骨碎补有无促进成骨细胞增殖、分化和钙化的作用。方法 :制备骨碎补的水、醇提取液。小鼠成骨细胞株MC3T3 E1作为药物筛选的细胞模型 ;用MTT法和流式细胞术测定不同浓度的骨碎补水、醇提取液的促细胞增殖作用 ;采用ALP活性和骨钙素定量检测分别观察上述药物提取液的促细胞分化作用 ;以Vonkossa钙化染色法了解上述药物提取液的促细胞钙化作用。结果 :0.01,1mg·L^-1骨碎补水提液能促进MC3T3 E1细胞数量增加 (P <0 .0 5 ) ;0.01,1mg·L^-1骨碎补水提液和醇提液能使S期细胞百分率升高、G1期细胞百分率减少 ;1,10 0mg·L^-1骨碎补醇提液能使细胞ALP的活性升高 (P <0.05 ) ;100mg·L^-1骨碎补醇提液能明显促进细胞骨钙素合成和分泌 (P <0 .001) ;1mg·L^-1骨碎补水提液及 0.01mg·L^-1骨碎补醇提液均可促进细胞钙化 (P <0.05 )。结论 :骨碎补水相和醇相提取物中分别存在有较高活性的促成骨细胞增殖、分化和钙化的物质。     

辛伐他汀对高血压大鼠心肌肥厚及细胞外信号调节激酶的影响

 目的探讨辛伐他汀对自发性高血压大鼠(SHR)心肌肥厚及细胞外信号调节激酶(ERK)的影响。方法将14只14周龄雄性SHR随机分成2组,每组7只;其中辛伐他汀组40mg·kg^-1·d^-1灌胃;对照组灌胃载体(0.5%羧甲基纤维素钠);共10 周。并以雄性同周龄Wistar Kyoto大鼠(WKY)作对照比较。以左心室质量与体重的比值反映心肌肥厚的程度;用Western-blot 方法检测大鼠心肌总ERK(t-ERK)、磷酸化ERK(p-ERK)以及丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶-1(MKP-1)水平。结果SHR辛伐他汀组心肌肥厚指数明显低于SHR对照组(P<0.05)。3组大鼠t-ERK水平无显著性差异(P>0.05);辛伐他汀组心肌p-ERK和p-ERK/t-ERK比值明显低于SHR对照组(P<0.01),与WKY组接近;辛伐他汀组心肌MKP-1水平低于SHR对照组(P<0.05), 与WKY组无显著差异。结论辛伐他汀能抑制心肌肥厚,其作用机制可能与降低ERK活性有关。     

氧化苦参碱对醛固酮诱导心肌成纤维细胞增殖抑制作用的机制

目的:研究氧化苦参碱(OMT)对醛固酮(ALD)诱导心肌成纤维细胞(CFs)增殖中C-Jun氨基末端激酶(JNK)/细胞外调节蛋白激酶(ERK),蛋白激酶B1(Akt1)信号的调控机制。方法:采用胰酶消化及差速贴壁法分离纯化CFs,波形蛋白免疫荧光染色鉴定CFs,实验分为空白组(无血清DMEM),ALD组(1×10-7mol·L-1),OMT低剂量组(3.78×10-4mol·L-1),OMT高剂量组(7.57×10-4mol·L-1)及螺内酯组(Spir,1×10-6mol·L-1)。噻唑蓝(MTT)比色法检测OMT对ALD诱导CFs的增殖抑制作用,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)及蛋白质免疫印迹法(Western blot)分析JNK,ERK,Akt1 mRNA及蛋白表达。结果:MTT结果显示,与空白组比较,ALD显著诱导CFs增殖(P0.05),给予OMT干预后,CFs的增殖被显著抑制(P0.05);Western blot及Real-time PCR结果显示,与空白组比较,ALD明显增加CFs中JNK,ERK及Akt1蛋白和mRNA表达(P0.05)。与ALD组比较,OMT可明显下调ALD诱导的CFs中JNK,ERK及Akt1 mRNA和蛋白表达(P0.05)。结论:OMT可抑制CFs增殖,其机制可能与抑制JNK,ERK及Akt1信号有关。     

养正散结汤对人胃癌MKN-45细胞增殖、凋亡及ERK通路的影响

目的:探讨养正散结汤对人胃癌MKN-45细胞增殖、凋亡及细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)通路的影响。方法:将养正散结汤组(0. 5,1,1. 5,2,2. 5,3,3. 5 g·L~(-1))作用于胃癌MKN-45细胞,设置空白组,分别孵育24,48,72 h后采用细胞增殖活性检测方法(CCK-8)检测细胞增殖情况;用养正散结汤组(0. 4,0. 8 g·L~(-1))处理细胞,运用平板克隆形成实验观察细胞的克隆形成能力;用4,8 g·L~(-1)养正散结汤干预细胞,利用流式细胞仪检测细胞的凋亡情况;用2,4,8 g·L~(-1)养正散结汤处理细胞,采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测ERK表达及其磷酸化水平。结果:与空白组比较,养正散结汤组能明显抑制MKN-45细胞的增殖,处理24,48 h后,养正散结汤从2 g·L~(-1)开始,处理72 h后,从1. 5 g·L~(-1)开始,细胞存活率逐渐降低,呈明显浓度依赖性(P 0. 05,P 0. 01)。经不同质量浓度的养正散结汤干预48 h后,养正散结汤组细胞克隆形成率显著低于空白组(P 0. 01),呈一定的量效关系,0. 8 g·L~(-1)养正散结汤干预后,MKN-45细胞集落基本无法形成;养正散结汤组细胞凋亡率明显高于空白组(P 0. 05,P 0. 01);干预12 h后,与空白组比较,养正散结汤从4 g·L~(-1)开始下调MKN-45细胞中ERK蛋白的磷酸化水平(P 0. 01)。结论:养正散结汤能抑制人胃癌细胞MKN-45的增殖,促进其凋亡,其作用机制可能与抑制ERK的磷酸化有关。     

黔岭淫羊藿总黄酮类成分对hFOB1.19人SV40转染成骨细胞活性的影响

目的:观察黔岭淫羊藿总黄酮类成分(YYH-C)对hFOB1.19人SV40转染成骨细胞活性的影响。方法:培养基连续培养hFOB1.19人SV40转染成骨细胞,采用MTT法测定细胞增殖率,全自动生化分析仪测定碱性磷酸酶(ALP)分泌水平,观察50,25,12.5,6.25,3.13,1.56,0.78,0.39,0.20 mg.L-1YYH-C与细胞培养72 h及连续多次给药与细胞培养1,4,7,10d时对细胞活性的影响。结果:0.78～50 mg.L-1的YYC-C与细胞共培养72 h,能明显促进细胞增殖,对细胞的最大增殖率达132.32%,0.78 mg.L-1剂量组尚能明显促进ALP的分泌;YYH-C连续给药1～4 d对hFOB1.19人SV40转染成骨细胞未见明显的增殖作用和明显的促进细胞分泌ALP的作用;自给药7 d开始,YYH-C不同质量浓度组显示出不同程度的促进细胞增殖的作用,YYH-C 0.78～25.0 mg.L-1呈现明显的量-效关系,随着质量浓度进一步的增大,对细胞的增殖作用不再增加,药效至少持续至给药10 d;12.5,25.0,50.0 mg.L-1在给药7 d,25.0,50.0 mg.L-1在给药10 d均能明显促进细胞分泌ALP。结论:YYH-C能明显促进hFOB1.19人SV40转染成骨细胞的增殖,且能明显促进细胞分泌ALP,提示YYH-C对成骨细胞活性的促进作用可能是其防治骨质疏松症的途径之一。     

参莲提取物对大鼠腹腔肥大细胞释放活性物质的干预作用

目的:探讨参莲提取物对大鼠腹腔肥大细胞释放活性物质的干预作用。方法:提取原代大鼠腹腔肥大细胞,纯化后以5×106个/mL浓度接种于培养板中,加参莲提取物预处理2 h后,用C48/80刺激肥大细胞脱颗粒,ELISA法检测细胞上清液以及细胞裂解液中组胺(histamine),类胰蛋白酶(tryptase),以及5-羟色胺(5-hydroxytryptamine,5-HT)的含量,计算活性物质释放率。结果:模型组较对照组组胺释放率由32.36%升至61.71%(P<0.01),参莲提取物各剂量(100,50,25,12.5 mg.L-1)作用后,组胺释放率分别降至16.24%,26.25%,27.81%,31.50%(P<0.01);模型组较对照组类胰蛋白酶释放率由13.19%升至21.72%(P<0.01),参莲提取物各剂量(100,50,25,12.5 mg.L-1)作用后,类胰蛋白酶释放率分别降至8.60%,15.78%,8.80%,12.15%(100,25,12.5 mg.L-1组P<0.01,50 mg.L-1组P<0.05);模型组较对照组5-HT释放率没有明显变化,但参莲提取物100,50,25 mg.L-1组显著增加5-HT释放率(P<0.01,P<0.05)。结论:参莲提取物对大鼠腹腔肥大细胞有一定的稳定作用。     

银杏内酯诱导嗜铬细胞瘤细胞表达低氧诱导因子-1α

 目的研究银杏内酯(ginkgolides,Gin)对神经生长因子(nerve growth factor,NGF)诱导分化的嗜铬细胞瘤(PC12)细胞的影响以及与其相关的信号通路。方法通过MTT比色法观察不同浓度Gin对PC12细胞活性的影响,RT-PCR和Western Blot法分析Gin对PC12细胞低氧诱导因子-1(αhypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)表达以及MAPK信号通路的影响。结果一定浓度范围的Gin可促进PC12细胞的活性,在37.5 mg·L^-1作用24 h效果最明显。37.5 mg·L^-1 Gin单独处理PC12细胞24 h可诱导HIF-1αmRNA表达增强和蛋白水平上调。Gin还引起p-ERK水平的明显提高。Gin增加PC12细胞HIF-1α蛋白的稳定性存在一定的时间和剂量依赖关系,PD98059可部分抑制Gin的增强作用,金雀异黄素可完全阻断之;与此相对应的是,Gin以时间和剂量依赖方式诱导PC12细胞p-ERK水平的增高,PD98059和金雀异黄素均能完全阻断Gin的诱导作用。结论Gin可诱导PC12细胞表达HIF-1α,主要与MEK-ERK信号通路激活有关,可能是其促进分化的PC12生长的原因。     

补阳还五汤抑制同型胱氨酸介导的血管平滑肌细胞增殖

目的:探讨补阳还五汤抑制同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)介导的血管平滑肌细胞增殖及其作用机制。方法:雄性SD大鼠补阳还五汤给药剂量为14.9 g.kg-1.d-1,给药7 d制备含药血清,取适量含药血清配制含药血清为5%,10%,20%3种培养基,取对数期细胞,按照分组将5%,10%,20%含药血清培养基预处理细胞1 h后加入Hcy 2 mmol.L-1作用24 h,流式细胞技术测定细胞周期,Western-blotting(WB)测定增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)的蛋白表达量,用荧光探针DCFH-DA试剂盒对细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)的聚积量进行测定。结果:补阳还五汤能抑制血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell,VSMC)细胞周期的进程,其中5%含药血清组细胞处在S+G2期为47.34%(P<0.05),10%含药血清组为38.81%(P<0.01),20%含药血清组为27.95%(P<0.01),下调细胞内PCNA的表达(P<0.01),测得补阳还五汤给药组细胞内ROS的荧光强度较Hcy组弱。结论:补阳还五汤能显著抑制Hcy介导的VSMC增殖,其作用机制可能是通过降低细胞内ROS的聚积量。