神经干细胞移植对帕金森病模型小鼠行为的影响

目的 评价神经干细胞移植对帕金森病(PD)模型小鼠行为缺陷的改善作用。方法 采用自发运动、Morris水迷宫和转杆实验对小鼠的行为进行评价。结果 与对照组相比，PD模型小鼠的自发运动次数明显减少，水迷宫寻台潜伏期延长，转杆时问缩短。经单侧和双侧纹状体神经干细胞移植后2周、4周和8周，PD模型小鼠的自发运动次数明显增加，水迷宫寻台时间显著缩短，转杆时间延长。结论 神经干细胞移植能够有效改善PD模型小鼠的行为缺陷。     

人参总皂苷在神经干细胞移植治疗帕金森病模型小鼠中的作用

目的：将人参总皂苷或人参总皂苷与白细胞介素1联合处理的神经干细胞移植到帕金森病模型小鼠纹状体内，观察人参总皂苷在移植治疗帕金森病模型小鼠中的作用。 方法：实验于2004-09／2005-07在重庆医科大学基础医学研究所重庆市生物化学与分子药理重点实验室完成。①从7～12周龄流产胚胎脑中分离皮质细胞，体外培养，纯化，分别用鼠抗人nestin抗体行免疫细胞化学染色，鉴定神经干细胞，并用4，6-二乙酰基-2苯基吲哚标记细胞。②人参总皂苷与人神经干细胞的体外培养，实验分组：神经干细胞组，常规培养神经干细胞；人参总皂苷组，常规培养体系中加入人参总皂苷（终浓度200mg／L）；人参总皂苷＋白细胞介素1组，在人参总皂苷组培养体系中加入白细胞介素1（终浓度200ng／L），均培养3d，待移植用。③健康清洁级小鼠20只，腹腔注射1-甲基-4-苯基-1，2，3，6-四羟吡啶（30mg／kg），建立帕金森病小鼠模型。记录小鼠震颤麻痹评分，自发活动和记忆功能，对模型进行评价。④将经人参总皂苷处理的神经干细胞，按所分实验组注入帕金森病小鼠纹状体内，同时设立磷酸盐缓冲液组（注入同体积磷酸盐缓冲液），移植后60d观测模型鼠行为学改变情况；荧光显微镜下观察移植的神经干细胞在帕金森病模型鼠脑内分布和迁移；酪氨酸羟化酶免疫组织化学染色，对移植的神经干细胞在脑内分化为多巴胺能神经元样细胞进行检测。 结果：①从流产人胚胎脑组织中分离、纯化的神经干细胞细胞，经3代以上的传代纯化培养，神经球nestin呈阳性表达，所有神经干细胞细胞核标记上蓝色荧光，标记率达100％。②20只小鼠均建模成功。③神经干细胞组、人参总皂苷组、人参总皂苷＋白细胞介素1组神经干细胞移植后帕金森病小鼠5min自发活动的次数均?     

人参总皂苷在神经干细胞移植治疗帕金森病模型小鼠中的作用

目的:将人参总皂苷或人参总皂苷与白细胞介素1联合处理的神经干细胞移植到帕金森病模型小鼠纹状体内,观察人参总皂苷在移植治疗帕金森病模型小鼠中的作用。方法:实验于2004-09/2005-07在重庆医科大学基础医学研究所重庆市生物化学与分子药理重点实验室完成。①从7～12周龄流产胚胎脑中分离皮质细胞,体外培养,纯化,分别用鼠抗人nestin抗体行免疫细胞化学染色,鉴定神经干细胞,并用4,6-二乙酰基-2苯基吲哚标记细胞。②人参总皂苷与人神经干细胞的体外培养,实验分组:神经干细胞组,常规培养神经干细胞;人参总皂苷组,常规培养体系中加入人参总皂苷(终浓度200mg/L);人参总皂苷 白细胞介素1组,在人参总皂苷组培养体系中加入白细胞介素1(终浓度200ng/L),均培养3d,待移植用。③健康清洁级小鼠20只,腹腔注射1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四羟吡啶(30mg/kg),建立帕金森病小鼠模型。记录小鼠震颤麻痹评分,自发活动和记忆功能,对模型进行评价。④将经人参总皂苷处理的神经干细胞,按所分实验组注入帕金森病小鼠纹状体内,同时设立磷酸盐缓冲液组(注入同体积磷酸盐缓冲液),移植后60d观测模型鼠行为学改变情况;荧光显微镜下观察移植的神经干细胞在帕金森病模型鼠脑内分布和迁移;酪氨酸羟化酶免疫组织化学染色,对移植的神经干细胞在脑内分化为多巴胺能神经元样细胞进行检测。结果:①从流产人胚胎脑组织中分离、纯化的神经干细胞细胞,经3代以上的传代纯化培养,神经球nestin呈阳性表达,所有神经干细胞细胞核标记上蓝色荧光,标记率达100%。②20只小鼠均建模成功。③神经干细胞组、人参总皂苷组、人参总皂苷 白细胞介素1组神经干细胞移植后帕金森病小鼠5min自发活动的次数均多于对照组(52.0±1.6,81.0±2.8,98.0±3.7,P<0.05或0.01)。④震颤麻痹评分(每组对照均为2分1只,3分4只),磷酸盐缓冲液组2分1只,3分4只;神经干细胞组2分3只,3分2只;人参总皂苷组2分4只,3分1只;人参总皂苷 白细胞介素1组1分2只,2分2只,3分1只。⑤移植的神经干细胞在帕金森病模型鼠脑内分布和迁移以及分化多巴胺能神经元样细胞的检测显示,人参总皂苷 白细胞介素1组优于人参总皂苷组,人参总皂苷组优于神经干细胞组,磷酸盐缓冲液组无作用。结论:人参总皂苷在神经干细胞移植治疗帕金森病中发挥促进作用。     

神经干细胞移植治疗帕金森病的现状及展望

帕金森病是临床常见的中枢神经系统退行性疾病 ,其病理基础为中脑黑质多巴胺能 (DA )神经元的慢性退变、坏死 ,表达的酪氨酸羟化酶 (TH )减少或活性降低 ,造成脑内DA含量减少 ,导致多巴胺—乙酰胆碱平衡失调从而引起运动减少、姿势性反射消失、肌张力增高及静止性震颤等一系列表现。目前保守治疗多采用复方左旋多巴、DA激动剂等替代治疗 ,但不能抑制疾病的发展 ,且存在副作用多 ,长期用药后药效衰减等缺点。传统移植治疗多采用胚胎中脑组织或肾上腺髓质移植 ,但疗效不明显 ,且存在采用胚脑组织受到伦理、道德、法律等多方因素的制约及排…     

胚胎干细胞诱导分化为神经细胞治疗帕金森病的前瞻与现状

帕金森病（Parkinson's disease,PD)为常见的中枢神经系统退行性疾病之一，其主要病理改变为中脑黑质多巴胺能神经元变性、缺失。胚胎干细胞（erabryonic alem cells,ESc)是一种从早期胚胎分离、能在体外经抑制分化后无限增殖，高度未分化的全肥干细胞。在全反式维A酸和无血清培养等诱导下，ES细胞可分化为神经元及神经胶质细胞等，为中枢神经退行性疾病的细胞移植治疗提供了丰富的种子细胞来源。将ESc分化为神经元移植治疗PD，在动物实验中已取得初步成效。     

胚胎干细胞诱导分化为神经细胞治疗帕金森病的前瞻与现状

帕金森病(Parkinson'sdisease,PD)为常见的中枢神经系统退行性疾病之一,其主要病理改变为中脑黑质多巴胺能神经元变性、缺失。胚胎干细胞(embryonicstemcells,ESc)是一种从早期胚胎分离、能在体外经抑制分化后无限增殖,高度未分化的全能干细胞。在全反式维A酸和无血清培养等诱导下,ES细胞可分化为神经元及神经胶质细胞等,为中枢神经退行性疾病的细胞移植治疗提供了丰富的种子细胞来源。将ESc分化为神经元移植治疗PD,在动物实验中已取得初步成效。     

神经干细胞移植治疗帕金森病的研究与应用

目的:总结神经干细胞的来源以及伸经干细胞移植治疗帕金森病的进展。方法:应用计算机检索中文科技期刊数据库1994-01/2007-06期间与神经干细胞移植和帕金森病相关的文献,检索词"神经干细胞移植、帕金森病",限定文章语言种类为中文。对资料进行初审,并查看每篇文献后的引文,文献所述内容应与神经干细胞移植、帕金森病相关,且以近5年发表在较权威杂志优先。排除重复性文章及Meta分析类文章。结果:①神经干细胞有很强的增殖能力和迁移能力,并替代受损伤的脑细胞,神经干细胞通过体外培养使其增殖后,移植到宿主脑内能够迁移并分化为黑质多巴胺能神经元。②神经干细胞联合基因治疗将神经干细胞作为基因治疗的载体,庄体外转基因移人病变的冲经组织,可阻止神经元变性并恢复其功能。③胶质细胞系源性神经营养因子的神经营养作用和酪氨酸羟化酶分泌黑质多巴胺能神经递质的功能,既能提高脑内黑质多巴胺水平,又能使黑质多巴胺能神经元长期存活,阻止黑质多巴胺能神经元变性,重建宿主神经通路。④神经干细胞作为基因载体,进行神经干细胞移植联合多基因治疗,为帕金森病治疗提供了新的思路。结论:随着神经干细胞研究的逐渐成熟及发展,神经干细胞移植已成为帕金森病治疗的主要发展方向。     

胚胎神经上皮干细胞脑内移植治疗大鼠帕金森病

背景：研究表明胚胎干细胞移植可改善血管性痴呆大鼠的学习记忆功能,增强神经的可塑性,诱导自身定向迁移并分化为成熟神经元。目的：观察胚胎神经上皮干细胞脑内移植治疗帕金森病大鼠及移植细胞的迁徙情况。方法：将绿色荧光蛋白转基因鼠的胚胎神经上皮干细胞分别移植到帕金森病大鼠的黑质、纹状体和侧脑室内,移植后检测移植细胞的存活、迁徙与分化;利用高效液相色谱法检测实验动物脑内多巴胺神经递质的含量：对比实验动物旋转行为的改变,评估胚胎神经上皮干细胞移植对帕金森病大鼠的治疗作用。结果与结论：移植细胞存活良好且分化出了酪氨酸羟化酶阳性细胞,向黑质纹状体环路迁徙趋势明显;脑内多巴胺含量增加,动物旋转行为改善明显。表明移植到帕金森病大鼠脑内的神经上度干细胞多向黑质纹状体环路迁徙,且可增加脑内多巴胺神经递质的含量治疗帕金森病。     

TH基因修饰的神经干细胞脑内移植对帕金森病模型动物的旋转行为及神经生化的影响

背景：神经干细胞(neuronal stem cells，NSCs)能提供多巴胺能神经元来治疗帕金森病(Parldnson disease，PD)，但脑内移植NSCs治疗PD的疗效目前观察结果欠佳。研究显示酪氨酸羟化酶(tyrosine hydIDxylase，TH)基因脑内移植能缓解PD的症状，TH基因修饰的NSCs脑内移植可能使PD的治疗效果出现新的结局。目的：探讨TH基因修饰的NSCs脑内移植对PD模型动物旋转行为和神经生化的影响。设计：完全随机对照实验。地点和对象：本实验选择105只大鼠，在解放军第三军医大学新桥医院中心实验室完成。干预：构建pN2ATH反转录病毒载体质粒，用PA317细胞包装，G418筛选阳性克隆，病毒上清感染NSCs，将NSCs和表达TH的NSCs植入PD大鼠皱状体内，测定移植后不同时间PD大鼠旋转行为改善以及多巴胺和3，4-二羟基苯乙酸(dihydroxy-phenyl acetlc acid，OOPAC)含量变化。主要观察指标：PD大鼠旋转行为改善以及多巴胺和DOPAC含量变化。结果：TH基因修饰的NSCs移植8周后能显降低PD大鼠旋转行为。增加纹状体多巴胺和DOPAC含量，疗效好于单纯NSCs移植组和对照组。结论：TH基因修饰的NSCs脑内移植能增加纹状体多巴胺和DOPAC含量，降低PD大鼠旋转行为，从而对PD大鼠有明显的治疗作用。     

神经干细胞与帕金森病

背景：帕金森病已经成为中老年人常见的运动障碍性疾病之一,目前对其治疗的主要方式仍然是在药物和手术等领域,而神经干细胞作用于帕金森病的功能康复已经受到国内外学者的广泛关注。目的：在分析神经干细胞的生物特性及其帕金森病的病理特征的基础上,探讨了神经干细胞对帕金森病的作用,旨在为神经干细胞移植促进帕金森病康复的应用提供科学依据。方法：应用计算机检索Medline数据库、CNKI数据库和维普数据库（1994-01/2010-08）以＂Parkinson disease,Neural Stem Cell,Rehabilitation＂为英文检索词,以＂帕金森病;神经干细胞;康复＂为中文检索词,通过对与帕金森病、神经干细胞等的相关文献,以权威期刊、近年来发表的文献作为纳入标准,以重复性研究、陈旧性研究为排除标准等,对所得文献进性整理分析。结果与结论：神经干细胞作用于帕金森病患者的康复具有取材方便、低免疫原性、多向分化潜能、可定向诱导分化等优势,被作为治疗包括帕金森病在内的神经损伤类疾病的新的手段,但如果要将神经干细胞真正应用于临床治疗仍需要不断的开展研究,主要体现在对于神经干细胞得分化和功能修复机制还不清楚,移植后的细胞能否与体内损伤细胞相整合,建立起正常得神经系统突触联系还需要进一步研究。     

神经干细胞脑脊液移植后存活及迁移规律研究

目的观察神经干细胞(NSC)经侧脑室穿刺法移植入小鼠脑内脑脊液(CSF)循环后其存活、迁移规律及接受移植小鼠的生长发育状况。方法将绿色荧光蛋白(GFP)标记的1×105 新鲜人源胚胎NSC悬液经侧脑室穿刺法移植入小鼠CSF循环,观察移植后小鼠的生长发育情况,并在移植后24 h、48 h、2周及10 周分别取脑行连续切片,通过荧光显微镜观察细胞存活及分布情况。结果在移植后的不同时间点,脑室内均可见到大量GFP阳性细胞,部分移植细胞向脑实质迁移,穹窿海马伞、海马、胼胝体、隔区、室管膜下区及血管壁旁均可见到GFP阳性细胞。此外,在穿刺针道周围也可见GFP阳性细胞。所有接受NSC移植的小鼠的生长发育良好,未见任何行为学异常表现,经10周观察未发现移植的NSC有成瘤现象。结论经侧脑室穿刺法移植的NSC可在宿主小鼠CSF循环良好存活,并具有向局部脑实质内迁移的能力。NSC移植对小鼠的生长发育无明显影响,具有较好的安全性。     

海人酸对神经干细胞增殖及分化的影响

背景：神经干细胞对脑组织的修复作用非常有限,约80％新增殖的内源性神经干细胞在6周内死亡,仅0．2％的细胞继续增殖、分化,参与修复。目的：分析不同剂量海人酸在对神经干细胞增殖及分化的影响。方法：体外分离并培养新生Wistar大鼠神经干细胞,将神经干细胞分为空白对照组和加入不同浓度梯度的海人酸组,通过免疫组化法和免疫荧光法进行鉴定,MTT比色法测定海人酸对神经干细胞分化的影响,计算分化后神经元和星形胶质细胞比例。结果与结论：海人酸组贴壁的神经球分化速度较空白对照组快,在同一时间点进行观察,神经细胞的迁移距离较未处理组远。分化5d后,海人酸组所分化的细胞中,星状细胞较空白对照组多,而神经元样细胞相对较少,培养的细胞具有自我更新和向神经元、少突胶质细胞和星形胶质细胞分化的潜能。兴奋性氨基酸海人酸可使部分神经干细胞死亡,但可促进幸存的神经干细胞增殖及分化,并诱导其向星形胶质细胞分化。     

新生小鼠海马神经干细胞体外培养条件下的增殖与分化

背景：神经干细胞移植可用于中枢神经损伤的临床治疗。目的：观察新生小鼠海马神经干细胞在体外培养条件下的增殖和分化。方法：从新生昆明小鼠海马取材,采用机械分离法对原代细胞进行无血清培养,采用机械法复合酶消化法对原代细胞进行传代,以体积分数为10%胎牛血清诱导分化。免疫荧光行巢蛋白、β-微管蛋白Ⅲ和胶质纤维酸性蛋白染色,对培养的细胞进行鉴定。CCK-8法检测神经干细胞增殖能力。结果与结论：从新生小鼠海马分离得到的细胞具有连续传代形成克隆球的能力,克隆球呈巢蛋白免疫反应阳性;加入胎牛血清可诱导分化为β-微管蛋白Ⅲ和胶质纤维酸性蛋白阳性细胞。提示实验成功建立了体外培养新生小鼠海马组织分离和培养神经干细胞的方法,培养的神经干细胞在体外培养条件下保持着自我增殖和分化的潜能。     

无血清神经球培养下神经干细胞的生长与分化

背景：体外分离培养纯度高、活力强、生物特性均一的神经干细胞并掌握其生物学特性是神经干细胞移植研究的前提。目的：建立大鼠神经干细胞的分离、培养、纯化方法,进行细胞形态学观察、表面标志物鉴定及多向分化能力检测。方法：利用无血清悬浮神经球方法分离培养胚胎来源的神经干细胞,进行形态学观察,用免疫细胞化学方法检测神经干细胞及其分化细胞的标志物,流式细胞仪检测细胞标志物及其比例。结果与结论：无血清悬浮神经球培养下大鼠神经干细胞生长稳定,操作简单,可大量分离、纯化、扩增神经干细胞,所获细胞具有神经干细胞的一股生物学特性,流式细胞仪检测第3代神经干细胞巢蛋白达91．5％,并具有多向分化潜能,免疫化学染色及流式细胞仪示神经干细胞可分化形成神经元,神经胶质细胞和少突胶质细胞。     

外源性神经节苷脂对神经干细胞增殖分化的作用

目的：探讨外源性神经节苷脂（GM1）对从大鼠分离培养的神经干细胞（NSCs）增殖及分化的作用。方法：①利用无血清培养技术从胎鼠大脑皮质和海马分离培养原代细胞，加血清诱导其分化。（④在NSCs培养基和DMEM／F12培养基中加入不同浓度的GM1，观察GM1对NSCs增殖和分化的作用。结果：①与不含GM1的NSCs培养基相比，在NSCs培养基中加入低浓度的GM1，NSCs的生长无明显改变，随着GM1浓度的增加，NSCs克隆球体积逐渐减小，细胞逐渐死亡；②在DMEM／F12培养基中单独加GM1而不加血清，NSCs克隆球均未见继续生长，也未见分化，而是迅速的死亡。结论：①在NSCs培养基中，低浓度（12．5μg／m1）GM1对NSCs的增殖无明显影响，但较高浓度的GM1对NSCs的增殖有抑制作用。②DMEM／F12培养基中单独加GM1，而不加血清和其他生长因子，既不能诱导NSCs分化，也不利于NSCs的继续生长。     

神经干细胞移植对帕金森病鼠纹状体多巴胺含量的影响

目的观察神经干细胞定向移植后对帕金森鼠纹状体多巴胺含量的影响,证实神经干细胞移植治疗的可行性。方法建立帕金森病模型大鼠以及体外培养神经干细胞,然后将神经干细胞悬液立体定向移植到帕金森病模型鼠黑质纹状体区,测定纹状体的多巴胺含量,并与生理盐水组和非移植组相比。结果神经干细胞移植后帕金森病模型鼠纹状体多巴胺含量(346±26)μg/g与生理盐水组(58±56)μg/g和非移植组(72±60)μg/g比较明显增多,经t检验差异有显著性意义(t=13.99,12.57,P<0.05)。结论神经干细胞移植能减轻6-羟基多巴胺对黑质纹状体多巴胺能神经元的损伤。     

神经干细胞培养及其影响因素

背景：神经干细胞移植治疗是中枢神经系统损伤性、难治性疾病研究的热点。如何有效提高神经干细胞存活率、克隆形成率将是其应用的重要基础和前提。目的：探讨影响神经干细胞培养质量的可能因素,为神经干细胞的基础和临床应用研究提供参考。方法：①神经干细胞分离和培养：分离出生24h内SD大鼠的大脑,剪碎离心后以1×108L-1的浓度接种,经含体积分数为10%胎牛血清的DMEM/F12培养基预培养4h后改用无血清条件培养基（DMEM/F12,碱性成纤维细胞生长因子、表皮生长因子、B27）培养,2d或3d换液1次,6d时传代。②神经干细胞鉴定：倒置显微镜下观察细胞形态及生物学特性;免疫组化检测第3代细胞神经巢蛋白表达和诱导分化后神经元特异性烯醇化酶和神经胶质酸性蛋白的表达。结果与结论：出生24h的新生大鼠可获得足量的神经干细胞;血清预培养可提高神经干细胞的增殖和存活率;免疫组化结合血清诱导分化可对培养的神经干细胞进行定性鉴定。取材时间、细胞接种密度、传代时间、细胞因子、血清等多种因素都将影响神经干细胞的培养质量。     

LINGO-1在脊髓神经干细胞向少突胶质细胞分化中的作用研究

目的:观察LRR结构和免疫球蛋白结构域Nogo受体作用蛋白(LINGO-1)在脊髓神经干细胞(SpNSCs)向少突胶质细胞分化过程中的表达特征及其对少突胶质细胞分化成熟的作用。方法:体外培养大鼠脊髓神经干细胞并诱导分化,于分化第3天及第5天进行LINGO-1与A2B5及O4免疫荧光双染色,观察LINGO-1的表达特征。体外培养的大鼠脊髓来源神经干细胞分为对照组及干扰组,干扰组通过LINGO-1shRNA慢病毒感染SpNSCs下调LINGO-1表达,对照组表达Scramble-shRNA的慢病毒,通过LINGO-1shRNA慢病毒感染SpNSCs下调LINGO-1表达,于分化第7天免疫荧光染色检测少突胶质细胞分化情况及髓鞘碱性蛋白(MBP)表达情况。结果:LINGO-1与A2B5及O4均共表达于分化细胞中。下调LINGO-1表达后,成熟少突胶质细胞达到对照组细胞的3.28倍,MBP表达量为对照组的5.31倍,且均具有统计学意义(均P0.05)。结论:LINGO-1在少突胶质细胞分化过程中持续表达,LINGO-1负性调控少突胶质细胞分化及成熟。     

胚胎大鼠神经干细胞的分离培养及自然分化的初步观察

目的神经干细胞体外培养的成功是进一步研究其分化机制的基础,从胚胎大鼠脑室下区分离、培养、鉴定神经干细胞(neuralstemcells,NSCs),并观察其向神经元的分化情况。方法分离胚胎SD大鼠脑室下区的组织,采用无血清原代及传代培养方法,获得具有克隆能力的细胞群;应用免疫细胞化学方法鉴定神经干细胞并检测分化后特异性成熟神经细胞抗原的表达;应用流式细胞检测技术观测神经干细胞随时间向神经元的分化情况。结果从胚胎大鼠脑室下区分离培养的细胞群具有克隆增殖能力,表达神经上皮干细胞蛋白(nestin),分化后的细胞表达神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞的特异性抗原;随着贴壁后分化时间的延长,表达nestin的细胞数量从80.5%下降到10.9%,而神经元特异性烯醇化酶(neuronspecificenolase,NSE)阳性细胞数量则从1.1%上升到31.6%。结论用本方法分离的细胞具有自我更新和增殖能力,并具有多分化潜能,是中枢神经系统的干细胞;随着分化时间的延长,神经干细胞数量下降,而神经元比例有明显上升。