扩增结核分枝杆菌DNA的微孔杂交比色检测

目的建立简单的杂交方法特异地检测聚合酶链反应(PCR)扩增的结核杆菌DNA.方法用玻璃粉提纯结核分枝杆菌DNA,dUTP-脲DNA糖基化酶(UDG)防污染,用5'端标记生物素的引物进行PCR扩增,5'端带标记的扩增产物与固定在微孔板上特异探针杂交,然后用酶标链霉亲和素进行酶联免疫法检测.结果对100份来自结核病人高度怀疑有结核分枝杆菌的痰标本检测,扩增杂交法检出40份阳性,比抗酸染色法(15/100),培养法(28/100)和PCR电泳法(35/100)检出率高,而50份来自无结核感染者的痰标本,几种方法检查均为阴性.结论该方法可灵敏、特异、客观地检测临床标本中的结核分枝杆菌,比传统PCR-电泳法优越.     

环介导等温扩增技术在检测痰标本结核分枝杆菌中的应用

目的评价结核分枝杆菌环介导等温扩增技术（LAMP）快速检测试剂盒的临床应用效果。方法选取肺结核患者183例（肺结核组）和非肺结核患者120例（对照组）。采用涂片抗酸染色、罗氏培养法和LAMP对痰标本进行检测,采用结核分枝杆菌核酸扩增荧光检测试剂盒（TB- PCR）检测罗氏培养与LAMP结果不符的标本,分析LAMP与罗氏培养的检出率及两者的符合率。结果去除经鉴定为非结核分枝杆菌的10例标本,涂片抗酸染色、罗氏培养法和LAMP的阳性检出率分为64.1%（111/173）、64.7%（112/173）、78.6%（136/173）。LAMP与抗酸染色、罗氏培养阳性检出率的差异有统计学意义（P＜0.01）,抗酸染色与罗氏培养比较差异无统计学意义（P＞0.05）。以罗氏培养为金标准,LAMP检测的灵敏度、特异度、阳性预测值和阴性预测值分别为88.5%（108/122）、82.3%（149/181）、77.1%（108/140）、91.4%（149/163）,LAMP检测与罗氏培养的符合率为84.8%（257/303）。结论结核分枝杆菌环介导等温扩增技术的灵敏度和特异度高,具有简单易行、快速准确的特点,在肺结核患者的早期诊断中将发挥重要作用。     

噬菌体扩增技术在结核分枝杆菌检测中的应用体会

作为对人类最具威胁性的传染病之一,近年来结核病流行正逐步加剧.目前对结核病诊断主要依靠与实验室检查、临床症状、体征及胸片等其他辅助检查相结合.     

结核/非结核分枝杆菌核酸检测对结核性脑膜炎的诊断价值

目的 探讨脑脊液中结核/非结核分枝杆菌(mycobacterium tuberculosis/nontuberculous mycobacteria,MTB/NTM)核酸检测诊断结核性脑膜炎(tuberculous meningitis,TBM)的临床价值。方法 收集120例TBM患者的临床资料,采用随机数字表法将患者分为TBM A组(n=67,进行脑脊液常规、生化、罗氏培养、涂片查抗酸菌、MTB/NTM核酸检测)和TBM B组(n=53,进行脑脊液常规、生化、罗氏培养、涂片查抗酸菌、GeneXpert MTB/RIF检测),另收集其他中枢神经系统感染患者脑脊液18例为对照组(C组,进行脑脊液常规、生化、罗氏培养、涂片查抗酸菌、MTB/NTM核酸检测、GeneXpert MTB/RIF检测)。结果 TBM A组脑脊液罗氏培养、涂片查抗酸菌、MTB/NTM核酸检测阳性率分别为13.43%(9/67)、10.45%(7/67)、46.27%(31/67);TBM B组脑脊液罗氏培养、涂片查抗酸菌、GeneXpert MTB/RIF检测阳性率分别为15.09%(8/53)、11.32%(6/53)、47.17%(25/53),GeneXpert MTB/RIF检测阳性病例中利福平耐药基因检测阳性2例。C组脑脊液罗氏培养、涂片查抗酸菌、MTB/NTM核酸检测和GeneXpert MTB/RIF检测均为阴性。结论 MTB/NTM核酸检测与GeneXpert MTB/RIF检测均可辅助早期诊断TBM,相较于后者更经济,并能鉴别非结核分枝杆菌(nontuberculous mycobacteria, NTM)感染,及时减少NTM病误诊、误治,值得临床推广。     

基于常规引物靶向结核分枝杆菌Ⅱ型分枝杆菌散在重复单位的恒温扩增

目的 探讨基于特异常规引物（即引物不需折叠成特定二级结构）靶向恒温扩增重复DNA序列的方法,并测试其检测结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis,Mtb）的可能性。方法 以合成的重复DNA或以抽提的细菌基因组DNA为模板,用Bst 2.0 WarmStart DNA聚合酶进行恒温扩增。用琼脂糖凝胶电泳检测扩增结果。结果 合成的重复DNA可用其特异常规引物进行恒温扩增。进一步,Mtb H37Rv Ⅱ型分枝杆菌散在重复单位（mycobacterial interspersed repetitive units,MIRUs）可用其特异常规引物对（即Ⅱ_MIRU-F和Ⅱ_MIRU-R）或单引物（即Ⅱ_MIRU-F）进行恒温扩增。相比于非分枝杆菌菌株、非结核分枝杆菌菌株、Mtb复合物菌株和临床分离株,Ⅱ_MIRU-F能够高特异地扩增Mtb菌株。Ⅱ_MIRU-F针对Mtb H37Rv基因组DNA的检测下限较高,且不能特异地区分Mtb阴性痰液样本和Mtb阳性痰液样本。结论 常规引物可恒温扩增重复DNA序列（包括Mtb Ⅱ型MIRUs）;Mtb Ⅱ型MIRUs特异引物Ⅱ_MIRU-F不适合用于痰液样本的检测。     

皮肤非结核分枝杆菌病诊治进展

非结核分枝杆菌（nontuberculous mycobacteria, NTM）是一类广泛存在于各种环境中的微生物,可引起人体多种器官和组织的感染。由于人口老龄化,美容、移植手术的广泛开展以及HIV感染的增加,近年来皮肤NTM病的发生率一直呈逐渐升高的趋势,小范围内爆发的报道也不少。由于临床和病理表现多不典型以及医疗机构检测能力的限制,皮肤NTM病极易被漏诊和误诊。同时各种NTM对药物敏感性差异很大、部分菌种极易对抗生素产生耐药,需联合多种抗生素长疗程治疗,但药物之间的相互作用及副作用使治疗效果往往不尽如人意。随着近年来研究的深入,人们对于皮肤NTM病的诊断和治疗等方面有了新的认识,在治疗手段、新型药物、噬菌体疗法、疫苗等领域的研究都有了新的进展。本文对皮肤NTM病诊断和治疗等方面的进展进行了综述。     

结核分枝杆菌DNA疫苗的研究进展

结核病是全球范围内一种严重的细菌感染性疾病，其病原菌为结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis，Mtb)。目前，全世界有近三分之一人口感染Mtb，每年约有9百万新发临床结核病例及2～3百万死亡病例，同一时间约有6千万病例处于活动感染期^[1]。如此严重的感染发病情况对人类健康和社会经济等诸多方面都造成了巨大的损失。     

非结核分枝杆菌肺病54例临床特点分析及诊治体会

目的 分析非结核分枝杆菌(NTM)肺病的临床特点,以提高对NTM肺病的诊疗水平.方法 回顾性分析54例NTM肺病患者的临床资料.结果 NTM肺病≥40岁的中老年人多见(87.0％),病程较长,平均8.3年,多发于原有慢性肺部基础疾病或免疫力低下人群;临床症状无特异性,结核菌素试验皮试多为弱阳性(79.6％);胸部CT示病灶多位于双侧肺(81.5％)和全部肺叶(70.4％),薄壁空洞(14/18,77.8％)较厚壁空洞(4/18,22.2％)常见,均靠近胸膜,支气管扩张多位于右中叶或左舌叶(12/17,70.6％),钙化影少见(9.3％);支气管灌洗液NTM培养阳性率高(18/20,90.0％);菌种以鸟-胞内分枝杆菌(64.8％)和龟或脓肿分枝杆菌(25.9％)多见;对一线抗结核药耐药率高,耐药率均超过90％.极易误诊为肺结核(96.3％),治愈率低(34.8％).结论 NTM肺病容易被误诊,治疗难度大,应分析其临床特点和诊疗上的难点,总结出提高NTM肺病诊疗成功率的策略.     

结核分枝杆菌DNA检测在肺部疾病患者临床诊断及治疗中的指导意义

目的:探讨结核分枝杆菌DNA检测在临床诊断及治疗中的指导意义。方法:选取肺部疾病患者1 000例,收集患者胸膜炎的胸水标本与咳痰标本,根据患者临床症状及涂片检测等结果将1 000例患者分为初治涂阳肺结核组(271例),初治涂阴肺结核组(265例),肺外结核组(266例)和肺部其他疾病组(198例)。另随机抽取医院80例医护人员的健康血样标本设为正常对照组。所有研究对象均采取双盲法诊断PCR扩增与ABI-7500仪器荧光检测结核分枝杆菌DNA定量。结果:271例初治涂阳肺结核组患者阳性检出率为85.98%,特异性96.25%,检测敏感性85.98%,阳性预测值98.73%,阴性预测值66.96%;265例初治涂阴肺结核组患者结核杆菌DNA阳性检出率为41.89%,特异性96.25%,检测敏感性41.89%,阳性预测值97.37%,阴性预测值33.33%;266例肺外结核组患者结核杆菌DNA阳性检出率为33.83%,特异性96.25%,检测敏感性33.83%,阳性预测值96.77%,阴性预测值30.43%。结论:采用结核分枝杆菌DNA检测具有极高的特异性与敏感度,提高了结核病患者的诊断准确率,为临床防治结核病提供重要依据。     

非结核分枝杆菌肺病分析

目的：了解非结核分枝杆菌（nontuberculous mycobacteria,NTM）肺病流行情况及耐药特点。方法：收集2003年9月～2006年5月门诊痰菌阳性标本,按《全国结核病细菌学检验规程》的要求,用改良罗氏法进行痰结核菌培养、菌种鉴定和药物敏感性试验。结果：非结核分枝杆菌分离率为10.3%,35岁以上分离率高于35岁以下人群,性别无明显差异。耐药率达100%,明显高于结核分枝杆菌,耐多药率51.7%,与结核分枝杆菌无明显差异。结论：非结核分枝杆菌在肺病患者中分离率高,且多耐药,因此对难治性肺病患者进行菌株鉴定及药敏试验非常重要。     

非结核分枝杆菌在活动性肺结核患者中的病原监测结果分析

目的对活动性肺结核患者的病原菌进行监测,为临床诊断和治疗提供依据。方法对正定县疾控结核门诊2012年1月1日~2012年12月31日期间确诊的198例活动性肺结核患者采集痰标本(其中痰涂片阳性62例,痰涂片阴性136例),用传统方法进行培养、菌群鉴定和药物敏感试验(INH、RFP、EMB、SM、OFX、KM 6种药物)。对确诊的非结核分枝杆菌(NTM)患者进行病史追查、治疗随访。结果涂片阳性患者培养阳性59例,涂阳培阳率95.16%,菌群鉴定结果:结核分枝杆菌56例、非结核分枝杆菌3例,非结核分枝杆菌占涂阳培阳的5.08%,占涂阳患者的4.84%。涂片阴性培养阳性36例,涂阴培阳率26.47%,菌群鉴定结果:结核分枝杆菌30例、非结核分枝杆菌6例,非结核分枝杆菌占涂阴培阳的16.67%,占全部涂片阴性的4.41%。9例非结核分枝杆菌患者的药敏结果:1例新涂阳患者对6种药物全敏感、1例复发涂阳患者对6种药物均耐药,其余患者对6种药物不同类型有不同的耐药情况。非结核分枝杆菌病病史:3例有明确的结核病史、3例症状持续数年但未明确诊断、3例为新发患者,1年以上病史者占66.67%。结论非结核分枝杆菌肺病被误诊为活动性肺结核的现象不容忽视,尤其是病史较长的活动性肺结核患者;痰培养、菌群鉴定和药敏试验应成为指导临床诊断和治疗的依据。     

荧光定量PCR检测痰结核分枝杆菌DNA的应用价值

目的:评价荧光定量PCR技术在痰结核分枝杆菌DNA检测中的应用价值,为临床检测提供依据。方法:对2011年7月-2013年8月在我院住院治疗的78例结核病患者,采取荧光定量PCR、抗酸菌涂片染色和改良罗氏培养三种方法对患者的同一份痰标本进行检测,比较分析检测差异。结果:荧光定量PCR检测痰结核分枝杆菌的效果明显优于抗酸菌涂片染色和改良罗氏培养检测,荧光定量PCR检测的阳性率最高,为73.1%。结论:应用荧光定量PCR技术检测痰结核分枝杆菌DNA操作简单、诊断快捷、灵敏度较高,可作为结核病的常规诊断方法,值得在临床推广应用。     

结核分枝杆菌higA基因的扩增及生物信息学分析

目的 对结核分枝杆菌的higA基因进行扩增,同时利用生物信息学方法分析其编码蛋白的结构和功能.方法 从结核分枝杆菌标准株H37Rv基因组DNA中扩增higA基因,对扩增产物进行测序.利用生物信息学网站和软件分析higA蛋白的理化性质、信号肽、空间结构、抗原表位等.结果 higA基因扩增产物与预期一致,大小为450 bp.higA蛋白共149个氨基酸,理论等电点7.93,脂溶性系数94.30,不稳定系数36.57,预测该蛋白为稳定蛋白.higA蛋白无信号肽,含10个磷酸化位点和多个潜在的抗原表位.结论 成功扩增出结核分枝杆菌higA基因.     

噬菌体生物扩增技术在结核分枝杆菌药敏检测中的应用

目的探讨噬菌体生物扩增技术(PhaB)在结核分枝杆菌(MTB)耐药研究中的应用价值。方法应用PhaB法同时测定233株结核分枝杆菌分离株对异烟肼(INH)、链霉素(SM)、利福平(RFP)及左旋氧氟沙星(LEV)的耐药性,并用改良罗氏培养法(LJ)做对照,比较两种方法的检测结果。结果PhaB法检测INH、SM、RFP、LEV的药敏结果与改良罗氏培养法药敏结果相比符合率分别为97.4%、96.6%、95.3%、96.9%。同时检出耐多药菌株26株,占11.1%。结论PhaB法能快速进行结核分枝杆菌的药敏检测并与金标法LJ符合率高,可作为基层结防单位MTB耐药性的快速筛选方法。     

非结核分枝杆菌肺病合并肉芽肿性血管炎1例

非结核分枝杆菌合并肉芽肿性血管炎(granulomatosis with polyangiitis,GPA)在临床上较为少见,分枝杆菌肺部感染(non-tuberculous mycobacterial–pulmonary disease,NTM-PD)是与血管炎有多种临床和实验室特征相似,且血管炎可继发于感染性疾病,甚至重叠出现。但两者治疗方向矛盾,使得两者合病的治疗出现困境。本文报道非结核分枝杆菌合并肉芽肿性血管炎病例一例,结合相关文献讨论非结核分枝杆菌肺病和血管炎的特征以及诊治的难点。     

噬菌体生物扩增法在关节结核诊治中的临床应用研究

目的 探讨噬菌体生物扩增法(phage amplified biologically assay,PhaB)快速检测关节结核脓液中结核分枝杆菌的临床应用价值.方法 采用PhaB技术对关节结核患者36例,非结核性关节炎患者20例关节液中的结核分枝杆菌进行检测,同份标本同时进行涂片抗酸染色、罗氏培养.结果 36例关节结核积液,PhaB阳性率为47.2%(17/36)、涂片抗酸染色阳性率为2.7%(1/36)、罗氏培养阳性率为5.5%(2/36).20 例非结核性关节炎患者PhaB、涂片抗酸染色、罗氏培养特异性均为100.0%.结论 PhaB法检测关节积液中结核分枝杆菌只需2d,操作简便、灵敏度高、特异性强,不需要特殊仪器设备,可作为诊断关节结核的一种好方法.     

非结核分枝杆菌与结核分枝杆菌皆培养阳性病例的分析

目的：探讨非结核分枝杆菌与结核分枝杆菌皆培养阳性病例特点的分析及防治对策。方法：对2008年-2012年住院病例32例为研究对象,进行分析。结果：32例中均有药敏试验结果,均对1种以上一线抗结核药物（异烟肼、利福平、链霉素和乙胺丁醇）耐药占比3．2％,其中耐多药15例占比46．8％,对左氧氟沙星、克拉霉素敏感16例占比50％。结论：NTM感染和发病率,随着生活、工作环境不同而有不同程度的改变,特别强调沿海及沿海地区,从事石场作业人员较多,应多次进行痰培养及菌种鉴定以明确诊断。     

PCR扩增巨噬细胞中结核分枝杆菌DNA诊断肺结核初探

在肺结核诊断中,抗酸杆菌染色及结核菌培养等方法均存在敏感性低或操作复杂、报告时间长等缺点,常延误诊断和治疗。聚合酶链反应(PCR)因具有敏感、快速、特异的优点,目前已广泛用于扩增痰标本中结核分枝杆菌DNA以诊断肺结核,而用其它标本扩增的报告很少。我们对扩增巨噬细...     

结核分枝杆菌DNA两种提取方法比较

目的 :比较能够满足内切酶分析的结核分枝杆菌染色体DNA提取的两种方法 ,并结合实验室条件加以改进。方法 :称取结核分枝杆菌培养物 ,灭活后以溶菌酶和蛋白酶K消化后 ,分别以CTAB/NaCl和酚 /氯仿 /异戊醇 (2 5∶2 4∶1)抽提 ,无水乙醇沉淀 ,紫外分光光度计测定DNA的含量。结果 :酚抽提法和CTAB抽提法提取的基因组DNA的得率分别为0 47± 0 0 71,0 41± 0 10 (‰ ,W/W )。A2 60 /A2 80 的值分别为 1 83± 0 12 ,1 89± 0 0 72。结论 :用CTAB/NaCl抽提结核分枝杆菌基因组DNA均能满足内切酶及杂交操作的要求 ,酚抽提法得率稍高 ,但无统计学意义。CTAB法污染少 ,省时省材 ,可代替酚抽提DNA。