长链非编码RNA-H19特异性吸附微RNA-760调控nanog基因表达促进非小细胞肺癌细胞增殖和迁移

目的 探讨长链非编码RNA（lncRNA）-H19对非小细胞肺癌（NSCLC）细胞增殖、迁移的影响及分子机制。方法 收集2015年10月至2016年5月海军军医大学（第二军医大学）长海医院确诊的20例NSCLC患者手术切除的NSCLC组织及相应的癌旁正常组织。通过实时荧光定量PCR（qPCR）检测NSCLC组织及癌旁正常组织,人NSCLC细胞系A549、NCI-H1299和人正常肺上皮细胞系BEAS-2B中lncRNA-H19的表达。在A549细胞中过表达lncRNA-H19后,采用CCK-8法和Transwell实验分别检测细胞的增殖和迁移能力。利用生物信息学分析预测lncRNA-H19与微RNA（miRNA）-760的结合位点,通过双荧光素酶报告基因实验分析lncRNA-H19对miRNA-760的吸附作用,采用qPCR和蛋白质印迹法分别检测lncRNA-H19过表达对miRNA-760及下游靶基因nanog表达的影响。通过对A549细胞转染miRNA-760模拟剂过表达miRNA-760后,检测过表达miRNA-760对lncRNA-H19促进NSCLC细胞增殖和迁移作用的影响。结果 LncRNA-H19在NSCLC组织和A549、NCI-H1299细胞中均呈高表达,分别与其在癌旁正常组织和BEAS-2B细胞中的表达水平相比差异均有统计学意义（P均<0.01）。与对照组相比,过表达lncRNA-H19后A549细胞的增殖能力增强（P<0.05）、迁移能力提高（P<0.01）。在线数据库starBase v3.0预测分析结果显示lncRNA-H19能特异性吸附miRNA-760。双荧光素酶报告基因检测结果显示lncRNA-H19与miRNA-760之间存在特异性结合。与对照组相比,过表达lncRNA-H19可抑制A549细胞中miRNA-760的表达（P均<0.05）,并促进其下游基因nanog在mRNA和蛋白水平的表达（P均<0.01）。过表达miRNA-760可抑制lncRNA-H19对A549细胞增殖和迁移的促进作用,与lncRNA-H19过表达组相比差异均有统计学意义（P均<0.05）。结论 LncRNA-H19可通过特异性吸附miRNA-760调控nanog基因表达,从而促进NSCLC细胞增殖和迁移。     

长链非编码RNA-8439促进肝癌细胞多能因子nanog的表达

目的 探讨长链非编码RNA（lncRNA）-8439与多能因子nanog的关系,及lncRNA对肝癌细胞生长的影响。方法 在肝癌原发灶与转移灶组织中,通过lncRNA测序与生物信息学分析方法筛选与多能因子nanog、oct4、sox2相关的差异表达lncRNA。采用实时荧光定量PCR（qPCR）法检测差异表达的lncRNA在人肝癌细胞系Hep3B、Huh7细胞及对应的肿瘤悬浮球中的表达量。通过生物信息学分析明确lncRNA-8439与nanog结合的可能性,采用荧光原位杂交方法观察lncRNA-8439在Hep3B和Huh7细胞中的定位。敲低lncRNA-8439后,采用qPCR和蛋白质印迹法检测2种肝癌细胞中nanog的表达,观察悬浮球生长情况。过表达lncRNA-8439后,采用qPCR和蛋白质印迹法检测2种肝癌细胞中nanog的表达。结果 筛选到9种与多能因子相关的差异表达lncRNA,但仅lncRNA-8439在2种肝癌细胞悬浮球中呈一致的上调表达,与对应的贴壁细胞相比差异均有统计学意义（P均<0.01）。LncRNA-8439的3''端有nanog结合位点。LncRNA-8439在细胞核中表达,细胞质中并无分布。敲低lncRNA-8439后,2种肝癌细胞中nanog表达量在RNA与蛋白水平均降低（P均<0.01）,肝癌肿瘤悬浮球数量减少。过表达lncRNA-8439后,2种肝癌细胞中nanog表达量在RNA与蛋白水平均增加（P均<0.01）。结论 LncRNA-8439通过促进多能因子nanog的表达影响肿瘤细胞的自我更新能力,可能是导致肝癌侵袭和转移的原因。     

长链非编码RNA PVT1对非小细胞肺癌细胞增殖和迁移能力的影响及其机制研究

目的 通过上调或者下调PVT1的表达，分析探究长链非编码RNA PVT1在非小细胞肺癌(NSCLC)细胞增殖和迁移能力中的作用及机制，并在此基础上运用RNA-Seq分析PVT1的靶向基因，说明其作用机理。 方法 ①通过TCGA数据库(The Cancer Genome Atlas)分析NSCLC细胞中PVT1的表达与NSCLC患者生存时间之间的关系；②探究PVT1上调或下调对NSCLC细胞增殖及迁移能力的影响；③运用RNA-seq技术探究PVT1的下游靶基因，然后运用siRNA沉默该基因，探究此基因对NSCLC细胞增殖和迁移能力。 结果 ①PVT1的高表达与肺癌患者存活时间减少有显著关系(P<0.001)；②PVT1高表达可以显著促进肺癌患者肿块体积的增大，并且与肿瘤分期和淋巴结转移程度密切相关(均P<0.05)；③过表达PVT1可以促进NSCLC细胞的增殖及迁移；④用Si-RNA下调PVT1可以抑制NSCLC细胞的增殖及迁移；⑤PVT1下调会使LATS2的表达水平显著升高。 结论 PVT1通过表观调控LATS2促进NSCLC细胞增殖和迁移能力。      

长链非编码RNA与肺癌

长链非编码RNA(1ong noncoding RNA,lncRNA)是一类长度超过200个核苷酸的非编码RNA分子,其数量众多,但缺少蛋白质编码功能。研究发现,lncRNA能在表观遗传学、转录及转录后等多种水平调控基因表达,在各类生物过程中起重要的调节作用,并与多种肿瘤等疾病相关,已经成为现代遗传学的研究热点。近期研究证据显示,肺癌中有多种lncRNA的表达水平发生了变化,并在肺癌的发生、发展及预后中起着重要的调控作用,本文就lncRNA的定义、分类、功能机制及与肺癌的相关性研究作一综述。     

非小细胞肺癌患者血清长链非编码RNA-GAS5、微小RNA-96-5p的表达及临床意义

目的 研究非小细胞肺癌(non-small-cell lung cancer,NSCLC)患者血清中长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)-GAS5、微小RNA(microRNA,miR)-96-5p的表达及临床意义.方法 选择2018年2月至2019年2月山东省青岛市胶州中心医院收治...     

长链非编码RNA BANCR对非小细胞肺癌增殖和侵袭的影响

目的:探讨长链非编码RNA BANCR在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)组织及细胞系中的表达水平,以及BANCR对NSCLC细胞增殖和侵袭的影响?方法:用定量PCR技术检测NSCLC组织及细胞系中BANCR的表达水平;通过转染pcDNA-BANCR上调BANCR的表达水平,并通过qPCR检测转染效率?用Transwell实验检测上调BANCR的水平对SPC-A1细胞和A549细胞增殖和侵袭能力的影响,Western blot检测这2种细胞中上调BANCR的水平对上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)标志物上皮型钙黏蛋白(E-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)表达水平的影响?结果:相比正常肺组织及细胞,在NSCLC组织和细胞中BANCR的表达出现显著下调?MTT实验显示,上调BANCR的表达能降低SPCA1细胞和A549细胞的增殖和侵袭能力?BANCR过表达能通过上调E-cadherin表达并下调Vimentin表达,影响EMT?结论:BANCR可通过影响EMT,抑制NSCLC细胞的增殖和侵袭?     

长链非编码RNA HOTAIR对非小细胞肺癌迁移与侵袭能力的影响

目的:探讨非小细胞肺癌组织中长链非编码RNA HOTAIR的表达情况及其对细胞侵袭与迁移水平的作用。方法:利用定量的反转录PCR技术检测50例非小细胞肺癌组织中LncRNA HOTAIR的表达,然后通过过表达技术与RNA干扰技术研究LncRNA HOTAIR的主要功能。再对其pcDNA-HOTAIR与si-HOTAIR进行转染调控LncRNA HOTAIR的表达,设置空白载体与阴性对照组,应用反转录PCR进行转染效率的定量检测。然后分别实施MTT与Transwell两种方法来判断LncRNA HOTAIR的异常表达对非小细胞肺癌细胞活性的干预作用。结果:在非小细胞肺癌组织中LncRNA HOTAIR的相对表达水平是(24.50±7.43)。LncRNA HOTAIR在SPC-A1和SK-MES-1两种细胞中的相对表达水平比在正常的支气管上皮细胞中更高,在A549细胞中的相对表达水平比在正常的支气管上皮细胞中更低。而经2d的转染siRNA后,LncRNA HOTAIR在A549与SPC-A1两种细胞中的表达水平降低;pcDNA3.1-HOTAIR后,LncRNA HOTAIR在A549细胞中的表达水平升高。利用RNA干扰技术阻碍HOTAIR的表达水平,不能抑制非小细胞肺癌细胞的增殖。而利用si-HOTAIR的转染降低LncRNA HOTAIR的表达水平能够阻碍癌细胞的迁移与侵袭作用(P<0.05);而LncRNA HOTAIR的过度表达能够明显推动癌细胞的迁移与侵袭作用(P<0.05)。结论:HOTAIR在非小细胞肺癌中的高水平异常表达,能够提高非小细胞肺癌细胞迁移与侵袭水平,可能和患者的不良预后有联系。     

微小RNA、长链非编码RNA及二者相互作用调控成骨细胞功能的研究进展

成骨细胞是一类特殊的具有成骨潜能的细胞,在骨重建及骨稳态维持中发挥重要的作用,其分化过程受到众多因素的调控.非编码RNA(non-coding RNAs,ncRNAs),尤其是微小RNA(microRNAs)和长链非编码RNA(long non-coding RNAs,lncRNAs)在成骨细胞增殖、分化、矿化和凋亡等...     

非小细胞肺癌组织中长链非编码RNA LINC02163的表达及临床意义

目的 探讨长链非编码RNA(long chain non?coding RNA,lncRNA)LINC02163在非小细胞肺癌(non?small cell lung cancer,NSCLC)组织中的表达及临床意义.方法 收集80例NSCLC患者术后癌组织及癌旁组织作为样本,应用qRT?PCR法分别检测组织样本中ln...     

长链非编码RNA BANCR与非小细胞肺癌EGFR-TKI耐药的相关研究

目的：探讨长链非编码RNA BANCR与非小细胞肺癌表皮生长因子受体（EGFR）-酪氨酸激酶抑制剂（TKI）耐药之间的相关性。方法：选择EGFR19外显子区缺失突变的细胞株以及野生型细胞株进行研究,应用实时荧光定量PCR法（qRT-PCR）检测耐吉非替尼细胞株PC9/GR及亲本细胞株PC9中BANCR的表达差异,发现BANCR在PC9/GR细胞中显著低表达。在PC9/GR细胞中过表达BANCR,分别应用CCK8法、克隆形成实验、流式细胞术检测过表达后PC9/GR细胞对吉非替尼药物敏感性,细胞增殖能力,联合吉非替尼处理后细胞凋亡变化;Western blot检测过表达BANCR后对PC9/GR细胞上皮间质转化（EMT）的影响。结果：①吉非替尼的敏感细胞株的RNA BANCR表达水平较高,耐药细胞株的RNA BANCR表达水平较低（P<0.05）。②在PC9/GR细胞中过表达BANCR,相对于对照组,吉非替尼对PC9/GR细胞的半数抑制浓度（IC50）减低,前后差异具有统计学意义（P<0.05）。过表达BANCR后PC9/GR细胞增殖能力减弱,经吉非替尼处理后细胞凋亡增多（P<0.05）。③与空白对照组比较,Western blot结果显示过表达BANCR的PC9/GR细胞E-钙粘蛋白表达水平明显升高,N-钙粘蛋白水平明显降低。结论：长链非编码RNA BANCR可诱导细胞凋亡,抑制细胞增殖;过表达BANCR可以增加PC9/GR细胞对吉非替尼的敏感性,逆转其耐药性,这一作用机制可能是通过调控EMT过程来发挥作用的。     

长链非编码RNA NORAD在肺癌中的表达及其对肺癌细胞增殖能力的影响

目的 研究长链非编码RNA DNA损伤诱导的非编码RNA (NORAD)在肺癌中的表达及其对肺癌细胞增殖的影响。方法 RNA-seq分析肺癌组织中LncRNA及miRNA的表达改变,根据表达量确定候选LncRNA;q RT-PCR检测分析肺癌组织及肺癌细胞中候选NORAD的表达;免疫荧光检测分析肺癌组织中细胞增殖核抗原Ki-67的表达;通过线性回归分析肺癌组织中NORAD与Ki-67的表达相关性。生物在线软件联合miRNA测序结果,并通过荧光素酶检测分析NORAD与miR-26b-5p、miR-654-5p结合情况。将A549细胞分成空白对照组(Control)、si-NORAD组、miR-26b-5p mimics、miR-654-5p mimics、si-NORAD与miR-26b-5p mimics联合组、si-NORAD与miR-654-5p mimics联合组,利用EdU检测细胞增殖能力、Annexin V-FITC/PI双染检测细胞凋亡、蛋白印迹(Western blot)检测细胞凋亡相关蛋白(Bad、Bcl-2、Cleaved Caspase-3)的表达。结果 NORAD...     

长链非编码RNA C6orf176两个转录本在非小细胞肺癌中的表达及意义

目的：探讨长链非编码RNA C6orf176两个转录本C6orf176-TV1和C6orf176-TV2在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)中的表达及临床意义。方法：采用实时荧光定量PCR技术检测57例NSCLC组织及配对癌旁组织中C6orf176-TV1与C6orf176-TV2的表达水平,并分析其与临床病理特征的关系。结果：NSCLC组织中C6orf176-TV1表达下调42例,表达上调15例,其表达与肿瘤分化程度有关(P<0.05),与性别、年龄、吸烟史、病理类型、TNM分期均无关。C6orf176-TV1表达诊断癌组织与癌旁组织的受试者工作特征(receiver operator characteristic,ROC)曲线下面积(area under curve,AUC)为0.708(95% CI：0.615~0.802),灵敏度和特异度分别为51%和88%。NSCLC组织中C6orf176-TV2表达下调39例,表达上调的18例,其表达与肿瘤分化程度有关(P<0.05),与性别、年龄、吸烟史、病理类型、TNM分期均无关。C6orf176-TV2表达诊断癌组织与配对癌旁组织的ROC的AUC为0.64(95% CI: 0.531~0.749),灵敏度和特异度分别为49%和75%。57例标本中C6orf176-TV1与C6orf176-TV2同时上调或下调的标本有53对,其相关系数为0.99。结论：C6orf176-TV1与 C6orf176-TV2在NSCLC组织中均表达下调,其与肺癌肿瘤细胞分化程度相关,可作为NSCLC的诊断指标。     

微RNA-375对非小细胞肺癌脑转移的诊断价值

目的:分析微RNA-375对非小细胞肺癌脑转移的诊断价值.方法:2019年9月-2020年9月收治非小细胞肺癌患者50例,其中发生脑转移25例,作为A组;未发生脑转移25例,作为B组.另选取同期健康体检者50例,作为对照组.比较三组血清微RNA-375表达水平,并分析其对脑转移的诊断价值.结果:对照组血清微RNA-37...     

长链非编码RNA和微小RNA在子痫前期发病机制中的研究进展

子痫前期（preeclampsia,PE）是一种以妊娠期高血压和蛋白尿为特征的血管性疾病,是孕产妇及胎儿死亡的主要病因之一。胎盘在PE的发病中起着核心作用,但其发生机制尚未阐明。非编码RNA功能众多,已有研究表明长链非编码RNA(long non-coding,lncRNA)和微小RNA(microRNA,miRNA)可通过影响胎盘滋养层细胞功能对PE的发生与发展产生影响。为此,本研究就lncRNA和miRNA在PE发病机制中的研究进展进行综述,为PE的预防与治疗提供参考。     

长链非编码RNA对耐药非小细胞肺癌细胞生物学特性的影响

目的 探讨转录失调的长链非编码RNA(LncRNA)对耐药非小细胞肺癌(NSCLC)细胞生物学特性的影响及作用机制。方法 选择2019年4月至2021年2月秦皇岛市第一医院收治的对化学治疗药物耐药的NSCLC患者61例为研究对象。采用经皮肺穿刺的方法获取患者的肺癌组织和癌旁组织,并采用转录组测序及LncRNA表达定量分析方法筛选出2种组织中差异表达的LncRNA。将肺癌组织和癌旁组织中LncRNA表达量比较差异有统计学意义的HOXA11-AS转染A549/DDP细胞(HOXA11-AS转染组),另取A549/DDP细胞转染空载体作为对照组。采用噻唑蓝法检测2组细胞的增殖能力,划痕愈合实验检测2组细胞的迁移能力,Transwell法检测2组细胞的侵袭能力,Western blot法测定2组细胞中磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)、蛋白激酶B(AKT)蛋白的表达。结果 共筛选出311个差异表达LncRNA,共表达最多的前10个LncRNA中,HOXA11-AS在肺癌组织中的表达量显著高于癌旁组织(P<0.05)。培养1 d时,2组细胞的增殖能力比较差异无统计学意义(P>0.05)...     

非小细胞肺癌中长链非编码RNA LINC00460表达及其临床意义

目的 探讨非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）患者组织中长链非编码RNA LINC00460（lncRNA LINC00460）的表达情况及其与患者临床病理特征及预后的关系。方法 将中南大学湘雅医学院附属海口医院2014年1月—2015年6月收治的73例NSCLC患者纳入研究对象,使用实时定量反转录聚合酶链反应（RT-qPCR）法检测NSCLC患者癌组织样本和对应癌旁正常组织中lncRNA LINC00460的表达水平,并分析其与患者临床病理特征（性别、年龄、肿瘤大小、临床类型、临床分期、分化程度、是否淋巴转移）及预后的关系。结果 RT-qPCR检测结果显示,73例NSCLC患者癌组织中lncRNA LINC00460的平均相对表达量（8.45±2.91）高于癌旁组织（1.73±0.92）,二者相比差异具有统计学意义（P<0.05）。不同性别、年龄、肿瘤直径及病理分型的NSCLC患者癌组织中lncRNA LINC00460相对表达量比较差异均无统计学意义（P>0.05）,但不同TNM 分期、分化程度及是否发生淋巴结转移的差异均有统计学意义（P<0.05）,即TNM分期越高、分化程度越低、发生淋巴结转移者,则lncRNA LINC00460相对表达量越高。根据患者癌组织中lncRNA LINC00460的表达水平,将其分为高表达组（≥8.45）和低表达组（<8.45）,其中高表达组（24例）与低表达组（49例）的无进展生存期分别为9.7个月（95%CI：7.6~11.9个月）和18.6个月（95%CI：13.8~23.6个月）,差异有统计学意义（P<0.05）;高表达组与低表达组的总生存期分别为13.2个月（95%CI：10.1~17.2个月）和23.8个月（95%CI：17.4~28.8个月）,差异也有统计学意义（P<0.05）。结论 lncRNA LINC00460在NSCLC患者癌组织中表达上调,其表达水平升高与NSCLC的恶性程度有关,可能对NSCLC的预后判断具有一定的指导意义。