聚合酶链反应检测霍乱弧菌

为快速、准确地检测霍乱弧菌，控制霍乱流行，研究建立了一种聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测方法。根据霍乱弧菌肠毒素ＣＴ基因序列，自行设计一对特异引物，扩增片断为２９６ｂｐ，同时采用一种高效率、快速、简便的方法提取并纯化ＤＮＡ，该法能成功地检测各种样品中的产ＣＴ肠毒素Ｏ１群霍乱弧菌。应用ＰＣＲ技术和常规分离培养方法对９０９份腹泻患者粪便标本和１８份环境水样标本进行平行检测。结果表明，两种方法的检测结果一致，粪便标本阳性率为４．２％（３８／９０９）；水样标本为２２．２％（４／１８），其中１份粪便标本和１份水样标本，是经过第２次增菌培养后，检出用性，而ＰＣＲ方法未见假阳性及假阴性结果。表明ＰＣＲ方法准确、快速、灵敏，并可在２、３小时内检测出含３个菌细胞的标本。因此，该方法可广泛应用于检测各种临床、环境标本中的产ＣＴ肠毒素Ｏ１群霍乱弧菌。     

聚合酶链反应检测纤维支气管镜毛刷标本在肺结核诊断中的应用

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术，对１１０例纤维支气管镜（纤支镜）毛刷标本进行结核菌脱氧核糖核酸（ＴＢ－ＤＮＡ）检测，以评价ＰＣＲ－ＴＢ－ＤＮＡ在肺结核诊断中的应用价值。１对象和方法１．１标本来源所有毛刷标本均来自住院患者，共１１０例，其中肺结核患者５...     

聚合酶链反应检测痰标本中结核菌的临床应用--附284例检测结果

目的：探讨ＰＣＲ检测痰标本中结核菌诊断肺结核的价值。方法：收集１９９３年４月至１９９６年６月我科用ＰＣＲ检测２８４例肺部疾病患者痰标一中结核菌的资料与涂片及结核菌培养比较，结果：肺结核病组ＰＣＲ检测结核菌阳性率明显高于涂片（６３．８％比２４．３％）及培养法（６８．９％比３３．８％）。结论：ＰＣＲ检测痰标本中结核菌培养法灵敏性，特异性高。     

聚合酶链反应结合探针杂交检测幽门螺杆菌

目的建立特异、灵敏的聚合酶链反应（ＰＣＲ）结合长臂光敏生物素探针杂交检测幽门螺杆菌（ＨＰ）的方法。方法用ＰＣＲ产物直接克隆并测序，以含ＨＰＤＮＡ序列的重组质粒外源片段为探针。用细菌培养、单纯ＰＣＲ和ＰＣＲ结合杂交（ＰＣＲ－Ｓｂ）检测经胃镜诊断为慢性胃炎、胃溃疡、十二指肠球部炎症、十二指肠溃疡的胃活检组织、唾液和粪便标本中的ＨＰ。结果检测胃活检标本７９份，ＰＣＲ－Ｓｂ阳性率为９９％，单纯ＰＣＲ及细菌培养的阳性率分别为９５％和６５％，ＰＣＲ－Ｓｂ的灵敏度达到１ｆｇ。唾液标本的检测阳性率为３５％，粪便标本的检测结果均为阴性。结论测序证实了ＰＣＲ扩增的正确性。ＰＣＲ结合长臂光敏生物素探针杂交是特异、灵敏、简便和对人体无害的检测ＨＰ的方法。     

PCR和巢式PCR直接检测血清中HIV核酸序列

采用ＰＣＲ和巢式ＰＣＲ方法对５３例ＨＩＶ抗体阳性和阴性标本进行了检测，以扩增ＨＩＶ特异性ＤＮＡ序列，结果美国ＡｂｂｏｔｔＨＩＶ阳性血清２份，新加坡阳性血清２份，国内阳性血清２份及ＨＩＶ－１病毒培养物１份，两套ＰＣＲ扩增反应物均为阳性，对其中一套ＰＣＲ扩增的ｇａｇ基因序列进行巢式ＰＣＲ也为阳性。采自西南边境地区的２３份ＥＬＩＳＡ和ＷＢ阳性血清，各种ＰＣＲ反应均为阳性；１１份ＥＬＩＳＡ可疑阳性、ＷＢ阴性标本中，有两例血清呈ＰＣＲ阳性，探针杂交亦为阳性。而１２例ＳＩＶ、ＳＲＶ及猴血清标本ＰＣＲ反应均为阴性。上述结果表明，采用ＰＣＲ方法检测血清中ＨＩＶ核酸序列是一种很有前途的ＨＩＶ感染诊断方法。     

PCR方法诊断重症急性胰腺炎继发全身性感染13例研究

目的 探讨以１６ｓｒＲＮＡ和１８ｓｒＲＮＡ基因为基础的细菌和真菌ＰＣＲ方法诊断重症急性胰腺炎继发全身性感染的价值。方法 对急性胰腺炎的血标本进行细菌、真菌通用引物ＰＣＲ检测,并同常规培养比较。结果 对于所收集１３例重症急性胰腺炎患的２２份血标本,细菌培养阳性１例,真菌培养阳性１例,阳性检出率分别为４．５％和４．５％;而细菌ＰＣＲ检测阳性有７例,真菌ＰＣＲ阳性为１份,阳性检出率分别为３１．８％和４     

聚合酶链反应对活动性肺结核病的诊断价值探讨

目的：探讨聚合酶链反应（ＰＣＲ）对结核病的临床诊断价值。方法：本文对１２６例活动性肺结核病人的痰标本进行了检测。结果：发现ＰＣＲ检出率为６０．３％,高于痰培养的４９．２％和痰涂片的３８．１％。但涂阳病人中有２２．９％ＰＣＲ阴性,８２例非结核疾患有２８．１％ＰＣＲ阳性。结论：提示ＰＣＲ阳性结果并非活动性结核病所特有     

聚合酶链反应凝胶呈像技术检测乙型肝炎病毒

目的建立聚合酶链反应（ＰＣＲ）凝胶呈像（ｇｅｌｄｏｃｕｍｅｎｔａｔｉｏｎｓｙｓｔｅｍｓ，ＧＤＳ）技术，并应用于临床检测乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）核酸ＤＮＡ。方法用凝胶呈像技术对血清ＨＢＶＤＮＡＰＣＲ扩增产物的电泳凝胶进行摄像、分析，并与紫外灯下的肉眼观察结果相比较，对肉眼未判断出阳性而凝胶呈像分析出阳性的血清标本，用定量ＰＣＲ（ＱＰＣＲ）方法检测ＨＢＶＤＮＡ。结果通过３８份血清标本的检测，发现用凝胶呈像技术判断的结果比单纯肉眼观察的阳性率高。前者１９份阳性（５０％），后者１６份阳性（４２．１％），符合率为９２．１％。经χ２检验（χ２＝０．４７７，Ｐ＞０．０５），说明两种方法有很好的一致性。凝胶呈像分析为阳性，而肉眼观察阴性的３份血清标本，经定量ＰＣＲ检测为阳性。结论应用凝胶呈像技术比ＰＣＲ产物电泳后紫外灯下肉眼观察的灵敏度高、客观性强，能避免与紫外线接触，并可长期保留检测结果。     

PCR检测HBV－DNA提取方法的比较

ＰＣＲ检测ＨＢＶ－ＤＮＡ提取方法的比较步恒富，马立人，刘志红，刘耀清，王全立（北京军事医学科学院放射医学研究所，北京１００８５０）我们对ＰＣＲ检测ＨＢＶ－ＤＮＡ时标本处理这一关键性问题进行了模索，现报告如下。１材料和方法１．１血清样品某宾馆服务员普查...     

聚合酶链反应检测胸腔积液结核杆菌DNA

聚合酶链反应检测胸腔积液结核杆菌ＤＮＡ柴辉，杨浏，鞠萍（湖北省黄石市二医院，４３５００２）我们应用ＰＣＲ技术检测４９例胸腔积液患者结核杆菌ＤＮＡ（ＴＢ－ＤＮＡ）并与常规方法进行了比较。现将结果报告如下。１材料与方法１．１标本４９例均为本院结核科和呼吸...     

聚合酶链反应在男性急性淋菌性尿道炎诊断及治疗中的应用

ＰＣＲ是一种体外基因扩增技术。具有灵敏、快速、简便、特异性和敏感性高等特点。现将我院收治１３４例男性急性淋菌性尿道炎患者治疗前后传统涂片染色检查和ＰＣＲ法检测的结果进行比较，报告如下。资料与方法１．一般资料男性患者１３４例，年龄１８～４３（平均２８．...     

应用逆转录－多聚酶链反应方法检测多发性骨髓瘤患者MDR1的表达

应用逆转录－多聚酶链反应方法检测多发性骨髓瘤患者ＭＤＲ１的表达齐君原武永吉应用逆转录－多聚酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）方法，对１４份正常骨髓标本和１３例多发性骨髓瘤（ＭＭ）患者的１６份骨髓标本进行了多药耐药基因ＭＤＲ１ｍＲＮＡ检测；对ＭＤＲ１ｍＲＮＡ与Ｍ...     

尿液对PCR检测的影响

尿液对ＰＣＲ检测的影响长征医院实验诊断科（２００００３）黄涛，黄超，孔宪涛在以尿液为标本的聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测中尿液是否会抑制扩增，各家报道不一。本文以检测巨细胞病毒（ＣＭＶ）为模式，通过一系列实验，来分析尿液对ＰＣＲ扩增的影响。一、材料１．标...     

PCR与ELISA法检测300例乙型肝炎病毒标志物的比较

乙型肝炎临床上一般用酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）法检测乙型肝炎病毒感染标志物ＨＢＶＩｇＭ来确定ＨＢＶ的感染状况,笔者结合聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术检测了３００例,其结果进行比较分析。材料和方法１－标本来源：本院住院患者１５７例,门诊患者１４３例,其中男１８８例,女１１２例,均为肝炎或凝似肝炎患者。２－检测方法：应用北京燕宇生物分子生物学研究所提供的ＨＢＶ－ＤＮＡＰＣＲ试剂盒严格按操作说明书在９８０１－Ｄ型扩增仪进行扩增,扩增产物在ＤＹＹ－Ⅲ２型稳压稳流电泳仪作电泳,然后用天能组合型紫外线仪观察…     

荧光信号引物PCR定量测定血清HCV—RNA的实验室评价

目的对Ａｍｐｌｉｓｅｎｓｏｒ荧光标记ＨＣＶ定量ＰＣＲ方法进行实验室考核。方法２８例抗ＨＣＶ（＋）、定性ＰＣＲ（＋）的血清标本，用于重复性测定；２０例健康人血清用于正常值测定；５例定性ＰＣＲ（＋）和５例定性ＰＣＲ（－）标本用于Ａｍｐｌｉｓｅｍｓｏｒ和ｂｒａｎｃｈ－ＤＮＡ两种方法的比较。结果孔间变异系数（ＣＶ）为 ２０．６％，操作者间ＣＶ为 ４３．８％，批内 ＣＶ为 ６１．９％，批间ＣＶ为８５．１％。２０例健康人血清测定值均小于最小检测浓度，即１０２拷贝／ｍｌ。用Ａｍｐｌｉｓｅｎｓｏｒ和ｂｒａｎｃｈ－ＤＮＡ两种方法对５ 例定性ＰＣＲ（－）标本测定，Ａｍｐｌｉｓｅｎｓｏｒ和ｂｒａｎｃｈ－ＤＮＡ均为阴性；对５ Ｎ定性ＰＣＲ（＋）标本测定，Ａｍｐｌｉｓｅｎｓｏｒ均为阳性，ＨＣＶ－ＲＮＡ的浓度为 ２． ５ × １０５拷贝 ／ｍｌ～ １． ７ ×１０６拷贝 ／ｍｌ， ｂｒａｎｃｈ－ＤＮＡ方法有 ２例未能检出。结论 Ａｍｐｌｉｓｅｎｓｏｒ ＨＣＶ定量 ＰＣＲ方法特异性和灵敏度均好，可用于临床疾病的研究和抗病毒药物疗效的评估。由于批内、批间变异系数较大，试验与操作均应严格规范。     

聚合酶链反应检测结核菌的应用研究

采用３８ＫＤ－４１９ｂｐ系统检测１０９８例病人的标本，并同时进行涂片找结核菌、结核菌培养等检查。结果表明，结核病ＰＣＲ检测的阳性率为５４．７％（４２８／７８２），菌阳率为２７．１％（１９０／７８２），说明ＰＣＲ是敏感性和特异性均较好的方法。在实验过程中使用了简易的热起动法，同时限定了敏感度，设立一系列的质控，并对影响ＰＣＲ检测结核菌的各种因素作了分析。     

聚合酶链反应诊断伤寒的可靠性探讨

聚合酶链反应诊断伤寒的可靠性探讨石碧平陈一斌博罗县人民医院５１６１００为了探讨聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测伤寒杆菌ＤＮＡ对伤寒诊断的可靠性，我们对８８例“发热待查”患者进行了ＰＣＲ检测，现将结果分析报道如下。１资料和方法１１病例选择８８例均为１９９６...     

聚合酶链反应检测霍乱弧菌

为快速，准确地检测霍乱弧菌，控制霍乱流行，研究建立了一种聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测方法，根据霍乱弧菌肠毒素ＣＴ基因序列，自行设计一对特异引物，扩增片断为２９６ｂｐ，同时采用一种高效率，快速，简便的方法提取并纯化ＤＮＡ，该法能成功地检测各种样品中的产ＣＴ肠毒素Ｏ１群霍乱弧菌，应用ＰＣＲ技术和常规分离培养方法对９０９份腹泻患者粪例标本和１８份环境水样标本进行平行检测。结果表明，两种方法的检测结果一致。     

荧光定量聚合酶链反应检测乙型肝炎病毒

目的用荧光定量聚合酶链反应（ＦＱＰＣＲ）方法准确地定量检测血清中乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）的数量和免疫指标,以指导临床。方法设计合成了ＨＢＶＦＱＰＣＲ诊断试剂盒,以一种完全闭管式的ＰＣＲ和荧光探针杂交技术相结合所产生的实时检测定量ＰＣＲ方法,检测了５３２份临床血清标本。结果经ＦＱＰＣＲ检测,１５８份ＨＢＶ的ｓ抗原、ｅ抗原、ｃ抗体（ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｇ、ＨＢｃＡｂ）都阳性的标本,其血清标本ＨＢＶＤＮＡ也全部阳性,平均ＨＢＶＤＮＡ拷贝数为１．１×１０８／ｍｌ;９８例ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｂ、ＨＢｃＡｂ都阳性的标本,其阳性率为７３％（７１例）,平均拷贝数为８．６×１０５／ｍｌ,而常规ＰＣＲ只有３３％的阳性率;６７例ＨＢｓＡｂ、ＨＢｅＡｂ、ＨＢｃＡｂ都阳性标本的平均拷贝数为２．３×１０５／ｍｌ。结论能够避免ＰＣＲ后处理导致的假阳性污染,并实现准确定量。ＦＱＰＣＲ可以检测ＨＢＶ的真实感染和复制情况,对于乙型肝炎的临床诊断,治疗方案的选择和疗效考察有较大的指导意义。     

聚合酶链反应和尿素酶试验检测幽门螺杆菌

近年来随着大量研究资料表明,幽门螺杆菌（ＨＰ）与慢性胃炎、消化性溃疡及胃癌的发生均有着十分密切的关系［１、２］。目前检测 ＨＰ感染的方法较多,分为入侵性和非入侵性两类,如细菌涂片。培养,尿素酶试验（ＲＵＴ）,聚合酶链反应（ＰＣＲ）和血清ＨＰ抗体检测及１３Ｃ或１４Ｃ,尿素呼吸试验（ＵＢＴ）等。我们通过对２ １６例患者胃镜活检同部位粘膜标本,分别作ＰＣＲ反应和ＲＵＴ试验检测对照,以了解各自优缺点。１资料和方法 本组２１６例,男１３６例,女８０例,年龄１７～８２岁,平均５２．１岁。慢性萎缩性胃炎８２例,…