新生儿溶血症换血治疗中母子血型抗体配合的必要性分析

目的:通过对1例由Rh血型系统抗-Ec造成的新生儿溶血症(hemolytic disease of the newborn,HDN)患儿的换血治疗分析,探讨HDN患儿输血或换血治疗中除考虑新生儿ABO血型外,还要考虑母体意外抗体对应抗原的重要性。方法:患儿行“新生儿溶血三项试验”证实HDN是由母体的抗-Ec免疫所致,故选择ABO配合及来自母体意外抗体对应抗原阴性红细胞进行换血治疗。结果:经药物治疗及配合性血液换血治疗后效果明显,患儿痊愈出院。结论:对胎母血型抗体免疫性溶血症输血及换血治疗时,不能只考虑传统ABO同型输注,必须结合母亲抗体特异性选择对应抗原阴性的红细胞血液制品,这样才能达到较好的输注效果。     

基于琼脂糖膜为载体的抗体芯片工作条件的优化

目的:优化以琼脂糖修饰的玻片为载体的抗体微阵列的制备方法,提高微阵列信噪比及检测灵敏度。方法:选取单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)作为待检的靶蛋白,在琼脂糖膜上首先固定MCP-1捕获抗体,经过洗涤、封闭,然后依次加入标准抗原、生物素标记的检测抗体以及亲和素标记的cy3,分别孵育、洗涤后,激光共聚焦扫描仪扫描获取图像,分析各点的荧光强度,根据荧光强度确定捕获抗体的最佳固定时间、温度以及最适宜的洗涤缓冲液。结果:与4、37℃过夜固定相比,捕获抗体室温(25℃左右)过夜固定时,蛋白质在载体上的固定效率和反应活性最高;捕获抗体过夜固定比固定2 h获得更高的检测灵敏度;另外,通过比较相同pH值不同溶质缓冲液的洗涤效应,pH 7.4的缓冲液PBST可获得更优信号强度。结论:本研究优化了以琼脂糖修饰的玻片为载体的蛋白质微阵列的反应条件,提高了微阵列的检测灵敏度。     

Lewis血型系统抗体引起的溶血性输血反应

目的研究Lewis血型系统抗体的血清学特异性及其在输血中的临床意义.方法将2例溶血性输血反应患者的血清分别与一组试剂红细胞在盐水介质、木瓜酶-抗痛素介质、抗球蛋白、酶-抗球蛋白介质中反应,分析鉴定其抗体的特异性.结果2例患者血清与试剂红细胞在多种反应介质中的反应结果显示有IgG抗-Lea.结论该同种抗体为特异性抗Lewis血型系统抗体,且引起溶血性输血反应.Lewis血型系统抗体筛选意义值得探讨.     

红细胞血型抗体检查

血型抗体主要以球蛋白ＩｇＭ ,ＩｇＧ和ＩｇＡ等形式存在 ,它由相应血型抗原刺激而产生 ,最常见的免疫途径是血型不合的输血和妊娠。采用适当的方法检查出这些抗体 ,能使输血安全有效地进行。血型抗体的检查方法因抗体的性质不同而异。1　完全抗体检查法完全抗体 ,使用含相应抗原的红细胞在盐水介质中的反应能检出其血清中抗体 ,凝集是ＩｇＭ抗体的行为 ,但在ＡＢＯ血型系统 ,Ａ、Ｂ抗原位点多 ,当ＩｇＧ抗Ａ、抗Ｂ的浓度足够大时 ,在盐水介质里也能发生凝集。( 1)材料。①受检者血清 ;②受检者 5%红细胞盐水悬液 ;③已知表现型的标准红细胞…     

新疆维族自治区48542名有输血可能的患者红细胞血型不规则抗体的分布状况分析

目的:了解新疆维族自治区输血患者红细胞血型不规则抗体的分布状况。方法:用微柱凝胶免疫法对2013年1月-12月来新疆医科大第一附属医院就诊的有可能输血的患者进行红细胞血型不规则抗体筛选试验,观察不规则抗体的阳性率以及分布状况。结果:48542名接受红细胞血型不规则抗体筛选的本院患者中共筛选出抗体阳性97例(阳性率为0.22%);通过抗体鉴定,检出抗M 3例,抗D 38例,抗E 29例,抗C 9例,抗c 4例,抗e 3例,抗Ce 7例,自身抗体4例。结论:新疆维族自治区有输血可能的患者存在一定比例的红细胞血型不规则抗体,建议有输血可能的患者进行红细胞血型不规则抗体的筛查,尤其是针对住院的少数民族女性患者。     

Lewis血型系统抗体引起的溶血性输血反应

目的研究Lewis血型系统抗体的血清学特异性及其在输血中的临床意义。方法将2例溶血性输血反应患者的血清分别与一组试剂红细胞在盐水介质、木瓜酶-抗痛素介质、抗球蛋白、酶-抗球蛋白介质中反应,分析鉴定其抗体的特异性。结果2例患者血清与试剂红细胞在多种反应介质中的反应结果显示有IgG抗-Lea。结论该同种抗体为特异性抗Lewis血型系统抗体,且引起溶血性输血反应。Lewis血型系统抗体筛选意义值得探讨。     

单克隆抗体修饰玻璃表面制备蛋白质芯片的初步研究

目的探讨应用单克隆抗体修饰玻璃表面制备蛋白质芯片的方法.方法用不同浓度的抗6X His单克隆抗体修饰玻璃表面,从蛋白质固定效率和固定蛋白质的反应活性两个方面,对修饰效果进行评价.结果初步观察到单克隆抗体修饰玻片对蛋白质的固定量较醛基化修饰的玻片没有明显增加,但其固定蛋白质中有反应活性的蛋白质的比例较高.结论单克隆抗体修饰的玻片也适合于制备蛋白质芯片.     

调查Rh血型抗体检出率和特异性分布的临床意义

目的:调查Rh血型抗体的检出率及其特异性分布特点,分析Rh血型抗体的临床意义及产生规律。方法:采用微柱凝胶抗球蛋白技术筛查和鉴定红细胞血型不规则抗体,鉴定红细胞Rh血型抗原、检测抗体的效价、Ig类型及37℃反应性并分析抗体产生的原因。结果:就诊者27000例,共检出Rh血型抗体24例,检出率为0.089%,24例Rh血型抗体均为IgG或IgG+IgM类。结论:输血和妊娠同种免疫是红细胞血型抗体产生的重要原因。红细胞血型抗体的主要临床意义为是否引起HTR及HDN。红细胞血型抗体的效价具有重大临床意义。     

南阳地区40001例患者红细胞血型不规则抗体检测分析

目的了解南阳地区患者红细胞血型不规则抗体的发生频率及特异性抗体的分布特点。方法选取就诊的患者40 001(男13 141,女26 860,男:女=0.489),用卡式微柱凝胶法进行红细胞血型不规则抗体筛查;对检出抗体阳性者鉴定其特异性及Ig类型。结果 40 001例患者中检出红细胞血型不规则抗体者347例(0.87%),其中男68/13 141例(0.52%)、女279/26 860例(1.04%),差异有统计学意义(P<0.05)。3960例孕妇检出红细胞血型不规则抗体73例(1.84%)。检出较多的特异性抗体依次为抗-M、抗-JK、抗-Lea、抗-P1、抗-Fyb、抗-Leb等。IgM类抗体183例、IgG类抗体74例、IgM+IgG类抗体28例,37℃反应阳性者62例(0.15%,62/40 001)。结论南阳地区患者红细胞血型不规则抗体发生频率和分布特点与其他地区不同,检出率较高,提示对于拟输血者特别是孕妇应例行红细胞血型不规则抗体检测。     

全人源抗PSMA单链抗体的筛选及免疫活性鉴定

目的 从全人源单链噬菌体抗体库中筛选出抗前列腺特异性膜抗原(PSMA)特异性单链抗体并进行免疫活性鉴定.方法 以合成的PSMA多肽为抗原,经过五轮吸附-洗脱-扩增,从单链噬菌体抗体库中筛选出特异性抗PSMA噬菌体抗体,ELISA检测其抗原结合能力,并对特异性较强的克隆提取质粒,表达可溶性抗体.Western Blott...     

Poly-L-Lysine玻片在寡核苷酸芯片制备中的改进

目的为了制得适合固定未修饰寡核苷酸的芯片,提高检测灵敏性,对Patrick Brown 实验室的多聚左旋赖氨酸包被玻片的方法进行改进。方法玻片经清洗后用缩水甘油-丙氧基三甲氧基硅烷进行硅烷化,然后应用Poly-L-Lysine在玻片表面形成聚合物涂层,经次亚苯基二异硫氰酸盐表面活化后可使寡核苷酸共价连接在芯片表面。设计了各种实验考察方法改进前后芯片表面的性能,并将改进后的玻片初步应用于SARS冠状病毒寡核苷酸芯片检测中。结果方法改进后芯片表面性能优良:固定效率高、点的同一性好、杂交效率和热稳定性好、寡核苷酸结合牢固、芯片可以重复利用。结论利用共价连接,方法改进后的芯片表面适合固定未修饰的寡核苷酸,解决了寡核苷酸与玻片之间物理结合不稳定、易剥离的缺陷,提高了芯片检测的灵敏性。     

Poly-L-Lysine玻片在寡核苷酸芯片制备中的改进

目的 为了制得适合固定未修饰寡核苷酸的芯片，提高检测灵敏性，对Patrick Brown实验室的多聚左旋赖氨酸包被玻片的方法进行改进。方法 玻片经清洗后用缩水甘油-丙氧基三甲氧基硅烷进行硅烷化，然后应用Poly-L-Lysine在玻片表面形成聚合物涂层，经次亚苯基二异硫氰酸盐表面活化后可使寡核苷酸共价连接在芯片表面。设计了各种实验考察方法改进前后芯片表面的性能，并将改进后的玻片初步应用于SARS冠状病毒寡核苷酸芯片检测中。结果 方法改进后芯片表面性能优良：固定效率高、点的同一性好、杂交效率和热稳定性好、寡核苷酸结合牢固、芯片可以重复利用。结论 利用共价连接，方法改进后的芯片表面适合固定未修饰的寡核苷酸，解决了寡核苷酸与玻片之间物理结合不稳定、易剥离的缺陷，提高了芯片检测的灵敏性。     

荧光检测孕妇感染蛋白质芯片制备的初步研究

目的：建立一种用蛋白质芯片检测血清中弓形虫、巨细胞病毒、风疹病毒、单纯疱疹病毒（TORCH）抗体的新方法。方法：采用玻片表面修饰琼脂糖膜制备蛋白质芯片，以荧光标记抗体，检测血清中TORCH IgM抗体。结果：所制备的蛋白质芯片可检测到血清中微量TORCH抗体的存在，荧光强度和抗原质量浓度呈线性关系，抗体之间交叉反应可忽略不计。该芯片法与ELISA试荆盒检测阴阳性符合率均100％。结论：蛋白质芯片技术检测孕妇TORCH感染，具有高通量、微型化、操作简便等优点，可望应用于临床中。     

Capture of cervical exfoliative cells on a glass slide coated by 3-glycidyloxypropyl trimethoxysilane and poly-L-lysine

A new modification method for glass slides was developed and applied to make ThinPrep Pap smears, in order to increase the adhesion ability of cervical exfoliative cells. 3-glycidyloxypropyl trimethoxysilane (GOPS) was coated on the glass slides firstly on the slides, then poly-L-lysine (PLL) was covalently modified onto the above epoxy-terminated slides to form GOPS-PLL double decorated slides. The modified slides were characterized using X-ray photoelectron spectroscopy (XPS) and atomic force microscopy (AFM). The cell adhesion ability effect was tested and compared with traditional PLL coated slides by fixing the cervical exfoliative cells on the double adorned slides. The control test was conducted by the bare glass slides unmodified. The cell morphology of cervical exfoliative cells adhered on different slides was observed under the microscope after Papanicolaou staining. The number of cervical exfoliative cells on the unmodified slides, PLL coated slides and GOPS-PLL coated slides was 1030±300, 3283±226 and 4119±280 (n=12), respectively. The data among the three different modification methods showed significant differences (one-way analysis of variance, ANOVA test, P<0.05). The cell capturing effect of the GOPS-PLL slide was the best among the three different modified slides. In addition, the GOPS-PLL slide could enhance the uniformity of the adhered cells and be widely applied to the ThinPrep system for cervical carcinoma screening to increase the accuracy rate of diagnosis.     

红细胞膜定向包裹血红蛋白-白蛋白纳米粒的制备及评价

目的 制备红细胞膜定向包裹的血红蛋白-白蛋白纳米粒(RBC-Hb/BSA-NP),并对其进行表征和长循环能力的探究.方法 通过溶剂蒸发法制备包含血红蛋白的白蛋白纳米粒(Hb/BSA-NP),然后采用物理挤压的方式制备得到RBC-Hb/BSA-NP,并对其粒径、Zeta电位和外观形态进行表征;通过评价红细胞膜包覆白蛋白纳...     

不同组合 CD3、CD28抗体对 CIK 细胞诱导培养的探索研究

目的：探索利用CD3、CD28抗体对人外周血单个核细胞(PBMC)体外激活转化增强作用，采用不同包被方法及抗体浓度，以期获得一种更有效的包被方法。方法利用人外周血单个核细胞分离技术、体外细胞培养技术及流式细胞术(FMC)，以 CD3抗体固相包被、CD28抗体不同浓度固相包被或悬浮加入，计算经12 d 培养获得成熟 CIK 细胞的数量，测定不同包被方法刺激培养后的细胞表型的变化。结果培养后 C 组中 CD4+细胞百分比明显低于 A 组，差异有统计学意义(P <0.05)。C 组中CD8+细胞所占比例高于 A、B 组(P <0.05)。C 组的 T4/T8比值与 A、B 组差异有统计学意义(P <0.05)。B 组 NK 细胞含量与C 组差异有统计学意义(P <0.05)。CD25+细胞在 C 组中所占比例低于 A 组(P <0.01)。结论CD3抗体固相包被及 CD28抗体悬浮加入组合对人外周血细胞的刺激增强作用强于 CD3抗体固相包被 CD28+抗体固相包被组合。     

A "dipstick" enzyme immunoassay for detection of antibody to Brucella abortus in cattle sera

An enzyme immunoassay that utilizes antigen bound to a matrix which can be removed from the substrate to stop development is described. The assay which is performed in glass or plastic disposable tubes uses Gel-Bond film strips for attachment of antigen. The only equipment requirements are a rotary shaker and a spectrophotometer (optional). The antigen coated strips are passed through a series of tubes containing test serum, wash solution, antibody-enzyme conjugate, wash solution and substrate-chromogen taking about 45 minutes to perform. In testing sera with or without antibody to Brucella abortus a very high correlation existed between same day tests and tests performed over several days as well as with data on the same sera obtained by an enzyme immunoassay in a microtiter format.     

抗人血清IgD抗体与微球颗粒连接方法的研究

目的研究抗人血清IgD抗体与微球颗粒连接的方法,为相关产品试剂盒的研发奠定基础。方法微球颗粒表面有许多COOH基团,EDAC与COOH基团反应,形成一个中间产物,S-NHS能与这个中间产物反应,进一步形成一个稳定的能与氨基反应的S-NHS ester中间物,抗人血清IgD抗体上的氨基能与这个S-NHS ester中间物反应,从而将抗人血清IgD抗体共价键连接到微球颗粒上。结果如果抗人血清IgD抗体被连接到微球颗粒上,这种微球颗粒在Luminex200仪器上检测时,平均荧光强度值高,而没有连接抗人血清IgD抗体的微球颗粒,平均荧光强度值低。同时被连接到微球颗粒上的抗人血清IgD抗体仍然能与相对应的抗原发生特异性的结合。结论该方法简单有效且重复性好,能够应用到临床检测及相关诊断试剂盒的开发中。     

噬菌体抗体库几种筛选方法的比较

目的：对多种不同的噬菌体抗体库筛选方法进行比较研究。方法：应用抗原固相化吸附筛选法,生物素化抗原液相筛选法和解离速率筛选法对半合成噬菌体抗体库或轻链替换库进行抗角蛋白噬菌体抗体的筛选,比较各自的筛选效率和优缺点。结果：3种方法筛选抗角蛋白抗体均获成功,抗原固相化吸附筛选法效果可靠,所获抗体特异性高但抗原消耗量大,生物素化抗原液相筛选法方法敏感且节省抗原,可以根据实验目的和抗体库性质灵活调节筛选体系,其不足是筛选获得的克隆中容易出现非特异性结合的克隆,而解离速率选是选择性获得高亲和力抗体的有效手段,结论：不同的筛选策略各具优势,在实际应用中可根据不同的实验目的选择相应的筛选方法。     

肿瘤转移相关基因的表达谱研究

目的：运用基因表达谱芯片技术对肿瘤转移相关基因的表达谱进行研究。方法：对临床切除的肝癌和胰腺癌组织及相应的对照正常组织进行总ＲＮＡ抽提,纯化后的ｍＲＮＡ进行逆转录制备杂交探针,应用ＢｉｏＤｏｏｒ４０９６和ＢｉｏＤｏｏｒ１２８００的全长基因ＤＮＡ芯片筛选与肝癌和胰腺癌转移相关的基因。杂交后的信号用ＳｃａｎＡｒｒａｙ３０００扫描,结果用ＩｍａＧｅｎｅ３．０软件分析。结果：对肝癌和胰腺癌基因表达谱进行分