高表达p73 基因对肺腺癌细胞VEGF 、bFGF 表达抑制作用的研究

 目的 观察高表达的p73基因对肺腺癌细胞中VEGF、bFGF mRNA和蛋白表达水平的影响。方法 将p73基因以脂质体法转染A549细胞、H1299细胞，G418筛选阳性细胞克隆．采用RT-PCR半定量法检测转染前后VEGF、bFGF mRNA的表达水平，Western-blot半定量法检测蛋白表达水平。结果 转染p73基因后，A549细胞、H1299细胞中VEGF、bFGF mRNA和蛋白表达水平均下降，较未转染p73基因的细胞有显著性差异(P<0．05)。结论 高表达的p73基因能够降低肺腺癌细胞中VEGF、bFGF mRNA和蛋白表达水平，提示p73基因可能抑制人类肺腺癌的血管生成。     

促红细胞生成素对肺腺癌A549细胞生长和凋亡作用的实验研究

背景与目的 促红细胞生成素(erythropoietin,EPO)对肿瘤细胞的具体作用存在争议.本研究旨在探讨细胞因子超家族成员EPO对肺腺癌AS49细胞株生物学行为的影响.方法 构建真核表达质粒pcDNA3.1(-)-hEPO,并转染肺腺癌A549细胞株.采用酶联免疫吸附(ELISA)法检洲转染后目的基因的蛋白表达水平;MTT法和流式细胞仪检测转染后A549细胞生长、周期及凋亡率等生物学行为的变化;ELISA法检测转染后细胞VEGF表达水平的变化.结果 成功构建真核表达质粒pcDNA3.1(-)-hEPO;转染后各检测时间点,EPO转染组细胞生长均明显受抑(P<0.01);流式细胞术分析表明,EPO转染组S期细胞比例明显高于对照组(P<0.05).且凋亡率也明显增高(P<0.01);EPO转染组VEGF表达量明显降低(P<0.01).结论 EPO基因转染A549后有抑制细胞生长、促进凋亡的作用,并且还可抑制细胞表达VEGF.     

p73基因对人肺腺癌细胞H1299化疗敏感性的影响

背景与目的:实验证明野生型p53基因能增强大多数非小细胞肺癌的化疗敏感性。p53基因的同源体p73与其在结构和功能上都具有高度的相似性。本研究拟探讨p73基因对人肺腺癌细胞株H1299化疗敏感性的影响。方法:通过脂质体介导将p73α基因导入人肺腺癌细胞株H1299,G418筛选获得稳定表达P73α的阳性细胞克隆。Westernblot检测转染细胞中P73α蛋白的表达;MTT法检测细胞存活率,观察转染细胞对阿霉素、顺铂的敏感性变化;采用流式细胞仪和TUNEL法检测.p73646化疗药诱导前后转染细胞凋亡的变化;克隆形成实验观察细胞生物学性状的变化。结果:转染p73α基因的H1299细胞可以稳定高表达P73α蛋白。MTT实验提示顺铂和阿霉素的IC50值分别减少了86.2%和99.2%,转染细胞在原本没有明显抑制和杀伤作用的药物浓度(1.25μmol/L的顺铂或0.05μmol/L的阿霉素)作用下生长明显受到抑制。流式细胞术显示p73α基因转染后顺铂诱导的细胞凋亡率从10.1%升高到38.4%(P<0.01),阿霉素诱导的细胞凋亡率从12.1%升高到49.3%(P<0.01)。克隆形成实验显示p73α基因转染能明显降低化疗后H1299细胞的克隆形成数(P<0.01),对顺铂和阿霉素的化疗增效倍数分别为1.8和2.6倍。结论:转染p73基因可以提高H1299细胞对阿霉素、顺铂等化疗药的敏感性。该作用可     

抗VEGF发卡状核酶抑制肝癌VEGF表达和移植瘤生长

目的:采用抗人血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)发卡状核酶基因转染肝癌细胞,观察核酶对VEGF表达及肿瘤生长的影响。方法:采用脂质体介导的方法,将人工合成的抗VEGF发卡状核酶基因转染肝癌细胞SMMC-7721,同时制备空载体和细胞对照,经G418筛选获得阳性克隆,基因组水平鉴定核酶在细胞中的表达,半定量RT-PCR法和免疫组化法观察核酶对SMMC-7721细胞VEGF表达的影响。接种各组细胞于裸鼠皮下,观察瘤体体积大小和质量,免疫组化法观测各组肿瘤微血管变化和VEGF的表达。结果:核酶基因成功导入到肿瘤细胞中,转基因细胞的增殖速率明显下降(P<0.01),转染核酶组细胞VEGF水平明显下降(P<0.01)。移植瘤成瘤率和生长速度减慢(P<0.01),肿瘤组织VEGF表达和血管形成减少(P<0.01)。结论:抗人VEGF发卡状核酶基因在体内、体外均可抑制肝癌VEGF表达,通过减少血管形成抑制肿瘤生长,为进一步开展肝癌血管靶向基因治疗提供实验依据。     

shRNA干扰对肺癌细胞内Skp2和p27水平及其生长的影响

探讨干扰肺腺癌SPC—A—1细胞中skp2（S-phase kinase associated protein，Skp2）基因的发夹结构RNA（small hairpin RNA，shRNA）对肺癌细胞Skp2和p27基因表达的影响及对细胞生长的影响。方法：设计、合成特异性的shRNA序列并与pGenesil-1质粒载体连接转染SPC-A-1细胞，经过稳定筛选后的肺癌细胞，通过RT—PCR和Western印迹法分别检测细胞内Skp2、p27 mRNA和蛋白的表达情况，MTT法检测细胞生长情况并绘制生长曲线。结果：在转染干扰RNA后SPC-A-1细胞内的Skp2 mRNA及蛋白表达下降明显，而p27蛋白水平却明显上升，这与抑制了Skp2表达导致p27降解减少有关。生长曲线表明细胞生长受到了抑制。结论：成功构建了针对脚2基因的shRNA真核表达载体，能有效抑制肺癌细胞生长，并使得Skp2基因表达下降，p27基因的表达增多，为肺癌细胞的基因治疗提供了实验依据。     

p16基因转染对肺腺癌细胞系Anip973和AGZY83—a的生长抑制作用

目的 探讨肿瘤抑制基因p16对肺腺癌细胞生长的抑制作用。方法 应用FuGene转染方法将p16基因的表达质粒转入一对分别具高、低转移能力的肺腺癌细胞系Anip973和AGZY83－a中。对p16蛋白过表达的细胞系进行了细胞生长曲线、克隆形成率、原位末端标记分析和流式细胞术分析。结果 p16基因的过表达只能使AGZY83－a和Anip973的G1期细胞比例提高,但细胞生长曲线、克隆形成率均未发生改变,原位末端标记分析也未发现凋亡信号。结论 本实验结果提示p16基因在AGZY83－a和Anip973中的过表达不能抑制它们的生长。     

TGFα-PE40对人肺腺癌细胞生长的抑制作用

目的 :探讨基因重组转化生长因子α 绿脓杆菌外毒素融合蛋白 (TGFα PE4 0 ,简称TP4 0 )对人肺腺癌细胞生长的导向抑制作用。方法 :用免疫组化LSAB法检测人肺腺癌SPC A 1细胞表皮生长因子受体 (EGFR)的表达 ,用结晶紫染色法和 3H 亮氨酸掺入法检测TP4 0对SPC A 1细胞生长及蛋白质合成的抑制 ,用过量EGF竞争拮抗TP4 0的细胞毒作用。结果 :SPC A 1细胞免疫组化显示出大量棕黄色的EGFR阳性染色。TP4 0浓度为 1～10 0ng/ml时 ,对SPC A 1细胞生长及蛋白质合成呈剂量依赖性抑制。过量EGF能完全拮抗TP4 0的细胞毒作用。结论 :人肺腺癌SPC A 1细胞能高水平地表达EGFR ,重组TP4 0对SPC A 1细胞生长具有较强的抑制作用 ,作用部位为细胞的EGFR。     

腹膜间皮细胞对卵巢癌细胞血管生成因子表达及分泌的影响

目的探讨腹膜间皮细胞（HPMC）对卵巢癌细胞血管生成因子表达及分泌的影响。方法用ELISA法检测HPMC条件培养液中肿瘤坏死因子α（TNF—α）及白介素-1β（IL-1β）的水平。用培养小室Millicell将卵巢癌细胞SKOV3与HPMC在不同培养条件下进行共培养。用RT—PCR方法检测SKOV3血管内皮生长因子（VEGF）和碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）的基因表达,ELISA法检测SKOV3条件培养液中VEGF和bFGF的蛋白水平。结果HPMC条件培养液中可检测到TNF—α和IL-1β。SKOV3与HPMC共培养后,其VEGF和bFGFmRNA表达增强,条件培养液中VEGF和bFGF蛋白水平升高,与SKOV3单独培养相比,差异均有统计学意义（P〈0．01）。加入TNF—α或IL-1β的中和抗体共培养,可明显抑制SKOV3VEGF及bFGFmRNA表达及蛋白分泌（P〈0．01）,共培养体系中同时加入TNF—α中和抗体及IL-1β中和抗体时,抑制作用增强（P〈0．05）。结论HPMC分泌TNF—α和IL-1β,刺激卵巢癌细胞表达及分泌更高的VEGF和bFGF,参与卵巢癌的血管生成及腹膜转移。     

Cox-2抑制剂对人肺腺癌A549细胞VEGF和Angs基因表达的影响

目的 :探讨环氧化酶 -2 (Cox 2 )抑制剂Nimesulide(NIM )对人肺腺癌A 5 49细胞血管内皮生长因子 (VEGF)及血管生成素(Angs)基因表达的影响及意义。方法 :不同浓度 ( 2 5、5 0、10 0、2 0 0 μmol/L)NIM处理人肺腺癌A 5 49细胞 2 4、48、72h后 ,放射免疫法测定细胞培养上清液PGE2 水平 ,半定量RT PCR检测NIM处理人肺腺癌A 5 49细胞后48h其VEGF及Ang 1、Ang 2mRNA的表达水平。结果 :NIM处理A 5 49细胞后 ,细胞培养上清液PGE2 水平下降 ,呈浓度和时间依赖性 ;NIM处理A 5 49细胞后 48h ,VEGF、Ang 2mRNA水平下降 ,呈浓度依赖性 ;Ang 1mRNA水平则无显著改变。结论 :NIM可抑制Cox 2活性及下调VEGF、Ang 2基因表达 ,该作用可能是Cox 2抑制剂抑制肿瘤血管生成的机制之一     

CaMKⅡ高表达通过EMT促进肺腺癌侵袭转移

  目的  探究钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ（calcium/calmodulin-dependent protein kinase Ⅱ,CaMKⅡ）在肺腺癌组织中的表达及其促进肺腺癌的侵袭、转移。  方法  通过免疫组织化学染色（immunohistochemistry,IHC）分析肺腺癌患者的石蜡组织标本CaMKⅡ表达与临床病理参数关系,同时对肺腺癌组织与其配对淋巴结转移病灶中的CaMKⅡ表达情况进行比较分析,收集2011年1月至2011年12月于天津医科大学肿瘤医院行手术治疗的113例肺腺癌患者及21例配对的原发病灶及淋巴结转移病灶的石蜡组织标本。将肺腺癌细胞系H1299及Calu3进行慢病毒转染,实验组转染高表达CaMKⅡ病毒,对照组转染阴性对照病毒,通过Transwell实验和划痕实验检测肺腺癌细胞侵袭、转移能力,通过Western blot 检测CaMKⅡ表达水平与上皮间充质转化（pithelial-mesenchymal transition,EMT）相关指标和表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor,EGFR）通路激活间的关系。  结果  CaMKⅡ高表达与肺腺癌TNM分期和淋巴结转移呈正相关,肺腺癌淋巴结转移病灶中的癌组织CaMKⅡ表达明显高于其原发病灶（P<0.05）。细胞实验表明,CaMKⅡ高表达的肺腺癌细胞,其穿膜细胞数目明显增多,伤口愈合能力增强; EGFR通路激活后p-CaMKⅡ水平增加,且CaMKⅡ促进了EMT相关蛋白及转录因子的表达。  结论  CaMKⅡ参与EGFR信号传导,促进EMT过程,增加肺腺癌的侵袭转移能力。