人视网膜母细胞瘤的细胞凋亡

目的 观察凋亡是否为视网膜母细胞瘤（ＲＢ）细胞死亡的主要方式。方法 应用光镜（１６例）、电镜（４例）及ＴＵＮＥＬ标记（１２例）对ＲＢ进行观察研究。结果 光镜下凋亡细胞大多位于退化区。电镜下可见不同凋亡阶段的ＲＢ细胞,占瘤细胞死亡的４２％。ＴＵＮＥＬ标记阳性细胞大多位于肿瘤退化区。凋亡指数（ＡＩ）在未分化型和放疗后的ＲＢ中明显增高（Ｐ〈０．０５）,与视神经受累与否及临床分期无关（Ｐ〉０．０５）。结论 凋亡可能是导致ＲＢ细胞死亡的主要形式,诱导调亡可作为促使ＲＢ退化的一种手段。     

视网膜母细胞瘤细胞分化程度与转移关系的研究

目的研究视网膜母细胞瘤（ｒｅｔｉｎｏｂｌａｓｔｏｍａ，ＲＢ）细胞分化程度与转移的关系，探讨其对预后的影响。方法对１５４例ＲＢ病人的眼球标本进行组织病理学观察，比较分化型与未分化型ＲＢ二者肿瘤细胞转移比率、转移程度及平均确诊年龄。结果分化型ＲＢ的转移发生率为４７．０６％，未分化型为４６．７２％，但后者转移的严重程度高于前者。发生转移的细胞均为未分化细胞。分化型ＲＢ平均确诊年龄为９．４３月，未分化型为４０．５８月。结论分化型与未分化型ＲＢ的转移比率相似，但未分化型转移程度更重。肿瘤细胞在眼内存留时间越长，分化越差。     

人视网膜脱离后细胞及细胞器超微结构变化的观察

目的 观察和比较人类视网膜脱离后视网膜不同部位细胞的死亡方式及形态学变化。方法 在5名孔源性视网膜脱离患者的手术过程中分别取孔盖、原发孔后缘、术中造孔后缘的视网膜组织,制片后分别记为A、B、C组标本,采用电子显微镜观察各组视网膜细胞的死亡方式和形态学变化,及线粒体、内质网的形态学变化。结果 观察A组标本,视网膜脱离后,细胞表现为凋亡和坏死性凋亡,以凋亡细胞居多,未发现典型的坏死细胞,可见线粒体空泡化,内部结构丢失,内质网略膨大;B组标本中细胞出现坏死、凋亡、坏死性凋亡的表现,以坏死现象最典型,可以发现视锥细胞中的线粒体出现肿胀、嵴断裂和内部结构丢失,在神经纤维层旁发现正常的内质网结构;C组标本中发现组织中存在大量正常细胞,偶见凋亡和坏死细胞,未发现坏死性凋亡细胞,单纯的自噬现象更加多见;3组标本的观察结果进行对比,结果显示A、B、C 3组标本细胞死亡的程度依次减轻,正常细胞数量依次增加。结论 视网膜脱离后,视网膜细胞出现凋亡、坏死、坏死性凋亡以及自噬的形态学改变;距离原发病灶越近的视网膜,其细胞的死亡程度越重,细胞数量越少。     

视网膜母细胞瘤瘤细胞凋亡分子病理学及自发退化机制研究

目的证明视网膜母细胞瘤中存在Ｒｂ细胞凋亡，阐明Ｒｂ自发退化的机制及与细胞凋亡的关系。方法应用光镜、电镜及ＴＵＮＥＬ标记技术进行形态学定性研究；同时应用计算机自动图像分析技术进行定量研究，分析Ｒｂ细胞各种肿瘤生长相关参数。结果光镜观察４７例Ｒｂ，均发现特征性病理退化区，该可见大量具有典型凋亡细胞形态特征的Ｒｂ退化细胞。而在Ｒｂ生长旺盛区则零星可见。电镜观察７例Ｒｂ，可见处于不同凋亡阶段的Ｒｂ退化细胞     

视网膜母细胞瘤术后存活20年以上的随访观察

为探讨视网膜母细胞瘤（ＲＢ）患者长期存活的有关因素及第二恶性肿瘤发病及遗传性，对１９６０—１９７５年病理确诊的９０例ＲＢ患者及其后代进行随访。随访到５９例，其中存活２０年以上者１６例，存活率为２７．１２％。尚未发现发生第二恶性肿瘤者。随访到ＲＢ患者的后代１４人，除２人因腹泻死亡外，其余经检查均未发现ＲＢ病变。结论：长期存活与病程、病期及是否做放疗有关，未分化型者的预后并不差，只要早期发现，及时治疗仍可长期存活。     

Rb基因诱导视网膜母细胞瘤移植瘤细胞凋亡的实验研究

目的观察外源性Ｒｂ基因对视网膜母细胞瘤（ＲＢ）细胞凋亡的影响。方法建立裸鼠眼玻璃体腔ＲＢ移植瘤模型及构建Ｒｂ基因的逆转录病毒表达载体Ｐｂａｂｅ－Ｒｂ，用脂质体Ｄｏｓｐｅｒ介导法将Ｒｂ基因导入裸鼠ＲＢ移植瘤，采用流式细胞术（ＦＣＭ），光镜、电镜及ＴＵＮＥＬ细胞凋亡原位末端标记法进行ＲＢ细胞凋亡的检测。结果Ｒｂ基因在ＲＢ移植瘤内表达至少持续７天。ＦＣＭ检测发现在Ｒｂ基因转染后第４天，各实验组治疗眼ＲＢ中均可检测到凋亡细胞峰，凋亡细胞百分率高于对照眼；第２０天，各实验组治疗眼细胞凋亡百分率与对照眼比无差异（Ｐ＞０．０５）。透射电镜下可见到典型的早期凋亡细胞及晚期凋亡小体形成。ＴＵＮＥＬ方法可在荧光显微镜下见到发黄绿色荧光的凋亡细胞，光镜下可见到紫红色的被标记的凋亡细胞。结论Ｒｂ基因可诱导ＲＢ移植瘤细胞凋亡，这可能是Ｒｂ基因体内抗癌的又一作用机制。     

增生性视网膜前膜中Caspase-3及Bax的表达

目的 观察凋亡及凋亡调控基因Caspase-3／Bax在增生性玻璃体视网膜病变(PVR)中视网膜前膜(epiretinal membrane)的表达及与凋亡的相关性。方法20例增生性玻璃体视网膜病变的视网膜前膜标本，分别进行Caspase-3和Bax免疫组织化学染色，观察表达情况及染色强度。结果Caspase-3及Bax在视网膜前膜中有较好的表达。正常视网膜组织中未见Caspase-3及Bax的表达。结论在视网膜前膜中存在细胞凋亡，Caspase-3及Bax的表达表示视网膜前膜的细胞凋亡的程度。     

视网膜母细胞瘤的细胞DNA倍体与组织类型和预后的关系

将２７例有随访资料的视网膜母细胞瘤（简称Ｒｂ）手术摘除的标本，按照ＷＨＯ标准，病理形态上分为未分化型Ｒｂ（Ｒ０）和分化型Ｒｂ（Ｒ），采用医学细胞图像处理系统（Ｍｅｄｉｃａｌｌｍａｇｅ Ｓｙｓｔｅｍ）测定瘤细胞中的ＤＮＡ倍体（Ｃ）分布，并与对照组进行比较，结果提示：分化好的Ｒｂ，视神经未受侵的Ｒｂ，ＤＮＡ倍体中〉２Ｃ比率低的Ｒｂ，发病年龄较大的Ｒｂ，发病后就诊早的Ｒｂ，其预后较好，预后与性别无关，放     

视网膜下液对培养的人视网膜色素上皮细胞、神经胶质细胞及成纤维细胞生长的刺激作用

目的：研究视网膜下液（ｓｕｂｒｅｔｉｎａｌｆｌｕｉｄ，ＳＲＦ）对增殖性玻璃体视网膜病变（ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅｖｉｔｒｅｏｒｅｔｉｎｏｐａｔｈｙ，ＰＶＲ）的多种细胞增殖的影响。方法：采用直接细胞计数和３Ｈ－ＴｄＲ掺入率测定ＤＮＡ合成两种方法观察２８例孔源性视网膜脱离患者ＳＲＦ对培养的人视网膜色素上皮（ｒｅｔｉｎａｌｐｉｇ－ｍｅｎｔｅｐｉｔｈｅｌｉｕｍ，ＲＰＥ）细胞、视网膜神经胶质（ｒｅｔｉｎａｌｇｌｉａ，ＲＧ）细胞及成纤维细胞（ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ，ＦＢ）生长刺激作用。结果：所有标本均具有刺激ＲＰＥ细胞、ＲＧ细胞及ＦＢ增殖和ＤＮＡ合成能力，增殖率范围分别在基线上５２．５％～２３３．３％、３６．４％～１７７．８％、５５．４％～２７７．８％之间。ＳＲＦ促细胞增殖率在三种细胞间比较无显著差异。结论：ＳＲＦ具有促多种细胞增殖的能力，推测ＳＲＦ中含有促细胞增殖的活性物质。     

双眼视网膜母细胞瘤一眼自发退行一例

双眼视网膜母细胞瘤一眼自发退行一例孙跃进（张家口医学院第一附属医院眼科，０７５０００）视网膜母细胞瘤（以下简称ＲＢ）是婴幼儿最常见的眼部恶性肿瘤之一，预后不佳。笔者遇一例双眼ＲＢ，一眼自发退行者，报告如下。患儿男性，２岁６个月。１岁２个月时家人发现其...     

视网膜母细胞瘤中Fas/Fas配体表达及 与凋亡的关系

目的观察视网膜母细胞瘤(retinoblastoma, RB)　Fas/Fas 配 体 (Fas ligand ,FasL)表达及与凋亡的相关性。方法应用免疫组织化学染色法观察32例RB标本中 Fas/FasL的表达及分布,并对32例用光镜、其中4例用电镜及12例用末端脱氧核苷酸转移酶介导的生物素化脱氧尿苷三磷酸末端标记 (t erminal deoxynucleotidyl transferase mediated biotin dUTP nick end labeling, T UNEL)染色观察细胞凋亡,分析与Fas/FasL表达的关系。结果光镜下凋亡细胞主要位于RB退化区,电镜下可见染色质边集和凋亡小体等凋亡特征 ;TUNEL显示阳性标识主要位于RB退化区及死亡区。Fas及 FasL在所有RB中均呈阳性表达 。Fas和 FasL表达与凋亡指数 (apoptosis index, AI)呈正相关 (P<0．01 ,P<0．001)。结论凋亡在RB中普遍存在,可能是触发RB细胞死亡的 主要方式;Fas系统在RB的发生发展中起重要作用。Fas系统上调可能会诱导RB细胞凋亡。(中华眼底病杂志,2001,17:21-23)     

Aurora Kinase B Expression,Its Regulation and Therapeutic Targeting in Human Retinoblastoma

PurposeAurora kinase B (AURKB) plays a pivotal role in the regulation of mitosis and is gaining prominence as a therapeutic target in cancers; however, the role of AURKB in retinoblastoma (RB) has not been studied. The purpose of this study was to determine if AURKB plays a role in RB, how its expression is regulated, and whether it could be specifically targeted.MethodsThe protein expression of AURKB was determined using immunohistochemistry in human RB patient specimens and immunoblotting in cell lines. Pharmacological inhibition and shRNA-mediated knockdown were used to understand the role of AURKB in cell viability, apoptosis, and cell cycle distribution. Cell viability in response to AURKB inhibition was also assessed in enucleated RB specimens. Immunoblotting was employed to determine the protein levels of phospho-histone H3, p53, p21, and MYCN. Chromatin immunoprecipitation–qPCR was performed to verify the binding of MYCN on the promoter region of AURKB.ResultsThe expression of AURKB was found to be markedly elevated in human RB tissues, and the overexpression significantly correlated with optic nerve and anterior chamber invasion. Targeting AURKB with small-molecule inhibitors and shRNAs resulted in reduced cell survival and increased apoptosis and cell cycle arrest at the G2/M phase. More importantly, primary RB specimens showed decreased cell viability in response to pharmacological AURKB inhibition. Additional studies have demonstrated that the MYCN oncogene regulates the expression of AURKB in RB.ConclusionsAURKB is overexpressed in RB, and targeting it could serve as a novel therapeutic strategy to restrict tumor cell growth.     

化疗药物诱导视网膜母细胞瘤细胞凋亡模型的建立

目的 检测不同类型肿瘤化疗药物对视网膜母细胞瘤（ｒｅｔｉｎｏｂｌａｓｔｏｍａ ＲＢ）细胞系ＨＸＯ－ＲＢ４４的诱导凋亡作用,建立该细胞系的细胞凋亡模型,作为今后研究化疗药物诱导ＲＢ细胞凋亡机理的工作基础。方法 将长春新碱、阿糖胞苷、氨甲喋呤、环磷酰胺、噻替派、米托蒽醌、阿克拉霉素、吡喃阿霉素、顺铂、卡铂、丝裂霉素、足叶乙甙第十二种化疗药物分别以１０＾－９、１０＾－８、１０＾－７、１０＾－６、１０＾－     

miR-218通过下调Bmi-1表达抑制人视网膜母细胞瘤细胞生长

目的：探讨miR-218在人视网膜母细胞瘤中的表达、临床意义及其分子机制。

方法：实时定量PCR检测miR-218在视网膜母细胞瘤及瘤旁组织中的表达,并分析其与临床病理特征的关系。检测miR-218在视网膜母细胞瘤细胞系中的表达,并用miR-218模拟物转染Y79细胞,MTT及流式细胞仪检测Y79细胞的增殖、凋亡情况,RT-PCR和Western-blot法检测Bmi-1 mRNA及蛋白的表达。

结果：miR-218在视网膜母细胞瘤组织中的表达水平显著低于对应瘤旁组织; miR-218低表达与神经浸润、分化程度密切相关; miR-218可显著抑制Y79细胞的增殖并促进其凋亡,并下调Bmi-1的mRNA及蛋白表达水平。

结论：miR-218在人视网膜母细胞瘤组织中表达下调,并与临床病理相关,miR-218抑制Y79细胞增殖、促进凋亡的作用可能与下调Bmi-1有关。     

人免疫重建的非肥胖型糖尿病-重症复合性免疫缺陷小鼠联合视网膜母细胞瘤荷瘤模型的建立

目的建立人免疫重建的非肥胖型糖尿病-重症复合性免疫缺陷（NOD—SCID）小鼠和人视网膜母细胞瘤（RB）动物模型,并观察其生物学特性。方法NOD—SCID鼠20只,采用计算机随机数字表法分为4组,即空白组（仅注射磷酸盐缓冲液）、人化组（仅注射人淋巴细胞）、荷瘤组（仅注射瘤细胞SO—RB50）及人化荷瘤组（注射人淋巴细胞及瘤细胞SO—RB50）,每组各5只鼠。常规分离健康成人外周血淋巴细胞,分别腹腔注射到人化组及人化荷瘤组小鼠。24h后,对单纯荷瘤组和人化荷瘤组鼠双侧腹股沟皮下接种人RB细胞株SO—RB50。定期观察小鼠的健康情况及移植瘤生长、转移情况。采用组织病理学、酶联免疫吸附实验（ELISA）、流式细胞仪等方法检测小鼠人免疫功能重建情况及所生长肿瘤特性。结果荷瘤组及人化荷瘤组RB皮下移植瘤潜伏期为12～19d,成瘤率为100％,形态学及免疫组织化学特点与人类的低分化RB一致,移植瘤内可见人白细胞共同抗原（LCA）阳性淋巴细胞浸润。免疫重建后9d,在人化组及人化荷瘤组鼠检测到人IgG存在,且随时间延长其含量逐渐升高;免疫重建后26d,小鼠血液内检测到人CD3^＋ T淋巴细胞,人化荷瘤组为27．1％,人化组为25．5％。由此表明,人化组及人化荷瘤组鼠也获得了人的体液免疫及细胞免疫功能。结论初步建立人免疫重建的NOD-SCID鼠和人RB皮下移植瘤模型,较好地模拟了有免疫功能情况下人RB的生物学行为,为研究RB肿瘤的发生、发展及其免疫防治提供了一个较为理想的动物模型。     

The human hyaloid system: cell death and vascular regression

The present study had investigated the roles of apoptosis and necrosis in the regression of the human fetal hyaloid vasculature. Normal human fetal hyaloid specimens (n = 67) ranging from 10 to 20 weeks' gestation were studied. Specimens were either immunolabeled with anti-von Willebrand factor and major histocompatibility complex class I antibodies or investigated using the terminal-deoxyribonucleotidyl transferase-mediated dUTP-biotin DNA nick-end labeling technique. A fluorescent DNA-binding dye acridine orange/ethidium bromide mixture was also applied to unfixed flat mounts of hyaloid vasculature and some specimens were processed for transmission electron microscopy. Vascular regression including cell loss in the connecting vessels, stretching and thinning of the vasa hyaloidea propria, tunica vasculosa lentis and the pupillary membrane was clearly evident after 13 weeks' gestation. Cresyl violet staining revealed condensed cells and pyknotic bodies throughout the hyaloid system; cell death occurred either in single cells or along small capillary segments associated with vascular regression. Acridine orange/ethidium bromide staining showed DNA condensation at early and late stages of cell death. Similarly, DNA nick-end labeling was positive in endothelial cells, pericytes and vessel and non-vessel associated hyalocytes. The observation of hyalocytes juxtaposed to cytolysed endothelial cells may indicate a role for these cells in vascular regression. Features of apoptosis were more evident during early vascular regression whilst necrosis was increasingly evident at later stages.     

端粒酶与视网膜母细胞瘤组织病理学特征相关性的初步研究

目的　探讨端粒酶基因 (hTR)和端粒酶催化亚单位基因 (hTRT)在视网膜母细胞瘤 (RB)组织标本中的表达 ,研究端粒酶与RB增殖和分化的关系。方法　应用原位杂交方法检测hTR、hTRT在 37例RB和 2例正常组织标本中的表达 ;并对标本中的增殖细胞核抗原 (PCNA)进行免疫组化染色 ,经过量化 ,作为肿瘤的增殖指数 ;应用SPSS统计软件对各指标进行相关性分析。结果　RB标本中hTR和hTRT的阳性表达分别为 83 8%、89 2 % ,2例正常视网膜组织内的表达均为阴性。hTR、hTRT的表达水平与RB不同的增殖、分化程度的统计学差异均有显著意义 (均P <0 0 5 ) ,RB侵犯视神经情况越严重、分化程度越差 ,hTR、hTRT的表达越强。此外 ,RB的端粒酶hTR、hTRT指标间有一定相关性。结论　RB中端粒酶基因hTR和催化亚单位基因hTRT的高表达可作为判断RB恶性及其程度的新型标记物。hTR、hTRT与RB分化类型、视神经侵犯情况密切相关 ,为端粒酶表达水平反映RB分化程度和增殖能力提供理论依据。端粒酶在RB中的存在为开辟新型临床治疗方法 ,即通过抑制RB细胞端粒酶活性达到治疗目的提供了新思路。     

miR-21对视网膜母细胞瘤细胞增殖的影响及作用机制

目的探讨MicroRNA-21(miR-21)对视网膜母细胞瘤(RB)细胞增殖的影响及作用机制。方法采用Real-time PCR技术检测miR-21在正常视网膜组织和确诊RB组织中的表达情况;然后在转染的基础上运用MTT检查RB细胞存活率、流式细胞仪检测细胞凋亡率。Western blot法检测与细胞凋亡相关蛋白PDCD4、Bax、Bcl-2的表达。结果与正常视网膜组织miR-21表达(0.703±0.071)相比,RB组织miR-21为高表达(2.214±0.162),差异有统计学意义(P<0.01)。在Weri-Rb-1细胞中,与NC组(2.245±0.213)相比,miR-21抑制剂转染后明显降低了miR-21的表达水平,miR-21 inhibitor组为0.683±0.075,差异有统计学意义(P<0.01)。两组细胞转染后24 h、48 h、72 h、96 h,MTT测定法检测细胞活力结果显示:两组24 h的A值比较,差异无统计学意义(P>0.05),miR-21 inhibitor组在48 h、72 h、 96 h的A值均低于NC组,差异均有统计学意义...     

Differential cell adhesion and expression of N-cadherin among retinoblastoma cell lines.

Retinoblastoma (RB) is the most common intraocular childhood cancer, but little is known regarding its cellular biology and the factors that might regulate its progression and metastatic potential. Although alterations in cell-adhesion interactions could contribute to the metastatic behavior of RB, no specific cell-adhesion molecules have been identified in RB cells. The current study examined the adhesive properties of three RB cell lines (Weri-Rb1, Weri-Rb27, and Y79) and determined whether N-cadherin, a specific cell-adhesion protein expressed during normal retinal development, was expressed by these cell lines. This study revealed marked differences in the cell-adhesive properties of the three cell lines with respect to several parameters assayed, including cell morphology, calcium dependence of the cell adhesion, and the presence of N-cadherin. N-cadherin was expressed by human RB cells, but the level of expression, determined both functionally and biochemically, varied among different RB cell lines.