低氧诱导因子-1α的基因克隆

目的克隆低氧诱导因子-lα(HIF-1α)cDNA,为进一步研究HIF-1α基因在肿瘤基因治疗中的作用提供依据。方法从健康成人外周血液中提取总的RNA,利用特异性引物,用两步法进行RT-PCR扩增出约2500 bp的HIF-1αcDNA,与T载体连接后转化感受态细胞DH5α,建立HIF-1α的cDNA克隆。结果RT-PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳,可见一条清晰特异扩增带,长2500 bp;cDNA经酶切鉴定证实为人低氧诱导因子1α基因。结论成功克隆HIF-lαcDNA,为进一步研究HIF-1α奠定了基础。     

低氧对人肺腺癌细胞SPCA-1低氧诱导因子-1α和低氧诱导因子-2α的差异性调控作用

目的探讨低氧对肺腺癌细胞SPCA-1低氧诱导因子-lα(HIF-lα)和低氧诱导因子-2α(HIF-2α)的差异性调控作用及其原因。方法体外培养肺腺癌细胞系SPCA-1细胞在常氧、低氧条件下培养不同时间,采用RT-PCR和Western blot检测低氧对HIF-2α和HIF-lα基因的激活作用。通过加入线粒体活性氧族阻断剂观察低氧对HIF-2α和HIF-lα蛋白表达的影响,探讨其表达调控的机制。结果正常氧条件下,SPCA-1整细胞提取物和细胞核提取物中,HIF-1α几乎不表达,HIF-2α在整细胞提取物中有少量表达,但在细胞核提取物中无明显表达。经低氧(0.5%O2)处理4 h后,HIF-2α和HIF-1α蛋白均明显增多;HIF-2α和HIF-1α蛋白与细胞浓度、氧浓度有关;HIF-1α蛋白在低氧4 h后增加,6 h后显著降低,而HIF-2α蛋白低氧4 h增加后并保持于此水平。HIF-1αmRNA水平在低氧6～12 h时降低,而HIF-2αmRNA表达持续升高;经线粒体活性氧族阻断剂鱼藤酮、二亚苯基碘鎓和粘噻唑菌醇处理4 h后,HIF-2α和HIF-lα蛋白水平明显降低。结论低氧可在肺腺癌细胞诱导HIF-1...     

低氧诱导因子-1α在人脑胶质瘤中的表达及意义

目的 研究低氧诱导因子-1α(HIF-1α).在不同病理级别人脑胶质瘤中的表达情况,探讨其与病理级别问的关系.方法 收集67例人脑胶质瘤标本以及10例行内减压术切除的正常脑组织标本,采用免疫组织化学方法研究HIF-1α在不同病理级别胶质瘤及正常脑组织中的表达情况.结果 HIF-1α阳性表达率在Ⅲ、Ⅳ胶质瘤中显著高于Ⅱ级胶质瘤,分别为72.7%、80.0%、36.0%,在正常脑组织中未见阳性表达,随着病理级别的增高,HIF-1α的表达阳性强度也相应增加(r=0.518).结论 HIF-1α在人脑胶质瘤中存在高度表达,其阳性表达率及表达阳性强度随着病理级别增加而上升.     

低氧诱导因子-1α在溃疡性结肠炎中的表达

目的 探讨低氧诱导因子-1α(HIF-1α)在溃疡性结肠炎(UC)组织中的表达及与疾病活动性的关系.方法 采用免疫组织化学方法检测47例UC患者(活动期35例、缓解期12例)和20例正常对照组中HIF-1α的表达.结果 溃疡性结肠炎患者活动期HIF-1α表达显著高于正常人,差异有显著性(152.27±16.26)vs(193.28±16.65)(P＜0.01),缓解期HIF-1α表达与正常人差异无显著性(185.93±11.80)vs(193.28±16.65)(P＞0.05),溃疡性结肠炎中HIF-1α的表达与Walmsley评分标准有相关性,且呈正相关.结论 HIF-1α作为一种转录因子可能参与了UC的发病过程并与疾病的活动性有关.     

低氧预处理大鼠缺血再灌注脑组织缺氧诱导因子-1α的表达

目的 :探讨低氧预处理对脑缺血再灌注组织缺氧诱导因子 - 1α表达的影响。方法 :SD大鼠 80只随机分为 3组 ,即假手术组 10只 ,缺血再灌注组 35只 ,低氧预处理组 35只。低氧预处理组连续吸入V(O2 ) :V(N2 ) =8:923h作低氧预处理 ,12h后再经插线左大脑中动脉栓塞 (MCAO)作缺血再灌注模型 ,缺血再灌注组不行低氧预处理 ,在大鼠大脑中动脉缺血 3h再灌注后 2h ,6h ,12h ,2 4h ,4 8hTTC法测定脑梗死体积 ,同时采用免疫组织化学方法观察低氧预处理对缺血再灌注大鼠脑组织缺氧诱导因子 - 1α蛋白表达的影响。结果 :与缺血再灌组相比 ,低氧预处理组大鼠的脑梗死体积明显降低 ,缺氧诱导因子 - 1α蛋白的表达增加 ,差异有统计学意义 (P <0 .0 5 )。结论 :低氧预处理对脑缺血再灌注有明显的保护作用 ,缺氧诱导因子 - 1α表达增加可能是其机制之一     

低氧诱导因子-1α对成骨细胞功能的调控作用

目的 探讨低氧诱导因子-1α(HIF-1α)对成骨细胞增殖、分化和矿化功能的影响. 方法 分别在21%和2%O2浓度下培养成骨细胞,21%O2 培养24 h和2%O2培养6、12、24 h后分别检测成骨细胞表达HIF-1α、血管内皮生长因子、核结合因子a1、骨钙素的水平,检测成骨细胞增殖率、分泌碱性磷酸酶情况以及钙结节形成情况. 结果 与21%O2培养相比,2%O2浓度下,成骨细胞在mRNA和蛋白水平HIF-1α表达均上升,同时成骨细胞表达血管内皮生长因子、核结合因子a1、骨钙素的水平逐渐升高;成骨细胞增殖率增加,分泌碱性磷酸酶的能力以及钙结节形成能力也逐渐增强. 结论 在2%O2浓度下24 h内,HIF-1α能促进成骨细胞增殖、分化和矿化,从而促进成骨细胞的成骨功能.     

低氧诱导因子-1α对成骨细胞功能的调控作用

目的探讨低氧诱导因子-1α(HIF-1α)对成骨细胞增殖、分化和矿化功能的影响。方法分别在21%和2%O2浓度下培养成骨细胞,21%O2培养24 h和2%O2培养6、12、24 h后分别检测成骨细胞表达HIF-1α、血管内皮生长因子、核结合因子a1、骨钙素的水平,检测成骨细胞增殖率、分泌碱性磷酸酶情况以及钙结节形成情况。结果与21%O2培养相比,2%O2浓度下,成骨细胞在mRNA和蛋白水平HIF-1α表达均上升,同时成骨细胞表达血管内皮生长因子、核结合因子a1、骨钙素的水平逐渐升高;成骨细胞增殖率增加,分泌碱性磷酸酶的能力以及钙结节形成能力也逐渐增强。结论在2%O2浓度下24 h内,HIF-1α能促进成骨细胞增殖、分化和矿化,从而促进成骨细胞的成骨功能。     

低氧诱导因子-1α对毛囊细胞的作用

目的探讨外源性人低氧诱导因子-1α（HIF-1α）在成纤维细胞中表达的可行性及其对毛囊周围细胞活性的影响。方法通过脂质体将含有HIF-1αcDNA的真核表达载体pcDNA3.0稳定转染成纤维细胞,应用RT-PCR及Westernblot方法检测HIF-1α在成纤维细胞中的表达,ELISA法检测转染细胞上清液中血管内皮细胞生长因子（VEGF）的表达,RT-PCR方法检测转染后细胞中成纤维细胞生长因子（bFGF）的表达。将该上清加入成纤维细胞及真皮鞘细胞中,MTT法检测加入上清后成纤维细胞及真皮鞘细胞活性。结果RT-PCR及Westernblot可检测出转染后细胞中HIF-1α的表达,MTT检测加入转染上清后成纤维细胞及真皮鞘细胞活性增强（P〈0.05）,并且该上清液VEGF的表达显著高于未转染组（P〈0.01）。转染后成纤维细胞的bFGF的mRNA表达显著高于未转染组（P〈0.01）。结论应用脂质体能够成功地将外源性人HIF-1α基因转染成纤维细胞,并进行有效表达,其表达的HIF-1α可增强细胞活性且可诱导转染细胞上清液中VEGF的表达,并增加bFGF的mRNA表达,且转染细胞上清可增强成纤维细胞及真皮鞘细胞活性。推测HIF-1α通过其下游因子VEGF及bFGF促进毛囊相关细胞的活性,为HIF-1α对毛囊作用的进一步研究打下了基础。     

低氧诱导因子-1α在大鼠脑缺血耐受中的表达

目的 探讨脑缺血耐受中低氧诱导因子-1α（HIF-lα）的表达。方法84只Wistar大鼠随机分成对照组（SS＋SS组,4只）,假手术组（SS＋MCAO组,40只）和缺血预处理组（IP＋MCAO组,40只）。线栓法阻塞大脑中动脉建立缺血预处理模型,分别于预缺血后1、3、7、14、21 d再缺血2 h,然后取脑经苏木精-伊红染色后光镜下进行病理观察,免疫组化方法检测脑组织HIF-1α蛋白的表达。结果 IP＋MCAO组中1、37、d的HIF-1α蛋白表达水平与SS＋MCAO组中相应时间点比较,差异具有显著性（t=2.449～9.898,P〈0.05）。结论 HIF-1α在脑缺血耐受中表达上调,可能是导致脑缺血耐受的分子机制之一。     

低氧诱导因子-1α在缺血和缺血/再灌注后大鼠心肌中的免疫组化表达型式

目的观察在心肌缺血和缺血/再灌注时大鼠心肌有无低氧诱导因子-1α(HIF-1α)表达及其表达的时-空间型式。方法选取220～280 g健康Wistar大鼠48只,随机分为3组:①正常对照组;②单纯缺血组;③缺血/再灌注组。利用免疫组织化学技术检测各组心肌HIF-1α的表达。结果正常对照组大鼠心肌组织未见HIF-1α表达。单纯缺血组大鼠心肌组织在缺血2 h即有HIF-1α的阳性表达,缺血12 h表达面积及强度达到最高,缺血24 h又有所下降。大鼠心肌组织中HIF-1α在细胞核及细胞浆中均有表达。在心肌缺血组大鼠心肌中的HIF-1α表达常呈区域性分布,与阴性表达区常有较明显的界限。缺血/再灌注组大鼠心肌组织在缺血45 min/再灌注1 h后即有HIF-1α表达,再灌注3 h后表达面积达到高峰,再灌注5 h又略有下降。单纯缺血组和缺血/再灌注组大鼠心肌组织的HIF-1α最高表达量差异无统计学意义。缺血/再灌注组大鼠心肌中的HIF-1α表达部位也呈区域性分布。结论心肌缺血或缺血/再灌注后大鼠心肌均有HIF-1α的表达,二者表达的时间过程相似,均在数小时内即达到高峰,且表达量差异无统计学意义;HIF-1α在细胞核及细胞浆中均有表达,在心肌组织中的表达常呈区域性分布,与阴性表达区常有较明显的界限,提示只在缺血部位有表达。     

缺血再灌注损伤后大鼠视网膜细胞凋亡与低氧诱导因子1α表达的关系

目的研究缺血再灌注损伤后大鼠视网膜细胞凋亡与低氧诱导因子1α（HIF-1α）的表达变化并探讨两者的相关性。方法雄性SD大鼠随机分为正常对照组和缺血再灌注损伤1 d、3 d和5 d组（n=6）。眼前房灌注生理盐水调节大鼠眼压至110 mmHg并持续50 min,制作实验性视网膜缺血再灌注损伤模型。制备视网膜切片,测量内网层（IPL）、内核层（INL）厚度及节细胞层（GCL）细胞数;采用DNA原位末端标记（TUNEL）法检测视网膜凋亡细胞;免疫组织化学染色观察损伤后不同时间HIF-1α在视网膜细胞中的表达;采用RT-PCR检测HIF-1αmRNA的表达。结果缺血再灌注损伤1 d、3 d和5 d组大鼠的IPL和INL厚度显著小于正常对照组（P〈0.01）,GCL细胞少于正常对照组（P〈0.05）。视网膜细胞凋亡位于GCL;缺血再灌注损伤1 d、3 d和5d组的细胞凋亡率均明显高于正常对照组,差异有统计学意义（P〈0.01）。缺血再灌注损伤1 d、3 d、5 d组视网膜GCL的HIF-1α蛋白表达阳性细胞比例分别为（47.88±14.71）%、（50.28±13.11）%、（43.09±10.04）%,与视网膜细胞凋亡率呈正相关（r=0.953）。缺血再灌注损伤3 d组视网膜细胞HIF-1αmRNA表达明显高于正常对照组（P〈0.05）。结论缺血再灌注后大鼠视网膜细胞凋亡与HIF-1α的表达均增加,两者呈正相关;HIF-1α的表达可能参与视网膜细胞凋亡。     

C-反应蛋白抑制缺氧状态下人脐静脉内皮细胞表达低氧诱导因子-1α

目的 研究C-反应蛋白(C-reactive protein,CRP)对低氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)表达的影响。方法 利用COCl₂(浓度为100μmol/L)模拟缺氧环境,使其分别与4个试验组的CRP(浓度分别为5,10,50,100μg/ml)同时作用于脐静脉内皮细胞,以仅加CoCl₂(100μmol/L)组为对照;同时设空白对照组。刺激24h后提取蛋白。用Western-blotting半定量检测HIF-1α的蛋白表达量,数据用SPSS11.0软件进行统计分析。结果 CRP在5μg/ml水平即减少HIF-1α表达(P<0.001),在100μg/ml水平达到最大作用,其作用效果呈剂量反应关系(P<0.001)。结论 CRP抑制缺氧状态下人脐静脉内皮细胞表达HIF-1α。此结果证实CRP直接作用于血管,抑制缺氧组织血管新生。     

低氧诱导因子-1α对大肠癌作用的研究进展

研究表明,多数恶性肿瘤中存在显著的缺氧区域,而缺氧可促使低氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1 alpha ,HIF-1α)的表达,其表达可使肿瘤细胞适应缺氧环境,并促进新生血管的生成,为肿瘤的侵袭和转移创造条件[1].     

低氧诱导因子-1α与阿尔兹海默症

阿尔兹海默症(Alzheimer's disease,AD)是伴有痴呆症的神经性退行性疾病最常见的形式.由β淀粉样蛋白(Aβ)组成的老年斑和由异常过度磷酸化Tau蛋白聚集形成的神经原纤维缠结是AD的两大神经病理学变化.低氧诱导因子-1α(HIF-1α)是缺氧相关病理变化的关键分子.该文综述不同类型缺氧调控HIF-1α及...     

低氧诱导因子-1α表达与胰腺癌增殖和凋亡的关系

①目的　研究胰腺癌组织中低氧诱导因子 1α(HIF 1α)的表达与胰腺癌增殖和凋亡的关系。②方法应用免疫组织化学方法 ,检测 4 7例胰腺癌和 1 0例正常胰腺组织中HIF 1α、增殖细胞核抗原 (PCNA)及Bcl 2蛋白的表达。③结果　 4 7例胰腺癌组织HIF 1α表达阳性率为 5 5 .3% ,1 0例正常胰腺组织均呈阴性表达。HIF 1α阳性表达率在有周围脏器浸润的胰腺癌组织中为 6 6 .7% ,无浸润者为 35 .3% ,二者间有显著性差异 (χ2 =4 .32 ,P <0 .0 5 ) ;伴淋巴结和远隔脏器转移的胰腺癌组织HIF 1α阳性表达率为 72 .0 % ,高于无转移者的 36 .4 % ,其差异有显著意义 (χ2 =6 .0 1 ,P <0 .0 1 )。HIF 1α阳性表达率与胰腺癌的大小、组织学分级和 1年生存率无关 (χ2 =2 .0 7～ 2 .5 2 ,P >0 .0 5 )。在 4 7例胰腺癌组织中高增殖活性 2 8例、低增殖活性 1 9例。 1 0例正常胰腺的腺胞均呈低增殖状态。胰腺癌细胞增殖程度与胰腺癌淋巴结或远处脏器转移及病人术后生存时间均密切相关 (χ2 =5 .98、6 .1 9,P <0 .0 5 ) ;而与胰腺癌的大小、分化程度和浸润无关 (χ2 =2 .0 1～ 3.74 ,P >0 .0 5 )。 1 0例正常胰腺癌组织Bcl 2蛋白均呈阳性表达 ,4 7例胰腺癌组织中Bcl 2蛋白的阳性表达率为 2 9.8%。Bcl 2蛋白表达与胰腺癌的大小、     

低氧诱导因子-1研究进展

低氧诱导因子-1(HIF-1)是机体的一种重要转录因子,其表达和活性受到细胞氧浓度的严密调控。它通过控制血管生成来调节氧的运输能力,通过调控糖酵解作用来增强机体对低氧的耐受。肿瘤的生长和血管生成与HIF-1的表达紧密相关,抑制HIF-1活性可能是治疗癌症的一种途径。另外,对HIF-1表达水平的药理学控制,可能也是治疗慢性肺疾患、脑缺血和心肌缺血等疾病的一种新思路。     

低氧诱导因子-1α在小鼠次级骨化中心形成中的表达

目的研究低氧诱导因子-1α(HIF-1α)在小鼠肢体次级骨化中心形成阶段的时空表达规律,并探讨其在长骨次级骨化中心发生和发育过程中的作用。方法解剖镜下整体观察股骨次级骨化中心的发生、发展过程;以地高辛标记的HIF-1αcRNA为探针,采用组织切片原位杂交技术,观察HIF-1αmRNA在次级骨化中心形成阶段的时空表达规律;通过免疫组织化学法观察HIF-1α蛋白在次级骨化中心形成中的表达及分布。结果出生6d,在股骨髁部见到不透光的骨化影,提示次级骨化中心开始出现;其后不透光影在股骨髁内不断膨大。原位杂交显示,出生6d时股骨髁中心出现小片状荧光增强区,出生8d时荧光增强区呈放射样扩大,表示HIF-1αmRNA有大量表达。免疫组织化学法显示,出生6d时股骨髁中心少量HIF-1α蛋白表达,出生8d时次级骨化中心的细胞核内出现大量HIF-1α蛋白表达,之后很快消失。结论HIF-1α在次级骨化中心发育中呈规律性的时空表达,提示其可能参与小鼠长骨次级骨化中心形成的骨发育过程。     

低氧诱导因子-1α对缺血性脑卒中严重程度和预后的影响

目的：：观察血浆低氧诱导因子-1α(HIF-1α)浓度对缺血性脑卒中患者严重程度和预后的影响。方法：采用ELISA法检测80例缺血性脑卒中患者血浆HIF-1α的浓度,并分别于治疗第1d和第14d采用NIHSS量表评价患者的神经功能缺损评分。结果：低HIF-1α组患者缺血性脑卒中的严重程度轻于高HIF-1α组(P＜0.05),预后好于高HIF-1α组(P＜0.05)。Logistic回归分析显示,血浆HIF-1α浓度是影响缺血性脑卒中患者预后的独立危险因素(P＜0.05)。结论：HIF-1α对缺血性脑卒中严重程度和预后均有重要影响。监测缺血性脑卒中患者血浆HIF-1α浓度,可作为判断缺血性脑卒中严重程度、评价神经功能恢复情况、评估疾病预后新的参考指标。     

严重烫伤大鼠肝脏热休克蛋白90α的表达变化及意义

目的 研究严重烫伤早期大鼠肝脏组织中糖皮质激素受体分子伴侣热休克蛋白90α(HSP90α)的表达变化及意义。方法 用免疫印迹技术分析严重烫伤后不同时相肝脏组织中HSP90α的表达量改变，通过免疫组化进一步观察HSP90α在肝细胞胞核中的表达变化。结果 大鼠严重烫伤后72h内肝脏HSP90α的表达明显升高，尤其以12～48h更为显著，在48h左右肝细胞核内还出现HSP90α的异位高表达。结论 严重烫伤可以引起肝脏HSP90α异常高表达，这可能是严重创伤早期糖皮质激素受体表达和功能发生改变的原因之一。     

低氧诱导因子-1α、促红细胞生成素在血管性痴呆大鼠海马的表达

目的 观察低氧诱导因子-1α（HIF-1α）和促红细胞生成素（EPO）在大鼠血管性痴呆（VD）形成过程中的动态表达规律,探讨VD发生的可能机制。方法 采用大鼠双侧颈总动脉永久性阻断法（2-VO）建立VD动物模型,应用Y型水迷宫实验测定动物的学习记忆能力,采用免疫组化法检测大鼠海马CA1区HIF-1α和EPO蛋白的表达．结果 ①随缺血时间的延长,痴呆组大鼠学习记忆能力进行性下降（P〈0．05）;②痴呆组大鼠海马CA1区HIF-1α、EPO的表达于缺血1周时最明显,此后缓慢下降,但与假手术组比较仍处于较高水平（P〈0．01）;③痴呆组大鼠两蛋白表达与学习记忆能力呈高度正相关（P〈0．01）。结论 HIF-1α和EPO参与了VD的发生发展过程,并可能在此过程中通过HIF—UEPO缺氧信号转导途径发挥了保护作用。