损伤血管内膜增生的研究

血管损伤后内膜增生（IH）是血管外科重建、血管腔内治疗术后发生狭窄或闭塞的主要原因，也是血管外科长期以来拯待解决的难题。有关的研究一直是血管外科临床和基础研究的重点。     

S型血管搭桥术对血管内膜增生的影响

作者采用犬自体颈外静脉S型重建颈总动脉,并与60°搭桥术作比较,探索两种血管搭桥术对血管内膜增生的影响.术后2个月,肉眼可见血管壁增厚、管腔狭窄;搭桥的主体动脉远心端组织切片显示不同搭桥方法对血管内膜增生的影响有明显区别,S型搭桥后血管内膜增生程度明显小于60°搭桥.     

选择性清除单核／巨噬细胞对血管损伤后内膜增生影响的研究

目的应用脂质体输送系统选择性清除单核／巨噬细胞，探讨血管损伤后抑制内膜增生的有效途径。方法采用反相蒸发技术将clodronate用脂质体包裹，在36只大鼠颈动脉损伤模型前1d、损伤后6d，分别尾静脉注射15mg／kg体重的脂质体包裹clodronate（112组。12只）、clodronate溶液（FC组，8只）、等量生理盐水（saline组，9只）或等量空脂质体（EL组，7只），14天后颈总动脉切片行HE、VG染色，用图象分析软件测定颈动脉管腔面积、增生内膜面积、中膜面积，并计算增生内膜与中膜面积比值（N／M）、管腔狭窄率（％）。另取10只大鼠尾静脉注射荧光标记的脂质体包裹clodronate（5只）或等量荧光标记的空脂质体（5只），颈总动脉损伤后1天下腔静脉抽血分离白细胞，并取颈总动脉、肝脏、脾脏，冰冻切片后在激光扫描共聚焦显微镜下观察荧光物质分布。结果包裹、未包裹clodronate的脂质体、罗丹明标记脂质体的平均直径分别为（213±20）nm、（（198±14）nm、（209±19）nm，包裹率17．6％-19．0％，脂质体中clodronate浓度（7．6±1．1）mg／ml；各组大鼠损伤动脉内膜均有明显增生，但LC组血管内膜增生明显较其它3组明显减轻，表现为N／M、管腔狭窄率（％）明显低于其它3组相应值（P〈0．01）；FC组或EL组对血管内膜增生无明显影响（与saline组比，P〉0．05）。各组间颈总动脉中膜面积无明显差别。尾静脉注射荧光标记脂质体48h后，大鼠左颈总动脉、静脉血中白细胞、脾脏、肝脏中可以发现单核／巨噬细胞中有荧光标记物积聚，其中LC组大鼠上述组织中荧光标记物较EL组者明显减少，表明脂质体包裹clodronate可明显减少体内单核／巨噬细胞数量。结论通过clodronate的脂质体输送系统将巨噬细胞暂时灭活、清除，可以预防血管损伤后的血管再狭窄。     

抗子宫内膜抗体和子宫内膜异位症

目的：研究抗子宫内膜抗体与子宫内膜异位症的关系。方法：改良法提取，纯化正常人及内异症患者的子宫内膜抗原，分析其氨基酸组成，并用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ及Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ分析两者蛋白质组成及抗原特异性，建立ＥＬＩＳＡ方法并测定，分析正常人及内异症患者血清ＥＭＡｂ。     

Am80抑制血管内皮细胞增殖和血管新生内膜形成的机制研究

目的:探讨维甲酸衍生物Am80抑制血管内皮细胞增殖和大鼠颈总动脉内皮剥脱术后新生内膜增生的机制。方法:用不同浓度Am80处理EA-hy926细胞24 h后,应用细胞计数和MTS细胞活力分析检测细胞的增殖情况;将Am80处理的细胞进行PI染色,用流式细胞术检测细胞周期的变化情况;通过real-time PCR方法分析Am80处理后EA-hy926细胞中cyclin B1、P21和基质金属蛋白酶(MMP)-2表达的变化;制备SD大鼠颈总动脉内皮球囊损伤模型,通过HE和免疫组化染色方法,观察Am80对球囊损伤后新生内膜形成的影响。结果:细胞计数和MTS细胞活力分析结果显示,Am80以浓度依赖性方式抑制EA-hy926血管内皮细胞增殖;流式细胞分析显示,Am80可使EA-hy926细胞周期停滞在G2/S期;real-time PCR结果表明,Am80处理后,EA-hy926细胞中P21表达上调,cyclin B1和MMP-2表达水平降低;内皮损伤动物模型结果显示,Am80处理后新生内膜的形成受到显著抑制。结论:Am80可通过促进P21而抑制cyclin B1表达,从而抑制血管内皮细胞增殖和血管新生内膜的形成。     

IGF-1 R抗体对血管损伤后新生内膜增生的影响

目的观察胰岛素样生长因子-1(IGF-1)R抗体体内局部干预对动脉粥样硬化大鼠血管损伤后新生内膜增生的抑制作用。方法建立动脉粥样硬化大鼠颈动脉球囊损伤模型,随机分成三组。损伤术后,分别将缓冲液、对照抗体和IGF-1R抗体作用于大鼠损伤血管壁,观察三者对术后不同时期新生内膜增生、细胞增殖的影响,以及对血管平滑肌细胞功能状态的影响。结果经IGF-1R抗体干预后,与给予缓冲液和对照抗体干预相比:各时期内膜/中膜面积比显著降低(P<0.01);损伤后早期,VSMC增殖率明显下降(P<0.01);损伤后期,电镜下可见到较多的凋亡细胞。结论IGF-1R抗体可以抑制损伤后新生内膜增生,减少再狭窄发生率,并可抑制损伤后早期VSMC的增殖。     

tPA基因局部定位转染抑制兔动脉损伤后内膜增生的研究

目的: 观察局部转染组织型纤溶酶原激活物 (tPA)基因, 对手术损伤兔右髂外动脉后内膜增生的影响并探讨可能的机制。方法: 采用显微外科手术方法, 建立兔右髂外动脉损伤模型。将 105只新西兰大白兔随机分为 3组, 每组 35只。A组为生理盐水对照组, B组为脂质体介导的pBudCE4. 1转染组, C组为脂质体介导的pBudCE4. 1 /tPA转染组。用微注射器将各种转染液注入损伤的血管壁, 每组按实验终点(术后 2、3、7、14、28d)再分为 5个亚组, 每个亚组 7只兔。于术后各实验终点, 取损伤段的血管用于病理学检查、电镜观察、RT PCR和免疫组化染色检查。结果: 与A组和B组相比较, 术后各时间点C组血管内膜的厚度、内膜的面积和血管腔的狭窄率均显著减小 (P<0. 01)。术后 28d时, C组血管腔的狭窄率比A组和B组分别降低了 51. 5%和54. 2%。术后各时间点, C组血管壁的tPAmRNA的表达量明显高于A组和B组(P<0. 01), 在术后 7d到达高峰, 并持续到 28d。扫描电镜观察显示, C组的血管壁只见少量血小板附着, 未见血栓形成; 而A组和B组的血管壁可见大量血小板黏附聚集, 且有血栓形成。免疫组化染色显示, C组的血管壁血小板源性生长因子(PDGF)阳性细胞的百分率明显低于A组和B组(P<0. 01)。A组和B组之间相比较, 以上数据差异无显著性(P>     

不孕不育者抗精子抗体和抗子宫内膜抗体检测分析

采用ELISA方法检测140例不孕者宫颈粘液和血液的抗精子抗体（AsAb)及血液中的抗子宫内膜抗体（EMAb),阳性率29．66％、20．71％、42．37％,对照组阳性率3．75％、20％、10％。经统计学卡方检验宫颈粘液中AsAb及血液中EMAb两组间存在显著差异。表明抗精子抗体和抗子宫内膜抗体是引起不孕的重要免疫因素,局部的AsAb检测比血液中检测有临床价值。     

自体静脉移植血管的内膜增生—形态计量学研究

作者采用图像分析技术,测量了自体静脉移植术后4周和24周时移植血管增生内膜的厚度,并与正常静脉的内膜厚度和正常动脉的内膜中膜厚度作比较.结果显示,自体静脉移植术后4周发生了明显的内膜增生,但4周和24周时移植血管增生内膜的厚度无显著差别(P>0.05),即表现为内膜增生在相当一段时间内保持稳定;增生的内膜厚度没有达到动脉的内膜中膜厚度,两者占血管壁厚度的比例亦有很大差别(P<0.01).     

骨桥蛋白在血管重塑中的作用

以往认为骨桥蛋白的主要作用是参与骨形成,近年来发现其在心血管系统特别是血管重塑过程中发挥重要调节作用.其作用将为临床治疗PTCA后再狭窄、高血压及动脉粥样硬化等引起的血管重塑提供新的策略.     

氟伐他汀抑制球囊损伤后兔的血管内膜增殖

目的：探讨兔髂动脉急性损伤后，氟伐他汀对血管内膜增殖的抑制作用及机制。 方法： 给新西兰大耳白兔行右髂动脉球囊导管内膜剥脱术，术后灌胃予氟伐他汀（8 mg·kg-1·d-1）治疗28 d，术前、术后3 h及3 d用放射免疫法测定血清中内皮素-1、血栓素A2和前列环素浓度；28 d后HE染色观察血管内膜增生情况，免疫组织化学方法检测细胞外基质的变化。结果： ① 兔髂动脉急性损伤后血清内皮素-1及血栓素A2浓度即明显增加，前列环素水平则显著下降；氟伐他汀治疗显著抑制内皮素-1和血栓素A2的升高；提高血清前列环素的水平；② 氟伐他汀治疗减轻了内膜TGF-β1的过度表达及细胞外基质（FN、LN）的沉积；③ 氟伐他汀显著抑制了内膜的增殖和肥厚。结论：氟伐他汀治疗抑制血管损伤后血栓的形成，减轻了内膜的增殖及内膜中细胞外基质的沉积。     

反义凝血酶受体基因表达抑制大鼠动脉内膜损伤后内膜增生

目的 了解凝血酶及其受体在血管损伤后动脉内膜增生中的作用,以进一步阐明经皮冠状动脉血管腔内成形术（PTCA）后再狭窄的发生机制,为寻找再狭窄的防治途径提供线索。方法 采用球囊导管损伤动脉内膜的方法建立大鼠颈动脉球囊损伤模型。用纳米粒子包装凝血酶受体重组反义基因质凿pLXSN/ATR,用保护灌注的方法局部定位转染损伤后的大鼠颈动脉。结果 PCR检测发现重组基因整合,RNA斑点杂交观察到实验组大鼠颈动脉壁内有重组反义凝血酶受体基因表达,正义凝血酶受体基因的表达受到明显抑制,反义基因转染组新生内膜,中膜比例降低了40．9％。结论 反义凝因酶受体重组基因转基因表达对大鼠颈动脉球囊损伤后动脉内膜的增生具有抑制作用,提示凝血酶及其受体在PTCA后再狭窄过程中有重要作用,为再狭窄的防治提供了新的线索。     

内皮祖细胞移植对血管内膜修复的影响

目的： 从脾源性单个核细胞中分离并扩增血管内皮祖细胞（EPCs）,研究EPCs移植对血管损伤后内膜修复的影响。 方法: 大鼠脾源性单个核细胞贴壁培养法定向扩增EPCs，检测其内皮细胞特性。荧光标记EPCs从尾静脉移植到颈动脉内皮损伤的大鼠体内。 结果: 脾源性单个核细胞体外可诱导出内皮祖细胞，表现为表达内皮细胞特异性标志。移植后，EPCs可归巢至血管损伤部位。EPCs移植组在球囊损伤2周后血管新生内膜明显减少，血管腔狭窄程度显著减轻。EPCs移植组新生内膜/中膜比值显著低于单纯球囊损伤组及M199组(0.82±0.09 vs 1.52±0.21, 1.48±0.19,P＜0.01)。EPCs移植组PCNA 阳性表达细胞明显少于单纯球囊损伤组及M199组（19.25±3.96 vs 31.42±5.23, 29.37±3.16, P＜0.05）。 结论: EPCs能有效移植到内皮损伤血管段，参与损伤血管的内膜修复过程。     

外源性野生型P16ink4a基因在兔损伤动脉壁的表达

目的：研究转染外源性野生型Ｐ１６＾ｉｎｋ４ａ基因逆转录病毒重组质粒对兔颈总动脉壁损伤后再狭窄形成的抑制作用。方法：构建野生型Ｐ１６＾ｉｎｋ４ａ基因的复制缺陷型逆转录病毒重组质粒,经包装细胞包装后取得高滴度病毒液,并以此病毒转染后即刻的兔颈总动脉。应用膜杂交和原位杂交技术检测损伤动脉壁的外源性Ｐ１６＾ｉｎｋ４ａ基因表达,并通过病理学等方法观察动脉内膜增生情况及管腔狭窄程度,结果：逆转录病毒重组质粒可     

移植不同年龄大鼠骨髓EPCs对损伤内膜增殖的影响

目的： 观察移植不同年龄大鼠骨髓EPCs对损伤血管内膜增殖的影响。方法：选取4月龄SD雄性大鼠30只，建立大鼠颈动脉球囊损伤模型，均分成接受4月龄大鼠骨髓EPCs移植组、接受18月龄大鼠骨髓EPCs移植组和对照组。于接受移植后14 d处死大鼠，颈动脉切片观察不同年龄大鼠骨髓EPCs对损伤血管内膜增殖的影响。结果：接受EPCs移植的大鼠损伤内膜增殖少于非移植组，接受4月龄大鼠骨髓EPCs移植组较接受18月龄大鼠骨髓EPCs移植组内膜增殖也明显减轻。结论：外源性EPCs可减轻损伤血管内膜增殖，且供体年龄对EPCs功能有影响，随供体年龄增加，减弱损伤内膜增殖功能减退。     

论海绵窦部硬脑膜的移行

目的 研究海绵窦部硬脑膜的移行及相关脑神经的走行，建立一个基本的模型，更好的理解该局部的结构。方法 选择20个经福尔马林固定的成人头颅，打开颅盖，切除部分脑组织，保留完好颅底结构，进行观察。结果 海绵窦是位于蝶鞍两侧的硬膜间隙，在该间隙内附有一层完整的内膜，围成一个封闭的腔，所有海绵窦的出、入口，皆应为静脉通路。结论 关于海绵窦的各种学说都是在硬脑膜和内膜的基本模型上衍生而成的。     

外源性野生型P16ink4a基因在兔损伤动脉壁的表达

目的:研究转染外源性野生型P16^ink4a基因逆转录病毒重组质粒对兔颈总动脉壁损伤后再狭窄形成的抑制作用。方法:构建野生型P16^ink4a基因的复制缺陷型逆转录病毒重组质粒,经包装细胞包装后取得高滴度病毒液,并以此病毒转染损伤后即刻的兔颈总动脉。应用膜杂交和原位杂交技术检测损伤动脉壁的外源性P16^ink4a基因表达,并通过病理学等方法观察动脉内膜增生情况及管腔狭窄程度。结果:逆转录病毒重组质粒可有效地将外源基因P16^ink4a转入兔体内动脉壁并在其中表达。P16^ink4a基因转染组动物的损伤动脉壁内膜平滑肌细胞增生(11.80±3.54vs25.20±5.12,P＜0.05)和管腔狭窄程度(50.2%±9.60%vs82.2%±12.83%,P＜0.05)均显著低于对照组。结论:体内转染外源性野生型抑癌基因P16^ink4a可有效抑制动脉损伤后再狭窄的形成。     

抗人基质金属蛋白酶-2的单抗制备及功能研究

目的在体外原核表达MMP-2纤维连接蛋白样片段(MFD),制备抗MMP-2特异性的单克隆抗体(McAb),以期得到能够有效抑制MMP-2活性的单抗。方法运用原核表达的MFD蛋白纯化浓缩后免疫BALB/C小鼠,尾静脉加强后取脾细胞融合,ELISA法筛选阳性克隆,制备腹水。运用Westernblotting对抗体进行鉴定,并观察抗体与天然MMP-2的反应情况,进行亚型鉴定,组织特异性鉴定同时进行功能实验增殖实验、侵袭实验以及体外血管新生实验。结果小鼠脾细胞与杂交瘤细胞融合后筛选获得一株持续分泌单克隆抗体的细胞株,命名为SZ-117。ELISA法测定上清和腹水效价分别为2×10-3和2×10-5。抗体为IgG1亚型,可以与天然的MMP-2相结合,与血细胞表面没有交叉反应。免疫组化提示胃、胆囊、脾脏、卵巢、前列腺、输卵管以及淋巴结的间质中都有阳性表达,而在甲状腺、小肠、肝脏等组织器官未见阳性表达。该抗体可以有效地抑制血管内皮细胞株Eahy926细胞以及胰腺癌细胞株1990细胞的侵袭行为,同时还可以抑制Eahy926细胞在体外的血管生成。结论抗MMP-2特异性抗体的获得为MMP-2测定提供了一个有效工具,并且该抗体还可以有效地抑制内皮细胞在体外的血管生成和肿瘤细胞的侵袭行为,有望成为一种新的抗肿瘤物质。     

表面磁性膜医用316L不锈钢支架对兔髂动脉内膜增殖的影响

目的 研究表面磁性膜医用316L不锈钢支架对新西兰大白兔髂动脉新生内膜增殖的影响.方法 通过动物体内支架植入,采用定量冠脉造影、光学显微镜图像技术观察不同支架对新生内膜增殖和再狭窄的影响.结果 与普通裸支架相比,表面磁性膜支架可以抑制支架植入后的新生内膜增殖和再狭窄,植入3月后应用表面磁性膜支架和普通裸支架的管腔面积分别为(2.78±0.40)mm2和(2.07±0.62)mm2,再狭窄率分别为3.3%和16.7%,且可能与磁场强度相关.结论 表面磁性膜支架对经皮冠状动脉介入治疗术后的再狭窄可能具有防治作用.