一种热稳定人成纤维细胞生长因子突变体原核表达及活性鉴定

目的原核系统可溶性地表达一种热稳定性的人角质细胞生长因子-2（human keratinocyte growth factor-2,hKGF-2）并鉴定其生物活性。方法通过重叠PCR方法进行定点突变,从人胎肝cDNA文库中获得编码人KGF-2突变体的核酸序列并克隆至原核表达载体pBV220进行诱导、表达和纯化。分别检测重组KGF-2及其突变体重组蛋白的生物活性和室温条件下的稳定性。结果 KGF-2及其突变体具有相同的促Hep-2细胞的增殖能力。室温状态下48 h内,rhKGF-2出现明显降解现象而rhKGF-2突变体几乎没有出现降解,表现出强的热稳定性。结论 KGF-2突变体具有天然KGF-2的生物活性,但其热稳定性明显优于天然KGF-2蛋白,为进一步研究KGF-2的结构和功能奠定了一定的基础。     

人胰岛素样生长因子1突变体的构建,表达及其鉴定

目的：根据胰岛素样生长因子１（ＩＧＦ１）的三维结构及其与ＩＧＦ结合蛋白３（ＩＧＦＢＰ３）的结合位点,构建ＩＧＦ１突变体。方法：以合成的人ＩＧＦ１基因为模板,利用体外定点突变技术,获得［Ｔｙｒ＾１５,Ｌｅｕ＾１６］ＩＧＦ１突变基因,在大肠杆菌中进行表达,重组蛋白经纯化、复性后,还采用蛋白免疫印迹分析、荧光光谱分析和生物活性测定进行验证。结果与结论：成功地构建并表达了ＩＧＦ１突变体,［Ｔｙｒ＾１５,Ｌ     

成纤维细胞生长因子10对人角朊细胞表达GM-CSF的刺激作用

研究FGF 10对角朊细胞表达GM CSF的作用 ,以探讨FGF 10促进创面愈合的机制。按FGF 10的浓度分为 4、16、12 5和5 0 0ng/ml四组 ,细胞接种密度为低密度 (2 5 0 0细胞 /cm2 )和高密度 (5 0 0 0细胞/cm2 )两种 ,分别于FGF 10作用后 2 4、48和 72h收集细胞培养液上清并进行细胞计数 ,测定GM CSF的含量。结果显示 ,低密度接种时 ,2 4h收集的各组上清中均未能检测到GM CSF,48h上清中的12 5ng/ml和 5 0 0ng/mlFGF 10组GM CSF的浓度及单个细胞的GM CSF的分泌均显著高于阴性对照组(P <0 0 5 )。 72h的培养上清中仅5 0 0ng/mlFGF 10组GM CSF的分泌量显著高于对照组 (P<0 0 5 )。高密度接种时 ,2 4h的上清中 16、12 5、5 0 0ng/ml的FGF 10各组GM CSF浓度显著高于对照组 (P<0 0 5 ) ,但单个细胞GM CSF的分泌无显著性变化 (P >0 0 5 ) ,48h的培养上清中 ,FGF 10各组的GM CSF均未升高 ,且 48h各组单个细胞GM CSF的分泌与细胞总数呈负相关 (r2 =0 881,P <0 0 5 )。结果提示FGF 10可能通过刺激GM CSF的分泌来促进创面肉芽组织形成。     

人酸性成纤维细胞生长因子双抗体夹心测定方法

用纯化的人酸性成纤维细胞生长因子（ｈａＦＧＦ）免疫家兔，获得了兔抗ｈａＦＧＦ血清。另从含ｈａＦＧＦ单克隆抗体的小鼠腹水中纯化了ＩｇＧ。用纯化的单抗ＩｇＧ和多抗血清建立了ｈａＦＧＦ的双抗体夹心测定方法，检测水平可达０．２５ｎｇ／ｍｌ。用此方法测定了Ｎ端截断型ｈａＦＧＦ和牛酸性成纤维细胞生长因子（ｂａＦＧＦ），结果显示截断型ｈａＦＧＦ的检测灵敏度较低，ｂａＦＧＦ更低，提示单克隆抗体的抗原识别部位在ｈａＦＧＦ的Ｎ端附近。另外，肝素对ｈａＦＧＦ的检测有明显的影响，说明单抗的抗原识别部位与肝素的结合部位有关．     

碱性成纤维细胞生长因子在乳腺癌组织中的表达

肿瘤血管形成 (Ｔｕｍｏｒａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ)是乳腺癌生长、转移的重要机制之一。碱性成纤维细胞生长因子 (Ｂａｓｉｃｆｉ ｂｒｏｂｌａｓｔｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ,ｂＦＧＦ)参与了肿瘤血管形成过程 ,并与人体多种恶性肿瘤的生长、转移及预后有密切关系。本研究通过检测ｂＦＧＦ在乳腺癌组织中的表达 ,探讨其与乳腺癌预后的关系。1　材料和方法1 1　临床资料　采用我院 1988年～ 1998年收治的女性乳腺癌病例 ,收集性别、年龄、手术日期、手术方式、病理类型、腋窝淋巴结转移情况、ＴＮＭ分期、辅助治疗、死亡日期、终检日期。其…     

碱性成纤维细胞生长因子和转化生长因子β1在人发育骨与软骨中的表达及意义

观察碱性成纤维细胞生长因子（ｂＦＧＦ）和转化生长因子β１（ＴＧＦβ１）在人发育骨与软骨中的表达和分布,认识这两种生长因子在人发育骨与软骨中的作用,用组织学、免疫组化及原位杂交技术,对临床经过石蜡包埋的人发育骨与软骨组织进行定位、定性检测。结果显示ＴＧＦβ和ｂＦＧＦ在人发育的骨与软骨细胞中共同表达。作者认为ＴＧＦβ和ｂＦＧＦ协同作用可能在人发育骨与软骨中起重要作用。     

人酸性成纤维细胞生长因子全长cDNA的序列分析及高效表达载体的构建

人酸性成纤维细胞生长因子(acidic fibroblast growth factor,aFGF)是一种主要作用于中胚层和神经外胚层来源细胞的细胞生长调节因子。aFGF参与血管形成、组织损伤的再生和修复、胚胎发育和分化、营养神经元、参与细胞的恶性增殖等生理和病理过程。近年来对aFGF的研究侧重于其在动物整体水平上的作用及与其它细胞生长调节因子相互作用的网络机制。为此,我们拟通过基因转染技术和转基因动物技术,建立aFGF在细胞     

碱性成纤维细胞生长因子促进人内皮细胞αv整合素及MMP-1表达的研究

创伤修复是体内多种因子和细胞参与的复杂过程，碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）可影响创伤修复的整个过程，深入了解其作用机制有重要意义。笔者通过研究经bFGF刺激后人脐静脉内皮细胞（HUVEC）αv整合素表达及基质金属蛋白酶-1（MMP-1）分泌的情况，从而分析bFGF促进内皮细胞迁移，血管新生的可能机制，为进一步研究bFGF促进创伤修复作用提供依据。     

腮腺创伤修复中碱性成纤维细胞生长因子的表达及意义

目的：观察碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)在腮腺创伤修复中的表达变化。方法：采用宏观、体视学、显微镜图象分析及免疫组织化学方法对大鼠腮腺部分切除术后剩余腺体bFGF的表达变化进行了动态分阶段分析。结果：bFGF在损伤刺激后发生高表达，伤后1d最高，之后逐渐降低，至伤后8w恢复正常。与之相伴随，间质组织在前2W明显增生，以后逐渐减少，腺泡细胞在前2w 大量萎缩凋亡，2w后又再生，8w恢复正常。结论：bFGF是强丝裂原和生血管因子，是参与腮腺创伤修复的重要细胞因子。     

重组人碱性成纤维细胞生长因子治疗烧伤及皮肤损伤的临床研究

目的 观察重组人碱性成纤维细胞生长因子（ｒｈ－ｂＦＧＦ,商品名贝复济）对烧伤、供皮区、外伤和慢性创面愈合的影响及不良反应。方法 将１８３例患者按照创面的可分性分为两部分。在常规治疗的基础上,试验组加ｒｈ－ｂＦＧＦ,对照组不加,第１部分１１０例采用随机自身对照法,观察同一创面不同区域或同体对称部位创面的愈合效果。第２部分７３例患者,采用开放试验。分别观察记录创面愈合时间在不同时间内的创面愈合率。结果     

人前列腺干细胞抗原的原核表达、纯化及鉴定

目的 构建包含人前列腺干细胞抗原(PSCA)的原核表达质粒,并进行诱导表达、蛋白纯化及鉴定.方法 通过PCR扩增人PSCA基因片段,与过渡载体pGEM-T Easy连接后进行测序鉴定,鉴定正确后,将PSCA基因片段酶切并插入含有谷胱甘肽s-转移本科GST标签的原核表达载体pET42a,得到重组质粒pET42a-PSCA.将pET42a-PSCA转化大肠埃希菌BL21(DE3),在IPTG诱导下表达GST-PSCA融合蛋白,用Glutathione-Sepharose 4B柱对融合蛋白进行纯化,纯化产物进行SDS-PAGE及Western blotting鉴定.结果 PSCA基因的PCR产物大小与预期相符,测序结果与GenBank 中的PSCA序列一致.pET42a-PSCA原核表达质粒构建正确,SDS-PAGE及Western blotting检测显示融合蛋白诱导表达成功,分子量大小约为43kD.结论 成功构建了人PSCA的原核表达质粒,能在BL21菌株中表达,且纯化后得到较高纯度的GST-PSCA融合蛋白,为后续抗前列腺癌基因疫苗研究奠定了基础.     

四肢火器伤受紫外线照射后碱性成纤维细胞生长因子的表达

目的 研究四肢火器伤受不同剂量短波紫外线(UVC)照射后伤口肉芽组织中碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)表达变化.方法 建立兔四肢软组织火器伤模型,UVC 30mJ/cm2和60mJ/cm2分别进行伤道内照射.采用免疫组化和原位杂交的方法观察组织中bFGF的表达.结果 致伤照射后7～21天,60mJ/cm2照射组和30mJ/cm2照射组bFGF在mRNA水平与蛋白水平的表达均高于对照组(P＜0.05),以60mJ/cm2照射组更为显著;照射后21天,60mJ/cm2照射组bFGF的mRNA水平显著降低,低于30mJ/cm2照射组(P＜0.05).结论 在伤口愈合早期UVC照射能促进bFGF的表达,以60mJ/cm2的作用更显著.但不同剂量UVC促进bFGF表达的时相性有所不同.     

人羊膜移植联合碱性成纤维细胞生长因子治疗翼状胬肉

翼状胬肉是常见的眼表疾病之一 ,术后创面复发率较高。瘢痕组织增生、睑球粘连等并发症的形成 ,给再手术带来较大困难。因此 ,改进或设计新的手术方式 ,加速角膜创面愈合是减少术后病变复发的关键。笔者应用人羊膜移植联合碱性成纤维细胞生长因子 (ｂＦＧＦ ,商品名贝复舒 ,珠海亿胜生物制药有限公司 )治疗翼状胬肉 ,取得了满意的临床效果。资料与方法　 (1)一般情况 :本组 33例 38眼 ,男 2 1眼 ,女 17眼 ;年龄 45～ 78岁 ;发病时间最短 5年 ,最长 2 8年 ;右2 3眼 ,左 15眼 ;原发性 2 5眼 ,复发性 13眼 ;胬肉头部伸入角膜缘内 2～ 6ｍｍ ,平…     

二维和三维培养的人皮肤成纤维细胞中生长因子mRNA表达的比较研究

探讨经二维或三维培养的人皮肤成纤维细胞在细胞因子表达能力方面是否有差异。以平面培养皿作为成纤维细胞二维培养系统 ,用胶原凝胶作为成纤维细胞三维培养系统 ,分别提取二维和三维培养的人皮肤成纤维细胞总RNA ,采用RT PCR方法检测两种培养系统中血管内皮细胞生长因子(VEGF)和碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)mRNA的表达。结果显示 ,虽然二维和三维培养的人皮肤成纤维细胞形态不同 ,但二维和三维培养的成纤维细胞均有VEGF/bFGF设计大小的条带显示 ,且两者条带相对灰度无明显差异。提示三维培养对人皮肤成纤维细胞的生长因子mRNA表达无明显影响     

微小颗粒骨异位成骨过程中碱性成纤维细胞生长因子的表达

目的　通过观察碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)在自体微小颗粒骨异位成骨过程中的表达 ,探讨微小颗粒骨移植的成骨机制。　方法　 4 8只日本大耳白兔随机分为两组 ,分别在臀大肌肌袋内植入自体微小颗粒骨及自体块状骨。术后按期取材 ,进行组织学、免疫组化及原位杂交染色。　结果　 (1)颗粒骨在成骨过程中吸收较快 ,至术后 2 8d时完全被新生骨替代。块状骨成骨能力弱 ,以骨吸收为主。 (2 )免疫组化及原位杂交结果显示两组间差异有显著性意义 (P <0 .0 5 )。　结论　颗粒骨异位成骨能力强于块状骨 ,bFGF在此过程中起重要作用。     

周转神经损伤后碱性成纤维细胞生长因子mRNA表达的实验研究

目的 研究大鼠坐骨神经钳夹伤后碱性成纤维细胞生长因子（ｂＦＧＦ）ｍＲＮＡ表达的变化规律。方法 １０２只Ｗｉｓｔａ大鼠随机分为正常组６只,对照及实验组各４８只,用地钳钳夹坐骨神经,于伤后４小时,１,３,７,１０,１４,２１,２８天采用逆转录－聚合酶链反应技术（ＲＴ－ＰＣＲ）结合聚丙烯酰胺凝胶电泳及ａｌｐｈａ－３２ｐ－ｄＣＴＰ放射自显影,检测大鼠坐骨神经钳夹伤局部,腰４－６背根节及相应脊髓节段ｂＦＧＦ     

碱性成纤维细胞生长因子和转化生长因子β1 在人发育骨与软骨中的表达及意义

观察碱性成纤维细胞生长因子（bFGF)和转化生长因子β1(TGFβ1)在人发育骨与软骨中的表达和分布,认识这两种生长因子在人发育骨与软骨中的作用,用组织学、免疫组化及原位杂交技术,对临床经过石蜡包埋的人发育骨与软骨组织进行定位、定性检测。结果显示TGFβ1和bFGF在人发育的骨与软骨细胞中共同表达。作者认为TGFβ1和bFGF协同作用可能在人发育骨与软骨中起重要作用。     

周围神经损伤后碱性成纤维细胞生长因子mRNA表达的实验研究

目的　研究大鼠坐骨神经钳夹伤后碱性成纤维细胞生长因子（ｂＦＧＦ）ｍＲＮＡ表达的变化规律。方法　１０２ 只Ｗｉｓｔａｒ 大鼠随机分为正常组６ 只，对照及实验组各４８ 只，用持针钳钳夹坐骨神经，于伤后４ 小时、１，３，７，１０，１４，２１，２８ 天采用逆转录－ 聚合酶链反应技术（ＲＴ－ ＰＣＲ） 结合聚丙烯酰胺凝胶电泳及ａｌｐｈａ－３２ｐ－ ｄＣＴＰ放射自显影，检测大鼠坐骨神经钳夹伤局部、腰４ ～６ 背根节及相应脊髓节段ｂＦＧＦｍＲＮＡ的动态变化。结果　实验组伤后４ 小时ｂＦＧＦｍＲＮＡ在损伤局部、脊髓及背根节的表达均开始增强，分别为１．４１±０．１０，１．７８±０ ．１０ 和２．１７±０．１２；伤后７ 天表达值最高，分别为２．７２±０．１４，３ ．６５±０．１７ 和３．９０ ±０．０６；伤后２８ 天表达值为１．２３ ±０．０６ ，１．４３±０ ．０５，１ ．７８±０．０３，降至正常及对照组水平（Ｐ＞ ０．０５）。结论　周围神经损伤后内源性ｂＦＧＦｍＲＮＡ表达增强有助于神经再生     

模拟失重环境碱性成纤维细胞生长因子对人牙周膜成纤维细胞增殖的影响

目的 探讨在模拟失重环境下碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对人牙周膜成纤维细胞(hPDLF)增殖的影响. 方法 试验分对照组、模拟失重组和模拟失重加hPDLF组3组.采用酶消化组织块培养法分离、培养原代hPDLF.应用噻唑蓝比色法,检测模拟失重条件下,不同时间和不同浓度的bFGF对hPDLF增殖的影响. 结果 在模拟失重12h、24h组hPDLF增殖较对照组没有显著差别,在48h、72h模拟失重组较对照组显著降低,差异有统计学意义(t=7.303、8.668,P<0.01).模拟失重48 h时bFGF浓度在50～100μg/L范围内加bFGF组hPDLF增殖高于模拟失重组,差异有统计学意义(P<0.05),而bFGF浓度为1～10μg/L时,两组没有显著差别. 结论 模拟失重在48 h、72 h对hPDLF的增殖有抑制作用,模拟失重环境bFGF浓度在50～100μg/L范围内具有促进hPDLF增殖的效应.