乳腺癌患者肿瘤组织及外周血多药耐药基因表达的临床意义

目的:检测多药耐药基因在乳腺癌患者肿瘤组织及外周血中的表达,探讨其临床意义。方法:荧光定量RT-PCR法检测40例原发性乳腺癌患者肿瘤组织及外周血、13例辅助化疗后乳腺癌患者外周血及10例乳腺良性疾病组织与外周血中mdr1的表达情况。结果:40例原发性乳腺癌患者肿瘤组织mdr1阳性表达率为67.5%(27/40),与对照组组织(无阳性表达)相比差异有统计学意义,χ2=14.380,P=0.001;乳腺癌患者外周血mdr1阳性表达率为22.5%(9/40),高于对照组(无阳性表达),χ2=4.486,P=0.034;化疗后乳腺癌患者外周血中mdr1的表达率为53.8%(7/13),高于化疗前外周血mdr1的表达,二者差异有统计学意义,χ2=12.345,P=0.001。结论:乳腺癌患者存在先天性和获得性耐药性,检测肿瘤组织和外周血mdr1表达对制定个体化化疗方案有指导意义。     

荧光定量RT-PCR检测mdr-1基因表达

建立荧光定量ＲＴ－ＰＣＲ检测肿瘤细胞ｍｄｒ－１基因表达的方法,了解肺癌组织中ｍｄｒ的表达水平。方法：建立荧光定量ＲＴ－ＰＣＲ方法,在ＰＥ７７００型检测仪上定量检测Ｋ５６２／ＡＤＭ耐药株和Ｋ５６２不耐药株细胞ｍｄｒ－１有达水平,同时检测４５例初治肺部肿瘤病人组织标本。     

实时荧光定量RT-PCR技术在肿瘤研究中的应用

实时荧光定量RT-PCR以其特异性强、灵敏度高、重复性好、定量准确、速度快、全封闭反应等优点而成为了分子生物学研究中的重要工具,广泛应用于医学等领域.全文就其原理、优越性及其在肿瘤研究中的应用及发展前景作一简要叙述.     

荧光定量RT-PCR检测胃癌患者外周血癌细胞及意义

胃癌的转移和复发是影响预后的重要因素,而存在于患者淋巴结,外周血,骨髓和腹腔中的微转移是导致转移和复发的基础^[1-3].     

RT-PCR方法检测早期人肺鳞癌基因表达谱

[目的]研究人肺鳞癌基因表达谱，筛选人肺鳞癌的差异表达基因。[方法]选择20种肿瘤发生相关基因，利用RT-PCR技术研究6个手术切除肺鳞癌标本的基因表达谱。找出在基因表达谱中均呈上调或下调的基因。[结果]共有11个基因在全部6个肺鳞癌标本中出现差异表达，其中9个表达上调，2个表达下调。[结论]利用RT-PCR重复筛选出的差异表达基因可初步作为肺鳞癌的候选分子标志物。     

SYBR Green I实时定量逆转录PCR方法的建立及检测乳腺组织hMAM mRNA的表达水平

目的 建立1种简便、有效的SYBR Green I实时定量逆转录PCR(SYBR Green I Q-RT-PCR)方法检测乳腺癌组织、癌旁乳腺组织人乳腺珠蛋白(hMAM)mRNA表达水平.方法 对SYBR Green I Q-RT-PCR检测乳腺癌细胞株MDA-MB-231表达hMAM mRNA的反应条件进行优化,初步检验该方法的重复性、灵敏性.应用该方法检测11例健康志愿者外周血hMAM mRNA表达,检验该方法的特异性,并对10例乳腺癌组织、10例对应癌旁乳腺组织hMAM mRNA表达水平进行测定.结果 SYBR Green I Q-RT-PCR可重复检出乳腺癌细胞株MDA-MB-231极低表达hMAM mRNA,CT值为34.45～34.67,变异系数(CV)=0.25%.健康志愿者外周血中hMAM mRNA均阴性.乳腺癌组织hMAM mRNA阳性率为80.0%(8/10),其中Ⅰ期1例(100.0%),其量为37800;Ⅱ期6例(100.0%),量为100.4(中位);Ⅲ期1例(33.3%),量为2.94.结论 建立的SYBR Green I Q-RT-PCR方法具有简便、特异、重复性、灵敏度好、定量结果可靠、直观等优点,应用于乳腺癌组织和癌旁乳腺组织hMAM mRNA的定量检测是理想的.     

实时荧光定量RT-PCR检测鼻咽癌Survivin mRNA基因表达

目的 建立实时荧光定量RT-PCR方法检测鼻咽癌组织中Survivin mRNA的表达.方法 用Trizol方法提取鼻咽癌CNE-2细胞株和鼻咽癌组织总RNA后,将其逆转录为cDNA,建立实时荧光定量RT-PCR方法,检测人鼻咽癌Survivin mRNA的表达,以慢性鼻咽炎患者鼻咽部组织作为对照.结果 鼻咽癌细胞株、鼻咽癌组和慢性鼻咽炎组患者鼻咽部组织均可检测到Survivin基因mRNA的表达,Survivin mRNA在鼻咽癌组织中的表达较慢性鼻咽炎患者鼻咽部组织高,两者差异有显著性意义(P＜0.01).Ⅲ+Ⅳ期和Ⅰ+Ⅱ期鼻咽癌患者均检测到Survivin基因mRNA的表达,但相对表达量无统计学意义.Survivin mRNA表达与鼻咽癌患者的年龄、性别无相关性.结论 实时荧光定量RT-PCR方法是一种快速有效灵敏度高的鼻咽癌Survivin mRNA表达的定量检测方法,Survivin mRNA的过度表达可能在鼻咽癌发生、发展过程中起一定作用.     

实时荧光定量RT-PCR分析E1AF在直肠癌中的表达及其临床意义

 【摘要】　目的　检测E1AF在直肠癌组织及正常组织中的表达，并分析其与直肠癌侵袭转移的相关性。方法　应用实时荧光素酶反转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测E1AF在86份直肠癌组织与正常组织中的表达。结果　在86份直肠癌标本中，55份E1AF mRNA表达上调。直肠癌组E1AF mRNA的表达与对照组差异有统计学意义。在直肠癌中，E1AF mRNA表达与组织分型、浸润深度、淋巴结和远处转移以及Duke分期明显相关。结论　E1AF与直肠癌的侵袭转移明显相关，可能是直肠癌侵袭转移的一个重要因子。     

RT—PCR方法检测临床乳癌组织的多药耐药基因表达

作者采用逆转录－多聚酶链式反应（ＲＴ－ＰＣＲ）技术、建立了临床乳腺癌ｍｄｒ－１ｍＲＮＡ表达的检测方法，同时筛选优化了影响实验结果的几个主要条件，检测７４例乳癌标本发现，原发乳癌ｍｄｒ－１基因性表达为３４．３％（１２／３５）；复发转移乳癌为４９．０％（２３／３９）。其中３２例复发转移乳癌的基因表达状况，与多药耐药（ＭＤＲ）相关药物疗效的总符合率为７８．１％。初步结果显示，ＲＴ－ＰＣＲ方法检测临床乳癌     

hMAM mRNA和CK19 mRNA联合检测乳腺癌骨髓微转移

目的：检测乳腺癌患者骨髓中的human mamglobin（hMAM）mRNA和CK19 mRNA表达,探讨乳腺癌患者早期骨髓微转移与临床病理学因素的关系.方法：采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR一步法）法检测骨髓组织中hMAM mRNA和CK19 mRNA的表达.结果：102例乳腺癌患者骨髓hMAM mRNA、CK19 mRNA表达阳性者分别为37.3%和56.9%,均高于良性乳腺疾病患者骨髓组织中的表达（P=0.043,P=0.002）.两者的阳性表达率与肿瘤大小、临床分期和组织学分级呈显著相关,P值分别为0.000、0.001、0.020、0.003、0.031和0.001;与淋巴结转移状况、年龄和月经状况无关,P值分别为0.101、0.255、0.111、0.110、0.492和0.187.结论：乳腺癌微转移与肿瘤大小、临床分期和组织学分级有关,hMAM mRNA和CK19 mRNA均可作为检测乳腺癌骨髓微转移标志,且两者间存在一致性.     

蜂胶黄酮PB3A对人大肠癌SW480细胞株CXCL1和FOS基因表达的影响

目的 探讨蜂胶黄酮短叶松素-3-乙酸酯(pinobanksin-3-acetate,PB3A)处理SW480细胞后CXCL1和FOS基因表达的改变及其与PB3A抑制人大肠癌细胞增殖的关系.方法 采用实时荧光定量RT-PCR和Westernblot法检测PB3A(100 mg/L)处理24小时后SW480细胞的CXCL1和FOS基因转录和蛋白质表达水平.结果 药物干预诱导CXCL1基因的mRNA转录水平下调,差异倍数为0.03(△CT比较,P＜0.01),蛋白质表达强度也降低(0.24±0.03)与非干预的对照组(0.52±0.04)比较表达水平差异有统计学意义(P＜0.01);药物干预诱导FOS基因的mRNA转录水平上调,差异倍数为13.64(△CT比较,P＜0.01),蛋白质表达水平也升高(1.43±0.16),与非干预的对照组(0.58±0.07)比较表达水平差异有统计学意义(P＜0.01).结论 蜂胶黄酮PB3A抗人大肠癌细胞的作用可能与其下调CXCL1基因和上调FOS基因的表达有关.     

RASSF1A基因在乳腺癌组织中的表达及临床病理意义

目的:探讨RASSF1A基因在乳腺癌组织中的表达以及与乳腺癌临床病理特征的关系。方法:采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术,检测49例乳腺癌组织及癌旁非肿瘤组织中RASSF1A基因的表达。应用条带密度分析软件,定量分析RT-PCR产物电泳带密度。结果:49例癌旁非肿瘤组织中RASSF1A全部表达,RASSF1A校正值(RASSF1A/β-actin)为0.6902±0.1179;49例乳腺癌组织中仅19例RASSF1A表达,校正值为0.1833±0.2441;癌组织与癌旁非肿瘤组织中RASSF1A基因表达差异有统计学意义(t=-14.199,P=0.000)。随着临床分期的增高,腋淋巴结转移率的增加,RASSF1A基因阳性表达率降低(χ2=7.201,P=0.027;χ2=3.893,P=0.048);病理组织学分级增加,RASSF1A基因呈现低表达(χ2=6.479,P=0.039);c-erbB-2蛋白表达阳性伴随RASSF1A基因的低表达(χ2=13.437,P=0.000);即RASSF1A基因高表达与临床分期、淋巴结转移、病理组织学分级、c-erbB-2蛋白表达呈负相关。而与患者年龄(χ2=0.002,P=0.962)、病理组织学类型(χ2=0.549,P=0.908)及其雌、孕激素受体(ER/PR;χ2=0.330,P=0.566/χ2=1.464,P=0.226)状况无关。结论:乳腺癌旁非肿瘤组织中RASSF1A基因表达高于癌组织,随着临床分期的增高、病理组织学分级的上升以及c-erbB-2蛋白的高表达,RASSF1A基因表达率降低。提示RASSF1A基因丢失与乳腺癌的发生、发展及乳腺肿瘤较差的生物学特性相关。     

Survivin基因在血液肿瘤细胞株细胞的表达

目的　探讨 Survivin基因在血液肿瘤细胞株细胞的表达及其可能的机制。方法　应用 RT- PCR半定量法检测 Survivin基因 m RNA表达。结果　血液肿瘤细胞株和 K5 6 2 / ADM细胞株细胞均有 Survivin m RNA表达 ,且均高于疾病对照组 (P<0 .0 0 1)。不同的血液肿瘤细胞株 Survivin m RNA表达有明显的差异性 ,Dami与K5 6 2、HL - 6 0、Jurkat、MU TZ- 1、Raji、6 T- CEM;NB4与 U 937、HEL、6 T- CEM、Jurkat、Dami;HEL与 MU TZ- 1之间Survivin m RNA的表达差异有显著性 (P值分别 <0 .0 0 1～ 0 .0 5 )。 K5 6 2 / ADM细胞株与 K5 6 2细胞株细胞相比 ,Survivin m RNA表达上调了 1.6倍。外周血单个核细胞 Survivin m RNA表达阴性。经 ATRA处理后 ,NB4细胞Survivin m RNA表达随着时间的延长而呈逐渐下降趋势 ,在 72小时时几乎检测不到 Survivin m RNA的表达。结论　 Survivin基因是肿瘤细胞抗凋亡和耐药的重要机制之一 ,Survivin基因有望成为肿瘤治疗新靶点     

一个肝癌相关基因的生物信息学及其基因表达分析

目的 :筛选并克隆肝癌相关基因 ,探讨肝癌发病机制。方法 :在国家人类基因组南方研究中心肝癌基因表达谱及其功能研究的工作基础上 ,发现 1个未知功能基因 (暂命名LLC基因 ) ,其DNA拷贝数在肝癌基因组中呈降低的趋势。本研究利用生物信息学和RT PCR的方法 ,对其进行功能预测并在转录组水平检测该基因的表达。结果 :LLC基因定位于染色体8p2 3 3区段 ,全长为 670 6bp ,含有 2个外显子 ,1个内含子 ,其开放阅读框长为 1871bp ,编码 1个含有 62 3个氨基酸的蛋白。该基因在 67%( 16/2 4)肝癌组织中呈现下调趋势。同时其在人体内多种组织均有表达。结论 :LLC基因有可能是一个新的肝癌相关抑癌基因     

蜂胶黄酮PB3A对大肠癌细胞SW480中RGS2和GEM基因表达水平的影响

目的 研究蜂胶黄酮(pinobanksin-3-acetate,PB3A)对体外培养的大肠癌SW480细胞中G蛋白信号转导调节因子2 (regulator of G-protein signaling 2,RGS2)和GTP结合丝裂原诱导蛋白(GTP binding protein overexpressed in skeletal muscle,GEM)基因转录和蛋白质表达水平的影响,探讨PB3A的抗肿瘤作用机制及其相关信号通路.方法 通过实时荧光定量RT-PCR和蛋白印迹法检测100 mg/L PB3A作用下人大肠癌细胞SW480中RGS2和GEM基因的转录和表达情况.结果 100 mg/L PB3A药物的干预诱导SW480细胞出现悬浮的细胞碎片、细胞体缩小、变圆、皱缩.药物干预之后,SW480细胞中RGS2和GEM基因在mRNA和蛋白水平上调表达.实验组与对照组比较,RGS2和GEM基因的mRNA转录水平差异有统计学意义(P＜0.01),蛋白质表达水平差异有统计学意义(P＜0.05).根据RT-PCR检测结果,利用Spearman相关性分析检测出RGS2和GEM高度正相关(r=0.929,P＜0.01).结论 PB3A干预大肠癌SW480细胞后使RGS2和GEM基因在转录和翻译水平上上调表达.PB3A的抗大肠癌作用机制可能与RGS2和GEM基因的上调表达有关.     

突变型p53与胃癌多重耐药基因表达的相关性研究

目的研究突变型p53与MDR-1基因间相互关系，探讨p53途径对防治肿瘤细胞多重耐药的意义。方法取胃癌组织切片，采用免疫组化方法检测组织切片p53蛋白和MDR-1基因蛋白产物Pg糖蛋白，分析突变型p53与MDR-1基因表达产物的相互关系。将突变型p53、sv40Tag（封闭p53）导入胃癌细胞株中，观察胃癌细胞株中MDR-1基因mRNA表达的变化。结果46例胃癌组织中p53蛋白阳性率为60．9％，Pg蛋白阳性率为73．9％。在28例p53蛋白阳性表达中有23例（82．1％）Pg蛋白表达阳性。18例p53蛋白阴性表达中9例（50．O％）为Pg蛋白表达阳性。p53和Pg蛋白之间的相关性有显著性意义（P〈0．05）。导入突变型p53细胞组的MDR-1基因mRNA表达比导入突变型p53＋sv40Tag细胞组、对照组MDR-1基因mRNA表达增强。结论突变型p53可能促进肿瘤细胞MDR-1基因表达，使肿瘤细胞更易产生耐药。     

p27kip1高表达乳腺癌细胞株MCF-7基因表达谱的差异分析

目的:利用基因芯片技术筛选p27kip1转染乳腺癌MCF-7细胞的差异表达基因,探讨p27kip1调控肿瘤细胞增殖和细胞周期的分子机制。方法:将含p27cDNA的质粒在脂质体介导下体外转染乳腺癌MCF-7细胞,利用Affy-metrix公司的人类基因组基因芯片U133A分别检测表达p27kip1蛋白和空载体的乳腺癌细胞株的基因表达谱,用生物信息学软件进行比较分析,对差异表达基因进行功能分类。结果:在含22277个基因cDNA的芯片上差异表达的基因有1379条,其中表达谱发生明显变化(2倍以上)的基因173条,占总检测基因的0·78%。157条基因表达明显上升(SLR>1),占总检测基因的0·705%;16条基因表达明显下降(SLR<-1),占总检测基因的0·072%。基因表达差异主要集中在物质代谢、细胞增殖、细胞周期调控、细胞分化与凋亡、免疫反应、信号传导、蛋白转运、调节转录等方面。结论:多基因共同参与了p27kip1抑制肿瘤细胞过度增殖以及促进细胞凋亡的作用。对于p27kip1相关基因群的研究有助于认识p27kip1蛋白在细胞周期调控乃至整个细胞癌变过程中作用的分子机制。