3’-甲异靛玉红对057BL／6小鼠脾细胞和胸腺细胞功能的作用

背景：中药3’-甲异靛玉红及，靛玉红衍生物在抗肿瘤的同时对机体正常免疫细胞影响的报道查及较少。 目的：观察3’-甲异靛玉红对C57BL／6小鼠胸腺、脾淋巴细胞增殖的影响。 设计、时间及地点：随机分组细胞病理学观察实验，于2007-08／2008-01在南方医科大学珠江医院完成。 材料：实验动物为C57BL／6小鼠，雄性，6-8周龄，体质量（204-2）g。 方法：取C57BL／6小鼠胸腺、脾组织研磨过滤为单细胞悬液，应用5，10，15，20，25μmol／L甲异靛玉红处理C57BL托小鼠胸腺和脾细胞。以未经任何药物处理的C57BL／6小鼠作为空白对照，以给予刀豆蛋白A处理的C57BL／6小鼠为阳性对照。 主要观察指标：①MTT法测定C57BL／6小鼠脾和胸腺淋巴细胞的增殖。②ELISA法测定培养上清中自细胞介素12活性。③流式细胞仪检测细胞周期、细胞凋亡率及死亡率，细胞内活性氧浓度。④RT-PCR法检测细胞bcl-2和cdk2 mRNA水平。⑤荧光显微镜检测细胞Bcl．2、Bax和CDK2蛋白表达率。结果：15，20，25μmol／L甲异靛玉红作用24h均可明显抑制C57BL／6小鼠胸腺、脾淋巴细胞增殖（P〈0．05），并呈量效、时效依赖性。各浓度的甲异靛玉红对C57BL／6小鼠胸腺和脾细胞各时间点分泌白细胞介素12的功能较对照组明显减低（P〈0．05）。15μmol／L的3’-甲异靛玉红可导致C57BL／6小鼠胸腺、脾淋巴细胞凋亡相关蛋白bcl-2和细胞周期蛋白cdk2 mRNA表达水平均减低，Bcl-2的蛋白表达水平降低，CDK蛋白表达减低，Bax表达水平升高，Bcl-2／Bax比例明显下降，启动细胞凋亡。15μmol／L的3’-甲异靛玉红将C57BL／6小鼠胸腺、脾淋巴细胞阻遏于G2／M期，细胞内活性氧水平呈量效、时效依赖性升高。 结论：一定浓度范围甲异靛玉红可逆性抑制C57BL／6小鼠体外培养的脾及胸腺淋巴细胞增殖，同时抑制白细胞介素12的分泌，并启动细胞凋亡。     

3''-甲异靛玉红对不同种系小鼠脾细胞增殖、凋亡及生物功能的调节

背景:靛玉红及其衍生物具有抗炎、抗肿瘤作用.可用于自身免疫性疾病的治疗,但其对正常免疫细胞的作用尚鲜见报道.目的:观察3'-甲异靛玉红对不同种系小鼠脾淋巴细胞增殖及生物功能影响的调节.设计、时间及地点:随机对照实验,于2007-07/2008-02在南方医科大学珠江医院血液科实验室完成.材料:清洁级BAL,B/c,C57BL/6以及F1代杂交鼠,均雄性,6～8周龄,体质量(20±2)g,由第一军医大学实验动物中心提供.3'-甲异靛玉红由美国Sigma公司提供.方法:取BALB/c,C57BL/6以及F1代杂交鼠脾组织研磨过滤为单个核细胞悬液,以5、10、15、20和25 μmol/L3'-甲异靛玉红处理各种系小鼠脾细胞,以未处理的为空白对照,以刀豆蛋白A处理组为阳性对照.主要观察指标:MTT法测定各种系小鼠脾淋巴细胞增殖情况:ELISA法测定淋巴细胞培养上清白细胞介素12活性;流式细胞仪检测细胞周期、细胞凋亡率及死亡率、细胞内活性氧浓度变化;RT-PCR检测细胞Bcl-2和CDK2基因mRNA水平;荧光显微检镜测细胞Bcl-2、Bax和CDK2蛋白表达率.结果:MTT检测显示,15、20和25 μmol/L3'-甲异靛玉红作用24h便可明显抑制3种小鼠脾淋巴细胞增殖(P＜0.05),此效应呈量效、时效依赖性.将25 μ mol/L3'-甲异靛玉红处理72 h后的细胞离心后撤除3'-甲异靛玉红干预继续培养,椎虫蓝记数发现细胞恢复增殖.ELISA检测显示,各浓度3'-甲异靛玉红抑制各种系小鼠脾细胞分泌白细胞介素12,各种系间差异不显著.RT-PCR检测显示,15 μ mol/L3'-甲异靛玉红处理12 h后脾细胞Bcl-2和CDK2的mRNA水平明显降低.流式细胞仪检测细胞凋亡率及死亡率表明,15 μ mol/L,的3'-甲异靛玉红可降低各种系小鼠脾淋巴细胞凋亡相关蛋白Bcl-2水平,升高Bax蛋白水平,下调Bcl-2/Bax比例,降低CDK2表达.不同种系小鼠脾细胞均有部分凋亡现象,但死亡率无明显升高.各种系小鼠脾淋巴细胞阻遏于G2/M期,细胞内活性氧水平呈量效、时效依赖性升高,种系间差异不显著.结论:15-25μmolR3'-甲异靛玉红可逆性抑制不同种系小鼠脾细胞的增殖及分泌功能,此效应呈量效、时效依赖性,并启动细胞凋亡程序.     

3’-甲异靛玉红对不同种系小鼠脾细胞增殖、凋亡及生物功能的调节

背景：靛玉红及其衍生物具有抗炎、抗肿瘤作用，可用于自身免疫性疾病的治疗，但其对正常免疫细胞的作用尚鲜见报道。目的：观察3’-甲异靛玉红对不同种系小鼠脾淋巴细胞增殖及生物功能影响的调节。设计、时间及地点：随机对照实验，于2007-07，2008—02在南方医科大学珠江医院血液科实验室完成。材料：清洁级BALB/c，C57BL/6以及F1代杂交鼠，均雄性，6～8周龄，体质量（20±2）g，由第一军医大学实验动物中心提供。3’-甲异靛玉红由美国Sigma公司提供。方法：取BALB＆，C57BL/6以及F1代杂交鼠脾组织研磨过滤为单个核细胞悬液，以5、10、15、20和25μmol／L3’-甲异靛玉红处理各种系小鼠脾细胞，以未处理的为空白对照，以刀豆蛋白A处理组为阳性对照。主要观察指标：MTT法测定各种系小鼠脾淋巴细胞增殖情况；ELISA法测定淋巴细胞培养上清白细胞介素12活性；流式细胞仪检测细胞周期、细胞凋亡率及死亡率、细胞内活性氧浓度变化；RT-PCR检测细胞Bcl-2和CDK2基因mRNA水平；荧光显微镜检测细胞Bcl-2、Bax和CDK2蛋白表达率。结果：MTT检测显示，15、20和25μmol／L3’．甲异靛玉红作用24h便可明显抑制3种小鼠脾淋巴细胞增殖俨〈0．05），此效应呈量效、时效依赖性。将25μmol／L3’-甲异靛玉红处理72h后的细胞离心后撤除3’-甲异靛玉红干预继续培养，椎虫蓝记数发现细胞恢复增殖。ELISA检测显示，各浓度3’-甲异靛玉红抑制各种系小鼠脾细胞分泌白细胞介素12，各种系间差异不显著。RT-PCR检测显示，15μmol／L3’-甲异靛玉红处理12h后脾细胞Bcl-2和CDK2的mRNA水平明显降低。流式细胞仪检测细胞凋亡率及死亡率表明，15umol／L的3’-甲异靛玉红可降低各种系小鼠脾淋巴细胞凋亡相关蛋白Bcl，2水平，升高Bax蛋白水平，下调Bcl-2／Bax比例，降低CDK2表达，不同种系     

甲异靛对K562细胞bcr-abl信号通路的影响以及诱导细胞凋亡机制研究

目的 探讨甲异靛对K562细胞bcr-abl信号通路的影响以及甲异靛诱导K562细胞凋亡的机制.方法 应用流式细胞术检测甲异靛诱导K562细胞凋亡的情况以及线粒体膜电位稳定性.应用Western blot技术检测bcr-abl信号通路相关蛋白、caspase以及Bcl-2家族成员在甲异靛作用前后的表达情况.RT-PCR技术检测甲异靛作用前后bcr-abl mRNA表达水平,用电泳移动迁移速度分析检测STAT3、STATS的DNA结合能力.结果 20 μmol/L甲异靛町降低ber-abl融合蛋白的表达及其磷酸化水平,但并不改变其mRNA表达水平,甲异靛可降低STATS以及CRKL的磷酸化水平,抑制STAT3、STATS的DNA结合能力.5-20μmoL/L甲异靛可诱导K562细胞凋亡并且具有浓度依赖性.甲异靛诱导K562细胞凋亡中伴随caspase 3、8、9活化以及细胞线粒体膜电位降低,caspase 3、8、9特异抑制剂z-DEVD-fmk、z-IETD-cho和z-LETD-fmk可阻断甲异靛诱导的K562细胞凋亡.甲异靛诱导K562细胞凋亡前后不伴有Bcl-2、Bax、Bid蛋白表达水平的改变.结论 甲异靛通过降低bcr-abl融合蛋白的表达并抑制bcr-abl信号通路中相关蛋白活性从而抑制K562细胞的增殖.甲异靛诱导K562细胞凋亡依赖于caspase活化以及线粒体途径,但Bcl-2家族成员不参与凋亡的调控.     

吴茱萸碱对不同种系小鼠免疫功能的调节

本研究探讨吴茱萸碱对不同种系小鼠胸腺细胞和脾细胞的增殖、凋亡及生物功能的影响。处死8周龄雄性BALB／c、C57BL／6及F1代杂交鼠，取其胸腺、脾制备单细胞悬液。用MTT法测定ConA诱导后脾和胸腺细胞增殖活性。用ELISA法测定培养上清IL-2活性，RT—PCR检测0．75μmol／L吴茱萸碱处理的细胞bcl-2和cdk2基因mRNA水平。流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡率，以双氢二绿荧光黄（27-diemorofluorcscein，DCF）阳性的细胞百分比间接检测细胞内海性氧（ROS）水平，应用荧光显微镜检测BCL-2、CDK2、BAX蛋白表达率。结果表明：当吴茱萸碱浓度≥0．5μmol／L时，在24、48和72小时3种小鼠ConA诱导的胸腺细胞、脾细胞的增殖均被抑制（P〈0．05），吴茱萸碱处理的各种系小鼠脾细胞和胸腺细胞释放IL-2的功能较对照组明显减低（p〈0．05），吴茱萸碱0．75μmol/L处理后细胞bcl-2和cdk2的mRNA水平较对照组明显降低。与对照组相比，吴茱萸碱0．75μmol／L处理6、12、24小时均可诱导3种小鼠胸腺细胞、脾细胞明显凋亡（P〈0．05）。12小时药物组DCF阳性细胞均明显高于对照。24和48小时药物组DCF阳性的细胞百分比与对照组无明显差异，但药物处理组细胞出现大小不一的两群细胞，直方图呈双峰，其中一群细胞DCF呈阴性，这表明吴茱萸碱使细胞内ROS水平增高，但随着药物处理时间的延长。濒死细胞内ROS水平明显降低。吴茱萸碱处理后BCL-2、CDK2蛋白表达明显降低，BAX蛋白表达上调。结论：吴茱萸碱可通过bcl-2、cdk2下调，抑制多种系小鼠体外培养的脾细胞和胸腺细胞增殖并诱导其凋亡，同时细胞分泌IL-2的活性亦明显下降。     

用单倍体相合小鼠FBL-3红白血病细胞株移植建立CB6F1小鼠红白血病模型

本研究探讨建立F1代单倍体相合小鼠FBL-3红白血病模型的可行性,并观察FBL-3细胞在小鼠体内的生物学特性。将FBL-3H2-d小鼠红白血病细胞经尾静脉分别接种给小鼠C57BL/6和CB6F1H-2b/d(C57BL/6×BALB/c),观察两种小鼠的生存时间和染色体变化,并对濒死小鼠的肝、脾、肺和肾进行病理检查,部分进行电子显微镜检查。分析骨髓和脾脏细胞染色体核型及MHC分子表达情况。结果表明:静脉接种103-107个白血病细胞的情况下,C57BL/6小鼠和CB6F1小鼠发病率分别为100%和92.5%;接种的细胞数量与存活时间呈线性关系;接种相同数量FBL-3细胞的CB6F1小鼠平均生存时间较C57BL/6小鼠延长。白血病细胞主要侵及肝、脾、骨髓、肺和肾组织,糖原染色阳性、氯醋酸染色部分阳性,过氧化物酶、碱性磷酸酶、丁酸染色均为阴性。电子显微镜观察到细胞内病毒样颗粒。脾脏和骨髓细胞染色体多数为非二倍体,且H-2b表达率升高,H-2d表达率降低。结论:经尾静脉接种FBL-3细胞可以建立CB6F1小鼠红白血病模型。     

不同遗传背景NK细胞对转化细胞的杀伤效应

目的:细胞免疫治疗的着眼点不仅是杀伤局部异常生长的肿瘤细胞,还要应对潜在转化细胞的影响,为此观察3种不同遗传背景NK细胞对转化细胞杀伤效应的差异.方法:实验于2007-03/09在南方医科大学珠江医院血液科完成.①材料:SPF级8～10周龄的C57BL/6(H-2b)小鼠10只、Balb/C(H-2d)d,鼠10只、Balb/C(H-2d)×C57BL/6(H-2b)杂交F1代(H-2d/b)小鼠10只,均购于南方医科大学实验动物中心,实验过程中对动物的处置符合动物伦理学标准.YAC-1细胞株由本室冻存;C57BL/6鼠源性红白血病细胞株FBL-3由周健博士惠赠.②实验方法:脱臼处死3种不同遗传背景小鼠,无菌取脾,密度梯度离心法常规分离脾单个核细胞,免疫磁珠细胞阳性分选得到3种不同遗传背景小鼠的NK细胞,即全相合C57BL/6组、不相合Balb/C组、半相合F1代组,以其作为效应细胞.将培养至对数生长期的YAC-1、FBL-3细胞株以及ConA刺激的C57BL/6小鼠脾细胞作为靶细胞.相对于靶细胞,不相合Balb/C组与半相合F1代组为同种异体反应性NK细胞,全相合C57BL/6组为自体NK细胞.③实验评估:通过流式细胞术检测CD49b 的表达鉴定NK细胞纯度.调整靶细胞YAC-1密度为2×108 L-1,按效靶比5:1,10:1,20:1,40:1以乳酸脱氧酶释放法测定NK细胞的杀伤活性.调整靶细胞FBL-3和ConA刺激的C57BL/6小鼠脾细胞密度均为2×108 L-1,按效靶比20:1,40:1同法测定NK细胞的杀伤活性.结果:①NK细胞的纯度鉴定:CIM9b 细胞率全相合C57BL/6组为(90.93±2.46)%,不相合Balb/C组为(89.50 1.04)%,半相合F1代组为(91.93±2.01)%,分选所得NK细胞的纯度满足实验要求.②NK细胞对YAC-1细胞的杀伤活性:3组NK细胞的杀伤活性均随效靶比5:1,10:1,20:1.40:1的升高而增强:同一效靶比时3组NK细胞对YAC-1的杀伤活性差异无显著性意义(F=0.557.P=0.600.F=0.550,P=0.604:F=0.503,P=0.628.F=0.946,P=0.439)③NK细胞对FBL-3和ConA刺激的C57BL/6小鼠脾细胞的杀伤效应:效靶比为20:1,40:1时,半相合F1代组与不相合Balb/C组对FBIL-3和ConA刺激的C57BL/6小鼠脾细胞的杀伤效应均明显高于全相合C57BL/6组(P均=0.000).结论:NK细胞的遗传背景能够影响其对靶细胞的杀伤活性,同种异体反应性NK细胞的杀伤效应强于自体NK细胞,为NK细胞介导的细胞免疫治疗提供实验依据.     

甲异靛对K562和HL-60细胞Wnt信号通路的影响

本研究探讨甲异靛对K562细胞和HL-60细胞Wnt信号通路的影响。采用RT-PCR和Western blot方法分别检测甲异靛处理的K562和HL-60细胞中GSK-3β及其下游相关基因及蛋白的表达水平。结果表明:甲异靛可使HL-60细胞中β-catenin和c-myc基因表达下降,但对K562细胞的这两种基因表达无明显影响;甲异靛略能增加HL-60细胞中GSK-3β蛋白表达,但明显降低K562细胞和HL-60细胞中p-GSK-3β和c-MYC蛋白表达水平;甲异靛对K562细胞中β-catenin表达没有明显影响,但能使HL-60细胞中β-catenin表达下降。结论甲异靛可抑制K562细胞和HL-60细胞中Wnt信号通路的传导,降低癌基因和相关蛋白的表达,从而发挥治疗白血病的作用。     

C57BL/6小鼠心肺复苏后心肌细胞线粒体自噬及细胞凋亡的相互作用与调节机制的研究

目的:探讨在心搏骤停心肺复苏系统性缺血再灌注损伤过程中,C57BL/6小鼠心室肌细胞线粒体自噬与细胞凋亡之间的相互作用和调控机制。方法:80只健康雄性C57BL/6小鼠应用高钾合并窒息法制备心搏骤停心肺复苏模型。其中6只复苏前组,74只小鼠造模。造模小鼠中有50只自主循环恢复(ROSC),将其随机分为复苏后2、12、24、48h组。应用透射电镜检测心肌细胞线粒体形态;应用Western blot检测线粒体自噬蛋白表达和蛋白磷酸化表达,检测与线粒体相关的细胞凋亡信号通路的蛋白表达和蛋白磷酸化表达。结果:C57BL/6高钾心搏骤停心肺复苏小鼠模型在复苏后48h内线粒体自噬特异性信号蛋白LC3-II表达持续显著增加,启动线粒体自噬的蛋白ULK1表达也持续增加。在复苏后12、24、48hC57BL/6小鼠通过mTOR磷酸化ULK1抑制线粒体自噬过度增加。C57BL/6小鼠在复苏后2、12h凋亡信号caspase-9蛋白活化增加,复苏后24、48h caspase-9蛋白激活逐步减少。心肺复苏后抑制凋亡因子Bcl-2未被明显激活。蛋白细胞色素C(Cyt c)和Smac/Diablo是线粒体释放的促进细胞凋亡的信号。C57BL/6小鼠在复苏后48h内线粒体释放的Smac/Diablo未见显著增加,线粒体释放的Cyt c在复苏后12h达到峰值。结论:免疫功能正常的C57BL/6小鼠心肌细胞在心搏骤停心肺复苏系统性缺血再灌注损伤过程中,激活线粒体自噬,清除受损的线粒体。在复苏后24h抑制线粒体自噬的信号通路也被激活,提示体内的调控机制发挥作用,防止线粒体过度自噬。线粒体释放促进细胞凋亡的信号蛋白Cyt c在复苏后12h达到峰值。Cyt c与procaspase-9/Apaf 1交联,促使caspase-9活化。     

利用定量蛋白组学的方法研究甲异靛诱导K562细胞凋亡的机制

目的:利用串联质谱标签系统(tandem mass tag,TMT)标记定量蛋白组学的方法,检测白血病细胞系K562细胞经甲异靛(meisoindigo)处理后蛋白表达的改变,探讨甲异靛诱导白血病细胞凋亡的作用机制。方法:用CCK8法检测甲异靛对K562细胞的半抑制浓度(inhibitory concentration 50,IC50),流式细胞术检测不同浓度甲异靛诱导K562细胞的凋亡水平。K562细胞经终浓度为0. 2%DMSO(对照组)和20μmol/L甲异靛(实验组)处理2 h后,提取总蛋白,TMT标记,高效液相色谱分级和质谱定量蛋白组学技术鉴定肽段和丰度信息,并进行3次技术重复。用Mascot软件鉴定蛋白,用GO(gene ontology)注释、富集和聚类分析方法分析差异表达蛋白。结果:在K562细胞系中,甲异靛以剂量依赖的方式诱导K562细胞凋亡(r=0. 98);蛋白质组学分析结果显示,共鉴定出蛋白质5 544个,其中有定量数据的蛋白质4 792个。与对照组相比,在实验组中表达差异1. 5倍以上的蛋白有8个,其中4个蛋白表达上调,4个蛋白表达下调,差异变化的蛋白主要与活性氧代谢相关。结论:应用定量蛋白质组学分析表明,包括DDIT4等蛋白的表达在甲异靛处理K562细胞系早期发生明显改变,提示活性氧代谢过程的改变可能在甲异靛促进凋亡的机制中发挥了重要作用。     

甘草酸单铵盐调节急性早幼粒细胞白血病细胞NB4肿瘤干细胞样特性、氧化应激及线粒体的功能

目的:探讨甘草酸单铵盐(MAG)对急性早幼粒细胞白血病细胞NB4肿瘤干细胞样特性、氧化应激及线粒体功能的影响.方法:CCK-8法检测急性早幼粒细胞白血病细胞NB4活力,筛选合适剂量;克隆法检测NB4细胞增殖;Western blot检测细胞周期相关蛋白表达;流式细胞术检测细胞凋亡并分选NB4干细胞阳性(CD133+);...     

Delta(9)-tetrahydrocannabinol-induced apoptosis in the thymus and spleen as a mechanism of immunosuppression in vitro and in vivo

Delta(9)-tetrahydrocannabinol (THC), the main psychoactive component of marijuana has been shown to suppress the immune response. However, the exact mechanism of THC-induced immunosuppression remains unclear. In the current study, we tested the hypothesis that exposure to THC leads to the induction of apoptosis in lymphocyte populations. Splenocytes of C57BL/6 mice cultured in the presence of 10 microM or greater concentrations of THC showed significantly reduced proliferative response to mitogens, including anti-CD3 monoclonal antibodies (mAbs), concanavalin A (Con A), and lipopolysaccharide (LPS) in vitro. Thymocytes and naive and activated splenocytes exposed to 10 microM or 20 microM THC showed significantly increased levels of apoptosis. Treatment with CB2 antagonist inhibited THC-induced apoptosis in thymocytes and activated splenocytes. Administration of 10 mg/kg body weight of THC into C57BL/6 mice led to thymic and splenic atrophy as early as 6 h after treatment. This effect could be partially inhibited by treatment with a caspase inhibitor in vivo. THC exposure led to reductions in the numbers of all subpopulations of splenocytes and thymocytes examined. Functional studies revealed that splenocytes from THC-treated mice had significantly reduced proliferative response to anti-CD3 mAbs, Con A, and LPS in vitro. Finally, thymocytes and splenocytes exposed to THC in vivo exhibited apoptosis upon in vitro culture. Together, these results suggest that in vivo exposure to THC can lead to significant suppression of the immune response by induction of apoptosis.     

环靶明对前列腺癌PC3细胞株生长的影响及其作用机制研究

目的 观察环靶明(Cyclopamine)对体外培养的人前列腺癌PC3细胞株增生、细胞周期及凋亡率的影响,并初步探讨其可能的作用机制。方法不同浓度环靶明处理体外培养的前列腺癌PC3细胞后,用MTT法检测药物处理24,48和72 h后的细胞增殖活性; 流式细胞仪检测药物处理72 h后的细胞周期分布和细胞凋亡率; Real-time RT-PCR 法检测用药后细胞Gli1,Bax和Bcl-2 mRNA的表达变化。结果 经5,10和15 μmol/L的环靶明处理后,PC3细胞的生长抑制率明显升高,且与药物浓度高低和作用时间长短呈一定正相关关系; 环靶明作用于PC3细胞72 h后,15 μmol/L环靶明组G0/G1期细胞数量增加,S期、G2/M细胞数量下降; 5,10和15 μmol/L环靶明组的细胞凋亡率分别为7.54%±1.19%,12.47%±2.11%和24.15%±3.40%,与对照组相比,差异具有统计学意义(t=5.414,7.159,10.413,均P<0.05)。明还可在转录水平下调Bcl-2 mRNA和上调Bax mRNA的表达,促进细胞凋亡。结论 环靶明可抑制PC3细胞生长,其作用机制可能与阻滞细胞周期、诱导细胞凋亡有关。     

Protective effect of procyanidins extracted from the lotus seedpod on immune function injury induced by extremely low frequency electromagnetic field

This study aimed to evaluate the protective effect of Lotus seedpod procyanidins (LSPCs) from extremely low frequency electromagnetic field (ELF-EMF) exposure (50 Hz, 8 mT, 28 days) and their protective mechanism against radiation damage. The results showed that LSPCs increased the organ index of mice and made the damaged blood-producing function and cytokine(INF-γ, TNF-α, IL-2, IL-6 and IL-10 in spleen) levels by ELF-EMF-irradiation recovered to normal appearance. And experimental results proved that dosing LSPCs inhibit more stagnation of splenocytes in G0/G1 phase caused by ELF-EMF, thus the spleen cells from G0/G1 phase to S phase shift, restore normal cell metabolism, promote the splenocytes proliferation, reduced the apoptosis of spleen cells, effective protect the damage induced by the ELF-EMF radiation. In addition, LSPCs prevented the decline of DNA content caused by ELF-EMF. Western blot determinated the levels of apoptosis genes including Bcl-2, Bax, Bcl-cl, Caspase-3 and Caspase-9. The results revealed that a significant suppression in Bcl-2 expression and increase in Bax, Caspase-3 and Caspase-9 expression in splenic cells in ELF-EMF group. However, LSPCs restored these changes. Taking these results together, it may be summarized that LSPCs could protect hematopoietic tissues and the immune system from ELF-EMF. And it may be hypothesized that ELF-EMF-induced apoptosis in splenocytes might occur via triggers the trans-activation of Bax and activates caspases-3 and −9, which then cleaves the death substrates, leading to apoptosis in splenocytes of mice treated with ELF-EMF.     

输注脾细胞建立输血相关的移植物抗宿主模型

目的探讨输注同种脾细胞建立小鼠输血相关的移植物抗宿主(TA-GVHD)模型及其特点。方法分离C57BL/6(H-2b)脾细胞,分别经静脉输注给Balb/c(H-2d)裸鼠与F1代(C57BL/6×Balb/c H-2b/d),建立输血相关的移植物抗宿主模型。活体染料羧基荧光素乙酰乙酸(5,6-carboxyfluorescein diacetate succini midyl ester,CFSE)标记供者脾细胞,通过流式细胞仪分析供者细胞在受者体内的增殖;免疫组化分析供者脾细胞survivin的表达;检测Balb/c裸鼠体内抗供者抗体及IL-10浓度;分析皮肤、小肠、肝脏的病理变化。结果输注同种脾细胞成功建立急性TA-GVHD模型。受者脾脏及外周可以检测到标记后增殖的供者细胞。小鼠的病理改变主要出现在肝脏,浸润细胞早期表达survivin。小肠及皮肤未见明显的病理改变。TA-GVHD裸鼠第7天IL-10、抗-Balb/c显著升高。结论输注同种脾细胞可以建立TA-GVHD模型,并具有简单、快速、稳定的特性,为诊断、治疗GVHD提供了良好的模型。     

染料木黄酮对前列腺癌细胞系PC-3生物学行为影响的意义

目的观察染料木黄酮(genistein)对前列腺癌细胞 PC-3生物学行为的影响 ,探讨 genistein预防前列腺癌的可能性.方法用 MTT法绘制生长曲线,观察 0, 10,20, 40 μ mol/L的 Genistein对 PC-3细胞生长能力的影响; PC-3细胞经 Genistein处理 3 d后,流式细胞术观察 Genistein对前列腺癌细胞 PC-3细胞周期的影响, Transwell小室法重建基底膜侵袭模型研究 Genistein处理后细胞侵袭性的改变.结果 经 Genistein处理后, PC-3细胞的生长受到抑制,作用 3 d时的药物半数致死量(IC50)为 25 μ mol/L;细胞周期改变主要为 G2/M阻滞,凋亡率(AI)明显增加, 0 ,10,20, 40 μ mol/L组的 G2/M的百分比和 AI分别为 14.9%, 27.4% ,33.1% ,31.9%和 0, 6.5% ,14.2% ,25.4%.侵袭能力分别下降到未加药组的 31.8%, 8.6%和 3.96%.结论 Genistein通过引起 PC-3细胞 G2/M阻滞,诱导 PC-3细胞凋亡,从而抑制 PC-3细胞的恶性增殖以及降低 PC-3细胞的侵袭能力可能是 Genistein降低前列腺癌的发病率的一个重要原因.Genistein有可能成为预防前列腺癌的药物之一.     

新生儿缺氧缺血性脑病患儿脐血中白细胞介素-6、肿瘤坏死因子-α与一氧化氮变化及其在脑损伤中的作用

背景缺氧缺血性脑病( hypoxic-ischemic encephalopathy,HIE)是新生儿死亡和致残的重要原因之一 ,但其发病机制仍不十分清楚. 目的旨在研究 HIE患儿脐血白细胞介素- 6( IL-6)、肿瘤坏死因子-α( TNF α)与一氧化氮的变化,并探讨其在 HIE发病机制中的作用,为进一步改善 HIE的预后提供理论依据. 设计以诊断为依据的病例对照研究. 地点、材料和干预研究对象来源于首都医科大学附属北京妇产医院,所用标本为脐血.分别用放射免疫法与硝酸盐还原酶两点法检测 40例 HIE患儿与 40例正常新生儿脐血 IL-6、 TNF α与一氧化氮水平,由北京东亚免疫技术研究所负责检测. 主要观察指标 HIE患儿与正常新生儿脐血 IL-6, TNF α与一氧化氮水平的对比结果. 结果 HIE患儿与正常新生儿脐血 IL-6水平分别为( 70.5± 18.9)、( 81.8± 28.0) ng/L (t=2.11,P=0.038), TNF α分别为( 1.03± 0.30)、( 0.82± 0.31)μ g/L (t=3.33,P=0.001),一氧化氮分别为( 59.2± 24.1)、( 85.1± 31.3)μ mol/L (t=3.59,P=0.001),而且病情越重 IL-6、一氧化氮减低与 TNF α升高越明显. 结论 HIE患儿脐血 IL-6和一氧化氮水平降低, TNF α水平升高,他们可能参与了新生儿缺氧缺血性脑损伤的发病过程,脐血免疫指标的检测可用于 HIE的早期预测.本研究为 HIE的免疫学治疗提供了理论依据.     

牛磺酸对大鼠缺血心肌缺血再损伤的保护作用

目的探讨大鼠心肌缺血损伤与凋亡蛋白 Bcl-2和 Bax的关系及牛磺酸的影响. 方法选择健康 SD大鼠 30只,随机分为假结扎组、结扎组和牛磺酸保护组,每组 10只.结扎大鼠冠状动脉左前降支建立心肌缺血模型.检测 3组心肌线粒体中超氧化物歧化酶( superoxide dismutase,SOD)、 Ca2+-ATP酶活性和丙二醛含量,用免疫组化法检测心肌中的 Bcl-2和 Bax蛋白. 结果结扎冠状动脉左前降支可致心肌线粒体丙二醛含量升高 [假结扎组 (4.89± 0.54) μ mol/g;结扎组( 9.85± 0.68) μ mol/g], SOD和 Ca2+-ATP酶活性下降 [假结扎组( 8.63± 0.35) μ mol/( g· s) ,(13.97± 1.97) mmol/( g· s) ;结扎组( 6.73± 0.39) μ mol/( g· s), (8.54± 2.28) mmol/( g· s) ].缺血心肌 Bax蛋白表达呈显著升高 (t=3.931, P< 0.01),牛磺酸能明显减少缺血心肌线粒体丙二醛的生成 [牛磺酸保护组 (5.46± 0.72) μ mol/g],降低心肌 Bax蛋白的表达,增加 Bcl-2蛋白的表达 ( t=3.716, P< 0.01). 结论结扎大鼠冠状动脉左前降支所致心肌缺血损伤与 Bcl-2和 Bax蛋白的表达有关 ,牛磺酸对缺血心肌 Bcl-2和 Bax蛋白的表达有较好的调控作用.