磷酸化胰岛素样生长因子结合蛋白-1的临床应用

临床判断宫颈成熟度一般用宫颈评分(Bishop评分)结合孕妇自述作出判断,没有相应的实验室指标。检测宫颈分泌物中磷酸化胰岛素样生长因子结合蛋白-1(IGFBP-1)正是弥补了这一不足之处。     

磷酸腺苷激活的蛋白激酶参与调节细胞外信号调节激酶1/2活化发挥对血管平滑肌细胞胰岛素样生长因子-1信号的抑制作用

目的 进一步证实在猪主动脉平滑肌细胞中磷酸腺苷激活的蛋白激酶（AMP-activated protein kinase,AMPK）抑制胰岛素样生长因子-1（insulin-like growth factor-1,IGF-1）刺激引起的细胞增生,以及探讨其可能的机制。方法 使用AMPK活化剂二甲双胍增强细胞内AMPK的活化（表现为AMPK第172位苏氨酸磷酸化增高）;采用定点突变获得组成性激活型AMPK突变体,设计短发卡RNA（short hairpin,shRNA）序列构建AMPK干扰载体,并分别包装产生组成性激活型AMPK和AMPK敲低慢病毒。分别采用AMPK活化剂二甲双胍处理、组成性激活型AMPK慢病毒感染和AMPK敲低慢病毒感染猪主动脉平滑肌细胞,观察AMPK活性对猪主动脉平滑肌细胞中IGF-1刺激引起的细胞外信号调节激酶1/2（extracellular signal-regulated kinases 1/2,ERK1/2）活性（表现为202位苏氨酸和204位酪氨酸的磷酸化）及其下游细胞增生的影响。结果 二甲双胍明显增强AMPK的活性（表现为172位苏氨酸磷酸化增高）,并明显抑制IGF-1刺激引起的ERK1/2活化（表现为202位苏氨酸和204位酪氨酸的磷酸化受到抑制）;组成性激活型AMPK表达能明显抑制IGF-1刺激引起的ERK1/2活化以及下游的细胞增生;在AMPK敲低细胞中,IGF-1能引起更强的ERK1/2活化。结论 AMPK能通过抑制ERK1/2活化抑制血管平滑肌细胞IGF-1信号,并能抑制IGF-1刺激引起的血管平滑肌细胞增生。     

血清胰岛素样生长因子-1、胰岛素样生长因子结合蛋白-3与2型糖尿病肾病的关系

目的:测定血清胰岛素样生长因子-1(IGF-1)、胰岛素样生长因子结合蛋白-3(IGF-BP3)水平,探讨其与2型糖尿病肾病的关系。方法:选择2型糖尿病患者86例,根据其尿微量白蛋白排泄率(UAER)结果分为单纯糖尿病组(SDM组)33例、早期糖尿病肾病组(EDN组)28例和临床期肾病组(CDN组)25例。检测IGF-1、IGF-BP3、UAER等指标,分析IGF-1、IGF-BP3与糖尿病肾病的发病和病情轻重的关系。结果:CDN组血清IGF-1、IGF-BP3和UAER均明显高于SDM与EDN组(P <0.01),CDN组血清IGF-1、IGF-BP3和UAER亦均明显高于EDN组(P <0.01)。 IGF-1与肌酐、尿素氮、UAER和IGF-BP3均呈正相关关系(P <0.01),与年龄和糖化血红蛋白均无相关关系(P >0.05),而与空腹血糖呈负相关关系(P <0.01)。结论:血清IGF-1、IGF-BP3水平与2型糖尿病肾病的发生发展有相关性,可作为糖尿病肾病早期的诊断指标之一。     

雄激素致不孕大鼠胰岛素样生长因子-1及其受体的变化

目的　观察雄激素致高胰岛素高雄激素不孕大鼠胰岛素样生长因子 1/胰岛素样生长因子 1受体(IGF 1/IGF 1R)的变化。方法　建立雄激素致高胰岛素高雄激素不孕大鼠模型 ,通过阴道涂片筛选各组大鼠 ;血清IGF 1测定采用放免法 ,IGF 1R的检测采用免疫组化法。结果　 (1)血清IGF 1水平 :两组间无统计学差异 ;(2 )胰腺、肝脏、卵巢和肾上腺IGF 1R免疫组化定量分析 :模型组 <正常组。结论　雄激素致不孕大鼠存在着主要靶器官低水平IGF 1R。     

小鼠胰岛素样生长因子-1基因体外克隆及表达的研究

目的 探讨小鼠胰岛素样生长因子-1(IGF-1)基因提取、鉴定及重组质粒转染COS-7细胞表达.方法 通过RT-PCR获取小鼠骨骼肌IGF-1的cDNA,将该基因亚克隆入重组质粒p1 (pcDNA3.1-Nestin-EGFP)中,构建重组质粒p2 (pcDNA3.1-Nestin-EGFP- IGF-1),脂质体转染COS-7细胞,ELISA检测细胞培养基中IGF-1蛋白量.结果 克隆IGF-1基因cDNA与GenBank中该基因序列一致,重组质粒转染COS-7细胞培养基中均含有IGF-1蛋白.结论 IGF-1基因成功构建到重组质粒p2中,且能在COS-7细胞中过表达.     

乳腺癌中胰岛素样生长因子-1受体及环氧化酶-2表达以及相关性研究

目的:探讨胰岛素样生长因子-1受体(IGF-IR)、环氧化酶-2(COX-2)在乳腺癌组织中的表达情况及其相互关系.方法:应用免疫组织化学Envision两步法对50例乳腺癌组织、20例乳腺良性疾病组织中IGF-IR和COX-2的表达进行检测及分析.结果:IGF-IR在乳腺癌和乳腺良性疾病表达率分别为80.00 %、50.00 %,乳腺癌组织中IGF-IR的表达率高于乳腺良性疾病组织(P＜0.05).有淋巴结转移组IGF-IR的表达率为92.59 %(25/27),无淋巴结转移组IGF-IR的表达率为65.22 %(15/23),差异有统计学意义(P＜0.05).IGF-IR的表达与患者的病理类型、临床分期、肿块大小和ER、PR、HER-2间,差异均无统计学意义(P＞0.05).COX-2在乳腺癌和乳腺良性疾病表达率分别为98.00 %、65.00 %,差异有统计学意义(P＜0.05).IGF-IR、COX-2在乳腺癌中的表达成正相关.结论:IGF-IR、COX-2的高表达可能与乳腺癌的发生、发展有关.IGF-IR、COX-2表达呈正相关,可能在乳腺癌发生发展过程中起到协同作用.IGF-IR可能参与了乳腺癌的转移过程.     

孕激素对早孕蜕膜基质细胞胰岛素样生长因子- Ⅰ受体基因表达的调控

目的　探讨孕激素对体外培养的人早孕蜕膜基质细胞胰岛素样生长因子 - 受体 (IGF- R)基因表达的影响。方法　采用逆转录 -聚合酶链反应 (RT- PCR)技术半定量检测不同浓度孕激素作用 72小时后及 0 .1μm ol/ L孕激素作用不同时间后人早孕蜕膜基质细胞中 IGF- R m RNA的表达水平。结果　体外培养的人早孕蜕膜基质细胞中 IGF- R m RNA呈强阳性表达 ,孕激素降调 IGF- R m RNA的表达 ,并与浓度呈显著负相关 (r=- 0 .6 80 ,P<0 .0 0 1)。孕激素终浓度为 0 .1μm ol/ L时 ,IGF- R m RNA的表达与作用时间无显著相关性 (r=0 .0 0 5 ,P>0 .0 5 )。结论　孕激素可能通过降调人早孕蜕膜基质细胞中 IGF- R m RNA的表达 ,调节基质细胞的增殖和蜕膜化 ,对早期妊娠的维持起重要作用     

胰岛素样生长因子-1和转化生长因子-β1在宫腔粘连患者子宫内膜表达的研究

目的：探讨胰岛素样生长因子-1（IGF-1）和转化生长因子-β1（TGF-β1）在宫腔粘连发生中的作用。方法45例宫腔粘连患者,其中轻、中、重度患者各15例,采用免疫组化法检测其正常子宫内膜组织及粘连组织中IGF-1、TGF-β1的表达水平。结果 IGF-1、TGF-β1在正常子宫内膜组织及粘连组织均有表达;在轻、中、重度粘连组患者正常子宫内膜组织中表达均低于粘连组织（P＜0．05）;随宫腔粘连程度加重,其在粘连组织中的表达逐渐增高,均呈重度组＞中度组＞轻度组（P＜0．05）,且粘连组织中两者呈正相关（r＝0．53,P＜0．01）。结论随宫腔粘连加重,粘连组织中IGF-1、TGF-β1表达增高,提示其可能参与宫腔粘连的形成。     

白藜芦醇抑制胰岛素样生长因子1促乳腺癌细胞增殖及其机制的研究

目的研究不同浓度白藜芦醇抑制胰岛素样生长因子1(IGF-1)介导的促乳腺癌细胞增殖效应及其机制。方法本研究以人乳腺癌MCF-7细胞株为研究对象,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞的增殖,免疫印迹法检测MCF-7细胞中磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)、p-PI3K、丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(AKT)及p-AKT蛋白的表达情况。结果不同浓度IGF-1(10、20、40ng/mL)可促进MCF-7细胞增殖,而不同浓度白藜芦醇(10、25、50μmol/L)对MCF-7细胞具有的增殖抑制作用,均具有浓度依赖性(P<0.05);白藜芦醇与IGF-1共同作用后,MCF-7细胞增殖明显降低(P<0.05);Wortmannin(10-6 mol/L)预处理后,IGF-1对MCF-7细胞的促增殖效应受到明显抑制(P<0.05);IGF-1(40ng/mL)作用MCF-7细胞后,细胞中p-PI3K与p-AKT蛋白的表达水平明显提高(P<0.05),而以白藜芦醇(50μmol/L)、IGF-1(40ng/mL)共同作用MCF-7细胞后,细胞中p-PI3K与p-AKT蛋白的表达水平明显低于IGF-1组(P<0.05)。结论白藜芦醇对IGF-1介导的促乳腺癌细胞增殖具有抑制作用,该抑制效应与PI3K-AKT信号途径密切相关。     

急性脑出血患者胰岛素样生长因子-1的动态变化及其临床意义

目的了解急性脑出血患者血清胰岛素样生长因子-1（IGF-1）水平的动态变化及其临床意义。方法采用放免法测定40例脑出血患者起病后2天内、2周时血清IGF-1的含量,并与20例健康者对照比较。结果发病2天内脑出血患者血清IGF-1水平明显低于对照组,相比较有显著差异（P〈0．01）,2周时血清IGF-1水平有恢复。结论脑出血患者急性期血清IGF-1浓度明显降低,脑出血患者急性期血清IGF-1水平可帮助判断病情轻重和预后。IGF-1也许能通过血脑屏障产生神经保护,具有潜在的临床价值。     

生肌象皮膏对2型糖尿病大鼠溃疡肉芽组织的胰岛素样生长因子-1及受体的影响

[目的] 对糖尿病大鼠溃疡创面肉芽组织的胰岛素样生长因子-1(IGF-1)及受体(IGF-1R)含量的动态观察,探讨生肌象皮膏促进糖尿病大鼠溃疡愈合的机制。[方法] 采用高脂饲料加链脉佐菌素(STZ)尾静脉注射制备2型糖尿病动物模型,模型动物于背部打孔,造成溃疡模型。糖尿病溃疡Wistar大鼠动物按随机数字表法随机分为糖尿病空白对照组、凡士林组、生肌象皮膏组。分别于1、7、14、21 d每组处死动物10只,手术取新鲜肉芽组织160 例,采用实时荧光定量PCR法检测IGF-1及受体的含量。[结果] 生肌象皮膏组、凡士林组、糖尿病对照组IGF-1的表达于7 d增加,第14天达到高峰,在21 d各组的IGF-1的含量明显低于空白组。在第7、14天凡士林组、糖尿病对照组与空白组比较P<0.05.生肌象皮膏组与空白组比较具有增加的趋势。在21 d凡士林组、糖尿病对照组、生肌象皮膏组IGF-1含量明显下降,与空白组比较P<0.05,糖尿病各组间比较各时间点无统计学意义。生肌象皮膏组、凡士林组、糖尿病对照组IGF-1R的分泌在各时间段均低于空白组,且呈递减趋势。第7、14、21天空白组、生肌象皮膏组与糖尿病对照组比较有显着性差异。第14、21天生肌象皮膏组与凡士林组比较有显着性差异。[结论] IGF-1在糖尿病溃疡早期、中期含量增加,而糖尿病溃疡后期含量减少。生肌象皮膏不能促进糖尿病溃疡肉芽组织中的胰岛素样生长因子的表达,却能增加胰岛素样生长因子受体的表达。     

胰岛素样生长因子1受体在甲状腺相关性眼病眼眶脂肪细胞增殖和分化中的作用

目的 观察胰岛素样生长因子1 (IGF-1)受体(IGF-1R)在甲状腺相关性眼病(TAO)眼眶脂肪组织中的表达及分布情况,探讨IGF-1对眼眶前脂肪细胞增殖和分化的影响.方法 收集2014年9月至2015年1月期间入住第二军医大学长征医院的TAO组患者(n=6)和对照组患者(n=5)的眼眶脂肪组织,用蛋白质印迹法、实时定量PCR及免疫组化法检测两组患者眼眶脂肪组织中IGF-1R的表达及分布情况.分别提取两组患者的眼眶前脂肪细胞,用CCK-8法检测不同浓度(0、1、5、10、20 nmol/L) IGF-1对细胞增殖能力的影响.体外分化细胞后用油红O染色法及蛋白质印迹法观察两组细胞的分化情况和IGF-1R的表达变化;实时定量PCR检测不同浓度(0、1、5、10、20 nmol/L) IGF-1对TAO组细胞分化水平的影响.结果 TAO组患者眼眶脂肪组织中IGF-1R蛋白及mRNA的表达均高于对照组(P＜0.01).不同浓度IGF-1均可以促进眼眶前脂肪细胞的增殖,且在1～20 nmol/L IGF-1作用下在TAO组细胞的增殖能力均高于对照组(P＜0.05,P＜0.01).TAO组前脂肪细胞分化前、后细胞中IGF-1R的表达水平均明显高于对照组.相较于未加IGF-1组,1～20 nmol/L IGF-1均促进TAO组前脂肪细胞中PPARγ mRNA的表达(P＜0.01);油红O染色检测结果显示随着IGF-1浓度的升高,脂滴合成逐渐增加(P＜0.05,P＜0.01).结论 IGF-1R在TAO患者脂肪组织及前脂肪细胞中的表达较高,IGF-1可以促进TAO眼眶前脂肪细胞的增殖和分化.     

生长激素在卵巢低反应患者中的应用研究

目的 探讨生长激素对控制性超排卵中卵巢反应低下的患者的应用价值.方法 将38例符合卵巢反应低下的不孕症患者,随机分为生长激素组(21例)和对照组(17例),均采用短方案降调节,其中生长激素组从周期第2～3d每天注射4IU生长激素直至HCG日,比较两组超排卵过程及结局.结果 两组的一般情况无明显差异;两组超排过程中的各项参数,包括各时期内分泌结果、促性腺激素的使用时间、剂量、获卵数、受精率、卵裂率、优质胚胎率以及移植胚胎数目均无显著性差异,最终GH组获得了42.1％的临床妊娠率,而对照组仅为13.3％.两组中,超排周期第二天血清GH、抑制素、IGF-Ⅰ、IGF-Ⅱ及IGFBP3水平均无显著差异;超排周期第6天两组患者的抑制素水平无显著差异;注射HCG日中,GH组血清IGF-Ⅰ水平较对照组显著增加(P＜0.000);IGF-Ⅱ水平在两组间无显著差异;GH组血清IGFBP3水平较对照组显著下降(P ＜0.000);两组患者卵泡液中IGF-Ⅰ、IGF-Ⅱ及IGFBP3水平均无显著差异.结论 在卵巢低反应患者中,在促排过程中加用生长激素可以显著提高血中IGF-Ⅰ水平,降低IGFBP3水平,妊娠率有上升趋势.     

胰岛素样生长因子-1受体在淋巴结阴性、淋巴结阳性乳腺癌组织和正常乳腺组织中的表达

目的:探讨胰岛素样生长因子-1受体(in sulin-like growth factor-1 receptor,IGF-1R)在淋巴结阴性、淋巴结阳性的乳腺癌组织和正常乳腺组织中的分布和表达。方法:采用免疫组织化学方法,对淋巴结阳性、淋巴结阴性的乳腺癌组织和正常的乳腺组织中IGF-1R的表达情况进行检测分析。结果:淋巴结阴性的乳腺癌组织中IGF-1R的阳性表达率为94.12％(16／17),淋巴结阳性的乳腺癌组织中IGF-1R的阳性表达率为91.30％(21／23),正常组织中IGF-1R的阳性表达率为58.33％(7／12)。淋巴结阴性的乳腺癌组织中有12例呈强阳性表达(强表达率70.59％)。淋巴结阳性的乳腺癌组织中有8例呈强表达(强表达率34.78％)。淋巴结阳性和淋巴结阴性的乳腺癌组织中IGF-1R的阳性表达率均明显较正常乳腺组织高(P<0.05),淋巴结阴性的乳腺癌组织中IGF-1R的强表达率比淋巴结阳性的乳腺癌组织高(P<0.05)。结论:由此推断,IGF-1R在乳腺癌发生发展过程中发挥着重要作用。IGF-1R有可能成为临床乳腺癌诊断和判断预后的一个重要指标。     

外源性胰岛素样生长因子-1对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的改善作用

目的:探讨胰岛素样生长因子-1(IGF-1)对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的改善作用及其脑保护机制.方法:36只大鼠随机分为3组:假手术组、模型组和IGF-1组,每组12只.模型组和IGF-1组采用线栓法建立大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型,假手术组除不插线外其余步骤同模型组.IGF-1组于缺血2 h再灌注1 h后经尾静脉注入5 mg/L IGF-11 ml,假手术组和模型组同时经尾静脉注入1 ml生理盐水.脑缺血再灌注24 h后,各组取6只大鼠灌注,取视交叉前后各2 mm的脑组织,光镜下观察病理改变,免疫组化法测nNOS阳性表达.另6只断头取脑,TTC染色测脑梗死体积.结果:光镜下观察,假手术组大鼠脑组织结构无明显变化.模型组大鼠皮层少见正常神经细胞,神经细胞减少,有大量淋巴细胞浸润;损伤神经元空泡变性多而明显.与模型组相比,IGF-1组皮层神经元细胞空泡变性较少,程度较轻;正常细胞增多,可见少数淋巴细胞浸润.假手术组未发生脑梗死.IGF-1组脑梗死体积百分比为(12.4±0.9)%,较模型组的(24.6±3.7)%减小(t=9.97,P＜0.01).模型组、IGF-1组和假手术组大鼠脑皮层nNOS阳性细胞数依次为(38.83±2.92),(28.33±2.58)和(15.00±1.41),逐渐降低(F=106.8,P＜0.05).结论:外源性IGF-1对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤有保护作用,该作用可能与抑制nNOS的上调有关.     

食管癌患者血清胰岛素样生长因子-1水平检测

目的:检测食管癌患者血清胰岛素样生长因子-1(IGF-1的水平.方法:采用ELISA法检测52例食管癌患者手术前后血清IGF-1含量,以22名正常健康人为对照.结果:手术前食管癌患者血清IGF-1水平为(292.57±100.53 μg/L),手术后为(280.50±81.46 μg/L,正常人血清IGF-1水平为(196.75±58.31 μg/L).食管癌患者手术前后血清IGF-1水平均高于正常人(P＜0.05).手术前后食管癌患者血清IGF-1水平差异无统计学意义(P＞0.05).结论:IGF-1参与食管癌的发病过程,是食管癌发生发展过程中重要的生长因子之一.     

人胰岛素样生长因子前体基因的重组、表达及其蛋白纯化

目的：构建含有人胰岛素样生长因子（human insulin-like growth factor-1，hIGF-1）前体编码全长cDNA的重组载体，使其在E-coli BL21（DE3）中表达，并对此表达菌株所表达的重组蛋白进行纯化，同时探讨其抗原性及应用价值。方法：采用PCR法，扩增编码hIGF-1前体cDNA的片段，通过双酶切、胶回收纯化、连接后得到pET32a（＋）／hIGF-1重组载体，然后将其转化入BL21（DE3）中，经IPrG诱导后表达的重组蛋白经镍柱亲和层析纯化，并用Western blot法检测重组蛋白的抗原活性。结果：重组质粒pET32a（＋）／hIGF-1经双酶切鉴定和测序分析后证实构建成功。BL21（DE3）表达的重组蛋白经SDS-PAGE电泳后显示．其表达量占细菌总蛋白量的25％左右．该重组蛋白经镍柱亲和层析纯化后其纯度高达90％以上。Western blot结果显示非常清晰的免疫印迹条带，表明此重组蛋白具有免疫学特异性。结论：pET32a（＋）／hIGF-1重组载体构建成功，并能够高效表达。     

血清胰岛素样生长因子-1浓度对绝经后乳腺癌他莫西芬治疗患者子宫内膜改变的相关性研究

目的探讨血清胰岛素样生长因子-1(insulin-like growth factor-1,IGF-1)在乳腺癌他莫西芬治疗患者子宫内膜增厚过程中的作用。方法对乳腺癌他莫西芬治疗患者39人进行为期24个月的研究,每3个月行妇科超声检测子宫内膜厚度并留取空腹血清备用,B超子宫内膜厚度≥0.5 cm或研究期满时终止,26例子宫内膜厚度<0.5 cm者为A1组,13例子宫内膜厚度≥0.5 cm者为A2组,分别检测血清IGF-1浓度。结果他莫西芬治疗乳腺癌造成子宫内膜增厚的发生率为33.33%(13/39),平均年龄明显小于子宫内膜无增厚的患者(P<0.05)。血清IGF-1浓度随他莫西芬治疗时间延长逐渐下降,治疗后6个月时,A1组明显低于A2组,差异有统计学意义(P<0.05),21个月时差异无统计学意义(P>0.05)。结论他莫西芬可以降低乳腺癌患者血清IGF-1浓度,造成的子宫内膜增厚的原因可能与血清IGF-1浓度下降缓慢有关。     

抗人胰岛素样生长因子-1单克隆抗体的制备与鉴定

目的:制备稳定分泌抗人胰岛素样生长因子-1(hIGF-1)单克隆抗体(mAb)的杂交瘤细胞系,并对其分泌的mAb进行鉴定.方法:用纯化后的hIGF-1重组蛋白免疫Balb/c小鼠,利用杂交瘤细胞融合技术制备抗hIGF-1的mAb,用Western blot法鉴定mAb的特异性,用间接ELISA法检测mAb腹水效价及mAb的亲和力,杂交瘤细胞染色体分析,鉴定Ig亚类.结果:获得2株能稳定分泌抗hIGF-1的mAb杂交瘤细胞系,Western blot分析显示,该mAb能与具有生物学活性的成熟IGF-1蛋白结合.腹水mAb效价可达6×104.mAb相对亲和力为2.1×109/mol～7.8×109/mol.2株单抗属IgM亚类.染色体分析符合杂交瘤细胞特征.结论:成功制备出抗hIGF-1的2株mAb杂交瘤细胞,为进一步用于hIGF-1的临床检测和实验研究创造了条件.