脾虚1号方对脾虚证功能性消化不良大鼠小肠葡萄糖转运蛋白1的影响

目的探讨脾虚型功能性消化不良(FD)大鼠小肠组织葡萄糖转运体蛋白1(GLUT1)蛋白与mRNA表达及脾虚1号方的干预作用。方法 70只7日龄雄性SD大鼠随机分为正常对照组(n=10)、FD模型组(单模型组,n=10)、脾虚型FD模型组(n=50)。正常组给予2%蔗糖溶液灌胃,FD模型组和脾虚型FD模型组均给予0.1%蔗糖碘乙酰胺蔗糖溶液灌胃,0.2 m L/只·d,连续6d。脾虚型FD模型组正常饲料喂养至6周龄后叠加改良小平台站立,连续14 d;造模结束后随机分为双模型组、多潘立酮组和脾虚1号方低、中、高剂量组,每组10只,连同正常组、单模型组,每日分别给予蒸馏水10 m L/kg、多潘立酮3.125 mg/kg和脾虚1号方1.275、2.55、5.1 g/kg和灌胃14d。采用免疫组化、Western-blot和RT-PCR方法检测小肠组织GLUT1蛋白与mRNA表达。结果与正常组相比,双模型组大鼠小肠黏膜GLUT1蛋白平均光密度值、小肠组织GLUT1蛋白和mRNA表达量均降低(P0.05,P0.01);与双模型组相比,脾虚1号方低剂量组大鼠小肠黏膜GLUT1蛋白平均光密度值、小肠组织GLUT1蛋白和mRNA表达量均升高(P0.01)。结论脾虚型FD大鼠存在GLUT1 mRNA及蛋白的表达量降低,脾虚1号方能够上调GLUT1 mRNA及蛋白的表达量。     

脾虚四号方含药血清对功能性腹泻脾虚证大鼠离体结肠平滑肌细胞的影响

目的从细胞水平角度,观察脾虚四号方含药血清干预离体培养功能性腹泻脾虚证模型大鼠的结肠平滑肌细胞的变化。方法对功能性腹泻脾虚证模型大鼠进行提取离体结肠平滑肌细胞并原代培养,将其分为6组:空白对照组、模型组、脾虚四号方低、中、高剂量组、蒙脱石散组,各组分别5%含药血清干预48 h,用细胞增殖和毒性检测(CCK-8)法测定细胞增殖活性,实时荧光定量PCR检测各组相关脑肠肽的基因表达。结果 CCK-8法检测结果显示:与空白对照组相比,模型组结肠平滑肌细胞OD值极显著降低(P0.01);与模型组相比,各含药血清干预组结肠平滑肌细胞OD值极显著升高(P0.01)。实时荧光定量PCR检测结果显示:与空白对照组相比,模型组胆囊收缩素(CCK)、血管活性肠肽(VIP)、生长抑素(SS)mRNA表达均显著降低(P0.05)。与模型组相比,各含药血清干预组均有表达升高趋势,脾虚四号方低剂量组较模型组CCK mRNA表达显著升高(P0.05),脾虚四号方低、中、高剂量组较模型组VIP mRNA表达极显著升高(P0.01)。结论脾虚四号方含药血清能够有效促进模型结肠平滑肌细胞的增殖活性,脑肠肽CCK、VIP、SS mRNA表达变化可能有利于进一步阐释功能性腹泻脾虚证在脑肠肽胃肠激素方面发病机制。     

平胃胶囊对肝郁脾虚型功能性消化不良模型大鼠胃蛋白质组学影响

目的:探讨平胃胶囊治疗肝郁脾虚型功能性消化不良的分子机制。方法:夹尾刺激、饮食失节、过度疲劳的复合因素方法建立肝郁脾虚型FD大鼠模型,造模10 d,将16只造模成功的大鼠随机分为模型组和平胃胶囊组,每组各8只,平胃胶囊组以0.24 g/mL的混悬液1 mL/100 g灌胃3周,正常组和模型组以1 mL/100 g生理盐水灌胃,3组均灌胃给药3周,2次/d。记录大鼠体质量、饮食,测定胃排空及肠推进,胃组织HE染色,蛋白质组学方法筛选差异表达的蛋白,采用MALDI-TOF-MS质谱仪进行质谱分析。结果:平胃胶囊组大鼠体质量、饮食均较模型组上升(P0.05);经典夹尾刺激、配合不规律饮食、过度疲劳的方法可成功复制肝郁脾虚型FD大鼠模型;平胃胶囊具有增加胃排空和肠推进,促进胃肠动力的作用;成功鉴定出10种蛋白,模型组与正常组相比有差异而平胃胶囊可使差异趋势逆转的蛋白点为8个,其中5个表达上调,3个表达下调。结论:平胃胶囊治疗肝郁脾虚型FD的分子机制可能与改善细胞骨架和形态、能量代谢、生物氧化等有关。     

舒胃汤对功能性消化不良大鼠胃肠平滑肌Bcl-2、Caspase-12表达的影响

目的 通过观察舒胃汤对功能性消化不良(functional dyspepsia,FD)肝郁脾虚证模型大鼠胃窦和幽门区Bcl-2、Caspase-12蛋白及mRNA表达的影响,探讨舒胃汤治疗FD的作用和机制.方法 将Wistar大鼠60只随机分成空白组,模型组,莫沙必利组,舒胃汤低、中、高剂量组.按改良复合病因造模法造成FD肝郁脾虚证模型,连续21 d.分组干预,连续14d.处死大鼠后,取胃窦平滑肌和十二指肠上段组织.Western-blot法检测Bcl-2、Caspase-12蛋白表达;RT-PCR法检测Bcl-2、Caspase-12的mRNA表达.结果 Western-blot检测发现,与空白组比,模型组Caspase-12表达升高而Bcl-2表达降低(P<0.05);与模型组比,舒胃汤中、高组Caspase-12 mRNA表达显著降低(P<0.01).RT-PCR检测发现,与空白组比,模型组Caspase-12表达显著升高而Bcl-2表达显著降低(P<0.01);与模型组相比,舒胃汤低、中、高剂量组Caspase-12表达显著降低(P<0.01),中、高剂量组Bcl-2表达显著升高(P<0.01).结论 舒胃汤可能通过调控胃窦和幽门区凋亡因子Bcl-2、Caspase-12的表达抑制平滑肌细胞的凋亡,从而有效地治疗功能性消化不良.     

糖毒清对糖尿病肾病大鼠肾组织TGF-β1mRNA及PAI-1表达的影响

目的通过检测正常及以不同药物治疗的各组糖尿病肾病肾功能不全(DRI)大鼠肾组织转化生长因子-β,mRNA(TGF-β1mRNA)和纤溶酶原激活物抑制物-1(PAI-1)的表达情况,探讨糖毒清治疗DRI的可能机制。方法采用5/6肾切除合中等剂量的STZ腹腔注射方法建立DRI大鼠模型,将造模成功的50只大鼠随机分为五组:模型组(生理盐水2ml/d灌胃);糖毒清高剂量组(糖毒清6.75g/(kg·d)灌胃);糖毒清中剂量组(糖毒清4.5g/(kg·d)灌胃);糖毒清低剂量组(糖毒清2.25g/(kg·d)灌胃);尿毒清组(尿毒清2.25g/(kg·d)灌胃)。另外10只正常对照组大鼠予生理盐水2ml/d灌胃;治疗10周后,通过原位杂交和免疫组化的方法检测各组大鼠肾组织TGF-β1mRNA和PAI-1的表达情况。结果模型组大鼠肾组织TGF-β1mRNA和PAI-1呈高表达,而糖毒清各治疗组的表达明显减少。结论糖毒清可以减少DRI大鼠肾组织TGF-β1mRNA和PAI-1的过度表达,从而达到控制或延缓糖尿病肾病肾功能恶化的作用。     

复肾功方对慢性肾功能衰竭大鼠肾脏nephrin mRNA表达的影响

目的 研究复肾功方对慢性肾功能衰竭（chronic renal failure,CRF）大鼠肾组织足细胞裂孔隔膜蛋白（nephrin） mRNA表达的影响,探讨其降低尿蛋白、减轻肾损害的作用机制。方法 将55只雄性SD大鼠随机分为正常组,模型组,复肾功方低、中、高剂量组,每组11只。正常组常规饲养,其余4组大鼠食用含腺嘌呤饲料建立慢性肾功能衰竭模型,连续喂养21 d。造模成功后,所有大鼠改用常规饲料。正常组和模型组按20 mL/(kg·d)灌胃给予生理盐水;复肾功方低、中、高剂量组按大鼠体质量分别以生药4、8、16 g/kg灌胃复肾功方,1次/d,连续灌胃30 d。实验结束后,收集大鼠尿液测定24 h尿蛋白定量,检测各组大鼠血清血肌酐(SCr)和尿素氮（BUN）水平,HE染色检测肾小球组织形态学改变,免疫荧光检测nephrin蛋白表达,Real-Time PCR法观察肾脏nephrin mRNA表达情况。结果 与正常组比较,模型组24 h尿蛋白定量、SCr和BUN水平升高(P<0.05),nephrin蛋白及mRNA表达下降（P<0.05);与模型组比较,经复肾功方治疗后,24 h尿蛋白定量、SCr和BUN水平降低（P<0.05）,肾组织nephrin蛋白及mRNA的表达升高（P<0.05）。结论 复肾功方降低CRF大鼠尿蛋白,减轻肾损害程度,其机制可能与升高肾组织nephrin蛋白及mRNA的表达、减轻足细胞损伤有关。     

苍术提取物调节脾虚证大鼠胃肠动力障碍的作用机制研究

目的 观察苍术提取物对实验性脾虚证大鼠胃肠动力的影响,探讨苍术提取物调节胃肠动力的作用机制.方法 将雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、多潘立酮组和苍术提取物高、中、低剂量组.除正常组外,其余各组喂饲小承气汤煎剂加饥饱失常建立脾虚证大鼠模型,造模时间15 d.造模结束后,苍术提取物低、中、高剂量组分别灌胃5、10、20 g/kg的中药煎剂2mL,多潘立酮组灌胃5 mg/kg的多潘立酮混悬溶液2mL,正常组及模型组则灌胃生理盐水2mL,1次/d,持续灌胃10 d.10 d后所有大鼠均用炭末灌胃法行大鼠胃内残留率、小肠推进率的测定,腹主动脉采血用放射免疫法检测血浆胃动素(MTL)、P物质(SP)、生长抑素(SS)含量,比色法测定大鼠空肠上皮细胞三磷酸腺苷(ATP)的含量,免疫组化法测定大鼠胃窦平滑肌细胞内肌球蛋白轻链激酶(MLCK)及结肠组织中c-kit表达量.结果 与模型组比较,正常组、多潘立酮组和苍术提取物高、中、低剂量组的胃内残留率明显下降、小肠推进率明显升高,而大鼠血浆MTL、SP和SS含量不同程度升高,差异均有统计学意义(P＜0.05或P ＜0.01);与模型组比较,正常组、多潘立酮组和苍术提取物高、中、低剂量组大鼠空肠上皮细胞ATP的含量及胃窦平滑肌细胞内MLCK和结肠组织中c-kit的表达量不同程度升高,差异均有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01).结论 苍术提取物可从不同方面整体改善由于脾虚导致的大鼠胃肠功能障碍,对因脾虚导致的胃肠功能紊乱有较好的调节和治疗作用.     

疏肝健脾活血方对肝郁脾虚证FD大鼠血浆NT、CRH、SS的影响

目的:研究疏肝健脾活血方对肝郁脾虚证功能性消化不良(functional dyspepsia,FD)大鼠血浆神经降压素(neurotensin,NT)、促肾上腺皮质激素释放激素(corticotropin releasinghormone,CRH)、生长抑素(Somatostatin,SS)的影响,探讨其作用机制。方法:70只SPF级雌性SD大鼠按体质量随机抽取10只作为正常组,其余60只采用"慢性束缚+过度疲劳+饮食失节"复合因素法造模21 d,造模成功后,按体质量随机分为模型组、疏肝健脾活血方高剂量组、中剂量组、低剂量组、柴芍六君子汤组、多潘立酮组。分组后,正常组和模型组大鼠灌胃给予相应体积纯净水,其他大鼠灌胃给予相应药物干预14 d。实验结束后,ELISA法检测血浆NT、CRH、SS含量。结果:与正常组比较,模型组大鼠血浆NT含量显著下降(P0.05);血浆CRH含量明显增加(P0.05);SS含量显著下降(P0.01)。给药干预后,与模型组比较,多潘立酮组、柴芍六君子组、疏肝健脾活血方高剂量组、疏肝健脾活血方低剂量组大鼠血浆NT含量显著增加(P0.05),中剂量组大鼠血浆NT含量有增加的趋势,但差异无统计学意义(P0.05);多潘立酮组、疏肝健脾活血方高剂量组、疏肝健脾活血方中剂量组、疏肝健脾活血方低剂量组大鼠血浆CRH含量显著下降(P0.05);多潘立酮组、柴芍六君子组、疏肝健脾活血方各剂量组大鼠血浆SS含量显著增加(P0.05或P0.01)。结论:疏肝健脾活血方能够调节肝郁脾虚型FD大鼠血浆NT、SS、CRH表达,这可能是其作用机制之一。     

枳实总黄酮苷对功能性消化不良模型大鼠内脏敏感性的影响

目的探讨枳实总黄酮苷对功能性消化不良(FD)模型大鼠内脏敏感性的影响及可能的作用机制。方法 10日龄雄性SD大鼠40只随机分为正常组,模型组,枳实总黄酮苷高、中、低剂量组,每组8只。采用碘乙酰胺灌胃联合夹尾刺激的方法,建立FD大鼠模型。大鼠8周龄时,开始灌胃相应药物,共14 d。检测胃扩张刺激时腹部撤退反射(AWR)评分、颈斜方肌肌电(EMG)及胃顺应性,评价枳实总黄酮苷对大鼠内脏敏感性的影响,并筛选出最优剂量进行下一步研究。将另15只10日龄SD大鼠随机分为正常组、模型组、枳实总黄酮苷最优剂量组,每组5只。造模方法及干预方法同上。检测大鼠胃及脊髓中5-羟色胺(5-HT)含量及脊髓中c-fos mRNA的表达。结果大鼠胃内球囊压力在40、50、60 mm Hg时,枳实总黄酮苷高、中剂量组AWR评分及颈斜方肌EMG均方根变化率明显低于模型组(P0.05),胃顺应性高于模型组(P0.05),而枳实总黄酮苷中、高剂量组间比较无统计学差异(P0.05)。因此,枳实总黄酮苷中剂量为最优剂量。枳实总黄酮苷中剂量可明显减低5-HT的含量、c-fos mRNA表达(P0.05),且与正常组比较无统计学差异(P0.05)。结论枳实总黄酮苷可以改善FD模型大鼠内脏高敏感性,作用机制可能与调节5-HT及c-fos表达有关。     

甘草酸配伍蛇床子素对大鼠酒精性脂肪肝的治疗作用

目的研究甘草酸配伍蛇床子素对大鼠酒精性脂肪肝的治疗影响,初步探讨组分配伍的作用机制。方法建立大鼠酒精性脂肪肝模型后,随机分为正常组、模型组、阳性药(力平之)组、蛇床子素组(Ost)、甘草酸组(GL)、蛇床子素与甘草酸配伍高、中、低剂量组。治疗组从实验第5周起,分别给予药物灌胃:阳性药组ig力平之20mg/(kg·d),蛇床子素组10mg/(kg·d)ig,甘草酸组22.5mg/(kg·d)ig,配伍低剂量组为ig蛇床子素5mg/(kg·d)和甘草酸11.25mg/(kg·d),配伍中剂量组为ig蛇床子素10mg/(kg·d)和甘草酸22.5mg/(kg·d),配伍高剂量组为ig蛇床子素20mg/(kg·d)和甘草酸45mg/(kg·d),正常组和模型组灌胃等体积的生理盐水连续灌胃6周。末次给药后,观察大鼠一般情况;光镜观察肝脏的病理变化,同时分别测定大鼠血清门冬氨酸氨基转移酶(AST)、碱性磷酸酶(AKP)、谷丙转氨酶(ALT)水平以及肝组织匀浆中总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)含量;Western blot法检测大鼠肝组织PPARα蛋白的表达情况。结果各治疗组与模型组比较,肝组织病理变化有不同程度的改善;甘草酸配伍蛇床子素中剂量和高剂量组能显著降低血清ALT、AST和AKP水平(P0.05);大鼠肝组织药理活性测试结果显示配伍中剂量和高剂量组能显著降低肝组织MDA含量,提高SOD的活性,差异具有统计学意义(P0.01),配伍中剂量组能显著降低大鼠肝脏TG和TC含量(P0.05);Western blot结果表明,各治疗组PPARα蛋白水平与模型组相比有不同程度上调,而配伍中剂量和高剂量组肝组织中PPARα蛋白水平表达量显著上调,具有统计学意义(P0.01)。结论甘草酸与蛇床子素合理的组分配伍能协同治疗酒精性脂肪肝,可能通过配伍改善肝脏功能、调节脂肪代谢、抗脂质氧化作用和增加PPARα蛋白的表达,促使损伤的肝组织得以修复。     

培元解郁方对几种抑郁模型小鼠的抗抑郁作用及机制研究

目的研究培元解郁方的抗抑郁作用和作用机制。方法采用利血平2.5 mg/kg腹腔注射,建立小鼠利血平抑郁模型;采用强迫游泳方法,建立急性应激小鼠抑郁模型;采用长期(14 d)束缚加噪声,建立慢性应激小鼠抑郁模型。观察培元解郁方对利血平抑郁模型小鼠的体温、眼睑下垂、出圈率的影响;对急性应激模型、慢性应激模型小鼠的强迫游泳不动时间的影响。采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测急性应激模型小鼠脑中5-羟色胺(5-HT)、去甲肾上腺素(NA)及吲哚胺-2,3-双加氧酶(IDO)的含量;慢性应激模型小鼠脑中5-HT、IDO的含量。并采用荧光定量PCR检测慢性应急模型小鼠脑中IDO mRNA的表达情况。结果培元解郁方各剂量组均能拮抗利血平抑郁模型小鼠的体温下降(P0.01),此外高剂量还可改善利血平引起的眼睑下垂、运动不能的状况(P0.05),中剂量组可改善运动不能的状况(P0.05)。培元解郁方中、低剂量组均可缩短急性应激模型小鼠不动时间(P0.05、P0.01),且显著增加脑中5-HT、NA的含量(P0.05、P0.01)。培元解郁方高、中、低剂量组均可不同程度地缩短慢性应激模型小鼠强迫游泳不动时间、增加脑组织中5-HT的含量、降低IDO的含量并上调IDO mRNA的表达(P0.05)。结论培元解郁方对利血平、强迫游泳、慢性应激造成的小鼠抑郁症状均有一定的改善作用。其机制可能与增加抑郁模型小鼠脑中单胺类神经递质5-HT、NA含量,抑制IDO活性、下调IDO mRNA表达有关。     

益气活血通络方对糖尿病周围神经病变小鼠JNK信号通路蛋白及炎性因子的影响

目的研究益气活血通络方对糖尿病周围神经病变模型小鼠(db/db小鼠)JNK信号通路蛋白及炎性因子的影响,探讨其对db/db小鼠周围神经的保护作用机制。方法 40只db/db小鼠随机分为5组:模型组、硫辛酸组和益气活血通络方高、中、低剂量(6.4、3.2、1.6 g/kg)组,另设8只db/m小鼠作为正常组。灌胃给药,1次/d,连续8周。末次给药后,测定小鼠足底热敏反应时间和运动神经传导速度(MNCV);酶联免疫吸附法(ELISA法)检测血清中白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;Western blot法检测背根神经节中c-jun氨基末端激酶(JNK)和磷酸化的c-jun氨基末端激酶(p-JNK)的蛋白表达。结果与正常组比较,模型组小鼠MNCV减慢,足底热敏反应时间延长,血清中IL-1β、TNF-α水平升高,背根神经节中JNK、p-JNK蛋白的表达增强,差异具有统计学意义(P0.01或P0.05)。与模型组比较,益气活血通络方能提高小鼠MNCV,缩短足底热敏反应时间,降低血清中IL-1β、TNF-α水平,一定程度下调背根神经节中JNK、p-JNK的蛋白表达(P0.01或P0.05)。结论益气活血通络方能抑制JNK信号转导通路的异常激活,减轻db/db小鼠炎症反应,从而保护周围神经的功能。     

杞红方对寒凝血瘀衰老大鼠心脏保护作用的实验研究

目的探究杞红方对寒凝血瘀衰老大鼠心脏的影响。方法 48只SD大鼠随机分为空白对照组,模型组,维生素E组(13.5 mg/kg),杞红方低、中、高剂量(45、90、180 mg/kg)组。除空白对照组外,其余5组运用28 d臭氧致衰复合14 d冰水致寒凝血瘀造模法,制作寒凝血瘀衰老大鼠模型。第29天腹主动脉取血分离血清、血浆,分离心脏,检测血清总超氧化物歧化酶(T-SOD)、铜锌超氧化物歧化酶(Cu-Zn-SOD)、锰超氧化物歧化酶(Mn-SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活力,丙二醛(MDA)含量,血浆凝血4项(PT、APTT、TT、FIB)。通过HE染色观察心脏细胞形态,Masson染色观察纤维沉积量,免疫组化检测转化生长因子β1(TGF-β1)表达量以评价寒凝血瘀衰老模型,并观察杞红方对大鼠心脏的保护作用。结果与空白对照组相比,模型组T-SOD、Cu-Zn-SOD、Mn-SOD、CAT、GSH-Px活力明显降低(P0.05),MDA含量明显升高(P0.05),PT、APTT明显降低(P0.05),FIB含量明显升高(P0.05),光镜下Masson染色,形态计量心脏胶原纤维沉积明显增加(P0.05),TGF-β1表达量明显升高(P0.05)。与模型组相比,杞红方中、高剂量均能明显回升T-SOD、Cu-Zn-SOD、CAT、GSH-Px活力(P0.05),明显回降MDA含量(P0.05),明显回升PT、ATPP(P0.05),明显回降FIB含量(P0.05),明显回降心脏细胞胶原纤维沉积(P0.05),明显回降TGF-β1表达量(P0.05)。结论杞红方对寒凝血瘀衰老大鼠的心脏具有保护作用。     

缬草醛对肠易激综合征模型大鼠胃肠敏感性和结肠中5-HIAA及5-HT相关受体蛋白表达的影响作用

目的探讨蜘蛛香环烯醚萜类成分缬草醛对慢-急性应激致肠易激综合征(IBS)模型大鼠的治疗作用及其对5-羟吲哚乙酸(5-HIAA)及5-羟色胺(5-HT)相关受体蛋白表达的影响作用。方法将SD雄性大鼠平均随机分为空白对照组、模型组及缬草醛高、中、低剂量组(0.6、0.3、0.15 mg/kg)、匹维溴铵组(25 mg/kg)。采用慢-急性应激结合孤养的方法建立IBS大鼠模型,观察缬草醛对IBS模型大鼠腹部回撤反射(AWR)评分的影响作用;使用高效液相色谱法测定大鼠结肠中5-HIAA含量;使用Western Blot法检测缬草醛对IBS模型大鼠结肠5-HT1A、5-HT3A及5-HTR4受体蛋白表达的影响。结果与模型组相比,缬草醛各剂量组均能够降低IBS模型大鼠AWR评分,并降低结肠内5-HIAA含量(P0.05);缬草醛各剂量组均可调节结肠内5-HT1A、5-HT3A及5-HTR4受体的蛋白表达。结论缬草醛对慢-急性应激致IBS模型大鼠的胃肠道功能亢进有明显抑制作用,可降低内脏敏感性,提示蜘蛛香环烯醚萜对IBS的症状有改善作用,作用机制可能与调节结肠内5-HIAA含量及5-HT相关受体的蛋白表达水平相关。     

益气养阴消癥通络中药对早期糖尿病大鼠肾小球滤过屏障裂孔膜蛋白的影响

目的探讨益气养阴消癥通络中药对糖尿病大鼠肾小球滤过屏障的影响。方法选择雄性SD大鼠110只,随机分为对照组、模型组、厄贝沙坦组和中药低、中、高剂量[5.29、10.58、21.16 g/(kg·d)]组。用左肾切除术加腹腔注射链脲佐菌素(STZ)制备糖尿病肾病模型,对照组只行左肾切除术。厄贝沙坦组大鼠给予厄贝沙坦15 mg/(kg·d)灌胃,益气养阴消癥通络中药低、中、高剂量组分别灌胃给药,对照组、模型组大鼠等剂量生理盐水灌胃,连续6周。实验结束时用PCR及Western blot印迹法测定肾组织CD2相关蛋白(CD2AP)及wilms'肿瘤抑制基因(WT-1)表达。结果与模型组比较,中药低、中、高剂量组和厄贝沙坦组CD2AP、WT-1表达显著增加(P0.01)。结论益气养阴、消癥通络中药可保护肾小球滤过屏障外层裂孔膜和足细胞的结构与功能,延缓糖尿病肾病的发生发展。     

清脑宣窍方有效组分对缺血性脑中风大鼠血脑屏障上P-糖蛋白表达的影响

目的比较正常及缺血损伤时大鼠血脑屏障上转运蛋白中P-糖蛋白(P-gp)时征表达及清脑宣窍方有效组分对其表达的影响。方法线栓法制备缺血性脑中风大鼠模型,按照不同再灌注时间,模型组再分为0、0.51、、26、、122、4 h,采用免疫组织化学法观察正常组与模型组大鼠脑皮质及海马缺血区P-gp的表达。除假手术组外,缺血动物于术后1 d,随机分为模型组、清脑宣窍方有效组分高、中、低剂量组、维拉帕米组,并于造模后1～5 d灌胃给予相应药物。末次给药后,处死动物,取材,检测大鼠脑皮质及海马区P-gp的表达。结果免疫组织化学染色结果显示,正常组与模型组大鼠脑皮质及海马缺血区均可见P-gp阳性染色。免疫组化半定量分析表明,与正常组比较,不同再灌注时间模型组P-gp表达量均有显著性差异(P<0.05),皮质及海马缺血区P-gp表达量均降低;与模型组比较,清脑宣窍方有效组分各剂量组及维拉帕米组对缺血性脑中风大鼠脑皮质及海马区P-gp表达量明显降低(P<0.05)。结论在缺血性脑中风病理状态下,大鼠脑血脑屏障上转运蛋白P-gp存在一定的时征表达,而且从一定程度上反映了特定病理状态下由于蛋白表达的改变而引起的血脑屏障通透性的变化。清脑宣窍方有效组分对缺血性脑中风大鼠脑皮质及海马缺血区P-gp表达具有显著的抑制作用。     

宁心安神方调控失眠大鼠Glu/GABA-Gln代谢环路失衡的机制研究

目的研究宁心安神方对失眠的治疗作用及对失眠大鼠谷氨酸(Glu)/γ-氨基丁酸(GABA)-谷氨酰胺(Gln)代谢环路的调控机制。方法采用改良多平台水环境睡眠剥夺法建立失眠模型。将大鼠随机分为正常对照组,模型组,地西泮组,宁心安神方低、中、高剂量组。观察大鼠一般情况,利用戊巴比妥钠睡眠协同实验观察大鼠的睡眠潜伏时间和睡眠持续时间,进行模型评价及宁心安神方治疗失眠的疗效评价。高效液相色谱法检测脑干、下丘脑内神经递质Glu、GABA的含量。利用Western blot法对脑干、下丘脑内谷氨酸脱羧酶(GAD)、星形胶质细胞谷氨酰胺合成酶(GS)的表达水平进行测定。结果宁心安神方中、高剂量可以明显缩短失眠大鼠睡眠潜伏时间、延长睡眠持续时间,提高脑干、下丘脑GABA水平,降低Glu/GABA的比值;宁心安神方各剂量均可明显升高脑干GAD表达和下丘脑中GS的表达。结论宁心安神方的镇静催眠作用可能是通过调控Glu/GABA-Gln代谢环路,影响Glu、GABA的合成和分解,进而改善Glu/GABA的兴奋/抑制代谢失衡而实现的。     

聚花过路黄对原代大鼠脑微血管内皮细胞糖-氧剥夺诱导下NFκ-B p65蛋白及下游靶基因ICAM-1表达的影响

目的 通过测定聚花过路黄(Lysimachia congestifloa hemsl,LCH)对原代大鼠脑微血管内皮细胞(brain microvascular endothelial cells,BMECs)糖-氧剥夺诱导下NF-κB p65蛋白及下游靶基因ICAM-1表达的变化,探讨其可能的细胞保护机制.方法 选用初生的Wistar大鼠,建立脑微血管内皮细胞培养模型,以糖-氧剥夺方法 (oxygen-glucose deprivation,OGD)复制体外模拟的脑缺血再灌注模型,观察试验各组(即正常组、模型组、LCH低剂量组及LCH高剂量组)缺氧缺糖6 h、复氧复糖18 h后BMECs的活性(CCK-8比色法)变化,相差显微镜下BMECs的细胞形态学改变,免疫组化测定NF-κB p65蛋白表达的变化以及荧光定量RT-PCR测定NF-κB p65 mRNA、ICAM-1 mRNA表达的变化.结果 BMECs活性,LCH高、低剂量组明显高于模型组(均P＜0.01);BMECs的细胞损伤变化,LCH高剂量组明显轻于模型组;NF-κB p65阳性表达,LCH高、低剂量组分别明显低于模型组(均P＜0.01);NF-κB p65 mRNA、ICAM-1 mRNA表达,LCH高、低剂量组明显低于模型组(均P＜0.01),LCH低剂量组高于LCH高剂量组(P＜0.01). 结论 LCH对糖-氧剥夺诱导下的脑微血管内皮细胞损伤具有保护作用,其机制可能与其抑制NF-κB p65的活化及其下游靶基因ICAM-1的异常表达有关.其抑制效应可能存在一定的量-效关系.     

五子衍宗丸对幼年大鼠睾丸支持细胞增殖的影响及机制

目的探讨五子衍宗丸对幼年大鼠睾丸支持细胞的增殖作用及其机制。方法分离并培养20 d龄SD雄性大鼠的睾丸支持细胞,将支持细胞随机分为正常组和五子衍宗丸低、中、高剂量(5、10、15 g/L)组。采用MTT比色法检测各组支持细胞OD值的变化,采用免疫组化的方法检测各组支持细胞中Ki67阳性颗粒的表达,采用Western Blot方法检测各组支持细胞中Akt和p-Akt的表达。结果与正常组相比,经五子衍宗丸处理后的睾丸支持细胞增殖能力明显增加(P0.05或P0.01);Ki67阳性颗粒的表达明显增多(P0.05或P0.01);p-Akt的相对表达量明显增加(P0.05或P0.01)。结论五子衍宗丸可能通过激活Akt信号通路,上调p-Akt的表达,促进幼年睾丸支持细胞的增殖。