黄芪多糖抑制氧化应激致大鼠 软骨细胞损伤及凋亡的作用机制分析

目的 探究黄芪多糖(alp)抑制氧化应激致大鼠软骨细胞损伤及凋亡的作用机制。方法 选取SPF级雌性3周龄大鼠,分为活性氧自由基培养组(ROS组)、黄芪多糖组(ROS+alp组),另设空白对照组。ROS组取其软骨细胞,加入活性氧自由基培养; ROS+alp组在ROS组的基础上加入浓度为30 mg/L的黄芪多糖处理;空白对照组不作处理。使用CCK-8法测定不同浓度(0 mg/L、20 mg/L、50 mg/L、100 mg/L、200 mg/L)黄芪多糖对大鼠细胞生存率的影响;采用蛋白质印记法(Western Blot)检测大鼠软骨细胞中Bcl-2相关X蛋白(Bax)、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、基质金属酶蛋白3(MMP3)、MMP13、CLO2蛋白表达情况;采用Hoechst 33342染色法测定软骨细胞凋亡率。结果 alp 0mg/L时,细胞大量凋亡,生存率不到40%,随着alp的浓度的增加,大鼠软骨细胞存活率显著升高;与空白对照组相比,ROS组大鼠细胞Bcl-2、CLO2蛋白表达显著下降(P 0. 01),MMP3、MMP13、Bax蛋白表达显著上升(P 0. 01);与ROS组大鼠细胞相比,ROS+alp组大鼠细胞CLO2、Bcl-2蛋白表达显著上升(P 0. 01),MMP3、MMP13、Bax蛋白表达显著下降(P 0. 01)。Hoechst 33342染色结果显示,空白对照组软骨细胞核染色分布均匀,呈弥散均匀的低密度荧光,ROS组大鼠细胞荧光分布较为杂乱且荧光密度较高,ROS+alp组大鼠细胞分布也较为均匀,荧光密度也较低。结论在一定范围内黄芪多糖呈剂量依赖性显著降低大鼠软骨细胞内ROS水平,上调抑制凋亡因子,下调凋亡因子,减少大鼠软骨细胞的凋亡,达到缓解软骨细胞损伤的效果。     

黄芪甲苷通过调节细胞自噬增强贝伐单抗在肺癌细胞系A549中抗肿瘤作用机制的研究

目的:验证黄芪甲苷可以通过调节细胞自噬增强贝伐单抗对肺癌细胞系A549细胞增殖能力的影响,讨论黄芪甲苷在A549中的抗肿瘤作用机制。方法:MTT方法检测黄芪甲苷单药以及与贝伐单抗联合应用对A549细胞增殖能力的影响。Western blot方法分别检测黄芪甲苷以及贝伐单抗处理A549后自噬相关蛋白P62和LC3的表达水平。RT-PCR方法检测黄芪甲苷处理后A549细胞内侵袭相关基因MMP-2和MMP-9的表达情况。ECIS方法检测黄芪甲苷处理后A549细胞黏附与迁移能力的变化。结果:MTT检测结果显示,100 mg/L的黄芪甲苷与750 mg/L的贝伐单抗联合应用对A549细胞的活力有显著的抑制作用,两药联合应用组与对照组相比差异有统计学意义,P值为0.0009。Wester n blot检测结果显示,黄芪甲苷能够通过影响自噬通路P62和LC3的表达从而抑制自噬的发生。RT-PCR方法显示黄芪甲苷能显著抑制侵袭相关基因MMP-2和MMP-9的表达,黄芪甲苷组与对照组相比差异有统计学意义,P值分别为0.0001和0.001。ECIS结果显示黄芪甲苷能够增强A549细胞的黏附能力并抑制其转移。结论:体外研究结果显示黄芪甲苷能够增强A549细胞的黏附能力并抑制其转移和侵袭,这一过程是通过抑制细胞自噬的发生,而贝伐单抗有较弱的促进自噬发生的作用,当两者联合时较单用贝伐单抗更强的抗肿瘤细胞增殖的作用。     

黄芪甲苷对脂多糖刺激单核细胞的保护作用及其机制研究

目的 观察黄芪甲苷对脂多糖(LPS)刺激的单核细胞能否起保护作用及其机制.方法 以LPS刺激体外培养的大鼠单核细胞,首先观察LPS诱导单核细胞发生凋亡的最佳浓度,再将黄芪甲苷按浓度梯度(分别为1 000、300、100、30、10、3μg/ml)加入细胞培养上清液中,测定其最大无毒浓度(TD0)及半数中毒浓度(TD50);并以不同浓度黄芪甲苷干预,测定黄芪甲苷的半数有效浓度(ED50)和95%有效浓度(ED95).采用异硫氰酸荧光索/藻红蛋白标记的膜联蛋白V(Annexin V-FITC/PI)染色和赫斯特荧光染料(Hoechst33258)荧光单染,流式细胞仪观察黄芪甲苷对LPS所致细胞凋亡的保护作用.结果 LPS在单核细胞培养上清液中的浓度为100 ng/ml时可以诱导细胞凋亡,凋亡率为(43.67±7.14)%.黄芪甲苷的TD0>1 000μg/ml时,TD50无法测出,其ED50和ED95分别为27.31μg/ml和101.29μg/ml;用100μg/ml黄芪甲苷进行干预后,培养的细胞贴壁良好,核浓缩、核着边等现象显著减少,凋亡率明显下降(P相似文献   

京尼平苷对大鼠软骨细胞增殖的影响

背景:京尼平苷能够促进韧带成纤维细胞的增殖和胶原的合成,促进组织的修复和韧带损伤的愈合.目的:观察京尼平苷对大鼠软骨细胞增殖的影响.方法:采用二次酶消化法获得大鼠关节软骨细胞进行传代培养,并取第4 代细胞给予0,25,50,100mmol/L 京尼平苷干预,利用MTT 比色、流式细胞仪检测细胞周期等方法检测药物干预后第4 代软骨细胞的增殖情况.结果与结论:体外培养的软骨细胞随着传代次数的增加,细胞形态由原代的多角形逐渐变为长梭形;且随着培养时间的延长及京尼平苷浓度的升高,软骨细胞增殖更为显著(P < 0.01).     

威灵仙干预体外培养兔膝关节软骨细胞增殖及转化生长因子β1 mRNA基因的表达

背景:有研究显示,威灵仙能够维持和促进软骨细胞合成蛋白多糖与Ⅱ型胶原,并可能通过抑制自细胞介素1水平的增高保护关节软骨,延缓骨关节炎的发展.目的:在以往研究基础上,观察中药威灵仙对体外培养兔膝关节软骨细胞增殖及转化生长因子β1 mRNA基因表达的影响,探讨其治疗骨关节炎的作用及可能机制.方法:取新西兰白兔膝关节软骨,剪碎后,采用酶消化法原代分离培养软骨细胞,甲苯胺蓝染色鉴定后,取处于对数生长期第3代细胞随机分组,实验组分别加入0.01,0.05,0.1,0.5,1.0 g/L威灵仙培养基,对照组仅加入普通培养基进行培养.倒置显微镜下观察原代培养的软骨细胞形态变化及甲苯胺蓝染色鉴定,MTT法检测不同质量浓度威灵仙对软骨细胞增殖影响,RT-PCR法检测转化生长因子β1 mRNA表达.结果与结论:原代软骨细胞呈圆球形,悬浮状态,24 h后大部分细胞贴壁;传代后软骨细胞生长速度加快,融合成片,外观呈典型"铺路石"状;传4代后逐渐出现长梭形软骨细胞,传代培养至6代时,呈成纤维细胞样外观,生长速度明显减慢,传代周期延长.软骨细胞经甲苯胺蓝染色后细胞外基质可见蓝色异染颗粒,细胞核染成深蓝色.不同质量浓度威灵仙均能促进软骨细胞增殖,尤以0.5 g/L增殖效果明显,且增殖高峰出现在威灵仙干预后的第3天.0.05,0.1,0.5,1.0 g/L威灵仙均能促进软骨细胞转化生长因子β1 mRNA表达,4组组间比较差异无显著性意义(P＞0.05),但作用的高峰为0.5g/L组.威灵仙能促进软骨细胞增殖及转化生长因子β1 mRNA的表达,提示这可能是其治疗骨关节炎的作用及可能机制之一.     

兔软骨细胞与骨髓基质细胞的平面共培养:两者培养比例筛选

背景:骨髓基质细胞一定条件下可以分化为软骨细胞,但目前还缺少将软骨与骨髓基质细胞平面共培养的深入探讨.目的:拟明确骨髓基质细胞与软骨细胞共培养时比例的选择、细胞增殖活性、软骨特异性蛋白表达的规律,用于细胞移植的最佳时间和传代次数.方法:软骨细胞与骨髓基质细胞的分离培养,传代后分为5组:单纯软骨细胞组;共培养组,软骨细胞与骨髓基质细胞7:3,5:5,3:7组;以及单纯骨髓基质细胞组.传代至第4代(G4),倒置相差显微镜观察各组细胞在不同传代时期的细胞形态,MTT实验检测细胞增殖活性,甲苯胺蓝与阿利新蓝染色,细胞免疫化学法检测Ⅱ型胶原的表达.结果与结论:共培养各组在各个时期细胞表型正常.G1～G3代细胞增殖活跃,G4代细胞增殖能力下降.共培养各组甲苯胺蓝与阿利新蓝染色以及Ⅱ型胶原表达在G2和G3代均较高.综合各指标认为,以软骨细胞与骨髓基质细胞的比例为5:5,3:7组为最佳.软骨细胞与骨髓基质细胞平面共培养,保持了软骨细胞的形态和蛋白表达特性,如进行细胞移植,选取软骨细胞与骨髓基质细胞5:5或3:7的比例为最佳.     

臭氧对兔骨性关节炎的关节软骨及关节液蛋白多糖含量的影响

目的:观察臭氧关节腔注射,对兔骨性关节炎的关节软骨及关节液蛋白多糖含量的影响,进一步探讨臭氧治疗骨性关节炎的作用。方法:将24只成年新西兰兔随机分为4组(每组6只):正常组、模型组,假治疗组,臭氧治疗组。造模成功后,臭氧治疗组关节腔注射40μg/ml臭氧(1 ml)治疗,每周一次,连续两周,假治疗组予以等量空气对照。治疗结束后一周取关节软骨标本进行HE染色、甲苯胺蓝染色、抽取关节液检测蛋白多糖的含量。结果:模型组软骨表面变粗糙,有裂纹糜烂和溃疡形成,软骨层变薄,滑膜明显增厚,关节积液增加,HE染色软骨表面碎裂,软骨细胞增生,结构明显紊乱,甲苯胺蓝染色明显减退,关节液蛋白多糖含量增加,与正常组比较差别有统计学意义(P<0.01);假治疗组软骨可见裂隙,大量血管翳形成,甲苯胺蓝染色轻度减退,部分区域失染,关节液蛋白多糖含量继续增高,与正常组比较差别有统计学意义(P<0.01);臭氧治疗组表层细胞轻度增生,结构可辨认,甲苯胺蓝染色不均,表层失染,关节液蛋白多糖含量减少,与模型组及假治疗组比较差别有统计学意义(P<0.01)。结论:兔骨性关节炎关节腔内注射40μg/ml浓度的臭氧(1 ml)可以明显地降低关节液蛋白多糖含量,对早期骨性关节炎软骨有促进修复作用。     

京尼平苷对大鼠软骨细胞增殖的影响

背景：京尼平苷能够促进韧带成纤维细胞的增殖和胶原的合成,促进组织的修复和韧带损伤的愈合。目的：观察京尼平苷对大鼠软骨细胞增殖的影响。方法：采用二次酶消化法获得大鼠关节软骨细胞进行传代培养,并取第4代细胞给予0,25,50,100mmol/L京尼平苷干预,利用MTT比色、流式细胞仪检测细胞周期等方法检测药物干预后第4代软骨细胞的增殖情况。结果与结论：体外培养的软骨细胞随着传代次数的增加,细胞形态由原代的多角形逐渐变为长梭形;且随着培养时间的延长及京尼平苷浓度的升高,软骨细胞增殖更为显著（P〈0.01）。     

人自体血清培养的鼻中隔软骨细胞

目的:比较人自体血清和胎牛血清对人鼻中隔软骨细胞增殖和分化的影响。方法:实验于2004-08/2005-03在解放军第一军医大学珠江医院全军儿科中心实验室完成。①全血标本取自健康鼻中隔偏曲手术患者,男2例(分别为27岁和32岁),女1例(35岁),经患者知情同意。②自体血清的制备:抽取患者全血40mL,室温静置1h后,离心(1000r/min,30min)后取上清约20mL。③取手术患者的鼻中隔软骨分离软骨细胞进行原代培养,设人自体血清组和胎牛血清组,分别加含体积分数为0.1的自体血清和胎牛血清的1640培养基,并进行传代培养。④取第3代软骨细胞接种于培养板上培养,设人自体血清组、胎牛血清组和对照组(无血清培养),分别于培养后的第1,2,3,4,5,6天行四甲基偶氮唑盐检测。⑤取第2,3,4,5,6代软骨细胞接种于养板上培养,设人自体血清组、胎牛血清组和对照组,行软骨基质蛋白多糖含量(35S-Na2SO4掺入量)测定。⑥取第2代软骨细胞,分别将人自体血清组和胎牛血清组的细胞接种于两个25mL的培养瓶中培养至细胞传代老化,观察细胞表型。结果:①在体积分数为0.1的血清浓度下,人自体血清和胎牛血清对人鼻中隔软骨细胞增殖作用差异不明显(P>0.05)。②人鼻中隔软骨细胞蛋白多糖合成量的比较显示两种血清对第2,3,4,5代软骨细胞软骨基质蛋白多糖的合成作用差异不明显(P>0.05),但在第6代,人自体血清组软骨细胞蛋白多糖合成量明显高于胎牛血清组(P<0.01)。③胎牛血清人鼻中隔软骨细胞到第6代几乎所有细胞变为梭形,人自体血清培养的软骨细胞到第7代以后才绝大部分变为梭形细胞,初步证实了人自体血清在维持鼻中隔软骨细胞表型方面也有一定的作用。结论:人自体血清能够有效地促进软骨细胞增殖和蛋白多糖合成同时维持细胞表型。     

壳寡糖对体外培养软骨细胞增殖的影响及对IL-1β诱导凋亡的保护作用

目的 体外实验研究不同浓度壳寡糖对软骨细胞增殖及IL-Iβ诱导细胞凋亡的保护作用.方法 从8周龄SD大鼠乳鼠膝关节分离、培养原代软骨细胞,鉴定后选用第2代软骨细胞进行实验.分别加入不同浓度壳寡糖培养48 h,通过CCK-8细胞计数法检测软骨细胞的增殖情况;采用IL-1β诱导软骨细胞凋亡,同时加入不同浓度的壳寡糖处理,倒置相差显微镜下观察软骨细胞形态及核分裂象的变化,通过流式细胞仪检测细胞早期凋亡比例,并通过Hoechst33258荧光染色检测软骨细胞凋亡细胞核的形态学变化.结果 CCK-8检测结果表明壳寡糖作用软骨细胞不同浓度、不同时间的软骨细胞增殖率比较均无显著性差异（P＞0.05）;流式细胞检测结果表明壳寡糖不仅扭转了细胞活力和增殖活性的下降,而且改善了IL-1β诱导的软骨细胞核染色质的损害,同时对软骨细胞凋亡率也有不同程度的降低.结论 一定浓度的壳寡糖对软骨细胞增殖无明显影响;壳寡糖能明显抑制IL-1β诱导的软骨细胞凋亡,且呈剂量依赖性.     

韶关市农村留守儿童孤独感状况调查

目的了解广东省韶关市农村地区留守儿童孤独感现状及其影响因素。方法对韶关市某地区两所农村小学3～6年级学生中的489名留守儿童采用儿童孤独量表和自编调查表进行问卷调查。结果17．6％留守儿童存在孤独感，不同性别孤独感发生率无差异性，不同年龄及不同年级间孤独感发生率差异均有极显著性（P〈0.01）；随年级增加，孤独感发生率呈下降趋势（X^2趋势=5．970，P〈0.05）。留守儿童孤独感与健康状况、学习成绩、学习困难程度、父母教育方式、父母间关系和老师教育方式等因素显著相关（P〈0.01～0．05）。结论农村地区留守儿童中存在一定程度的孤独感问题，老师和家长应以正确的态度和方法对待留守儿童，以减少其孤独感的发生。     

产科新生儿不同部位经皮测黄报警预值的可靠性观察

目的对比观察产科新生儿不同部位经皮胆红素（TCB）报警预值的可靠性。方法132例产科新生儿采取随机数字分组法分为正常产组和剖宫产组各66例,新生儿均于产后第4天同一时间点应用KJ8000经皮测黄仪分别测量额、胸、腹、额胸、额胸腹TCB值,TCB〉12．9mg／dl者,取得亲属同意抽取静脉血检测血清胆红素（SB）,对比分析不同部位TCB及其与sB值的差异。结果两组分别有17例或21例达到TCB报警预值。两组TCB或sB相同方法及相同部位比较,差异无统计学意义（P〉0．05）;两组TCB不同部位对比,额部值最低、胸部值最高,且与其他部位同组对比差异均有统计学意义（P〈0．01）;两组sB值对比差异无统计学意义（t=1．53,P〉0．05）,与不同部位TCB对比均以胸部数值差异无统计学意义（P〉0．05）,而与其他部位TCB两组差异均有统计学意义（P〈0．01）。结论正常产与剖宫产新生儿术后sB对比差异无意义;TCB动态监测以胸部结果更接近SB。     

Determination of loss of quality of life

Physiatrists are a valuable resource in legal settings, where assessment of functional capacity to perform work and of future medical needs must be determined. Physiatrists help determine what future medical care is needed to restore and maintain an individual at the maximum level of life function. This article focuses on the use of a quality of life (QOL) rehabilitation model, rather than a medical model, for enhancing functional performance, modifying environments, and facilitating patient coping. We discuss use of the QOL model to describe and influence a patient's physical, psychological, cognitive, vocational/economic, and social/leisure domains.     

护士选择性应用静脉留置针现状分析

[目的]了解护士选择性应用留置针的现状以及主要影响因素,为指导临床留置针合理应用提供理论依据。[方法]采用自设问卷对138名护士留置针选择性使用情况及其影响因素进行调查。[结果]约1／4的护士并不知道应选择性使用留置针,近60％的护士在实际工作中选择留置针的意识较差;护士选择性应用留置针的决策受多因素影响;不同科室、职称及是否具有带教资格选择性应用留置针的影响因素不尽相同;绝大部分护士希望参加选择性应用留置针相关内容的培训。[结论]临床护士操作前考虑留置针选择的意识有待加强。建议实施有针对性的培训以提高护士选择性应用留置针的能力。     

血液透析患者家庭护理提供者的生活质量调查

目的:了解江汉油田血液透析(血液透析)患者家庭护理提供者(护理者)的生活质量。方法:对60例血液透析患者的家庭护理提供者进行一般情况和生活质量综合评定问卷(QOLI-74)调查,并进行相关性和多因素回归分析。结果:家庭护理提供者各维度的主观生活满意度与其客观指标相关,但也与其需求、年龄、文化程度、与患者的关系有关。结论:客观状态是影响主观生活满意度的重要因素,同时应考虑护理者的需求、年龄、文化程度、与患者的关系对护理者主观生活满意度的影响。