应用ELISA间接法检测患者血清中抗“0”

本文对124例可疑A族链球菌感染的病人血清同时用ELISA间接法及抗“0”中和试验法检测抗“0”。结果发现,两法高度相关。用ELISA法还可代替抗“0”中和试验法,适用于流行病学调查。     

ELISA法与胶体金吸附法检测丙肝抗体特异性比较

目的 比较酶联免疫吸附试验(ELISA)与胶体金吸附试验检测丙型肝炎病毒(HCV)抗体的特异性.方法 用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测480例临床手术前患者血清.如酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测为阳性者,再采用肢体金吸附试验方法重新检测抗HCV.结果 480例样本中,抗HCV酶联免疫吸附试验法(ELISA)阳性10例,阳性率2.10%.胶体金吸附试验法阳性6例,阳性率1.25%.结论 酶联免疫吸附试验法(ELISA)检测抗HCV检出率高出肢体金检测法0.85%.     

竞争ELISA法检测人抗脊髓灰质炎病毒(Ⅲ型)中和抗体

目的建立竞争ELISA检测方法,用于检测人群中抗脊髓灰质炎病毒Ⅲ型中和抗体的监测,旨在消灭脊灰后时代中替代中和试验,提供方便、快速和准确的检测方法。方法在前期研究的双抗体夹心ELISA方法的基础上,用纯化后的SabinⅢ型的D抗原作为包被抗原,然后将待测人血清和兔多克隆抗脊灰抗体共同孵育,形成竞争性结合,使用方阵滴定法确定各项抗体、抗原的包被条件,建立抗脊灰中和抗体竞争性ELISA检测方法,与中和试验进行结果的一致性评价。结果该方法仅对脊灰病毒Ⅲ型D抗原血清检测为阳性,与脊灰病毒Ⅰ、Ⅱ型血清无交叉反应,比中和试验敏感性更高。批内批间变异系数分别为3.29%～4.51%和5.26%～6.11%,具有良好的重复性。与中和试验比较,阳性符合率为100%,阴性符合率为88.9%。结论使用本实验建立的竞争ELISA方法用于检测人群抗脊灰中和抗体能达到快速、准确的评价目的并且可避免活病毒的使用。     

酶联免疫吸附试验中和法与竞争法联合应用快速检测抗HB_c

酶联免疫吸附试验(ELISA)竞争法检测抗HBc时加HBcAg和病人血清、酶标抗HBc分两步进行,需5小时之久。我们将中和(抑制)法、竞争法联合应用检测抗HBc(以下称联合法)一步进行,整个试验只要2个多小时。同时用联合法与原法对照检测门诊肝炎病人400例,抗HBc检出率分别为82％和80％。获得满意结果,现介绍如下。     

ELISA(双抗体夹心法)共系统检测抗-HBe与HBeAg结果分析

目的探讨用双抗体夹心法检测HBeAgEIA商品试剂盒共系统检测抗-HBe与HBeAg的可行性及结果判定方法。方法用双抗体夹心法检测HBeAgELISA试剂盒结合配套中和(竞争)抑制法检测抗-HBeELISA试剂盒中的中和试剂(HBeAg)等试剂组分共系统检测1000份随机血清(浆)标本抗-HBe与HBeAg,并分别以常规ELISA检测抗-HBe与HBeAg作平行对照。结果ELISA共系统检测抗-HBe与HBeAg易于目测;它们的比色判定临界值同常规ELISA易于设定(或使用临界值血清,检测HBeAg时也使用抗-HBe阴性对照),与常规ELISA检测比色判定无显著性差异(配对计数资料比较的χ2检验:相关检验均为P<0.005,υ=1,a=0.05;抗-HBe优劣检验(ELISA共系统检测抗-HBe前两项COV与抗-HBe临界值血清)均为P>0.900,υ=1,a=0.05;HBeAg优劣检验依次为HBeAg临界值血清:(1)P>0.900,υ=1,a=0.05,抗-HBe阴性对照;(2)0.100>P>0.050,υ=1,a=0.05,ELISA共系统检测HBeAgCOV;(3)0.100>P>0.050,υ=1,a=0.05,但χ21<χ22<χ23)。结论用双抗体夹心法检测HBeAgELISA试剂盒与配套中和(竞争)抑制法检测抗-HBeELISA试剂盒试剂组分重组共系统检测抗-HBe与HBeAg是可行的,两种试剂盒能够相互替代,在有优质现代酶标仪的实验室,可以省去常规ELISA试剂盒其中之一,实用价廉,值得推广。     

ELISA法与胶体金法检测HCV抗体特异性比较

目的比较丙型肝炎病毒（HCV）抗体酶联免疫吸附试验（ELISA）法与胶体金法检测的特异性。方法采用酶联免疫吸附试验方法检测642例临床进行传染病筛查患者血清,若ELISA法检测为阳性则继续进行胶体金法检测抗HCV。结果在这642例标本中ELISA法检测出抗HCV阳性12例,阳性率为1.87%,胶体金法检测出抗HCV阳性7例,阳性率1.1%。结论ELISA法检测抗HCV阳性率明显高于胶体金检测法。     

ELISA法与RFFIT法检测狂犬病疫苗免疫后血清抗体的比较

目的 比较狂犬病疫苗免疫后血清抗体酶联免疫吸附试验(ELISA)与快速免疫荧光灶抑制试验(RFFIT)两种检测方法.方法 对93名研究对象采用0、3、7、14和28 d程序进行暴露后免疫,分别采用ELISA法与WHO认可的金标法RFFIT法检测免疫D0、D3、D7、D14、D45 d的血清抗体.结果 免疫D0、D3、D7、D14、D45 d ELISA法检测抗体阳性率分别为8.6%、11.8%、22.6%、49.6%、86%,RFFIT法检测抗体阳性率分别为0%、0%、22.58%、100%、100%,ELISA法与RFFIT法阳性符合率分别为0%、0%、34.8%、100%、100%;阴性符合率分别为100%、100%、81.4%、0%、0%.结论 ELISA法检测狂犬病疫苗免疫后血清抗体,免疫早期D0、D3、D7假阳性率较高,免疫D14、D45则假阴性率较高.建议采用WHO认可的方法做检测.     

抗核抗体谱IgG检测酶联免疫吸附法试剂盒的临床试验

目的根据《体外诊断试剂临床试验技术指导原则》要求,对由欧蒙(杭州)医学实验诊断有限公司生产的酶联免疫吸附法(ELISA)二类体外诊断试剂盒中抗核抗体谱IgG检测试剂盒进行临床验证试验,以评价该试剂盒的临床应用性能。方法收集2017年11月至2018年3月本院83例系统性红斑狼疮、夏普综合征(MCTD)、干燥综合征、进行性系统性硬化症、皮肌炎/多肌炎等患者有效血清样本及32例有效同源血浆,对照组为健康人群,其中血清27名、血浆26名。使用欧蒙(杭州)医学实验诊断有限公司拟注册的抗核抗体谱IgG检测试剂盒(ELISA)分别与苏州浩欧博生物医药有限公司、INOVA Diagnostics,Inc.及EUROIMMUN Medizinische Labordiagnostika AG生产的酶联免疫吸附法检测系统检测ANA谱,通过计算符合率和Kappa检验评价分析拟注册试剂盒与其他3种试剂的一致性。结果待评价试剂盒(抗核抗体谱IgG检测试剂盒(ELISA)与对比试剂盒,包括[对比试剂盒1[抗核抗体筛查试剂盒(ELISA)]/对比试剂盒2[抗核糖体P蛋白抗体检测试剂盒(ELISA)]检测不相符的样本,以第三方试剂盒EUROIMMUN Medizinische Labordiagnostika AG生产的抗核抗体谱IgG检测试剂盒(ELISA)的检测结果为准,最终待评价试剂盒与对比试剂/第三方试剂的血清检测阳性符合率为100%,阴性符合率为100%,总符合率为100%,Kappa值为1.00。待评价试剂盒检测血清与同源血浆检测阳性符合率为100%,阴性符合率为97%,总符合率为98%,Kappa值为0.96。结论待评价试剂盒经过临床试验验证,待评价试剂盒与对比试剂/第三方试剂血清及血浆检测结果符合性良好,具备应用性能。     

CLIA法和ELISA法在乙型肝炎病毒血清学标志物检测中的应用价值比较

目的:比较化学发光免疫分析法(CLIA)和酶联免疫吸附试验(ELISA)在乙型肝炎病毒血清学标志物检测中的应用价值。方法:选择乙型肝炎患者136例作为观察对象。采用CLIA法、ELISA法测定患者的乙型肝炎核心抗体(HBcAb)、乙型肝炎e抗体(HBeAb)、乙型肝炎e抗原(HBeAg)、乙型肝炎表面抗体(HBsAb)、乙型肝炎表面抗原(HBsAg)等血清标志物水平。比较两种方法的检测结果。结果:CLIA法对血清HBeAb、HBeAg、HBsAg的检出率分别为27.94%(38/136)、28.68%(39/136)、67.65%(92/136),显著高于ELISA法的16.18%(22/136)、17.65%(24/136)、53.68%(73/136),差异有统计学意义(P<0.05);两种方法对血清HBcAb、HBsAb的检出率比较,差异无统计学意义(P>0.05);当血清HBsAg水平≤0.50 IU/mL时,CLIA法的检出率高于ELISA法,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:与ELISA法相比,CLIA法可更准确地测定乙型肝炎病毒血清学标志物水平,且灵敏度更高,利于临床进行乙型肝炎早期诊断及病情监测。     

快速检测抗斯氏狸殖吸虫抗体的金标免疫渗滤法的建立和应用

目的 :建立一种检测斯氏狸殖吸虫病患者血清抗体的快速、敏感和特异的新方法。方法 :以斯氏狸殖吸虫成虫可溶性抗原为上样抗原 ,胶体金标记羊抗人IgG为显色剂 ,建立检测斯氏狸殖吸虫病患者血清抗体的斑点金免疫渗滤法 (DIGFA) ;并以ELISA作平行对照。结果 :DIGFA和ELISA分别检测 83例斯氏狸殖吸虫病患者血清抗体 ,其阳性率分别为 95 .2 % (79/ 83)和 91 .6 % (76 / 83) ,两法差异无显著性 (P >0 .0 5 )。DIGFA分别检测正常人血清32例、华支睾吸虫病患者血清 2 3例和日本血吸虫病患者血清 36例 ,前者均为阴性 ,后两者的交叉反应率分别为 4 .3% (1 / 2 3)和 8.3% (3/ 36 ) ;DIGFA和ELISA两法的总符合率达 92 .3% (36 / 39)。结论 :DIGFA的特异性和敏感性与ELISA相近 ,但方法快速、试剂稳定 ,且不需特殊设备 ,适用于各级医疗单位和血清流行病学调查     

ELISA检测抗精子抗体并与间接血凝法比较

本文结果表明,188份结扎兔血清中,ELISA抗精子抗体阳性者为85.1％,间接血凝(IHT)为62.8％,差异显著(P<0.005),以118份IHT阳性血清的抗体滴度对数值与相对应的ELISA光密度值相关分析结果表明,二者有非带显著的正相关(P<0.001)。我们认为,ELISA检测抗精子抗体是一种灵敏度高、方便、迅速且易于操作的免疫学方法。     

ELISA间接法检测人轮状病毒血清抗体的研究

本文对ELISA间接法检测人轮状病毒(RV)血清抗体的方法学进行了探讨.结果表明,RV抗原能直接包被酶标反应板,与经免疫血清间接包被者无甚差异;RV抗原经EDTA、硫氰酸钾或盐酸胍预作用后再行包被,可提高抗原的包被效果.以ELISA间接法和间接双抗体夹心法同时检测34份血清标本,两者检出率无差异(P>0.05);进一步检测11份阳性血清的抗体效价,两法GMT分别为755.1和822.1,也无差异(P>0.05).进行ELISA间接法阻断试验,阻断率达95.6%;重复性试验表明变异系数在3.7～8.7%之间.因此,ELISA间接法敏感性高、特异性强和重复性好,可代替ELISA间接双抗体夹心法以检测RV血清抗体.     

幽门螺杆菌感染者血清特异性抗体检测及其临床意义

本实验用12株经鉴定及增菌培养的幽门螺杆菌(Helicobacter Pylori;HP)制成酸提取物作抗原,以ELISA间接法对101名患者进行血清HP-IgG检查,同时做细菌学检查,并以此作为金标准。检查结果显示62例患者血清HP-IgG阳性,阳性率达61.39%,与细菌学检查相比较,ELISA间接法检测HP感染的敏感性和特异性分别为:93.55%、89.74%。由此我们认为ELISA间接法检测HP抗体可用于HP感染的流行病学调查及大量标本的初筛检查。     

ELISA检测脐血中巨细胞病毒IgM抗体诊断先天性巨细胞...

Cytomegalovirus IgM (CMV IgM) antibodies of 582 cord sera from 6 hospitals in Chengdu were detected by direct ELISA and indirect ELISA. Twenty-seven cases with CMV IgM antibody positive were detected from 582 cord sera. Twenty-five and 15 cases were found to have CMV IgM antibody by direct ELISA and indirect ELISA, respectively (P greater than 0.05). Indirect ELISA for detection CMV IgM antibody was only interfered by high concentration of CMV IgG and rheumatoid factor. Children with CMV IgM antibody positive were followed-up to 5-6 months. Hearing loss was detected by impedance audiology in only 2 cases. But the other physical and mental examinations were normal. The result showed that the prevalence of congenital CMV infection is 4.6% in our study and direct ELISA method is more specific and sensitive than indirect ELISA method to detect CMV IgM antibody in cord serum.     

河豚毒素中和性单抗的制备、鉴定及TTX检测方法的建立

目的研制河豚毒素中和性单抗,建立基于河豚毒素单抗的河豚毒素检测方法。方法用TTX-KLH免疫Balb/c小鼠,用TTX-BSA间接ELISA筛选,建立杂交瘤细胞系,腹腔接种Balb/c小鼠诱生腹水,Protein A Sepharose CL4B亲和柱纯化,SDS-PAGE、间接ELISA鉴定;用常规法确定TTX对昆明小鼠的LD50;将单抗和TTX混合物注入小鼠腹腔,检测单抗对TTX的中和能力;建立检测TTX的竞争ELISA法。结果获得了2株TTX中和性单抗,腹水用Protein A Sepharose CL 4B纯化后抗体纯度大于95%;常规间接ELISA检测,显示单抗5E7的结合能力高于5E4。单抗对2 LD50 TTX攻击昆明小鼠的保护率为50%,建立了基于中和性单抗的TTX检测方法,TTX的最小检出浓度为1.56μg/mL。结论获得了TTX中和性单抗,对致死剂量TTX攻击昆明小鼠的保护率为50%,建立了基于中和性单抗的TTX检测方法,TTX的最小检出浓度为1.56μg/mL。     

双抗体间接夹心ELISA法检测血清MUC1蛋白方法的建立及其在肺癌诊断中的应用

目的:建立双抗体间接夹心酶联免疫吸附法（ELISA）试剂盒,检测血清黏蛋
白1（MUC1）水平,探讨其在肺癌诊断中的应用,阐明血清MUC1蛋白检测的临床应用
价值。方法:在前期制备的MUC1蛋白和兔抗人MUC1多克隆抗体的基础上,建立以鼠抗人MUC1
单克隆抗体为包被抗体,兔抗人MUC1多克隆抗体为检测抗体的双抗体间接夹心ELISA方法,
并通过对MUC1蛋白标准品的检测,绘制出标准曲线。临床上收集48例肺癌患者、7例肺良性
疾病患者和20例健康人的血清,应用本研究建立的ELISA方法检测各组标本血清MUC1蛋白表
达水平,绘制ROC曲线,确定最佳cut-off值,得出双抗体间接夹心ELISA方法检测肺癌的敏
感度、特异度及约登指数。同时与临床应用的CA15-3试剂盒检测结果进行比较。结果:应用双抗体间接夹心ELISA法确定血清MUC1的临界值为1.98 μg?L-1,检测
肺癌的敏感度为62.5%,特异度为100%,约登指数为0.625　0。CA15-3试剂盒检测肺癌的敏感度
为18.75%,特异度为100%,约登指数为0.187 5。结论:建立的双抗体间接夹心ELISA
试剂盒检测肺癌有更高的敏感度和特异度,优于临床常用的CA15-3试剂盒。     

双单克隆抗体ELISA间接夹心法检测HFRS病毒抗原的实验研究

间接荧光抗体技术(IFAT)已广泛用于肾综合征出血热(HFRS)病毒抗原的检测,其不足之处是需用荧光显微镜,有一定主观性及不能检测可溶性抗原。本文建立了以同样的抗HFRS病毒单克隆抗体(McAb)作为包被和第二抗体,以酶标葡萄球菌A蛋白(SpA)作指示抗体的双McAb ELISA间接夹心法,初步用于感染细胞培养上清及组织标本中HFRS病毒抗原的检测,获得较满意结果。     

单克隆抗体ELISA间接夹心法检测HFRS病人血清IgM和IgG抗体的研究

肾综合征出血热(HFRS)早期临床症状不典型,因此在病人血清中检出特异性抗体,特别是IgM抗体,对辅助临床早期诊断和流行病学监测均有重要意义。间接免疫荧光法(IFAT )和免疫酶染色法,虽已被广泛用于上述目的,但尚存在需用荧光显微镜或判定结果有一定主观性等不足之处。血凝抑制试验测出的则主要是IgG抗体。本文采用抗HFRS病毒单克隆抗体(McAb)和粗纯抗原建立了一种ELISA间接夹心法,以检测HFRS病人血清中IgM和lgG抗体,并与IFAT进行了比较。     

Production and characterisation of monoclonal antibodies against 19-Nortestosterone

Objective To produce anti‐19‐Nortestosterone (NT) monoclonal antibodies and identify their immunological characteristics. Methods Hybridomas were prepared by fusing NS0 mouse myeloma cells with splenocytes isolated from immunized BALB/c mice. Noncompetitive and competitive indirect ELISA were employed to screen positive cell clones. A caprylic acid ammonium sulphate (CAAP) method was used to purify NT mAb, and the Batty saturation method was used to determine the affinity constant (Kaff). Results Five hybri...     

用免疫荧光McAb对286株脊髓灰质炎病毒标本进行...

The serum neutralization test is a classical method used for typing poliovirus. Since 1987, some type-specific non-neutralization McAb's have been obtained in our laboratory, and were used in indirect immunofluorescence straining tests to detect serotypes I, II and III. A total of 286 poliovirus strains were typed by the indirect immunofluorescence test (IF) and neutralization test (NT). The results demonstrated that both tests were in agreement, suggesting that McAb IF could replace NT as an alternative typing diagnostic method: moreover, IF was easier to perform than NT. It is economical and rapid (the results can be read within 1-2 days as compared to 7 days for NT). The reagent is very stable and can be stored for two years at 4 degrees C or for two months at 37 degrees C.