三苯氧胺(TAM)及靶向CLC-3反义核苷酸对MCF-7(ER+)增殖的影响

目的研究氯离子通道CLC-3反义核苷酸及三苯氧胺对乳腺癌MCF-7细胞株增值的影响,探讨其在乳腺癌治疗方面的生物学基础,为临床乳腺癌的内分泌治疗及生物治疗提供参考。方法将MCF-7细胞分成如下6组,对照组(control group);实验组1:CLC-3反义核苷酸;实验组2:TAM 10μM;实验组3:TAM 20μM;实验组4:CLC-3反义核苷酸+TAM 10μM;实验组5:CLC-3反义核苷酸+TAM 20μM。单纯给予TAM时,于给药后24h收集细胞,以MTT比色法分析。结果随着TAM浓度从0逐渐增加到25μM,MCF-7细胞较对照组的增殖抑制率逐渐增加,呈剂量依赖性。0-10(P<0.05),10-20μM(P<0.01),单纯用反义链阻断CLC-3时MCF-7细胞的增殖没有明显受到抑制。CLC-3反义核苷酸+TAM 10μM与对照组相比有差异(P<0.05);CLC-3反义核苷酸+TAM 20μM较对照组相比有明显差异(P<0.01)。CLC-3反义核苷酸+TAM 10μM与TAM 10μM对比两组之间有差异(P<0.05);CLC-3反义核苷酸+TAM20μM与TAM 20μM对比两组之间有明显差异(P<0.01)。结论 TAM有抑制乳腺癌细胞株MCF-7增殖的作用,CLC-3反义核苷酸可以增加这种作用,且随TAM的浓度增加两者之间的协同作用增大。为临床乳腺癌的内分泌治疗及生物治疗提供了参考。     

SETDB1-siRNA对卵巢癌SKOV-3细胞增殖、侵袭和凋亡的影响及其机制

目的 探讨转染SETDB1-siRNA对卵巢癌SKOV-3细胞增殖、侵袭和凋亡的影响及其机制。方法 将体外培养的SKOV-3细胞分为(1)组(正常培养)、(2)组(转染阴性对照NC-siRNA)和(3)组(转染SETDB1干扰序列SETDB1-siRNA),采用实时荧光定量PCR检测细胞中SETDB1 mRNA表达,MTT法、Transwell小室和流式细胞仪分别检测细胞增殖、侵袭和凋亡情况,Western blot检测蛋白表达情况。结果 与(1)组相比,转染NC-siRNA后SKOV-3细胞中SETDB1 mRNA和蛋白的表达水平比较,差异无统计学意义(P>0.05)。转染SETDB1-siRNA可使SKOV-3细胞中SETDB1 mRNA和蛋白的表达明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。转染NC-siRNA后SKOV-3细胞的增殖能力与(1)组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。转染SETDB1-siRNA后SKOV-3细胞从2 d开始增殖能力明显受到抑制,差异有统计学意义(P<0.05)。与(1)组相比,转染NC-siRNA对SKOV-3细胞穿膜...     

丁苯酞通过混合谱系激酶3信号通路对1-甲基-4-苯基-吡啶离子诱导的SH-SY5Y细胞增殖和凋亡的影响北大核心CSCD

目的探讨丁苯酞对1-甲基-4-苯基-吡啶离子(MPP+)诱导的SH-SY5Y细胞混合谱系激酶3(MLK3)通路的影响,及其对细胞增殖与凋亡的作用机制。方法对数生长期SH-SY5Y细胞分为对照组、MPP+组、丁苯酞组和URMC-099组,对照组正常培养,MPP+组加1 mmol/L MPP+培养24 h,丁苯酞组予10μmol/L丁苯酞预处理3 h后,加入MPP+培养24 h,URMC-099组予200nmol/L MLK3通路特异性抑制剂URMC-099预处理3 h后,加入MPP+培养24 h。倒置相差显微镜观察细胞形态,噻唑蓝比色法检测细胞活性,Annexin-V/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡率,Hoechst33342荧光染色法观察凋亡细胞,Western blotting检测MLK3磷酸化蛋白(p-MLK3)、c-Jun氨基末端激酶磷酸化蛋白(p-JNK)和细胞外调节蛋白激酶磷酸化蛋白(p-ERK1/2)的表达。结果 MPP+组细胞存活率低于对照组(P<0.05),丁苯酞组和URMC-099组细胞存活率高于MPP+组(P<0.05);MPP+组细胞凋亡率高于对照组(P<0.05),丁苯酞组和URMC-099组细胞凋亡率低于MPP+组(P<0.05);与对照组相比,MPP+组p-MLK3、p-JNK蛋白表达量增加(P<0.05),p-ERK1/2蛋白表达量降低(P<0.05);与MPP+组相比,丁苯酞组和URMC-099组p-MLK3、p-JNK蛋白表达量降低(P<0.05),p-ERK1/2蛋白表达量升高(P<0.05)。结论丁苯酞可减少MPP+诱导的SH-SY5Y细胞凋亡,促进细胞增殖,其机制可能是通过抑制MLK3通路,调节下游p-JNK、p-ERK1/2蛋白表达。     

β-elemene通过调节耐药特异性miRNA逆转乳腺癌细胞耐药性的机制研究

目的:探讨β-榄香烯逆转乳腺癌细胞耐药性的机制,明确其抗肿瘤作用。方法:通过向MCF-7细胞株培养基内逐渐增加临床上最常用于乳腺癌化学治疗的药物多西紫杉醇(Doc)或阿霉素(Adr),逐渐提高培养基中药物浓度的方法成功地构建出亲本细胞株MCF-7中耐药亚型,选择乳腺癌阿霉素耐药细胞(MCF-7/Adr)和乳腺癌多西紫杉醇(MCF-7/Doc)耐药细胞株,采用MTT-cytotoxic、miRNA微阵列、实时定量PCR、双荧光素酶活性测定等方法,研究β-elemene对乳腺癌耐药细胞生存率、耐药特异性miRNA29a、miRNA452、miRNA34a及miRNA222表达的影响。结果:β-elemene明显降低耐药乳腺癌细胞株细胞生存率和增殖率,β-elemene显著调节MCF-7/Adr和MCF-7/Doc细胞内miRNAs的表达水平,其中6个miRNAs上调,12个miRNAs下调显著。结论:β-elemene是一种从植物中提取的天然抗肿瘤中药成分,可以逆转乳腺癌细胞的耐药性。证实了中药β-elemene可以通过调控耐药相关miRNA表达的机制抗乳腺癌耐药细胞的耐药性。     

乳腺癌细胞放疗后LncRNA RP3-340B19.3的表达以及干预对其生物学特性的影响

目的 检测乳腺癌细胞放疗后LncRNA RP3-340B19.3的表达水平变化，探讨干预RP3-340B19.3后对乳腺癌细胞生物学特性的影响。方法 采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测经辐照后乳腺癌细胞系MCF-7和MDA-MB-231中RP3-340B19.3的表达水平；利用小干扰RNA技术抑制两株细胞系中RP3-340B19.3的表达，qRT-PCR检测其转染效率；克隆形成试验检测RP3-340B19.3对乳腺癌细胞存活率的改变，并计算细胞放疗增敏比(SER);流式细胞术检测RP3-340B19.3对乳腺癌细胞的细胞凋亡与细胞周期的影响。结果 qRT-PCR结果显示，经辐照后MCF-7和MDA-MB-231细胞中RP3-340B19.3的表达水平明显上调。转染siRNA后，MCF-7和MDA-MB-231细胞中RP3-340B19.3的相对表达量分别为0.236 3±0.153 8和0.363 3±0.037 1,均显著低于si-NC组(P<0.01)。经辐照后，RP3-340B19.3敲减组细胞克隆形成率和细胞存活分数明显下降(P<0.05),MCF-7和M...     

hTERT基因沉默对乳腺癌细胞生物学特性及COX-2表达的影响

目的本研究探讨hTERT基因沉默后对乳腺癌细胞生物学特性及环氧化酶-2(COX-2)的影响。方法设计合成特异性针对hTERT mRNA的siRNA,电转染入乳腺癌细胞,以致目的基因沉默。应用RT-PCR及Western blot法检测沉默hTERT基因后乳腺癌MCF-7细胞的mRNA及蛋白的表达状况;应用流式细胞仪检测细胞周期;并通过CCK-8增殖实验检测沉默hTERT基因后乳腺癌MCF-7细胞的增殖能力;经小室侵袭实验检测沉默hTERT基因后乳腺癌MCF-7细胞的侵袭能力。利用免疫组织化学法检测COX-2蛋白的表达。结果 hTERT基因沉默48h后,hTERT转染组在沉默hTERT基因后乳腺癌MCF-7细胞的mRNA及蛋白表达呈现明显降低(P0.05);细胞周期检测结果示乳腺癌MCF-7肿瘤干细胞停滞在G0/G1周期,S期的细胞数目减低,三组比较统计学差异明显(P0.05);CCK-8增殖实验结果表明乳腺癌MCF-7肿瘤干细胞在hTERT转染组的增殖得到显著抑制(P0.05);小室侵袭实验结果表明,hTERT转染组穿过滤膜的细胞数量明显减少(P0.05);免疫组织化学法检测结果显示,COX-2蛋白在hTERT转染组的表达明显降低,并与hTERT基因的表达相关联。结论 hTERT基因沉默后对乳腺癌细胞的增值和迁移能力均有影响,并能降低COX-2蛋白的表达,从而改善乳腺癌患者预后。     

肿瘤相关巨噬细胞诱导乳腺癌耐药的实验研究

目的探索肿瘤相关巨噬细胞(TAM)在乳腺肿瘤细胞耐药中的作用及其耐药机制。方法通过佛波酯(PMA)、白细胞介素4(IL-4)、白细胞介素13(IL-13)刺激人单核细胞白血病细胞系THP-1,建立TAM模型在体外与乳腺癌细胞共培养,运用流式细胞术(FCM)检测TAM表面分子CD14、CD204;使用噻唑蓝(MTT)比色法检测紫杉醇对乳腺癌细胞系T47D、BT-549的有效杀伤浓度和时间,以及乳腺癌细胞单独培养、乳腺癌细胞与TAM/TAM上清共培养下乳腺癌细胞的杀伤;运用Western blot检测肿瘤细胞的磷酸化信号转导与转录激活因子3(p-STAT3)、磷酸化c-jun氨基末端激酶(p-JNK)信号通路变化。结果 THP-1细胞经PMA、IL-4、IL-13诱导分化为TAM,其细胞表面表达CD14、CD204(表达率分别为31.52%±9.39%、48.21%±8.76%)。TAM/TAM上清与肿瘤细胞共培养均可显著削弱紫杉醇对肿瘤细胞的杀伤(T47D相对存活率由43.52%±9.40%提高至92.68%±2.32%/92.20%±2.10%,BT-549相对存活率由63.08%±2.71%提高至77.96%±2.64%/79.55%±2.35%,P0.05),明显下调其凋亡信号p-JNK(P0.05),同时显著上调p-STAT3(P0.05)。结论成功建立TAM模型,TAM介导乳腺肿瘤细胞耐药,其机制可能与TAM分泌的细胞因子影响肿瘤细胞STAT3、JNK信号分子磷酸化有关。     

葡萄糖调节蛋白78通过调节上皮-间叶转化促进乳腺癌MCF-7的侵袭转移

目的探讨葡萄糖调节蛋白78(GRP78)对乳腺癌细胞MCF-7侵袭转移能力的影响和可能的分子机制。方法 p EGFP-N1-GRP78质粒转染至MCF-7细胞,通过筛选克隆获得GRP78高表达MCF-7细胞株(MCF-7-GRP78),同时将p EGFP-N1空载体转染细胞(MCF-7-空)作对照组,未处理细胞(MCF-7)作为空白对照。荧光显微镜观察绿色荧光,确定转染效果。通过细胞划痕实验检测三组细胞的迁徙能力,Western blot法检测三组细胞中GRP78、E-钙黏素、N-钙黏素的表达情况。结果 (1)荧光显微镜观察细胞转染效果均很好。Western blot结果显示,与MCF-7细胞相比,MCF-7-GRP78细胞中GRP78含量明显增加(P<0.05),而MCF-7-空细胞中GRP78的表达含量与之比较差异无统计学意义(P>0.05)。(2)细胞划痕实验显示,与MCF-7细胞相比,MCF-7-GRP78细胞的愈合能力明显增强,而MCF-7-空细胞与之差别不大。(3)Western blot结果显示:与MCF-7细胞相比,MCF-7-GRP78中N-钙黏素表达量升高(P<0.05),E-钙黏素表达量下降(P<0.05),而MCF-7-空细胞中E-钙黏素、N-钙黏素的表达含量与之差异无统计学意义(P>0.05)。结论 GRP78是一个促癌基因,GRP78可能通过上皮-间叶转化促进乳腺癌细胞的侵袭转移。     

呼肠孤病毒对乳腺癌细胞的治疗作用

目的探讨呼肠孤病毒对乳腺癌细胞的治疗作用。方法比较呼肠孤病毒和表柔比星对MCF-7、BT474细胞的杀灭作用及其干细胞表型CD44+CD24-/low的表达变化(FCM法)。结果表柔比星和呼肠孤病毒均对乳腺癌细胞有杀灭作用。在表柔比星作用下MCF-7和BT474细胞中表达CD44+CD24-/low比例明显升高,为2.5%±0.6%和0.5%±0.1%(P<0.01)。病毒感染后MCF-7和BT474细胞中表达CD44+CD24-/low比例明显下降,均为0(P<0.05)。结论表柔比星对乳腺癌细胞有杀伤作用,但表柔比星可以富集乳腺癌干细胞。呼肠孤病毒对乳腺癌干细胞和癌症细胞同时具有治疗作用,有可能达到关闭癌细胞的目的。     

丁苯酞通过混合谱系激酶3信号通路对1-甲基-4-苯基-吡啶离子诱导的SH-SY5Y细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨丁苯酞对1-甲基-4-苯基-吡啶离子(MPP+)诱导的SH-SY5Y细胞混合谱系激酶3(MLK3)通路的影响,及其对细胞增殖与凋亡的作用机制。方法对数生长期SH-SY5Y细胞分为对照组、MPP+组、丁苯酞组和URMC-099组,对照组正常培养,MPP+组加1 mmol/L MPP+培养24 h,丁苯酞组予10μmol/L丁苯酞预处理3 h后,加入MPP+培养24 h,URMC-099组予200nmol/L MLK3通路特异性抑制剂URMC-099预处理3 h后,加入MPP+培养24 h。倒置相差显微镜观察细胞形态,噻唑蓝比色法检测细胞活性,Annexin-V/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡率,Hoechst33342荧光染色法观察凋亡细胞,Western blotting检测MLK3磷酸化蛋白(p-MLK3)、c-Jun氨基末端激酶磷酸化蛋白(p-JNK)和细胞外调节蛋白激酶磷酸化蛋白(p-ERK1/2)的表达。结果 MPP+组细胞存活率低于对照组(P0.05),丁苯酞组和URMC-099组细胞存活率高于MPP+组(P0.05);MPP+组细胞凋亡率高于对照组(P0.05),丁苯酞组和URMC-099组细胞凋亡率低于MPP+组(P0.05);与对照组相比,MPP+组p-MLK3、p-JNK蛋白表达量增加(P0.05),p-ERK1/2蛋白表达量降低(P0.05);与MPP+组相比,丁苯酞组和URMC-099组p-MLK3、p-JNK蛋白表达量降低(P0.05),p-ERK1/2蛋白表达量升高(P0.05)。结论丁苯酞可减少MPP+诱导的SH-SY5Y细胞凋亡,促进细胞增殖,其机制可能是通过抑制MLK3通路,调节下游p-JNK、p-ERK1/2蛋白表达。     

CCR3在肾透明细胞癌中的表达及对肾透明细胞癌细胞侵袭、转移能力的影响

目的研究CCR类趋化因子受体3(CCR3)在肾透明细胞癌中的表达及对肾透明细胞癌细胞侵袭、转移能力的影响。方法回顾性选取2019年4月至2020年4月在湖南中医药高等专科学校附属第一医院就诊的肾透明细胞癌组织标本50例,选取50例癌旁组织为对照,进行免疫组化染色。选取人肾透明细胞癌细胞系786-0和人肾透明细胞癌细胞系A498,细胞培养,检测CCR3 mRNA表达水平。构建CCR3沉默慢病毒载体作为CCR3抑制组,对照组中加入一段无义序列,空白组只加生理盐水。细胞迁移、侵袭实验观察细胞迁移、侵袭能力,蛋白质印迹(Western blotting)检测磷酸化细胞外调节蛋白激酶(p-ERK1/2)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)水平。结果CCR3在肾透明细胞癌组织中阳性表达比率(48.00%)低于癌旁组织阳性表达(12.00%),差异有统计学意义(P <0.05)。A498人肾透明细胞癌细胞系中CCR3 mRNA表达量高于786-0人肾透明细胞癌细胞系中表达量,差异有统计学意义(P <0.05)。与空白组相比,对照组癌细胞迁移、侵袭数量增加,CCR3抑制组癌细胞迁移、侵袭数量减少(P <0.05);与对照组相比,CCR3抑制组癌细胞迁移、侵袭数量减少,差异有统计学意义(P <0.05)。与空白组相比,对照组p-ERK1/2、MMP-2、MMP-9蛋白表达水平升高,CCR3抑制组p-ERK1/2、MMP-2、MMP-9蛋白表达水平降低(P <0.05);与对照组相比,CCR3抑制组p-ERK1/2、MMP-2、MMP-9蛋白表达水平降低,差异有统计学意义(P <0.05)。结论 CCR3在肾透明细胞癌细胞中显示高表达,抑制CCR3表达通过调控p-ERK1/2、MMP-2、MMP-9蛋白,从而抑制肾透明细胞癌细胞侵袭和迁移。     

ARK5、MMP-2和MMP-9在胃癌中的表达及与侵袭转移的关系

目的:探讨ARK5、基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)、基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)在胃癌组织中的表达及与胃癌侵袭转移的关系。方法:免疫组织化学方法检测66例胃癌组织及20例正常胃组织中ARK5、MMP-2、MMP-9的表达;脂质体介导法将ARK5-siRNA转染入胃癌细胞株SGC-7901(siARK5/SGC7901细胞组),以SCRsiRNA转染组(scr/SGC7901细胞组)作为对照组,Western blot检测转染后ARK5、MMP-2、MMP-9蛋白表达;Transwell侵袭实验检测细胞体外侵袭能力。结果:ARK5、MMP-2、MMP-9在胃癌组织中的阳性表达率分别为68%、76%、68%,三者之间差异具有统计学意义(P<0.05);ARK5的表达与胃癌的浸润深度、细胞分化程度、TNM分期及淋巴结转移呈正相关(P<0.05),与年龄、性别、肿瘤大小无关(P>0.05);转染后siARK5/SGC7901细胞组表达ARK5、MMP-2和MMP-9蛋白水平降低,体外侵袭能力明显降低(P<0.05)。结论:ARK5、MMP-2和MMP-9在组织中的表达有相关性,ARK5与胃癌的侵袭和转移密切相关,可作为判断预后的指标和化学治疗的靶点。     

The role of captopril and losartan in prevention and regression of tamoxifen-induced resistance of breast cancer cell line MCF-7: An in vitro study

Innate and acquired tamoxifen (TAM) resistance in estrogen receptor positive (ER+) breast cancer is an important problem in adjuvant endocrine therapy. The underlying mechanisms of TAM resistance is yet unknown. In the present study, we evaluated the role of renin–angiotensin system (RAS) in the acquisition of TAM resistance in human breast cancer cell line MCF-7, and the potential role of captopril and captopril + losartan combination in the prevention and reversion of the TAM resistant phenotype. MCF-7 cells were continuously exposed to 1 μmol/L TAM to develop TAM resistant cells (TAM-R). MTT cell viability assay was used to determine the growth response of MCF-7 and TAM-R cells, and quantitative real-time polymerase chain reaction (qRT-PCR) was used to assess angiotensin I converting enzyme (ACE), angiotensin II receptor type-1 and type-2 (AGTR1 and AGTR2) mRNA expressions. Preventive and therapeutic effects of RAS blockers – captopril and losartan – were examined on MCF-7 and TAM-R cells. Based on qRT-PCR, TAM-R cells compared to MCF-7 cells, had a mean ± SD fold increase of 319.1 ± 204.1 (P = 0.002) in production of ACE mRNA level, 2211.8 ± 777.9 (P = 0.002) in AGTR1 mRNA level, and 265.9 ± 143.9 (P = 0.037) in production of AGTR2 mRNA level. The combination of either captopril or captopril + losartan with TAM led to the prevention and even reversion of TAM resistant phenotype.     

Stathmin表达水平与乳腺癌细胞侵袭能力相关性研究

目的 探讨乳腺癌细胞MDA-MB-231和MCF-7中Stathmin基因表达水平与细胞生长、黏附、侵袭等生物学行为之间的关系,为进一步研究乳腺癌转移机制奠定实验基础。方法 应用RT-PCR和Western Blot方法检测MDA-MB-231和MCF-7细胞中Stathmin基因的表达水平,同时利用细胞增殖试验、细胞黏附试验和细胞侵袭试验检测MDA-MB-231和MCF-7细胞的生长、黏附、侵袭能力,分析Stathmin表达与细胞的生长、黏附、侵袭能力之间的关系。结果 RT-PCR和Western Blot检测结果显示,Stathmin基因在MDA-MB-231和MCF-7细胞中表达均高于正常对照细胞(F=10.173,P<0.05),且MDA-MB-231细胞中的表达水平明显高于MCF-7细胞中的表达水平(t=4.562,P<0.05)。而MDA-MB-231细胞在生长、黏附和侵袭能力方面均强于MCF-7细胞(P<0.05)。结论 Stathmin表达水平高的乳腺癌细胞相应的生长、黏附、侵袭能力较强,Stathmin表达水平与细胞侵袭能力密切相关。     

槲皮素对人乳腺癌MCF-7细胞增殖及迁移的抑制作用

目的探讨槲皮素对人乳腺癌MCF-7细胞增殖及迁移能力的影响。方法采用不同浓度槲皮素处理乳腺癌MCF-7细胞,以CCK8法观察乳腺癌MCF-7细胞的增殖活性,以划痕迁移实验检测槲皮素对MCF-7细胞迁移情况的影响。结果槲皮素处理后乳腺癌MCF-7细胞增殖率明显降低,且呈浓度和时间依赖性(P<0.05);划痕迁移实验中,随着槲皮素浓度提高,MCF-7迁移率呈递减趋势。结论槲皮素可抑制乳腺癌MCF-7细胞的增殖,并阻断MCF-7细胞迁移。     

二氢杨梅素对乳腺癌细胞MCF-7增殖、凋亡的影响

目的研究二氢杨梅素(DMY)对乳腺癌细胞MCF-7增殖、凋亡的影响。方法 2014年3月至2015年2月,该院采用99%纯度的DMY为抑制剂,以乳腺癌MCF-7细胞为研究对象,采用MTT法、流式细胞术法和免疫细胞化学来分析乳腺癌细胞MCF-7增殖、凋亡的情况。结果当使用浓度大于20μg/mL的DMY处理细胞时,出现了抑制效果,但效果不佳;当用40与80μg/mL的DMY时,明显地抑制了乳腺癌细胞MCF-6的增殖,且有不同程度的敏感性。当DMY为80μg/mL时,其IC50为226.9μg/mL。抑制率和IC50分别与0μg/mL DMY比较,差异有统计学意义(P0.05)。40与80μg/mL的DMY处理乳腺癌细胞MCF-6可以诱导其周期阻滞在G2/M期(P0.01),并表现出明显的细胞凋亡现象,同时,G0/G1期也受到阻滞,S期细胞比例降低明显,差异有统计学意义(P0.05);当使用浓度大于20μg/mL的DMY时,PCNA阳性率有所下降,当浓度为40μg/mL的DMY时,乳腺癌细胞MCF-6的PCNA阳性率明显下降(P0.01),尤其浓度为80μg/mL的DMY时,阳性率为10.00%。与0μg/mL DMY比较,差异有统计学意义(P0.05)。结论对乳腺癌患者采用DMY可以有效抑制癌细胞快速增殖,加速器凋亡,减缓患者病情,疗效突出。     

siRNA沉默VDAC1对MCF-7细胞增殖、周期的影响及其作用机制

[目的]观察siRNA沉默VDAC1基因对乳腺癌MCF-7细胞增殖及细胞周期的影响.[方法]针对人VDAC1基因设计并合成siRNA,并将VDAC1-siRNA转染MCF-7细胞后,应用实时荧光定量PCR和Western印迹法检测MCF-7细胞中VDAC1的表达水平,MTT法检测MCF-7细胞的增殖情况,流式细胞术检测MCF-7细胞的周期分布,同时Western印迹法检测周期蛋白D1的表达.[结果]MCF-7细胞转染VDAC1-siRNA后能够有效抑制VDAC1的表达,显著抑制其增殖水平,促使MCF-7细胞发生G1期阻滞,同时下调Cyclin D1蛋白表达.[结论]VDAC1沉默能够有效抑制人乳腺癌MCF-7细胞增殖,促使细胞发生G1期阻滞.VDAC1可作为乳腺癌治疗的新靶点.     

TNF-α可诱导乳腺癌细胞凋亡

目的研究TNF-α对乳腺癌的影响。方法采用RT-PCR和WesternBlotting分析30例乳腺浸润性导管癌及癌旁正常乳腺组织,乳腺正常上皮细胞系及乳腺癌细胞系中TNF-α的表达情况;采用流式细胞术观察TNF-α对乳腺癌细胞凋亡的影响。结果RT-PCR和Western Blotting结果碌示,TNF-αmRNA和蛋白在乳腺癌组织中表达都明显低于配对的癌旁正常组织（P〈0．05）,在乳腺上皮细胞系中表达均高于乳腺癌三利一细胞系,流式细胞术检测结果显示与未处理组桐比．经TNF-α处理的MDA-MB-435S（16．7±0．31）和MCF7（18．6±0．42）细胞的凋亡率明显增加,差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论TNF-α可促进乳腺癌细胞的凋亡,TNF-α可为乳腺癌的治疗提供新靶点。