臭灵丹抗甲1型流感病毒FM1株感染小鼠的药效学研究

【目的】观察臭灵丹抑制甲1型流感病毒FM1株感染的体内药效。【方法】采用小鼠流感病毒性肺炎模型,通过检测小鼠体质量变化和肺指数、肺组织病理变化确认药物的体内抗病毒药效。【结果】病毒对照组的肺指数较正常对照组显著升高(P<0.001),表明该模型复制成功;臭灵丹高、中、低剂量组均未能有效缓解流感病毒感染小鼠的体质量下降(P>0.05);臭灵丹高、中、低剂量组可显著降低流感病毒感染小鼠的肺指数(P<0.05)。小鼠肺组织病理检查结果显示:臭灵丹低剂量组可以缓解肺组织病理性炎症。【结论】臭灵丹对甲1型流感病毒FM1株感染小鼠的病毒性肺炎具有一定的抑制作用。     

银翘柴桂汤抗甲型流感病毒作用的实验研究

目的 观察甲型流感病毒FM1感染小鼠体内流感病毒复制量的不同,研究中药复方银翘柴桂汤体内抗甲型流感病毒的作用.方法 NIH小鼠分为正常对照组、病毒模型组、利巴韦林组及银翘柴桂汤组,除空白对照组外,将甲型流感病毒FM1稀释液滴鼻感染各组小鼠,建立流感病毒感染模型.病毒感染前1 d及感染后4 d,银翘柴桂汤组及利巴韦林组分别灌胃银翘柴桂汤和利巴韦林,病毒感染后第5天处死小鼠,解剖,提取肺组织总RNA,实时荧光定量PCR(RT-PCR)方法测定小鼠肺组织流感病毒复制量.结果 正常对照组无扩增曲线,Ct>30,流感病毒病原体检测阴性;银翘柴桂汤组、利巴韦林组及病毒模型组扩增曲线Ct分别为19.49±1.40、21.02±4.25、15.80±4.18,流感病毒病原体检测阳性.与病毒模型组病毒复制量(128 973.40±18.14)相比,利巴韦林组病毒复制量(33 327.29±19.56)降低,有显著差异性(P<0.05);银翘柴桂汤组病毒复制量(79 104.28±2.52)降低,有显著性差异(P<0.05).结论 建立的流感病毒感染模型可靠,银翘柴桂汤对流感病毒感染小鼠肺内流感病毒增殖具有明显抑制作用,有抗流感病毒作用.     

痰热清注射液对流感病毒FM1感染小鼠免疫功能影响的研究

目的研究痰热清注射液对流感病毒(FM1)感染小鼠的免疫功能和肺组织中细胞因子以及肺组织炎症反应的作用。方法采用流感病毒亚甲型鼠肺适应株(FM1)制备小鼠肺感染模型,观察痰热清注射液对FM1感染小鼠肺组织匀浆中细胞因子IFNγ-、IL-4和TNF-α的含量,以及T、B淋巴细胞的增殖功能和T淋巴细胞产生IL-2的能力。结果痰热清注射液不仅具有显著增强FM1感染小鼠T、B淋巴细胞的功能和提高小鼠肺组织匀浆中IFN-γ和IL-4的含量,而且还能显著抑制肺组织匀浆中TNF-α的含量。结论痰热清注射液对流感病毒FM1感染小鼠的免疫功能和肺组织中细胞因子具有明显的调节作用和抑制肺组织炎症反应的作用。     

抗炎多肽AF-2对LPS诱导的小鼠急性肺损伤的保护

目的 研究抗炎多肽AF-2(antiflammin-2)对内毒素(LPS)诱导的小鼠急性肺损伤的保护作用.方法 Balb/c雄性小鼠37只,随机分为3组,对照组(n = 10)、急性肺损伤(ALI)模型组(n=14)和AF-2治疗组(n=13),模型组和治疗组腹腔注射大肠杆菌内毒素复制小鼠肺损伤模型,治疗组同时注射抗炎多肽AF-2,对照组和模型组注射等量的生理盐水.在0 h、6 h和12 h记录动物的呼吸频率,12 h处死动物,肺组织切片观察肺病理变化,ELISA法检测血清细胞因子.结果 6 h和12 h AF-2治疗组动物呼吸频率均低于模型组.肺组织病理显示AF-2对LPS诱导的小鼠ALI肺组织的渗出、炎细胞浸润有一定的抑制作用.AF-2治疗组与ALI模型组比较血清IL-6水平明显下降.结论 AF-2对内毒素诱导的小鼠急性肺损伤有一定的保护作用.     

麻黄中的主要活性成分对原发性痛经模型小鼠的作用研究

目的研究麻黄中的主要活性成分麻黄碱与伪麻黄碱对原发性痛经模型小鼠的影响,为阐明麻黄在葛根汤治疗原发性痛经中的作用积累实验理论基础。方法采用缩宫素诱导的原发性痛经小鼠模型,以扭体反应次数和扭体潜伏期为主要观测指标,考察麻黄碱(Ephedrine)与伪麻黄碱(Pseudoephedrine)的镇痛作用。通过检测血清环磷酸腺苷(c AMP)和钙离子(Ca2+)的含量以及子宫组织中环氧合酶(COX-2)蛋白的表达,初步探讨麻黄碱与伪麻黄碱抑制小鼠子宫平滑肌收缩的作用机制。结果麻黄碱中剂量组(6 mg/kg),高剂量组(12 mg/kg)和伪麻黄碱中剂量组(6 mg/kg),高剂量组(12 mg/kg)均能显著抑制原发性痛经模型小鼠的扭体反应次数;麻黄碱高剂量组能显著延长扭体反应潜伏期;麻黄碱中、高剂量组和伪麻黄碱高剂量组能显著增加血清c AMP含量,降低Ca2+的含量;麻黄碱和伪麻黄碱中、高剂量组均能显著下调COX-2蛋白的表达。结论麻黄碱与伪麻黄碱剂量依赖性地缓解原发性痛经模型小鼠的疼痛反应,其发挥镇痛作用可能与参与调节Ca2+水平和抗炎作用有关,为进一步阐明麻黄在葛根汤治疗原发性痛经中的作用机制奠定了一定的理论依据。     

菊黄上清含片抗流感病毒的研究

目的: 研究菊黄上清含片在小鼠体内的抗流感病毒作用.方法: 以流感病毒鼠肺适应株FM1滴鼻感染小鼠,用高、中、低浓度菊黄上清含片药液灌胃小鼠,观察小鼠的生存时间、死亡率、肺指数和肺组织病变程度.结果: 菊黄上清含片对流感病毒FM1致小鼠肺病变有明显抑制作用,对流感病毒FM1感染小鼠具有显著的保护作用,明显抑制小鼠体内流感病毒FM1的增殖.结论: 菊黄上清含具有明显的抗流感病毒作用.     

朝医麻黄定喘汤对哮喘模型小鼠肺组织中p38蛋白激酶表达的影响

[目的]探讨朝医麻黄定喘汤对支气管哮喘模型小鼠肺组织中p38蛋白激酶(p38MAPK)表达的影响.[方法]应用卵清蛋白腹腔注射致敏和反复超声雾化吸入方法刺激复制小鼠哮喘模型,随机分成正常对照组、哮喘模型组和麻黄定喘汤小、大剂量组.分别采用酶联免疫吸附法和蛋白质印迹法检测支气管肺泡灌洗液中的嗜酸性粒细胞总数(EOS)、白细胞介素5(IL-5)含量和肺组织磷酸化p38MAPK表达的变化.[结果]朝医麻黄定喘汤小、大剂量组小鼠肺组织磷酸化p38MAPK表达水平、IL-5含量及EOS计数均较哮喘模型组显著降低(P<0.05),而且p38MAPK表达水平与IL-5含量和EOS计数呈正相关.[结论]朝医麻黄定喘汤可能通过p38MAPK信号转导途径对哮喘起治疗作用.     

痰热清注射液对流感病毒FM1感染小鼠肺损伤及血凝滴度影响的研究

目的观察痰热清注射液对流感病毒亚甲型鼠肺适应株(FM1)感染小鼠肺组织损伤及肺组织匀浆病毒血凝滴度的影响.方法采用流感病毒FM1感染小鼠模型,设立正常对照组、模型组、利巴韦林阳性药物组、痰热清注射液大、中、小剂量组.观察各组小鼠肺指数、肺匀浆的血凝滴度、肺组织的病理改变.结果与模型组比较,痰热清注射液大、中、小剂量组小鼠肺组织匀浆病毒血凝滴度明显降低(P＜0.05);痰热清注射液大、中剂量组小鼠肺组织病理形态学明显改善;与模型组比较,痰热清注射液大中小剂量组小鼠肺指数显著降低(P＜0.05).结论痰热清注射液对流感病毒FM1感染小鼠肺匀浆的血凝滴度具有明显的降低作用,对其所致肺损伤具有明显的改善作用.     

麻黄定喘汤对咳嗽变异性哮喘模型小鼠Th1/Th2类细胞因子水平的影响

[目的]探讨麻黄定喘汤对咳嗽变异性哮喘小鼠气道炎症和Th1/Th2类细胞因子水平的影响及其可能机制.[方法]取雄性BALB/c小鼠,以给予卵清蛋白溶液的方法建立咳嗽变异性哮喘模型,麻黄定喘汤小、大剂量组分别灌胃给予20,60mL/kg麻黄定喘汤.采用酶联免疫吸附法检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中白细胞介素4(IL-4),IL-5,IL-13及γ干扰素(IFN-γ)含量,并观察BALF中的炎性细胞计数变化和肺组织病理学改变.[结果]模型对照组小鼠BALF中炎性细胞计数及IL-4,IL-5,IL-13,IFN-γ水平均明显降低,与正常对照组比较差异均具有统计学意义(P<0.05).麻黄定喘汤小、大剂量组小鼠BALF中炎性细胞计数及IL-4,IL-5,IL-13水平显著降低,IFN-γ水平明显上升,与模型对照组比较差异均具有统计学意义(P<0.05).麻黄定喘汤明显减轻哮喘小鼠肺组织病理学改变,麻黄定喘汤小、大剂量组之间相比较,差异无统计学意义(P>0.05).[结论]麻黄定喘汤对咳嗽变异性哮喘小鼠具有治疗作用,其机制可能与调节IL-4/IFN-γ平衡失调、减轻炎性细胞浸润有关.     

麻黄水提物雾化吸入对哮喘小鼠气道炎症的影响

目的观察麻黄水提物雾化吸入对哮喘小鼠气道炎症及白细胞介素-13(IL-13)、嗜酸性粒细胞趋化因子(Eotaxin)表达的影响。方法将24只雌性BALB/c小鼠随机分为3组:正常对照组、哮喘模型组、麻黄组,每组8只。除正常对照组用生理盐水外,哮喘模型组、麻黄组用卵蛋白腹腔注射致敏及滴鼻激发建立哮喘模型,麻黄组每次激发前1h予以麻黄水煎液雾化吸入30min,2次/天,连续7d。正常对照组、哮喘模型组用等量生理盐水代替麻黄水煎液雾化吸入,吸入方法和时间同麻黄组。小鼠末次激发24h后,计数支气管肺泡灌洗液(BALF)中白细胞(WBC)和嗜酸性粒细胞(EOS),HE染色观察支气管及其周围组织病理改变,免疫组化法测定支气管肺组织中IL-13、Eotaxin的表达,ELISA法检测IL-13、Eotaxin的浓度。结果与正常对照组比较,哮喘模型组小鼠BALF中WBC、EOS计数,支气管肺组织中IL-13、Eotaxin蛋白表达明显增高,差异均有统计学意义(P<0.01);与哮喘模型组比较,麻黄组小鼠以上各项指标均降低,支气管及其周围组织炎症细胞浸润减少,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论麻黄水提物雾化吸入能减轻哮喘小鼠气道炎症,抑制支气管肺组织中IL-13、Eotaxin蛋白的表达可能是其抗炎机制之一。     

抗肿瘤药物羧胺三唑的抗炎镇痛作用

目的 探讨抗肿瘤药物羧胺三唑(CAI)是否具有抗炎镇痛作用并初步考察其作用机制.方法 采用巴豆油诱导小鼠耳肿胀模型、棉球肉芽肿模型和大鼠佐剂性关节炎模型评价CAI的抗炎作用.检测CAI对血管内皮生长因子(VEGF)或组胺诱导的小鼠背部皮肤局部血管通透性的影响,以及对炎症部位和血清中致炎细胞因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素1β(IL-1β)水平的影响.采用醋酸致小鼠扭体模型和福尔马林致痛模型评价CAI的镇痛作用.结果 CAI对急慢性炎症均有明显抑制作用,对VEGF或组胺诱导的血管通透性增加有明显缓解作用,对致炎细胞因子TNF-α和IL-1β有明显抑制作用.CAI对外周炎性疼痛也有明显治疗作用.结论 CAI是一种极具开发潜力的抗炎镇痛物质.     

麻黄及其麻黄碱制剂中有效成分的测定

麻黄是一种常用中药，为麻黄科植物草麻黄、中麻黄或木贼麻黄的干燥草根茎。麻黄的主要活性成分是麻黄类生物碱，即：麻黄碱(E)、伪麻黄碱(PE)、去甲基麻黄碱(NE)、去甲基伪麻黄碱(NPE)、甲基麻黄碱(ME)等。麻黄类生物碱具有松弛平滑肌、收缩血管、抗炎及解热发汗、抗菌、抗病毒、镇咳平喘等作用，属剧药类。为评价药品品质，保证用药安全，研究们在麻黄及其麻黄碱制剂中化学成分测定方面做了大量的工作。目前，已报     

MEK1/2抑制剂U0126体内外抗流感病毒研究

目的观察丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)的激酶MEK1/2抑制剂U0126对甲型H1N1流感病毒PR/8/34株感染正常小鼠肺炎模型和人肺泡上皮细胞(A549)感染模型的作用。方法采用PR/8/34株感染ICR小鼠模型,通过肺指数评价感染后第2天和第5天U0126的抗病毒作用,采用实时荧光定量PCR技术观察U0126对小鼠肺脏组织病毒载量的作用。采用PR/8/34株感染A549细胞模型,通过观察细胞病变(CPE)法研究U0126对细胞病变的作用。结果 PR/8/34株流感病毒感染小鼠第2天,U0126组与模型对照组比较肺指数和病毒载量均显著降低(P0.05);U0126对A549细胞病变作用具有明显的抑制作用。结论 U0126对体内外甲型流感病毒感染模型均具有抗病毒作用。结果提示,药物抗病毒作用可能通过抑制MAPK(Raf/MEK/ERK)信号反应途径实现的设想,为研究新的抗病毒药物提供新思路,为进一步揭示药物抗病毒机理提供药效学研究基础。     

经卵白给药研究利巴韦林在鸡胚内抗甲型流感病毒的作用

目的建立抗甲型流感病毒作用新的鸡胚模型。方法设计尿囊腔中接种流感病毒(甲型流感病毒鼠肺适应的FM1株及流感病毒A3),鸡胚卵白注射利巴韦林,35℃培养72 h后,观察尿囊液流感病毒血凝素滴度。结果在新的模型下,利巴韦林100、50、25 mg/kg剂量组对流感病毒FM1及流感病毒A3在鸡胚体内有明显的抑制作用,具有统计学意义(P<0.05)。感染前2 h及感染后0 h、2 h、4 h注射利巴韦林,对流感病毒FM1及流感病毒A3在鸡胚体内有明显的抑制作用,具有统计学意义(P<0.05)。结论在新的鸡胚模型中,利巴韦林可明显地抑制流感病毒的复制。     

NF-κB对病毒性心肌炎小鼠心肌中促炎细胞因子的调控

目的 探讨核因子-κB （NF-κB）对A型流感病毒（IAV）性心肌炎小鼠心肌中促炎细胞因子的调控作用。方法 30只8周龄雄性BALB/c小鼠随机分3组：1正常对照组（C组）：经鼻吸入15μl生理盐水;2感染对照组（I组）：经鼻吸入40空斑形成单位（pfu） IAV;3PDTC组（P组）：经鼻吸入40pfu IAV,腹腔注射NF-κB抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸（PDTC）（10mg/kg）,每天1次。感染后第9天处死小鼠,切取心脏组织进行病理及生化检查。结果 IAV感染可诱导心肌中促炎细胞因子白介素（IL）-1β、IL-6及肿瘤坏死因子（TNF）α显著上调（P<0.01,P<0.05）,引发心肌急性炎性反应,部分心肌组织坏死。PDTC显著抑制促炎细胞因子在心肌中表达（P<0.01）,有效抑制IAV病毒复制（P<0.01）,减轻心肌炎性反应。结论 IAV感染心肌组织后可能通过NF-κB信号通路诱导心肌中促炎细胞因子表达上调,抑制NF-κB激活可能为预防和治疗流感病毒性心肌炎提供新的思路。     

不同配比麻黄细辛附子汤对肾阳虚外感模型小鼠的干预作用

目的:探讨不同配比麻黄细辛附子汤对肾阳虚外感模型小鼠的干预作用。方法:采用腹腔注射苯甲酸雌二醇(8 mg/kg)法复制肾阳虚小鼠模型,按体质量将小鼠分为正常对照组、模型组、利巴韦林组、麻黄细辛附子汤6∶3∶3组、6∶6∶6组、6∶3∶9组。采用流感病毒FM1尿囊液(血凝滴度为1∶320)滴鼻感染小鼠,建立肾阳虚小鼠外感模型。感染1 d后给药,每日1次,连续给药5 d。观察小鼠的一般体征、体质量、肛温变化和死亡情况,比较各组小鼠肺脏指数和肺组织的炎症病变。结果:与模型组比较,各药物组给药后小鼠体质量、肛温显著回升,死亡率、肺指数均显著降低,差异有统计学意义(P0.05);其中以麻黄细辛附子汤6∶3∶9组治疗效果最佳。结论:麻黄细辛附子汤6∶3∶9组具有较高的抗病毒活性,为中药抗病毒有效复方的筛选提供了实验依据。     

金翘片体内抗流感病毒作用研究

【目的】探讨金翘片的体内抗流感病毒作用。【方法】以15 LD50流感病毒滴鼻感染小鼠造成肺炎模型,经预防或治疗给药5 d后,取小鼠肺组织,称重,采用实时荧光定量PCR反应检测肺组织中的病毒载量,采用双抗体夹心酶联免疫吸附分析(ELISA)法检测肺组织和血清中的γ-干扰素(γ-IFN)水平,观察金翘片对小鼠肺指数、病毒载量和γ-IFN的影响;以3LD50流感病毒滴鼻感染小鼠造成肺炎模型,经预防或治疗给药7 d后,观察动物发病情况和死亡数,共14 d,评价金翘片对小鼠死亡保护和生命延长的作用。【结果】金翘片能明显抑制小鼠肺指数升高,提高死亡保护率和生命延长率,降低肺组织的病毒载量,提高γ-IFN水平(P0.05或P0.01);金翘片抗流感病毒作用明显优于银翘解毒片和连花清瘟胶囊,相当于达菲;金翘片预防作用优于治疗作用,但无明显差异。【结论】金翘片具有明显的抗甲型H1N1流感病毒作用。     

流感后肺炎的细胞因子风暴及免疫治疗

流感后肺炎的流行给社会带来巨大经济损失,其发病过程表现为"细胞因子风暴"。流感后肺炎的免疫反应强度决定了预后,在流感后肺炎发病过程中,促炎因子和抗炎因子相互作用导致肺组织广泛水肿、肺毛细血管渗漏,进展为急性呼吸窘迫综合征,甚至呼吸循环衰竭直至死亡。目前糖皮质激素、他汀类药物、免疫球蛋白以及具有免疫调节作用的抗生素等药物被用于流感后肺炎的免疫治疗。这些药物在其他疾病的治疗中应用广泛,且易获取、对不良反应相对了解,因此可作为流感后肺炎免疫治疗的重点研究方向。     

麻黄-甘草药对抑制Th2型变应性接触性皮炎的作用及机制探讨

目的研究麻黄-甘草药对对Th2型变应性接触性皮炎(Allergic contact dermatitis,ACD)的影响及机制。方法采用不同浓度异硫氰酸荧光素(FITC)诱导BALB/c小鼠建立Th2型ACD模型及诱导初期ACD模型。HE染色观察小鼠耳组织病理学变化,测量小鼠耳肿胀,ELISA法检测小鼠耳组织Th2细胞因子水平及胸腺基质淋巴细胞生成素(Thymic stromal lymphopoietin,TSLP)蛋白水平,用qPCR检测小鼠耳组织TSLP mRNA水平,Poly(I∶C)和TNF-α联合刺激HaCaT细胞,检测细胞分泌的TSLP蛋白水平。结果 Th2型ACD模型中,与模型组小鼠比较,麻黄-甘草2.34g/kg和7.02g/kg组均明显抑制小鼠耳肿胀,减少耳组织炎性细胞浸润;麻黄-甘草2个剂量组均显著降低耳匀浆中IL-4水平,麻黄-甘草7.02g/kg组明显降低IL-13水平。诱导初期Th2型ACD模型中,与模型组比较,麻黄-甘草药对显著降低耳匀浆TSLP的基因及蛋白表达,体外麻黄-甘草药对及其主要单体成分同样抑制TSLP的分泌。结论麻黄-甘草药对具有抑制过敏性炎症的作用,其作用机制可能是通过减少TSLP的分泌。     

人H7N9禽流感病毒与H1N1流感病毒感染小鼠病理学损伤比较研究

【摘要】 目的 比较分析H7N9病毒与H1N1病毒感染小鼠病理学损伤特点,初步探讨两种病毒感染致所致小鼠急性肺损伤的致病机制。 方法 H7N9病毒与H1N1病毒分别感染小鼠,观察不同病毒感染后小鼠生存率,并于不同时间点取心、肝、脾、肺、肾、脑、肠等组织,伊红-苏木素染色并进行组织病理学分析,免疫组化检测病毒抗原分布及中性粒细胞浸润。综合分析肺组织病理损伤与病毒复制、宿主免疫反应之间的关系。 结果 H7N9病毒感染小鼠肺及脾脏损伤较轻,存活率较高。H1N1 病毒感染的小鼠肺及脾脏损伤较重,感染后9d全部死亡;两种病毒抗原主要分布于支气管上皮细胞、少量间质细胞和肺泡上皮细胞,病毒复制水平无明显差异。但H1N1病毒感染后肺及脾脏中均有大量中性粒细胞浸润,小鼠机体炎症反应明显强于H7N9病毒感染后小鼠炎症反应。 结论 H7N9病毒与H1N1病毒感染后小鼠病理学损伤特点及程度均不同,病毒复制是小鼠肺损伤的诱发因素但并非决定因素,宿主针对病毒感染产生的免疫反应程度与急性肺损伤密切相关。