bcl-2硫代反义寡核苷酸增强膀胱癌细胞对顺铂的敏感性

目的　研究凋亡抑制基因bcl 2硫代反义寡核苷酸 (S ODN)转染T2 4细胞后对顺铂药物敏感性影响。方法　将培养细胞分为 6组 :反义S ODN组 ,正义S ODN组 ,反义S ODN +顺铂组 ,正义S ODN +顺铂组 ,顺铂组和对照组。应用脂质体法介导bcl 2正义、反义S ODN转染T2 4细胞。通过免疫细胞化学方法观察细胞内BCL 2的蛋白表达 ,RT PCR方法检测细胞内bcl 2mR NA的相对表达量 ,MTT法测经顺铂 (cis platinum)处理的各组细胞的生成率 ,流式细胞仪 (FCM)检测细胞凋亡率。结果　bcl 2反义S ODN处理过的T2 4细胞中BCL 2蛋白和bcl 2mRNA表达明显下降。顺铂对反义S ODN组细胞的半抑制浓度 (IC50 )为 (2 .2 5± 0 .0 9) μg/ml显著低于正义S ODN组 (5 .83± 0 .15 ) μg/ml和对照组 (6 .11± 0 .2 1) μg/ml(P <0 .0 1)。顺铂处理反义S ODN组细胞的凋亡率显著高于其它组。结论　bcl 2反义S ODN能显著抑制T2 4细胞中BCL 2蛋白的表达并增强T2 4细胞对顺铂的药物敏感性     

抑制miR-23a表达增强卵巢癌顺铂敏感性的分子机制

目的分析抑制miR-23a表达后,耐药卵巢癌A2780细胞对化疗药物顺铂的敏感性变化及其分子机制。方法选择顺铂耐
药卵巢癌A2780细胞株为研究样本,并分为两组,其中对照组仅加入顺铂,实验组加入顺铂及antagomir-23a。应用MTT法检测
antagomir-23a抑制miR-23a并经顺铂处理后细胞增殖抑制率;应用流式细胞仪分析细胞周期分布情况;应用Hoechst33258染色
分析细胞凋亡形态学变化;应用Western blot法分析耐药糖蛋白P-gp的表达变化。结果抑制miR-23a并经顺铂处理后,细胞增
殖抑制率显著上升（P<0.01）,顺铂中效浓度（IC50）为17.89 μmol/L,比对照组IC50 110.18 μmol/L降低了83.76%（P<0.01）,细胞被
阻滞于G0/G1期且凋亡率增加（P<0.01）;Hoechst33258染色见细胞核浓缩、染色增强。Western blot检测提示细胞P-gp蛋白表
达随着顺铂浓度加大而逐渐减低（P<0.01）。结论抑制耐药卵巢癌A2780细胞内miR-23a表达后,细胞对顺铂的敏感性显著增
加,这可能miR-23a靶基因负性调控因素得以缓解,并由此引发P-gp蛋白表达受抑有关。
     

反义bcl-2 和反义survivin对人神经母细胞瘤细胞系SK-N-MC细胞生长的作用

目的研究反义bcl-2和反义survivin(svv)对人神经母细胞瘤(NB)细胞系SK-N-MC细胞生长的作用.方法利用基因重组技术,采用定向克隆构建在真核细胞中能够稳定表达反义bcl-2 或反义svv 的逆转录病毒载体PBabe puro-Asbcl-2和PBabe puro-Assvv,并分别经脂质体LipofectamineTM介导转染人NB细胞株SK-N-MC细胞,经嘌呤霉素(2.0 μg/ml)筛选得到抗性克隆,同时以空载体Pbabe puro 转染SK-N-MC作为对照;以免疫组化和Western 印迹分析反义bcl-2、反义svv对细胞内源性Bcl-2、SVV蛋白质的表达抑制作用,应用MTT法研究细胞(5×103 /孔)的生长和增殖情况,并接种于裸鼠(3只/组),观察107 个细胞在6周时的成瘤情况,以研究反义bcl-2、反义svv对SK-N-MC细胞生长的作用.结果反义bcl-2转染后的细胞SK-N-MC/PBabe puro-Asbcl-2中的Bcl-2表达明显降低,反义svv转染后的细胞SK-N-MC/PBabe puro-Assvv中的SVV表达也明显降低;且这两种细胞均生长缓慢, 裸鼠移植瘤体积均明显小于SK-N-MC原始细胞或转染空载体的细胞接种形成的移植瘤.结论稳定表达的反义bcl-2、反义svv均能够有效抑制SK-N-MC细胞内源性相应蛋白质Bcl-2、SVV的表达,提示这两个基因在NB细胞的肿瘤形成中均具有一定的作用.     

核酶抑制N2a细胞血栓素合酶mRNA的表达

根据“锤头状结构”核酶的设计原理,以小鼠全长血栓素合酶（TXS）mRNA为靶系更,计算机预测其二级结构,设计核酶,并人工合成核酶对应的DNA片段,克隆入真核表达载体pEGFP-C1,经脂体转染N2a细胞,用原位杂交的方法检测TXSmRNA的表达水平。结果表明：针对小鼠TXSmRNA的核酶R15、R544、对内毒素刺激的N2a细胞TXSmRNA的表达具有显著的抑制作用,核酶R15、R544可望用于基因治疗,抑制病理条件下TXSmRNA的表达。     

沉默MSH3表达增强舌癌细胞对顺铂的敏感性

目的设计靶向DNA错配修复基因MSH3的siRNA干扰片段,观察MSH3有效沉默对舌癌细胞顺铂耐药性的影响。方 法针对MSH3基因CDS区序列,设计3条siRNA片段,体外化学合成小干扰RNA（siRNA）片段,通过脂质体介导转染人舌癌细 胞CAL27。Real-time PCR及Western 检测干扰后MSH3 的表达。MTS,凋亡双染法及细胞免疫荧光检测顺铂处理后细胞存 活、凋亡及DNA双链断裂的情况。结果3 条siRNA 片段转染细胞后,与对照组相比,3 号siRNA 片段转染后能显著降低 MSH3 mRNA及蛋白质表达水平,该片段被选为后续实验。MSH3表达下调后,顺铂的半数抑制浓度（IC50值）分别由21.32降 至13.95 μmol/L（P<0.05）,凋亡指数分别由4.23±1.27升至11.32±1.82（P<0.05）,舌癌细胞中γ-H2AX焦簇（Foci）的数量显著增 加。结论MSH3表达下调可以明显增加舌癌细胞对顺铂的敏感性,减少DNA双链断裂修复是其主要机制之一。     

视网膜母细胞瘤Bcl—2和Bax基因蛋白质表达

目的：研究凋亡及凋亡调控基因Ｂｃｌ－２／Ｂａｘ和视网膜母细胞瘤（Ｒｅｔｉｎｏｂｌａｓｔｏｍａ，ＲＢ）的发生、发展及退化的关系。方法：收集ＲＢ标本，对其分别进行Ｂｃｌ－２和Ｂａｘ基因的蛋白质免疫组织化学染色。对其表达情况和染色强度进行观察。结果：①Ｂｃｌ－２在分化型ＲＢ中表达比较好；②Ｂａｘ在未分化型和分化型中表达都比较好。结论：①分化型和未分化型ＲＢ中都有Ｂｃｌ－２／Ｂａｘ基因蛋白表达；②随ＲＢ恶     

鼻咽癌组织中ABCC2的表达与顺铂化疗敏感性的关系

目的 探讨在鼻咽癌组织中ABCC2的表达与顺铂化疗敏感性之间的关系。方法 收集临床资料完善的鼻咽癌标本,根据对化疗的情况分为高敏感组和低敏感组,通过免疫组化SP法检测ABCC2在鼻咽癌组织中的表达,统计分析ABCC2的表达与化疗效果、转移等方面的相关性。结果 共收集84例标本,其中高敏感组50例,低敏感组34例;ABCC2在低敏感组中的表达显著高于高敏感组（P <0.01）,并且在顺铂+5-氟脲嘧啶化疗方案中,ABCC2在低敏感组中的的表达高于高敏感组（P <0.05）;在转移组中ABCC2的表达高于未转移组（P <0.05）。结论 在鼻咽癌中ABCC2的表达与DDP化疗效果、转移有关,提示可以考虑用ABCC2来预测鼻咽癌对DDP为基础的化疗的敏感性及预后。 【关键词】 鼻咽肿瘤 ABCC2 顺铂 耐药     

蛋白激酶CK2ɑ特异性siRNA增强喉癌细胞Hep-2对顺铂敏感性的研究

目的 探讨RNA干扰技术抑制蛋白激酶CK2ɑ表达后,喉癌细胞Hep-2对顺铂敏感性的变化. 方法 构建蛋白激酶CK2ɑ特异性siRNA表达质粒psiRNA-hH1neo-CK2ɑ和非特异性表达质粒psiRNA-hH1neo-cont,脂质体转染法转染Hep-2细胞.采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、Western blot技术检测转染后Hep-2细胞蛋白激酶CK2ɑ mRNA和蛋白表达.设立正常对照组、顺铂(5μg/ml)组、psiRNA-hH1neo-CK2ɑ组和psiRNA-hH1neo-CK2ɑ+顺铂(5μg/ml)组,应用MTT法检测转染后Hep-2细胞对顺铂敏感性的变化. 结果 psiRNA-hH1neo-CK2ɑ特异性地抑制了Hep-2细胞中蛋白激酶CK2ɑmRNA和蛋白的表达(P＜0.05).顺铂组(5μg/ml)及psiRNA-hH1neo-CK2ɑ组Hep-2细胞的增殖能力分别为正常对照组的(55.32±4.68)%和(49.68±5.33)%(P＜0.05),但均高于二者联合组(26.12±5.51)%(P＜0.05),转染psiRNA-hH1neo-CK2ɑ后,Hep-2细胞对顺铂敏感性增加了2.12倍. 结论 RNA干扰技术抑制蛋白激酶CK2ɑ表达能增加喉癌细胞Hep-2对顺铂的敏感性.     

蛋白激酶CK2a特异性siRNA增强喉癌细胞Hep-2对顺铂敏感性的研究

目的探讨RNA干扰技术抑制蛋白激酶CK2α表达后,喉癌细胞Hep-2对顺铂敏感性的变化。方法构建蛋白激酶CK2α特异性siRNA表达质粒psiRNA—hH1neo—CK2α和非特异性表达质粒psiRNA—hH1neo—cont,脂质体转染法转染Hep-2细胞。采用逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）、Western blot技术检测转染后Hep-2细胞蛋白激酶CK2α mRNA和蛋白表达。设立正常对照组、顺铂（5μg/ml）组、psiRNA—hH1neo—CK2α组和psiRNA—hH1neo—CK2α＋顺铂（5μg/ml）组,应用MTT法检测转染后Hep-2细胞对顺铂敏感性的变化。结果psiRNA—hH1neo—CK2α特异性地抑制了Hep-2细胞中蛋白激酶CK2α mRNA和蛋白的表达（P〈0．05）。顺铂组（5μg/ml）及psiRNA—hH1neo—CK2α组Hep-2细胞的增殖能力分别为正常对照组的（55．32&#177;4．68）％和（49．68&#177;5．33）％（P〈0．05）,但均高于二者联合组（26．12&#177;5．51）％（P〈0．05）,转染psiRNA—hH1neo—CK2α后,Hep-2细胞对顺铂敏感性增加了2．12倍。结论RNA干扰技术抑制蛋白激酶CK2α表达能增加喉癌细胞Hep-2对顺铂的敏感性。     

顺铂对肝癌HepG2细胞增殖抑制作用的实验研究

目的探讨顺铂对肝癌HepG2细胞增殖的影响。方法将肝癌细胞株传代培养至对数生长期,分组加入不同浓度的顺铂,并设空白对照组,用MTT比色法观察顺铂对体外培养的肝癌细胞生长的抑制作用,在光学显微镜下观察细胞形态学变化。结果 MTT比色法测定显示,顺铂作用于肝癌HepG2细胞后可以抑制其增殖且呈剂量依赖性。结论顺铂能抑制体外培养的肝癌Hepg2细胞的增殖。     

缺血预处理对猪冬眠心肌细胞凋亡及Bcl-2、Bax表达的影响

目的探讨缺血预处理对冬眠心肌细胞凋亡及Bcl-2、Bax表达的影响.方法18只小型中国家猪随机分为3组:对照组(CON组)、冬眠心肌组(HM组)、缺血预处理组(IP组).采用末端标记技术(TUNEL)测定细胞凋亡,免疫组化方法检测Bcl-2、Bax蛋白表达,透射电子显微镜观察心肌细胞超微结构.结果HM组中Bcl-2蛋白表达较CON组显著增加,在IP组,Bcl-2蛋白表达较HM组进一步升高;在HM组Bax蛋白表达高于CON组,Bax蛋白表达在HM组、IP组无统计学差别.TUNEL显示,CON组极少心肌细胞凋亡,HM组细胞凋亡较CON组增多,IP组细胞凋亡较HM组减少.结论缺血预处理可能通过增加Bcl-2蛋白表达来减少冬眠心肌细胞凋亡的发生.     

缺氧刺激对人骨髓间充质干细胞凋亡基因Bcl-2和Bax的影响

目的探讨缺氧刺激对人骨髓间充质干细胞(hBMSCs)凋亡基因Bcl-2和Bax的影响。方法本研究将hBMSCs按不同氧浓度分为对照组(20%O_2)和低氧组(2%O_2),检测不同作用时间缺氧对hBMSCs抑凋亡基因(Bcl-2)和促凋亡基因(Bax)蛋白表达的影响。结果与对照组比较,低氧组各时间点hBMSCsBcl-2蛋白表达有明显的下调,hBMSCs Bax蛋白表达有明显的上调,差异有统计学意义(P<0.05)。且12 h时变化最明显,总体上呈现出时间依赖性特点。结论缺氧培养对hBMSCs的Bcl-2有明显的抑制作用,对hBMSCs的Bax有明显的促进作用,促使骨改建平衡向破骨方向倾斜。     

外源性IL-18基因对C6胶质瘤细胞增殖及相关基因表达的影响

目的:研究IL-18基因转染对C6胶质瘤细胞增殖活性及相关基因表达的影响. 方法:用流式细胞仪观察C6/IL-18细胞周期、增殖指数的变化;用RT-PCR,蛋白印迹、免疫细胞化学方法分析C6/IL-18细胞cyclin D1,cyclin B1,Bcl-2 mRNA及蛋白的表达. 结果:与亲代C6细胞相比,C6/IL-18细胞表现为G0/G1期细胞增多、G2/M期细胞减少,细胞增殖指数(PI)降低. C6/IL-18细胞的cyclin D1和cyclin B1,Bcl-2 mRNA及蛋白表达降低. 结论: 外源性IL-18基因可降低C6细胞的增殖活性,其机制可能与Bcl-2,cyclin B1和cyclin D1表达下调有关.     

参附注射液对大鼠脑缺血再灌注后Bcl-2和Bax蛋白表达的影响

目的观察大鼠局灶性脑缺血再灌注后海马Bcl-2、Bax蛋白的表达及参附注射液对其的影响。方法成年雄性SD大鼠30只,随机分为假手术组、模型组、参附注射液治疗组。采用线栓法制备大鼠大脑中动脉闭塞((middle cerebral artery oc-clusion,MCAO)再灌注模型,应用TTC染色检测脑梗死体积,免疫组织化学法检测海马CA1区Bcl-2、Bax蛋白的表达。结果缺血组大鼠海马CA1区Bcl-2、Bax蛋白的表达较假手术组明显增加(P<0.01),给予参附注射液处理后,Bcl-2蛋白表达明显增加(P<0.01),Bax蛋白表达减少(P<0.05),差异均有统计学意义。结论参附注射液可以通过调节Bcl-2、Bax蛋白表达来抑制细胞凋亡,这可能是其发挥脑保护作用的机制之一。     

胃癌变过程中Hp感染与凋亡基因Bcl-2表达相关性研究

目的 研究胃癌变过程中幽门螺杆菌(Hp)感染与凋亡基因Bcl-2表达、细胞凋亡和临床意义.方法 用快速尿素酶法、W-S银染法和美蓝法联合检测62例慢性浅表性胃炎(CSG)、55例慢性萎缩性胃炎(CAG)、52例肠化生(IM)、46例不典型增生(AH)、65例胃癌(GC)组织中Hp的感染,并采用免疫组化及TUNEL法分别检测Bcl-2蛋白的表达及细胞凋亡水平.结果 Hp感染率、Bcl-2蛋白阳性表达率均随着胃癌形成中病变恶性程度的加重而明显上升.Hp感染率CAG、IM、AH和AC组较CSG,GC组较CAG组均明显升高 (P＜0.05);IM、AH、GC组阳性表达率明显高于CSG组(P＜0.01,P＜0.05);GC组的阳性表达率明显高于IM组(P＜0.01);AH、GC组Hp阳性患者Bcl-2蛋白表达率均高于Hp阴性患者(P＜0.05);IM、AH、GC组中Bcl-2阳性者凋亡指数均低于Bcl-2阴性者;Hp感染阳性胃癌患者组织中Bcl-2蛋白表达与组织分化程度有明显关系,低未分化胃癌Bcl-2蛋白表达明显高于高中分化胃癌(P＜0.01).结论 在胃黏膜癌变过程中,Hp感染可能通过逐渐上调Bcl-2基因的表达,抑制细胞凋亡和分化发挥致癌作用.     

凋亡相关基因Bcl-2、Bag-1在宫颈上皮病变中的表达及意义

目的：探讨Bcl-2蛋白和Bag-1蛋白在宫颈癌发生、发展中的表达变化以及两者的关系。方法：采用免疫组织化学SP法,分别对39例宫颈上皮内瘤变CINⅠ/Ⅱ、25例CINⅢ（原位癌4例）及36例浸润性宫颈鳞癌（ISCC）组织中的Bcl-2和Bag-1蛋白进行检测,并以20例子宫肌瘤经手术切除的正常宫颈鳞状上皮作对照进行分析。结果：Bcl-2蛋白在正常宫颈组织、CINⅠ/Ⅱ、CINⅢ和宫颈癌组织中表达率分别为10.00%、43.57%、76.00%、66.67%,其表达在CIN和宫颈癌组织间差异无统计学意义（P〉0.05）,在其余各组之间差异有统计学意义（P〈0.05）。Bag-1在正常宫颈组织、CINⅠ/Ⅱ、CINⅢ和宫颈癌组织中的表达率分15.00%、48.72%、72.00%、83.33%,其表达在正常组织与CIN和宫颈癌之间差异有统计学意义（P〈0.01）,在上皮内瘤变与宫颈癌中差异也具有统计学意义（P〈0.05）。宫颈癌中Bcl-2与Bag-1蛋白表达同时增加。结论：宫颈鳞状上皮不典型增生和鳞状上皮癌中均有Bcl-2、Bag-1过表达,表明它们在宫颈癌的发生、发展中均起重要作用。Bcl-2与Bag-1在肿瘤早期抗凋亡作用相互增强,呈正相关关系。     

不同类型颈动脉粥样斑块Bcl-2/Bax的基因表达

目的观察Bcl-2/Bax凋亡调控基因在不同类型的颈动脉粥样斑块中的表达,探讨该基因表达与粥样硬化斑块稳定性和脑缺血症状的关系.方法选取人体颈动脉内膜剥脱术标本42例,根据病理学分为稳定型(19例)和不稳定型(23例)两组,8例正常腹主动脉及其分支作为对照组.Bcl-2/Bax抗凋亡基因表达分别采用免疫组化和原位杂交进行检测.结果免疫组化和原位杂交检测Bcl-2在不稳定型斑块中分别表达20和9例,在稳定型斑块中表达11和4例(P＜0.05);在平滑肌细胞、内皮细胞和泡沫细胞均有表达.Bax在不稳定性斑块中分别表达18和11例,在稳定性斑块中分别表达8和5例(P＜0.05);在泡沫细胞、平滑肌细胞均有表达.Bcl-2/Bax在细胞成分聚集的肩区,表达强度在不稳定型斑块中明显高于稳定型斑块(P＜0.01).结论Bcl-2/Bax在不稳定型斑块的表达均高于稳定型斑块,其在颈动脉粥样硬化不同时期的表达可能是调控颈动脉粥样硬化发病机制之一.     

内皮抑素基因治疗子宫内膜异位症裸鼠模型异位病灶中Bcl-2、PCNA的表达

目的：探讨内皮抑素基因治疗子宫内膜异位症裸鼠模型异位病灶中B细胞淋巴瘤,白血病-2（Bcl-21蛋白和增殖细胞核抗原（PCNA）蛋白的表达。方法：将成模的子宫内膜异位症裸鼠模型60只随机分成3组：内皮抑素组（n=20）、空病毒组（n=20）、PBS组（n=20）,应用免疫组化法检测裸鼠模型异位病灶中Bcl-2和PCNA的表达。结果：3组中的腺体均萎缩,但是内皮抑素组的腺体萎缩及血管减少较空病毒组和PBS组明显。给予治疗后,Bcl-2和PCNA均在腺体中表达,Bcl-2在内皮抑素组的阳性表达率明显低于在空病毒组的阳性表达率及在PBS组的阳性表达率,有显著性差异（P〈0．05）,Bcl-2在空病毒组与PBS组的阳性表达率无差异（P〉0．05）;PCNA在内皮抑素组的阳性表达率明显低于在空病毒组的阳性表达率及在PBS组的阳性表达率,有显著性差异（P〈0．05）,PCNA在空病毒组与PBS组的阳性表达率无差异（P〉0．05）。结论：内皮抑素能够治疗子宫内膜异位症。     

醋酸铅对小鼠胸腺细胞凋亡及Bax和Bcl-2基因表达的影响

目的探讨醋酸铅诱导小鼠胸腺细胞凋亡及对Bax和Bc l-2基因表达的影响。方法以3种不同浓度的醋酸铅灌胃饲养小鼠46 d后,取胸腺组织,用琼脂糖凝胶电泳法检测胸腺细胞凋亡情况,Western blot法检测胸腺组织中Bax和Bc l-2的表达情况。结果铅处理组小鼠胸腺细胞有被降解的凋亡带,并且降解条带的量随着染铅剂量的增加而增加;小鼠胸腺细胞Bax表达量均高于对照组,并且表达量随着染铅剂量增加而升高(P<0.05);而Bc l-2表达量均低于对照组,且表达量随着染铅剂量的增加而递减(P<0.05),Bc l-2/Bax表达比明显降低(P<0.01)。结论醋酸铅可诱发小鼠胸腺细胞凋亡,,促进胸腺细胞中Bax基因的表达,抑制Bc l-2基因的表达,降低Bc l-2/Bax表达比。     

N-硝基-L-精氨酸甲酯对实验性大鼠隐睾Bcl-2表达的影响

①目的研究一氧化氮合酶抑制剂N-硝基-L-精氨酸甲酯对实验性大鼠隐睾生精细胞凋亡过程中B细胞淋巴瘤/白血病-2（Bcl-2）表达的影响。②方法 42天龄雄性SD大鼠建立单侧隐睾模型,随机分为隐睾组、隐睾＋L-NAME组、隐睾＋生理盐水（溶媒）组、假手术组,每组12只大鼠,隐睾＋L-NAME组和隐睾＋生理盐水组大鼠术后分别腹腔内注射L-NAME或生理盐水,每天1次,定时定量（50mg/Kg）,术后第7天分别采用RT-PCR和免疫组织化学方法检测各组隐睾Bcl-2mRNA和蛋白表达的变化。③结果与假手术组睾丸相比,隐睾组、隐睾＋生理盐水组睾丸生精上皮和睾丸间质细胞内Bcl-2mRNA和蛋白表达降低,差异有显著性（P〈0.05）;而隐睾＋L-NAME组Bcl-2 mRNA和蛋白与假手术组睾丸无明显差别。④结论 L-NAME可通过调节Bcl-2的表达抑制热应激导致的生精细胞凋亡。