难治性癫痫患者外周血多药耐药基因表达的研究

目的 研究人多药耐药基因(MDR1)、mRNA及其产物P-糖蛋白(P-gp)在外周血中的表达.方法 用流式细胞仪定量检测难治性癫痫(RE)患者(A组)、癫痫控制良好患者(B组)和健康献血者(对照组)的人外周血P-gP表达,荧光定量聚合酶链反应技术检测其MDR1-mRNA表达.结果 两种方法均显示,RE组MDR1-mRNA表达量较B组和对照组显著增高(P均<0.01);B组与对照组比较无统计学差异.A、B组及对照组P-gP阳性细胞表达率为0者分别为2、3、7例,而三组均有MDR1-mRNA表达,如表达量按>103为参考值,则RE组阳性率为100%.结论 定量检测癫痫患者外周血MDR1-mRNA表达,可同步反映其脑组织MDR1表达水平,作为RE诊冶的外周指标;荧光定量PCR较流式细胞仪检测MDR1-mRNA表达的灵敏度及特异性高.     

原发性胆汁性肝硬化患者外周血单个核细胞諸Toll样受体3 mRNA表达水平的研究

目的 探讨原发性胆汁性肝硬化(PBC)患者外周血单个核细胞(PBMCs)中Toll样受体3(TLR3 mRNA)表达及其与疾病活动性的关系.方法 利用实时荧光定量-反转录-聚合酶链反应(FQ-RT-PCR)的方法 ,检测55例PBC患者(活动期33例、缓解期22例)、20例肝癌患者(疾病对照组)和24名健康体检者(健康对照组)PBMCs中TLR3 mRNA的表达水平.以△Ct=Ct(待测基因)-Ct(内参基因)来比较基因表达水平的高低.结果 PBC患者活动期TLR3 mRNA的表达水平高于疾病缓解期,差异有统计学意义(P<0.05);同时也高于肝癌患者和健康对照组,差异有统计学意义(P<0.05);缓解期TLR3 mRNA的表达水平与健康人和肝癌对照组差异无统计学意义(P>0.05).结论 PBC患者TLR3 mRNA表达异常,可能参与了PBC的发病过程并与疾病的活动性有关.     

难治性癫痫儿童外周血P糖蛋白检测的意义

目的探讨外周血P糖蛋白水平与儿童难治性癫痫（RE）耐药性的关系。方法采用ELISA方法检测RE患儿（RE组）、非难治性癫痫患儿（NRE组）及健康体检者（对照组）的外周血P糖蛋白浓度。结果 RE组初诊时血清P糖蛋白含量高于NRE组及对照组（P均〈0.05）,而NRE组与对照组比较无统计学差异（P〉0.05）;正规治疗1 a后,RE组血清P糖蛋白含量明显高于NRE组（P〈0.01）。结论 P糖蛋白在癫痫耐药的发病机制中起重要作用,其在外周血高表达可作为癫痫患者耐药的一个客观指标。     

G6PC基因在糖尿病患者中的表达及其与糖尿病肾病发生的相关性

目的探讨糖尿病(DM)患者外周血白细胞中葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PC)基因的表达变化及其与糖尿病肾病(DN)发生的相关性。方法选取30例DM患者作为实验组(其中10例DN患者),20例健康体检者为对照组,采用RT-PCR法检测DM患者外周血白细胞G6PC mRNA表达水平(以β-actin为内参),同时比较DN患者与肾功能正常DM患者之间G6PC mRNA表达差异。结果与对照组比较,DM组患者G6PC的mRNA表达明显降低(0.65±0.19 vs 1.54±0.32,P<0.05)。DN组G6PC mRNA表达量显著低于肾功能正常DM组患者(P<0.05)。结论 DM患者外周血白细胞G6PC基因表达下降,其可能在DN发生及进展中具有重要作用。     

系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞TLR9的表达及意义

运用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot技术检测系统性红斑狼疮(SLE)患者和正常对照组外周血单个核细胞中Toll样受体9(TLR9)mRNA和蛋白的表达水平.结果 显示,SLE活动期患者外周血单个核细胞中TLR9 mRNA和蛋白的表达水平明显高于SLE缓解期患者和正常对照组(P<0.05),后两者间比较亦有统计学差异(P<0.05).认为TLR9与SLE疾病的活动性呈一定的线性相关关系.     

支气管哮喘患者外周血巨噬细胞移动抑制因子的表达及意义

目的 观察巨噬细胞移动抑制因子(macrophage migration inhibitory factor,MIF)在支气管哮喘(简称哮喘)患者外周血中的表达水平及其意义.方法 应用酶联免疫吸附试验法和荧光定量PCR技术,测定56例哮喘患者(哮喘组)和34名健康对照者(正常对照组)外周血MIF的表达水平.根据临床症状和肺功能检查将哮喘患者分为发作期组和缓解期组,其中发作期组32例,缓解期组24例,并对结果进行统计学处理.结果 血浆MIF的浓度和外周血单个核细胞MIF mRNA的表达水平:哮喘组高于正常对照组,差异有统计学意义(P<0.05);哮喘发作期组高于缓解期组,差异有统计学意义(P<0.05);但缓解期组与正常对照组之间差异无统计学意义.结论 MIF可能参与哮喘的病理过程并发挥重要作用,哮喘患者发作期组血MIF mRNA表达及血MIF水平显著增高,其变化可反映疾病的活动性.     

系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞增殖诱导配体及其受体的表达

目的 探讨系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血单个核细胞(PBMC)中增殖诱导配体(APRIL)及其受体B细胞成熟抗原(BCMA)、跨膜激活剂及钙调亲环素配体相互作用分子(TACI)mRNA的表达和意义.方法 应用实时定量聚合酶链反应(real-time PCR)技术,检测66例SLE患者及25名正常人PBMC中APRIL及其受体mRNA的表达,采用2-AACT对目标基因的表达量进行评估.结果 SLE活动组和缓解组的APRIL mRNA、BCMA mRNA和TACI mRNA的表达水平均明显高于正常对照组(均P<0.01);且SLE活动组的APRIL mRNA和TACI mRNA的表达水平显著高于SLE缓解组(分别P<0.01,P<0.05),BCMA mRNA的表达在SLE活动组与缓解组之间比较差异无统计学意义;此外,APRILmRNA和TACI mRNA在SLE肾损组的表达显著高于非肾损组(均P<0.01).结论 SLE患者PBMC中APRIL及其受体的表达水平增高,可能在SLE发病机制中发挥重要作用.     

系统性红斑狼疮初发患者外周血中维生素D及其受体mRNA的水平和意义

目的 ①检测初发系统性红斑狼疮(SEE)患者外周血中维生素D内分泌系统的水平,探讨维生素D内分泌系统在SLE发病中的作用.②分析维生素D内分泌系统水平与SLE患者骨密度和病情活动程度的关系.方法 选择初发SLE患者43例,健康对照组44名,用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测患者外周血浆中25羟基维生素D3(250HD3)和1,25-二羟基D3[1,25(OH)2D3]的水平,利用实时定量反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测患者外周血维生素D受体(VDR)表达水平.双能X线分别检测患者腰椎(L1-4)和股骨近端2个部位的骨密度,根据SLE疾病活动指数(SLEDAI)评分评估SLE病情活动程度.采用统计学单因素分析分别检验25OHD3、1,25(OH)2D3和VDR基因mRNA表达水平与SLE患者骨密度和病情活动程度的关系.结果 初发SLE患者25OHD3和1,25(OH)2D3激素水平与健康对照组比较,差异有统计学意义(P均<0.01);初发SLE患者组与健康对照组比较,VDR基因mRNA表达水平的差异有统计学意义(P<0.01);SLE患者2个部位的骨密度均低于健康对照组,且两组间的差异有统计学意义(P<0.05),SLE患者组骨量异常的发生率为35%,骨量异常与骨量健康对照组之间25OHD3、1,25(OH)2D3激素水平及VDR基因mRNA表达水平的差异无统计学意义(P0.05);250HD3、1,25(OH)2D3激素水平和VDR基因mRNA表达水平与SLE患者骨密度的情况不存在相关性(r=0.187,P0.05;r=0.172,P0.05;r=0.287,P0.05),它们与SLE患者的病情活动度之间也不存在相关性(r=0.054,P0.05;r=0.190,P0.05;r=0.046,P0.05).结论 SLE患者维生素D激素的水平及VDR基因的表达异常提示维生素D内分泌系统可能参与了SLE的发病,但与SLE患者骨量异常的发生和SLE病情活动度不存在相关性.     

原发性胆汁性肝硬化患者外周血单个核细胞中糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子受体mRNA表达水平的研究

目的 探讨原发性胆汁性肝硬化(PBC)患者外周血单个核细胞(PBMCs)中肿瘤坏死因子受体(GITR)mRNA表达及其与疾病发病机制、疾病活动性的关系.方法 采用反转录实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-RT-PCR)的方法 ,在Light Cycler Real time PCR检测仪上检测78例PBC患者(活动期44例、缓解期34例)、肝癌患者30例(疾病对照组)、健康体检者30名(健康对照组)PBMCs中GITR mRNA的表达水平和含量.以△Ct=Ct(待测基因)-Ct(内参基因)来比较基因表达水平的高低.结果 活动期PBC患者GITR mRNA表达水平(△Ct=10.5±2.8)明显低于缓解期PBC患者(△Ct=7.2±2.3,P<0.01);活动期PBC患者GITR mRNA表达水平(△Ct=10.5±2.8)明显低于健康对照组(△Ct=7.4±1.1)与肝癌组(△Ct=5.9±1.3,P<0.01);缓解期PBC患者GITR mRNA表达水平与健康对照组差异无统计学意义(P>0.05);肝癌患者GITRmRNA表达水平明显高于健康对照组及PBC患者(P<0.01).结论 GITR的表达与PBC的发生发展存在定关联性,可能参与了PBC的发病过程并与疾病的活动性有关.     

原发性非小细胞肺癌患者外周血中Th17的检测及其临床意义

目的通过检测非小细胞癌(NSCLC)患者与健康对照组外周血中Th17细胞及相关因子的表达水平,探讨其在NSCLC中的临床意义。方法流式细胞术检测外周血中Th17细胞占CD4+T淋巴细胞的比例;RT-PCR检测外周血单个核细胞(PBMC)中IL-17及孤独核受体γt(RORγt)mRNA的表达水平;酶联免疫吸附(ELISA)法检测外周血浆中IL-17的水平。结果 NSCLC患者外周血Th17细胞占CD4+T淋巴细胞的比例较对照组显著升高(P<0.01);PBMC中IL-17及RORγt mRNA表达水平显著高于对照组(P<0.01);外周血浆中IL-17的水平显著高于对照组(P<0.01)。不同病理类型之间Th17细胞比例、IL-17 mRNA及IL-17的表达水平无统计学差异(P>0.05)。Ⅲ期患者Th17细胞比例、IL-17 mRNA及IL-17的表达水平较Ⅰ^Ⅱ期患者显著增高(P<0.01)。结论 Th17细胞可能通过RORγt和IL-17参与NSCLC的发生,Th17相关指标对NSCLC的治疗及预后有指导意义。     

白细胞介素-21和Blimp1 mRNA在老年类风湿关节炎患者外周血单个核细胞的表达及作用机制

目的探讨白细胞介素(IL)-21和Blimp1 mRNA在老年类风湿关节炎患者外周血单个核细胞(PBMCs)的表达及作用机制。方法老年类风湿关节炎患者62例,同期体检的健康老年人45名作为对照。取外周静脉血分离PBMC和血浆,酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测血浆中IL-21水平,分析DAS28、抗CCP抗体与IL-21的相关性;实时荧光定量PCR检测患者PBMCs中Blimp1 mRNA表达量;使用IL-21、CD40L刺激PBMCs72 h后检测Blimp1 mRNA表达量,流式细胞术检测各组CD138+细胞比例。结果类风湿关节炎患者血浆IL-21含量明显高于对照组(P<0.01)。血浆IL-21含量与类风湿关节炎患者DAS28、抗CCP抗体具有明显相关性(r=0.769、0.785,P<0.05)。类风湿关节炎患者PBMCs中Blimp1 mRNA表达量明显高于对照组(P<0.05)。IL-21、CD40L体外刺激后,对照组与CD40L组Blimp1 mRNA表达水平之间差异无统计学意义(P>0.05);IL-21组、IL-21+CD40L组Blimp1 mRNA表达水平均明显高于对照组(P<0.01);IL-21+CD40L组明显高于IL-21组(P<0.05)。流式细胞术显示,IL-21+CD40L组CD138+细胞比例明显高于CD40L组和IL-21组(P<0.05)。结论 IL-21可促进老年类风湿关节炎患者PBMCs中Blimp1 mRNA表达,IL-21与CD40L协同作用可通过调节Blimp1 mRNA表达促进B淋巴细胞分化并参与类风湿性关节炎的发病。     

哮喘患者外周血单个核细胞白细胞介素-13 mRNA表达的研究

目的 探讨哮喘患者外周血单个核细胞(PBMCs)白细胞介素(IL)-13 mRNA的表达和糖皮质类固醇激素治疗对其的影响.方法 采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法分别检测34例发作期哮喘患者(其中14例激素敏感型和10例激素抵抗型分别口服泼尼松治疗1周)、18例缓解期患者和30名健康对照者PBMCs IL-13 mRNA的表达.结果 52例哮喘患者和30名健康对照者PBMCs IL-13 mRNA的表达量分别为16.72±1.12和8.25±1.15,两组比较差异有统计学意义(P＜0.05).发作期和缓解期哮喘患者PBMCs IL-13 mRNA的表达量分别为20.72±1.02和13.67±3.15,两组比较差异有统计学意义(P＜0.05).在34例发作期哮喘患者中,轻、中、重度患者PBMCs IL-13 mRNA表达量分别为16.35±2.38、19.12±2.16、23.57±2.43,相互间比较差异有统计学意义(P＜0.05).激素敏感型哮喘患者经泼尼松治疗1周后PBMCs IL-13 mRNA表达量(21.03±3.77)较治疗前(15.67±2.67)明显下降,差异有统计学意义(P＜0.05);激素抵抗或依赖型哮喘患者经泼尼松治疗1周前后PBMCs IL-13 mRNA 表达量分别为20.35±3.58和19.57±3.34,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 PBMCs IL-13参与哮喘发生的病理过程,并调节糖皮质类固醇激素的作用,可作为判断哮喘患者病变严重程度的指标之一.     

慢性阻塞性肺疾病患者外周血单个核细胞NOD2 mRNA表达及白细胞介素-6的水平及意义

目的探讨外周血单个核细胞NOD2 mRNA和血清白细胞介素(IL)-6在慢性阻塞性肺疾病(COPD)发病机制中的作用及其与COPD患者严重程度的关系。方法对经过门诊及住院达到稳定期的COPD患者进行综合评估,分为A、B、C、D四组,每组30例,同期门诊健康体检者30例作为健康对照组,采用PCR和ELISA法分别检测COPD各组及健康对照组外周血单个核细胞核内NOD2 mRNA的表达及血清中IL-6的含量。结果 COPD稳定期患者外周血单个核细胞核内NOD2 mRNA及血清IL-6的表达均明显高于健康对照组(P<0.05)。COPD患者A、B、C、D各组中NOD2 mRNA和IL-6的表达明显高于健康对照组(P<0.05)。COPD患者D组NOD2 mRNA和IL-6的表达明显高于C组(P<0.05),C组和D组的NOD2 mRNA和IL-6的表达均明显高于A组和B组(P<0.05),A组和B组之间无统计学差异(P>0.05)。COPD患者NOD2 mRNA表达和IL-6的含量呈正相关(r=0.81,P<0.05)。结论 NOD2和IL-6都参与了COPD气道炎症的发生发展,其水平与COPD患者严重程度呈正相关。     

系统性红斑狼疮患者外周血干扰素基因的定量表达

目的　探讨系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血中IFN α、 β、 ω和 γmRNA与蛋白的定量表达水平与SLE疾病特异性和病情活动性是否相关。方法　对 144例SLE患者、27例非SLE患者与 59例正常人取外周血抽提总RNA并逆转录成cDNA,运用实时定量PCR法在基因测序仪上检测 4种IFN的mRNA表达水平,分离血浆,用ELISA法检测 4种蛋白水平,并与病情特异性和活动性进行分组比较,分析其意义。结果　(1)SLE患者组的 4种IFNmRNA定量表达水平均显著低于正常对照组, 差异有统计学意义 (P值均<0 01);SLE患者组的IFN αmRNA定量表达水平同时显著高于非SLE对照组 (P<0 01 )。(2)SLE活动组与非活动组之间的 4种IFN表达水平差异无统计学意义(P值均>0 05),SLE患者组的 4种IFNmRNA表达水平与有无肾、肺、脑损害无相关性。(3)SLE患者组的IFN积分显著低于正常对照组, 差异有统计学意义 (P<0 01 )。(4)SLE患者组和正常对照组组内的 4种IFN表达水平之间均呈强正相关 (各组间P<0 01 )。(5)IFN α、 β和 ω的蛋白水平在正常对照和SLE患者中差异均无统计学意义 (P值均 >0 05),IFN α的蛋白水平在活动期SLE患者比非活动期显著增高 (P<0 01 )。IFN γ的蛋白水平在SLE患者中有升高趋势。结论　IFN α、 β、 ω和 γ的mRNA定量表达水平的减低     

FOXO1和FOXO3a在系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞中的表达及其与疾病活动性的关系

目的 探讨转录因子FOXO1和FOXO3a在系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血单个核细胞(PBMC)中的表达水平及其与SLE疾病活动性的关系.方法 选择SLE活动性、SLE非活动性患者和正常对照,运用反转录一聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot检测SLE患者和健康对照组PBMC中FOXO1和FOXO3a mRNA及蛋白的表达水平.结果 活动性SLE患者PBMC中FOXO1 mRNA和蛋白的表达水平明显低于SLE非活动性患者和正常对照(P<0.05),非活动性SLE患者FOXO1 mRNA和蛋白的表达水平明显低于正常对照(P<0.05).FOX03a mRNA和蛋白的表达水平在3组间差异无统计学意义.FOXO1 mRNA水平与狼疮活动指数(SLEDAI)呈显著负相关(r=-0.651,P<0.05).结论 SLE患者PBMC中FOXO1 mRNA和蛋白的表达水平显著低于健康对照,随着SLE患者病情的好转,FOXO1 mRNA和蛋白的表达水平逐渐增高.FOXO1与SLE疾病的活动性呈负相关.FOXO3a与SLE疾病的活动性无关.     

B淋巴细胞刺激因子的异常表达与系统性红斑狼疮发病的关系

目的 通过检测系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血中B淋巴细胞刺激因子(Blys)的表达水平,研究BlyS与SLE发病的关系,进一步阐明SLE的发病机制.方法 采用反转录一聚合酶链反应(RTPCR)半定量技术,分别检测38例SLE患者及36名健康者外周血细胞内B淋巴细胞刺激因子的mRNA水平.结果 狼疮组外周血细胞内B淋巴细胞刺激因子的mRNA表达水平显著高于健康对照组,比较差异有统计学意义(P＜0.01).结论 B淋巴细胞刺激因子在狼疮组中的表达有明显升高趋势,说明BlyS在SLE的致病过程中起着重要作用.     

前列腺增生和前列腺癌患者组织前列腺特异性抗原mRNA水平

目的探讨外周血前列腺特异性抗原(PSA)水平和良恶性疾病前列腺组织生成PSA能力的关系。方法应用实时荧光定量(RTPCR)技术测定前列腺癌(PCa)、前列腺增生(BPH)伴炎症和不伴炎症患者前列腺组织中的PSA mRNA含量。PSA定量检测采用电化学发光法。结果血PSA浓度在BPH组和PCa组比较差异显著(P<0.01),组织PSA mRNA表达量在BPH组和PCa组比较无显著性差异(P>0.05)。PCa组组织PSA mRNA表达量与外周血PSA值无相关性。结论 PCa患者血PSA水平与PSA生成能力无相关性,PCa分化差者PSA生成能力显著降低。     

干扰素调节因子5在系统性红斑狼疮的表达及临床相关性研究

目的 比较干扰素调节因子5(IRF5)mRNA在系统性红斑狼疮(SLE)患者和健康对照组的表达水平,分析IRF5表达与SLE疾病活动性及自身抗体和临床症状的相关性.方法 Ficoll密度梯度离心法分离SLE患者及健康对照外周血单个核细胞(PBMC),Trizol法分离提取总RNA,反转录mRNA为eDNA;实时定量聚合酶链反应(PCR)法测定SLE患者和正常对照组IRF5表达量;并分析SLE患者IRF5表达量与疾病活动性及临床症状的相关性.结果 SLE组IRF5表达量(2.1+2.2)高于正常对照组(1.5±1.2),但差异无统计学意义(P=0.161);SLE患者IRF5表达量与其疾病活动指数(SLEDAI)显著相关(r=0.616,P<0.01);SLE患者中抗dsDNA抗体阳性组IRF5表达量(3.2±2.8)明显高于抗体阴性组(1.3±1.6).差异有统计学意义(P=0.018);SLE患者有发热、神经精神症状者IRF5表达量明显高于无此类临床症状者.结论 IRF5在SLE患者中表达偏高,且与SLEDAI显著相关,其可能通过调节下游基因的转录表达诱一导免疫失调,并由此参与SLE的发病过程.     

实时荧光定量聚合酶链反应检测外周血趋化因子受体3 mRNA对类风湿关节炎的临床意义

目的 检测趋化因子受体3(CXCR3)在类风湿关节炎(RA)患者外周血单一核细胞(PBNC)中的表达,并分析其与疾病活动性的相关性.方法 研究建立实时荧光定量(RFQ)-聚合酶链反应(PCR)法测定外周血单个核细胞CXCR3 mRNA含量的方法;检测CXCR3在51例RA患者PBMC中的表达水平,并和32名健康人群进行对照.计量资料采用t检验、单因素方差分析,计数资料采用x2检验或Fisher's精确概率法.结果 RA患者在外周血的CXCR3 mRNA的表达水平明显高于健康对照组(8.8±1.5和7.3±1.9,P<0.05).在活动期与缓解期RA组的比较中发现活动期RA患者CXCR3 mRNA的表达水平也明显高于缓解期RA患者(9.4±1.0和8.0±1.6,P<0.05).而且活动期RA患者中外周血CXCR3 mRNA 表达水平与红细胞沉降率(ESR)、C反应蛋白(CRP)有密切的相关性,且存在正相关关系(r=0.824和0.765,P<0.05).RA患者中外周血CXCR3 mRNA表达水平与类风湿因子(RF)、抗角蛋白抗体(AKA)、抗核周因子(APF)抗体及抗环瓜氨酸多肽(CCP)抗体无显著相关性(P>0.05).结论 RFQ-PCR检测CXCR3 mRNA含量的方法具有较好的灵敏度和可重复性;RA患者CXCR3 mRNA表达含量升高,提示CXCR3可能参与了RA的发病过程.活动期RA患者CXCR3水平明显升高,并且和ESR、CRP呈正相关,提示CXCR3可作为观察病情活动性的指标和疗效、评价预后的指标.     

病毒性肝炎患者内毒素血症及外周血单核细胞Toll样受体4基因表达的研究

目的研究病毒性肝炎患者内毒素血症及外周血单核细胞内Toll样受体4(TLR4)mRNA的表达。方法采用鲎试剂法测定86例肝炎患者和11例对照组的血浆脂多糖(LPS)浓度,外周血单核细胞TLR4mRNA的表达用RT-PCR法检测。结果肝炎患者血浆LPS浓度均有不同程度的升高,高于对照组(P<0.05),重型肝炎组升高最显著,与其他各型肝炎比较差异有显著性(P<0.05);重型肝炎组单核细胞TLR4mRNA的表达升高最明显,与其他各型肝炎及对照组比较差异有显著性(P<0.05),其他各型肝炎与对照组比较差异不明显(P>0.05)。结论各型肝炎均存在内毒素血症,以重型肝炎最为显著,且重型肝炎患者外周血单核细胞内TLR4mRNA的表达水平最高,可能与肝细胞损伤相关。