肝癌非高发区安徽省肝细胞癌p53基因249密码子点突变的研究

目的：研究ｐ５３基因２４９密码子在肝癌非高发区安徽省的点突变的发生率。方法：应用ＰＣＲ－ＲＦＬＰ技术肝细胞癌ｐ５３基因２４９密码子突变的频率。结果：所检测的３８例肝细胞癌均无出现ｐ５３基因第七外显子纯合性缺失,４例有ｐ５３基因２４９密码子的点突变,且均为杂合型突变,突变率为１０．５％（４／３８）。结论：本资料说明,在肝细胞癌非高发区中,肝细胞癌中ｐ５３基因第七外显子发生的点突变并非为高发事件。提示     

广西肝癌高发区原发性肝细胞癌 HBV X 基因的整合及影响因素分析

目的 了解广西肝癌高发区乙型肝炎病毒（hepatitis B virus,HBV）X区基因在肝细胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC）染色体中的整合及影响因素。方法 以30例与HBV相关的原发性肝细胞癌患者为研究对象。提取HCC组织及癌旁组织标本DNA作为模板,以HBV X基因上游序列和人类基因组Alu重复序列为引物,应用重复序列-多聚酶链反应（Alu-PCR）扩增整合的HBV X片段及两侧的人类基因组DNA片段。扩增产物进行测序,计算目的片段整合率并分析相关的影响因素。结果 18例HCC组织检测到HBV X基因的整合片段,整合率为60.00%（18/30）;26例癌旁组织检测到HBV X基因的整合片段,整合率为86.67%（26/30）。癌旁组织HBV病毒整合率高于HCC组织,差异有统计学意义（χ²=5.445,P=0.020）。不同性别、年龄、HBeAg、HBV DNA、ALT、AST的HCC癌组织及其癌旁组织HBV X基因整合率比较差异均无统计学意义（P＞0.05）。结论 广西肝癌高发区癌旁组织比HCC组织HBV整合率高,说明HBV整合发生在感染早期。HBV X基因整合与HCC患者性别、年龄、HBeAg、HBV DNA、ALT、AST无明显关系。     

肝癌高危人群中DNA氧化损伤与损伤修复酶基因多态性的关系

目的:探讨肝癌高危人群中DNA氧化损伤与损伤修复酶基因多态性的关系.方法:收集广西扶绥县550例乙型肝炎病毒携带志愿者的外周血和尿样,应用高效液相-电化学法和聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism,PCR-RFLP)检测法检测肝癌高危人群的尿8-羟基-2-脱氧鸟苷(8-hydroxy-2-deoxy-guanosine,8-OHdG)水平和外周血中DNA损伤修复酶基因多态性,分析2者之间的关系.结果:肝癌高危人群中尿8-OHdG水平男性低于女性(P<0.01);PCR-RFLP检测法检测外周血DNA损伤修复酶X线修复交叉互补组1 (X-ray repair cross complementing group 1,XRCC 1) 基因和人8-羟基鸟嘌呤DNA糖苷酶1 (human 8-oxoguanine DNA glycosylase 1,hOGG 1)基因多态性的结果发现,女性hOGG 1 Ser326Ser和XRCC 1 Arg194Arg者的尿8-OHdG水平较低(P=0.049,P=0.048).将尿8-OHdG水平以中位数为基点分为高、低2组进行多因素分析发现,hOGG 1突变型杂合子和突变型纯合子者的尿8-OHdG水平较高,尤其在女性研究对象中更明显(P<0.05).结论:DNA损伤修复酶基因多态性可以影响其编码的蛋白质的功能,影响机体对损伤DNA的修复作用,最终可能导致肿瘤发生的个体差异.     

HBsAg 携带及肝癌家族史与原发性肝癌发病年龄的相关性分析

目的：探讨乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）携带及肝癌家族史与高发区原发性肝癌发病年龄的关系。方法以1359例启东籍原发性肝癌住院病例为研究对象,分析 HBsAg 携带及肝癌家族史与发病年龄的相关性及相互间的协同作用。结果肝癌患者中男性1053例,女性306例,发病年龄20~84岁,平均（54.02±10.47）岁。HBsAg 阳性肝癌平均发病年龄比 HBsAg 阴性肝癌提前9.24岁（51.99岁：61.23岁,t =13.51,P =0.000）;有肝癌家族史肝癌比无肝癌家族史肝癌提前2.70岁（52.53岁：55.23岁,t =4.839,P =0.000）,差异均有统计学意义。HBsAg 阳性肝癌中,平均发病年龄男性低于女性（51.18岁：54.89岁,t =5.353,P =0.000）,有家族史患者低于无家族史患者（51.33岁：52.62岁, t =2.233,P =0.026）;HBsAg 阴性肝癌中,虽然平均发病年龄男性与女性相比（60.83岁：62.45岁）、有家族史与无家族史相比（59.58岁：61.92岁）都有所提前,但差异均无统计学意义（t =1.126,P =0.261;t =1.728,P =0.085）。结论启东地区 HBsAg 携带使原发性肝癌平均发病年龄显著提前。性别和肝癌家族史在 HBsAg 阳性肝癌中与发病年龄密切相关,在 HBsAg 阴性肝癌中对发病年龄影响不显著。     

肝癌非高发区安徽省肝细胞癌p53基249密码子点突变的研究

目的： 研究 p53基因 249密码子在肝癌非高发区安徽省的点突变的发生率。方法：应用 PCR- RFLP技术分析肝细胞癌 p53基因 249密码子突变的频率。结果：所检测的 38例肝细胞癌均无出现 p53基因第七外显子纯合性缺失, 4例有 p53基因 249密码子的点突变,且均为杂合型突变,突变率为 10.53％ (4/38)。结论：本资料说明,在肝细胞癌非高发区中 ,肝细胞癌中 p53基因第七外显子发生的点突变并非为高发事件。提示 p53基因第七外显子的点突变在肝癌非高发区肝细胞癌的形成过程中可能不起主导作用。     

抑癌基因FHIT第8和第5外显子在原发性肝癌中纯合性缺失与点突变的研究

目的　对 2 0例原发性肝细胞肝癌 (HCC)的抑癌基因 FHIT外显子 5、外显子 8的纯合性缺失和点突变进行检测。方法　收集 HCC手术标本 ,提取癌细胞 DNA,采用 PCR方法研究 FHIT外显子 5、外显子 8的纯合性缺失 ;使用 PCR- SSCP方法研究 FHIT外显子 5和外显子 8的点突变。结果　发现在 2 0例 HCC中外显子 5的纯合性缺失率为 10 .0 (2 / 2 0 ) ,外显子 8的纯合性缺失率为 30 .0 % (6 / 2 0 ) ;有 1例外显子 5和外显子 8均缺失 ;FHIT的异常率为 35 .0 % (7/ 2 0 )。在被检的肿瘤组织细胞中 ,未发现 FHIT外显子 5和外显子 8存在点突变。在被检的正常细胞中未发现 FHIT缺失和点突变的情况。结论　 FHIT的缺失只发生在 HCC的肿瘤细胞中。在 HCC中 ,外显子 (尤其是外显子 8)的纯合性缺失是 FHIT基因失活的重要方式之一。点突变可能不是 HCC中 FHIT失活的主要方式     

乙型肝炎病毒X蛋白氨基端变异与肝癌发生的相关性分析

目的:探讨乙型肝炎病毒X蛋白(hepatitis B virus X protein, HBx)氨基端1～90位氨基酸(amino acid, AA)变异与肝细胞癌发生之间的关系.方法:采用PCR扩增产物直接测序的方法,对48例肝癌组织、159例肝癌和144例慢性肝炎患者血清中HBV X基因进行序列分析.通过病例-对照研究HBx变异与肝癌发生之间的关系.结果: 肝癌组织中HBx氨基端变异集中于1～49 AA区域,突变率为4.1%; 50～90 AA为保守区,突变率仅为0.46%. 血清检测结果显示,HBx氨基端突变在肝癌患者中的发生率显著高于肝炎患者(2.2% vs 1.8%,P<0.05); HBx第36位Ala/Thr/Pro→Ser的突变,在肝癌患者中的发生率为10.1%,显著高于肝炎患者中的2.1%[P<0.01,比数比(odds ratio,OR)=5.259, 95%可信区间为1.499～18.444)].A/T/P36S突变仅发生于C基因型病毒.结论:HBx 氨基端突变的累积可能与肝癌的发生有关.HBx A/T/P36S突变能增加C基因型HBV感染者发生肝癌的危险度.     

乙肝病毒引起肝癌的分子机制研究进展

流行病学证据提示乙肝病毒（HBV）感染是肝细胞性肝癌（HCC）病因中最重要的危险因子，占80％，世界上HBV带毒者约有3亿人，其发生HCC的危险性比未感染者高出200倍。我国的统计表明，在11亿人口中，大约有6亿曾有过HBV感染史，其中约1．2亿人口成为慢性带毒者。慢性带毒者的1／     

肝癌患者乙型肝炎病毒全基因组结构分析

目的 研究肝细胞癌患者乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)全基因组的结构及特点。方法 PCR扩增并克隆乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)阳性肝癌患者血清中HBV全基因组DNA,测序并进行基因结构分析。结果 获得不同肝癌患者来源的22株HBV全基因组DNA,均属于C或B基因型和adr或adw2血清型。与标准株相比,肝癌患者来源的HBV在表面抗原、核心抗原的B／T细胞表位、X蛋白的反式激活区及增强子Ⅱ、核心启动子区发生了一些有意义的共有变异。结论 HBV的基因型与基因变异可能与HBV相关性肝癌的发生发展有关。     

丙型肝炎病毒核心抗原及HBxAg在肝硬化、肝细胞肝癌中分布的免疫组化研究

研究丙型肝炎病毒核心抗原在肝硬变、肝细胞肝癌中的分布规律及意义。方法以免疫组织化学方法检测丙型肝炎病毒（ｈｅｐａｔｉｔｉｓＣｖｉｒｕｓ，ＨＣＶ）核心抗原及ＨＢｘＡｇ在肝硬化、肝细胞癌及其癌旁肝组织中的定位及分布。结果ＨＣＶ核心抗原既定位于肝细胞或癌细胞胞核中，又可定位于这些细胞的胞浆中。在不同的病例，有时以胞浆阳性为主，有时以胞核阳性为主，或二者同时存在。肝硬化组织中，ＨＣＶ核心抗原胞浆阳性细胞多呈灶性分布，而核阳性病例阳性细胞则为弥漫分布；肝细胞肝癌中ＨＣＶ核心抗原以弥漫胞核阳性多见，癌旁肝组织多为ＨＣＶ核心抗原胞浆阳性。ＨＣＶ核心抗原在肝硬化、肝细胞肝癌及癌旁肝中的阳性率分别为６７．３％（６６／９８），７５．０％（７８／１０４）及４８．１％（２５／５２），χ２检验，肝细胞癌中核心抗原的胞核阳性率明显高于其在肝硬化及癌旁肝中的胞核阳性率（Ｐ＜０．０１）。核心抗原在肝细胞肝癌中，其细胞核阳性率，明显高于细胞浆阳性率（Ｐ＜０．０１）。结论ＨＣＶ感染在我国肝硬化、肝细胞肝癌中比较普遍，除ＨＢＶ以外，ＨＣＶ可能在我国肝硬化、肝细胞癌的发生中起着重要作用     

广西黄曲霉毒素高危区肝癌p53基因序列改变

目的　检测广西肝细胞癌 p53基因的序列改变。方法　 4 0例肝细胞性肝癌 ( HCC)分两组 :一组 2 6例 ,来自广西扶绥地区已知 HCC、黄曲霉毒素 ( AFB1)和乙型肝炎病毒 ( HBV)高危区 ;对照组 14例 ,来自广西玉林地区 ,该地 HCC和 HBV高危 ,但 AFB1可能低 ,因居民以低 AFB1的大米为主食。第七外显子直接测序。 p53蛋白和 HBs Ag免疫染色。结果　扶绥组 16/ 2 6例 ,占 61.5% ,2 4 9密码子第三号位 G→ T颠换 ,形成公认的突变热点。玉林组仅在贵港地区 p53突变集中在热点 ,为 3/ 5例 ,其他地区第七外显子突变点则分散在不同位点。全组 38/ 4 0例 HBs Ag( ) ,占 95%。结论　除启东和南部非洲外 ,世界上第三个 AFB1高危区肝癌 p53基因出现特异突变位点。已知肝癌 p53基因突变发生在这热点则提示该地 AFB1高污染。 HBV常伴随这些基因改变。     

广西地区乙肝病毒／黄曲霉毒素B1双暴露相关性肝细胞性肝癌微阵列比较基因组学的研究

目的研究乙肝病毒／黄曲霉毒素B1双暴露相关性肝细胞性肝癌（hepatocellularcarcinoma,HCC）染色体遗传学畸变的特点。方法将32例手术切除经病理证实为HCC的癌组织,按照乙肝病毒与黄曲霉毒素的暴露情况分为4个亚组：A组为HBV（＋）／AFB,（＋）10例;B组为HBV（＋）／AFB1（-）10例;C组为HBV（-）／AFB1（＋）6例;D组为HBV（-）／AFB1（-）6例。应用微阵列比较基因组杂交技术（ArrayCGH）检测分析其22对染色体DNA拷贝数的变化。结果32例HCC样本中,共发现573个染色体畸变区段（chromosomalaberrations,CNAs）。其中1q、4p、5p、6p、7p、8q、10p、17q、20p、20q和X主要表现为扩增区段;1p、2q、4q、8p、9p、10q、11q、13q、14q、16p、16q、17p、19p、19q、21q、22q和Y主要表现为缺失区段。同时,共检测出25个染色体发生高频畸变的区段（recurrentlyalteredregions,RARs）,其中lq21．1-q44、5p13．2-p15．3、6p12．1-p25．2、7q11．2-q35、8q11．2-q24．3、17q12-q25．2、18q12．3-q22．3和x为高频率扩增区段,而lp31．1-p36．2、2q23．2-q37．2、4q12-q35．2、6q14．1-q26、8p12-p23．2、9p21．1-p24．2、10q21.3-q26．2、13q12．1-q21．1、14q21．3-q32．2、16p12．1-p13．2、16q12．1-q24．1、17p12-p1313、19p13．1-p13．3、19q13．2-q13．4、21q21．3-q22．2、22q11．2-q13．2和Y染色体为高频缺失区段。8p12-p23．2缺失的发生率在进展期HCC（TNM分期为Ⅲ～Ⅳ期）中明显高于早期HCC（TNM分期为I～Ⅱ期）（仁0．038）。4q12-q35．2、13q12．1-q21．1的缺失及7q21．1-q35的扩增发生率在A组中最高。Cox模型分析结果示：在单因素分析中AFP水平、肿瘤大小、TNM分期、BCLC分期、侵袭与转移的发生、8p12-p23．2的缺失以及19p13．1-p13．3的缺失等为影响患者无瘤生存时间的危险因素（P〈0．05）.而在多因素分析中AFP水平、TNM分期以及8p12-p23．2的缺失等为影响患者无瘤生存时间的危险因素（P〈0．05o结论广西地区HCC染色体遗传学改变具有多样性,其中染色体19p13．1．p13-3的高频缺失可能为广西地区HCC特有的分子生物学特征之一。染色体8p12-p23．2的缺失可能为HCC的晚期事件,并且与患者的不良预后有关。染色体4q12-q35．2、13q12．1-q21．1缺失及7q21．1-q35扩增可能与HBV／AFB。双因素的协同致癌作用有关。     

新疆维吾尔族非乙非丙型及病毒相关性肝癌的临床特征及预后

目的：探讨新疆维吾尔族肝细胞癌（ HCC）患者的临床特征和预后。方法回顾性分析301例维吾尔族HCC患者的临床资料,分为非乙型非丙型肝癌组（ NBC?HCC组）和病毒相关肝癌组（ viral?HCC组）。采用Kaplan?Meier法计算生存率,采用Log rank检验对影响患者预后的因素进行单因素分析,采用Cox多因素对影响患者预后的因素进行多因素分析。结果 NBC?HCC组患者的性别、城乡地区、糖尿病史、体质指数、肝硬化史、临床分期、Child?pugh分级、总胆红素和甲胎蛋白水平与viral?HCC组比较,差异均有统计学意义（均P＜0．05）。全组HCC患者的1、2、3、5年生存率分别为35．6％、20．3％、12．6％和4．5％;NBC?HCC组患者的1、2、3、5年生存率分别为32．2％、18．5％、14．7％和5．2％,viral?HCC组患者的1、2、3、5年生存率分别为38．0％、21．1％、13．5％和4．1％,差异无统计学意义（ P＝0．124）。多因素分析结果显示,年龄、临床分期、门静脉癌栓（ PVTT）、Child?pugh分级、肝动脉化疗栓塞（ TACE）联合放疗或射频消融（ RFA）均为影响HCC患者预后的独立因素（均P＜0．05）。结论NBC?HCC组和viral?HCC组肝癌患者的临床特征不尽相同,具有一定的区域特点。年龄、临床分期、PVTT、Child?pugh分级、TACE联合放疗或RFA为影响HCC患者预后的独立因素。     

p16影响乙肝病毒相关性肝细胞肝癌的发生

目的　探讨乙肝病毒 (HBV)基因整合和p16基因表达改变及其与肝细胞肝癌发生发展的关系。方法　 35例肝癌及癌旁肝组织为标本 ,采用聚合酶链式反应 (PCR)及Southernblot检测HBVX基因整合 ,以单链构象多态性分析确定p16基因突变 ,以RT PCR检测p16mRNA ,以Westernblot检测p16蛋白。结果　肝癌中X基因整合与p16mRNA及蛋白表达相关 (P <0 .0 5 ) ,肝癌及癌旁肝组织中p16蛋白表达缺失率分别为 6 2 .9%和 4 0 .0 % ,差异有显著性 (P <0 .0 5 ) ;癌组织中p16蛋白表达缺失与肝癌分化程度、癌细胞浸润有相关性 (P <0 .0 5 )。结论　X基因整合与p16蛋白缺陷有关 ,p16改变在肝细胞癌变各阶段发挥重要作用 ,并与肝癌的演进和侵袭有关。     

核因子-κB和nm23-H1在肝细胞肝癌中的表达及其意义

目的探讨核因子NF-κB和转移抑制基因nm23-H1在肝细胞癌（HCC）组织的表达情况及与临床病理特征的关系。方法采用免疫组织化学方法检测41例HCC中NF-κB和nm23-H1的表达情况，以相应癌旁肝组织、肝硬化组织（10例）、肝血管瘤旁正常肝组织（11例）作对照，并分析其与病理特征的关系。结果NF-κB蛋白在41例HCC组织中阳性28例，表达率为68．3％；41例相应癌旁肝组织中有5例表达，阳性率12．2％，10例肝硬变组织中1例表达，11例正常肝组织未见表达，HCC与非癌组织中NF-κB蛋白的表达差异有统计学意义（χ^2=41．1，P〈0．01）；NF-κB的表达与HCC的临床病理特点无显著相关性。nm23-H1蛋白在41例HCC组织中14例为阳性染色，27例为阴性染色。nm23-H1阴性表达与肝被膜浸润和门静脉浸润显著相关（χ^2=4．16，χ^2=4．19，P均〈0．05）。结论NF-κB可能参与了HCC的发生、发展，可望作为基因治疗的靶点。nm23-H1在HCC中的阴性表达与HCC的恶性生物学特征相关，可能表明肿瘤的预后不良。     

启东肝癌高发区肝癌患者血清中p53突变研究

目的　研究启东地区肝癌患者血清中 p5 3基因突变 ,并确定其对肝癌诊断的意义。 方法　收集 2 5例肝癌 ,2 0例肝硬化 ,30例健康对照者的血标本 ,提取DNA ,应用限制性酶切及直接序列分析方法测定 p5 3基因第七外显子突变。 结果　显示 p5 3基因第七外显子的 2 49密码子产生突变 ,ARG变为SER ,肝癌 ,肝硬化 ,健康者中发生率分别为 44 % ( 11/2 5 ) ,2 0 % ( 4/2 0 ) ,7% ( 2 /30 ) (P <0 .0 1)。结论　启东地区肝癌患者血清中p5 3突变与肝癌发生密切相关 ,其可作为新的肝癌早期诊断标志。     

乙型肝炎病毒e抗原与肝癌关系的17年前瞻性队列研究

目的:探讨启东肝癌高发区乙型肝炎病毒e抗原(hepatitis B e antigen,HBeAg)与肝癌发生之间的关系。方法:利用1992年在启东建立的由807例乙型肝炎病毒表面抗原(hepatitis B surface antigen,HBsAg)携带者和761例性别、年龄匹配的HBsAg阴性者组成的肝癌前瞻性队列,分析1992年5月-2010年3月肝癌发生与HBeAg之间的关系。结果:队列观察总人数为24715人年。HBsAg阳性组中156例发生肝癌,发生率为1288.83/10万人年;HBsAg阴性组中9例发生肝癌,发生率为71.37/10万人年。肝癌发病在HBsAg(+)/HBeAg(-)和HBsAg(+)/HBeAg(+)组中的相对危险度分别为13.25[95%可信区间(con?dence interval,CI)为6.67～26.33,P<0.001]和28.05(95%CI为13.87～56.73,P<0.001)。在HBsAg阳性者中,HBeAg效价<24、1:24～1:27、1:28～1:212和>212者其罹患肝癌的风险分别是HBeAg阴性者的2.55(95%CI为1.54～4.22,P<0.001)、5.02(95%CI为2.89～8.73,P<0.001)、1.71(95%CI为0.91～3.18,P>0.05)和1.19(95%CI为0.64～2.23,P>0.05)倍。结论:HBeAg是预测肝癌高危的一个重要指标,且低效价者的危险度更高。