多重逆转录聚合酶链反应检测常见呼吸道病毒

目的 建立一种可同时快速检测引起人呼吸道感染的重要病毒病原的检测方法 .方法 通过对PCR反应条件的优化,建立同时检测季节性甲型流感病毒(INFA)、乙型流感病毒(INFB)、人鼻病毒(HRV)和甲型H1N1流感病毒(H1N1)的多重RT-PCR方法 .结果 该法可同时或分别扩增INFA 212 bp、INFB 489 bp、HRV 380 bp和H1N1 153 bp的基因片段.检测的敏感性分别为104、104、103、104 copies/mL.采用相同的反应体系和条件,分别对其他6种常见病原体(包括肺炎链球菌、肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和粪肠球菌核酸)进行扩增,均未检测出扩增产物.结论 此种多重RT-PCR法适用于4种重要呼吸道病毒的快速甄别.     

呼吸道病毒核酸检测技术研究进展

急性呼吸道感染是临床最常见的疾病之一。呼吸道病毒作为其最主要的致病病原体,种类繁多,不易区分。因此,建立一种快速、灵敏、特异的检测方法显得尤为重要。近年来,随着分子生物学的不断发展,呼吸道病毒检测方法日新月异,尤其是基于聚合酶链反应的分子诊断技术以其检测速度快、灵敏度高、特异性强等特点在呼吸道病毒检测过程中发挥了重要作用。     

呼吸道合胞病毒PCR序列分析方法的建立和应用

目的：探讨呼吸道合胞病毒ｃＤＮＡ（ＲＳＶ ｃＤＮＡ）序列分析的方法。方法：将ＰＣＲ扩增与核酸序列分析技术相结合,以γ＾３２Ｐ－ＡＴＰ标记Ｔ７Ｐｒｏｍｏｔｅｒ为测序引物,Ｔａｑ ＤＮＡ聚合酶直接测序。结果：测序梯清晰,可读性好。．ＲＳＶ ＮＳ和Ｎ基因区虽较稳定,但仍有颠换突变。结论：ＲＳＶ的变异性决定了它对人类的反复感染,ＰＣＲ测序方法较简便,在临床标本的检测和变异的观察中有重要意义。     

柯萨奇B组病毒逆转录聚合酶链反应检测方法的建立

根据柯萨奇Ｂ组病毒（ＣＢＶ）基因组５’非编码区核苷酸序列，选用了一对组特异性吸收物，用于逆转聚合酶链反应检测ＣＢＶ－ＲＮＡ，结果显示该法可检出ＣＢＶ１～６型ＲＮＡ，灵敏度为１０ＰＦＵ不能检出其他病毒ＲＮＡ，采用的碘化钠－异硫氰酸胍－氯仿法提取ＣＢＶ－ＲＮＡ与传统的蛋白酶Ｋ－酚－氯仿法及异硫氰酸胍－酚－氯仿法比较，具有快速，简便，稳定，可靠的特点，应用该法检测ＣＢＶ－５感染鼠外周血ＲＮＡ，第３ｄ即为     

丽水市严重急性呼吸道感染病毒多重检测的调查分析

目的 了解本市严重急性呼吸道病毒病原谱的构成情况,以期能够为临床用药提供病原学数据。方法采用基于DPO技术的多重RT-PCR方法同时检测呼吸道感染13种病毒:人呼吸道合胞病毒(RSV),人鼻病毒(hRV),呼吸道腺病毒(AdV),人肠道病毒(hEV),人偏肺病毒(hMPV),人冠状病毒(hCoV 229E/OC43),人博卡病毒(hBoV),甲、乙型流行性感冒病毒(Inf A and Inf B),副流感病毒(PIV 1/2/3),凝胶电泳鉴定结果。结果累计761份严重急性呼吸道感染患者标本中,共检出病毒阳性标本214份,阳性率为28.12%。除PIV 2和hCoV 229E未检出外,其他11种病原均有被检出,检出率为32.19%,前三位分别是RSV 55份、hRV 45份、Inf B 36份。共有27份病原混合感染标本,其中23份双重感染,4份三重感染,混合感染前三位分别是hRV 18份、RSV 13份和PIV 37份。结论丽水市严重急性呼吸道病毒感染的主要病原体是RSV,除流感病毒外hRV、hMPV、PIV 3、hEV亦为主要单一致病原,hRV、RSV较高的混合感染率提示hRV或RSV的多重感染可能是呼吸道的基础感染。     

逆转录—多聚酶链反应检测丙型肝炎病毒RNA方法的建立及实…

对逆转录－多聚酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）检测丙型肝炎病毒ＲＮＡ（ＨＣＶＲＮＡ）的方法学进行了探讨，逆转录与多聚酶反应是否在同一反应管内进行，对ＨＣＶＲＮＡ检测结果没有明显影响，但在操作难易程度，ＴａｑＤＮＡ聚合酶的选择等方面有差别，在防止污染的前提下，套式ＰＣＲ可提高ＨＣＶＲＮＡ检出率（７．８３％）这对于极低水平ＨＣＶ感染的诊断十分重要，本文对受检标本的贮存方法也进行了初步探讨。     

多重PCR检测技术在儿童急性呼吸道病毒感染中的应用

目的 探讨多重PCR检测技术在儿童急性呼吸道感染中的临床应用价值。了解重庆市九龙坡区儿童急性呼吸道病毒感染病原情况,有助于更好地制定有效的预防策略。方法 收集2021年3月-2022年2月重庆地区195例儿童急性呼吸道病毒感染病例咽拭子标本,应用18种呼吸道病原体核酸实时荧光PCR检测试剂盒进行检测。结果 195份样本中有143份(73.33%)检测出病毒感染阳性,其中119份为单一病毒感染,24份为多重病毒感染。单一感染中最常见的是呼吸道合胞病毒25.64%(50/195),其次是人鼻病毒17.95%(35/195)、甲型流感病毒4.62%(9/195)。以0～3岁组阳性检出率最高为84.95%(79/93),>3～6岁组阳性检出率为60.00%(39/65),>6岁组阳性检出率为67.57%(25/37),不同年龄组病毒阳性检出率差异有统计学意义(χ²=12.952,P=0.002)。冬春季节比夏秋季节更容易发生病毒感染(75.68%vs. 41.67%)(χ²=23.252,P<0.001)。结论 多重PCR技术对于快...     

呼吸道病毒分离培养检测技术的研究进展

急性呼吸道感染是世界范围内的常见疾病,呼吸道病毒是其主要的致病病原体。近年来,呼吸道病毒的检测方法日益广泛,培养法作为病毒检测方法中的"金标准",也有了多方面的发展。该文综述了传统呼吸道病毒培养法及新兴方法,如病毒离心培养法、Pre-CPE检测、混合细胞培养法及转基因细胞培养法。这些新方法提高了呼吸道病毒培养法的效率及灵敏度,提高了该方法的实用性,将促进新型呼吸道病毒的发现。     

多重PCR技术检测病毒性肝炎相关病毒的研究

目的建立一种快速、特异的可同时检测血中多种病毒性肝炎相关病毒的多重PCR方法。方法参照各病毒特异性核酸序列,按多重PCR引物设计的特殊要求设计引物,以核酸测序确证扩增产物,用标准病毒株及临床阳性血清样本DNA、RNA为模板优化PCR反应体系和反应条件,建立病毒性肝炎相关病毒多重PCR检测方法。应用建立的多重检测方法对120例ALT升高的血清标本进行多重检测,并将检测结果与单一PCR检测结果进行比较。结果采用多重PCR技术可同时对EBV、TTV、HBV、HSV 4种DNA病毒进行扩增;采用多重RT-PCR技术可同时对Cox-V、HEV、HCV 3种RNA病毒进行扩增。各病原体单一及多重扩增条带均清晰、均一,无非特异性扩增条带,片段长度与理论值一致;核酸测序证实各扩增产物属各病原体特异性基因片段。临床标本检测多重感染率为19.2%,与单一检测结果一致。结论建立的多重PCR检测方法稳定可靠,敏感度、特异度好,适用于病毒性肝炎相关病毒的实验室诊断与临床筛查。     

聚合酶链反应检测HGV RNA方法的建立及应用

目的：了解我国不同人群中庚型肝炎病毒（ＧＢＶＣ／ＨＧＶ）感染的状况。方法：以ＮＳ５区序列分析为基础设计引物，建立聚合酶链反应方法，并对我国几个地区、不同疾病状况的２６８例患者进行庚型肝炎病毒核酸的检测。结果：有输血史的健康人群、ＨＢＶ和ＨＣＶ感染者及慢性非乙非丙型肝炎患者的ＧＢＶＣ／ＨＧＶＲＮＡ阳性率均高于自然人群，分别为１３．３％，１８．４％，１９．８％，８．９％，其中有明确血液暴露史者的检出率达２０．１％。结论：庚型肝炎在我国有广泛的流行，输血等肠道外途径为重要危险因素。     

高通量蛋白纯化方法的建立

目的:建立一种简便、经济的高通量蛋白纯化的技术平台。方法:利用重组融合蛋白N端所带的6×H is标签,通过96孔板对172个在大肠杆菌BL21(DE3)中表达的鼠疫菌蛋白进行高通量纯化。将纯化出的蛋白制备蛋白芯片,与抗6×H is的单抗反应筛选出能够满足后续试验要求的蛋白。结果:通过改变细菌培养温度、IPTG诱导浓度等条件,经过三次96孔板纯化,在两个星期内完成了对149个重组蛋白的纯化。结论:这种简便、快捷、经济的蛋白高通量纯化技术平台的建立,为大规模蛋白的研究提供了基础。     

应用多重反转录PCR技术检测病毒性呼吸道感染

目的：为了寻求呼吸道感染病毒的快速诊断并指导治疗，建立一种多重反转录PCR体系。方法：分别设计针对肠病毒、腺病毒、乙型流感病毒和甲型流感病毒标准株的特异性引物，采用多重反转录PCR检测4种病毒。结果：应用此多重反转录PCR系统可以特异的同时检测到同一模板中的肠病毒、腺病毒、甲型流感病毒和乙型流感病毒。通过用多重反转录PCR和单一PCR对36份临床标本的检测相比较，结果表明多重反转录PCR的检测与单一PCR的检测结果是一致的。结论：通过与单一的PCR对比，证明该多重反转录PCR系统可替代单一的PCR用于肠病毒、腺病毒、甲型流感病毒和乙型流感病毒引起的呼吸道感染的快速诊断。     

差示逆转录-聚合酶链反应技术定量检测柯萨奇B组病毒核酸方法的建立

目的　建立对患者体内病毒水平进行客观定量检测的方法。方法　采用差示逆转录 -聚合酶链反应 ,共同扩增柯萨奇B组病毒 (CVB)目的基因和参照模板Mmyogene ,建立一种检测CVB复制水平的定量方法 ,并对苦瓜素体外抗CVB3感染疗效进行初步评价。结果　该方法成功检测到CVB3RNA水平 ,且苦瓜素处理组CVB3RNA水平明显低于对照组。结论　该方法具有简便、快速、可靠、重复性好等优点 ,同时检测多份样本 ,非常适合于大样本药物筛选 ,可为抗CVB病毒感染疗效的评价提供一个有效指标     

An exo Probe-based Reverse Transcription and Recombinase Polymerase Amplification for Rapid Detection of Feline Calicivirus in Cats

<正>Feline calicivirus (FCV) was a highly prevalent RNA virus causing upper respiratory tract infections in cats through the mouth and nose around the world, result in the death of cats especially under 1 year old with upper respiratory tract disease (URTD)and virulent systemic disease (FCV-VSD)[1]. Infected cats usually presented with mouth ulcers, salivation and gingivitis—stomatitis. Furthermore,     

利用逆转录环介导恒温扩增技术建立新型冠状病毒核酸快速检测方法

  目的  利用逆转录环介导恒温扩增技术建立新型冠状病毒核酸快速检测方法。  方法  针对新型冠状病毒的特征核壳蛋白N基因和开放阅读框1ab（ORF1ab）基因序列保守区设计引物，获得了 RT-LAMP 检测体系，并评价该体系的特异性、最低检测限、抗干扰能力和最佳反应时间。  结果  经检测新型冠状病毒核酸标准物质，其结果与预期相符，证实了该检测体系的可行性。  结论  利用逆转录环介导恒温扩增技术快速检测新型冠状病毒核酸的反应体系特异性好、灵敏度高，适用于边境条件有限地区。     

泌尿系肿瘤人端粒酶催化基团mRNA的表达

目的　探讨泌尿系肿瘤中端粒酶催化基因 (hTRT)mRNA的表达与肿瘤分期和分级的关系。方法　应用原位杂交技术对膀胱癌、肾癌标本和膀胱、肾脏正常组织进行hTRTmRNA表达检测。结果　 48例膀胱癌标本中 42例hTRTmRNA阳性表达 ,hTRTmRNA阳性率为 88% ,对照组 30例中 2例正常膀胱组织黏膜阳性表达 ,两者存在明显差异 (P <0 .0 1) ,肿瘤分级与肿瘤组织hTRTmRNA表达情况无相关性。 2 9例肾癌组织hTRTmRNA阳性 2 5例 ,阳性率为 86 % ,对照组 30例中 2例肾脏正常组织hTRTmRNA阳性表达 ,两者存在明显差异 (P <0 .0 1) ,肿瘤分期与肿瘤组织hTRTmRNA表达情况无相关性。结论　hTRTmRNA在肾癌和膀胱癌中有异常阳性表达 ,但其表达情况与肿瘤的分期和分级无相关性