TLR4和NF-κB p65表达与结肠癌的关系

目的 评价结肠癌和癌旁正常组织中TLR4 mRNA和NF-κB p65蛋白表达水平与结肠癌发生发展的相关性.方法 取手术切除的新鲜结肠癌组织和距癌组织2 cm以上的癌旁组织各63份,其中:结肠癌高分化型组23份,中分化型组17份,低分化型组20份,其他分化类型3份;伴淋巴结转移组27份,不伴淋巴结转移组36份;Dukes A期组18份,Dukes B期组14份,DukesC期组22份,Dukes D期组9份.采用实时荧光定量RT-PCR检测结肠癌组织和癌旁组织中TLR4 mRNA的表达水平;用WB法检测NF-κB p65蛋白的相对表达水平.结果 结肠癌组织中TLR4 mRNA表达量为86.42±15.16,明显高于癌旁组织的32.74±9.44,差异有统计学意义(t=22.354,P＜0.01).高、中、低分化型结肠癌TLR4 mRNA表达量分别为69.58±11.27、64.57±13.91、97.12±15.44,低分化型结肠癌表达量高于高、中分化型结肠癌(t值分别为11.304、12.223,P均＜0.01).伴淋巴结转移组TLR4 mRNA表达量(89.91±13.33)与不伴淋巴结转移组(81.16±13.59)比较,差异无统计学意义(t=0.959,P＞0.05).Dukes A期组TLR4 mRNA表达量(59.05±11.66)低于Dukes B～D期组的表达量(分别为92.32±17.51、91.41±15.21、101.46±17.43),差异有统计学意义(t值分别为8.708、9.664、9.525,P均＜0.05);结肠癌组织和癌旁组织NF-κB p65蛋白表达量分别为0.63±0.11、0.34±0.08,结肠癌组织NF-κB p65表达量高于癌旁组织(t=18.266,P＜0.01),高、中、低分化型结肠癌组织中NF-κB p65蛋白表达量分别为0.46±0.09、0.72±0.11、0.77±0.14,中低分化型组表达高于高分化型(t值分别为11.223、10.875,P均＜0.01),伴淋巴结转移组与不伴淋巴结转移组NF-κB p65表达量分别为0.82±0.17、0.57±0.12,且差异有统计学意义(t=18.269,P＜0.05).Dukes A期的NF-κB p65表达量(0.39±0.06)低于Dukes B～D期(分别为0.72±0.12、0.69±0.14、0.76±0.13),且差异有统计学意义(t值分别为10.442、9.889、9.721,P均＜0.01).结论 TLR4/NF-κB p65信号通路的表达水平升高与结肠癌的临床进展和病理分级密切相关;NF-κB p65可能是结肠癌转移的分子指标之一,TLR4/NF-κB p65升高可促进结肠癌的发生发展.     

氟伐他汀对人THP-1细胞TLR4及下游信号转导通路的影响

目的探讨氟伐他汀对脂多糖(LPS)刺激的人急性单核细胞白血病细胞系(THP-1)Toll样受体4(TLR4)及下游信号转导通路的干预作用。方法采用不同剂量的氟伐他汀、LPS处理THP-1细胞,MTT法检测细胞增殖情况,实时荧光定量RTPCR(qRT-qPCR)检测细胞中TLR4和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)mRNA的表达,western blot检测TLR4及下游磷酸化胞外信号调节激酶(ERK)、磷酸化核因子κB(NF-κB p65)蛋白的表达水平。ELISA法测定细胞培养上清中TNF-α蛋白的含量。结果氟伐他汀(10 mg/L)降低LPS刺激的THP-1细胞TLR4(蛋白质和mRNA)的表达(t分别为7.55、7.80,P均0.05),1、5、10mg/L氟伐他汀能显著抑制LPS刺激的下游分子ERK的磷酸化(q分别为11.78、18.15、18.88,P0.05);亦能抑制LPS刺激的NF-κB p65的磷酸化(q分别为5.13、6.87、11.68,P0.05)。同时,氟伐他汀(10 mg/L)能显著干预LPS刺激的细胞TNF-α(蛋白质和mRNA)的表达(q分别为4.23、3.01,P0.05)。结论氟伐他汀可通过干预LPS刺激的TLR4表达及下游分子ERK、NF-κB p65的磷酸化,抑制THP-1细胞TNF-α的表达,可能为氟伐他汀的抗炎机制之一。     

乌司他丁对脂多糖诱导的大鼠肺组织Toll样受体4信号通路表达的影响

目的 探讨乌司他丁对脓毒性大鼠肺损伤的保护机制.方法 选健康清洁级SD大鼠30只,随机(随机数字法)分为生理盐水对照组10只、脂多糖(LPS)组10只、脂多糖+乌司他丁(LPS+ UTI)组10只.注药24 h后取肺组织观察形态学改变,分别应用RT-PCR或Western blot 及ELISA方法测定肺组织Toll样受体4(TLR4)、核因子-κB (NF-κB)及肿瘤坏死因子TNF-α mRNA及蛋白表达.结果 脂多糖导致大鼠肺组织损伤,乌司他丁可下调肺组织TLR4 mRNA (t=3.563,P=0.032)、TNF-α mRNA(t=5.147,P=0.028)及TLR4蛋白(t=2.692,P=0.041)、NF-κB蛋白(t=2.459,P=0.024)、TNF-α蛋白(t=3.336,P=0.037)表达,并减轻肺损伤.结论 乌司他丁对脂多糖致肺损伤具有一定保护作用,其机制之一可能与抑制TLR4-NF-κB信号途径转导有关.     

脂多糖刺激后腹腔巨噬细胞表面Toll样受体表达的变化

目的探讨LPS刺激后小鼠腹腔巨噬细胞表面TLR2、TLR4表达的动态变化.方法常规方法从BALB/C小鼠腹腔中分离出巨噬细胞,调整细胞数为2×106/孔,分为6组,每组设3个复孔,加入LP S使其终浓度为1μg/ml,在终浓度为1μg/ml LPS刺激下,5%CO2,37℃孵育0、1.5、3、6、16、24h.用异硫氢酸荧光素(FITC)标记的大鼠抗小鼠TLR2抗体和藻红蛋白(PE)标记的大鼠抗小鼠TLR4抗体对小鼠腹腔巨噬细胞进行免疫荧光染色,流式细胞仪(FCM)测定FITC、PE阳性细胞数及其平均荧光强度(MFI).结果1.随着LPS刺激时间的延长,TLR2阳性率逐步上升,6h达到高峰后出现缓慢下降趋势,各刺激组阳性率与对照组组相比,P＜0.01.TLR2 MFI则随着LPS刺激时间的延长而缓慢下降,各刺激组与对照组相比,P＜0.05.2.随着LPS刺激时间的延长,TLR4阳性率逐步上升,刺激达24h时,阳性率为14.02%+1.23%,与对照组(8.98%±1.06%)相比,P＜0.01.TLR4 MFI也随着刺激时间的延长而上升,各刺激组与对照组相比,P＜0.05.结论LPS能够引起巨噬细胞TLR2/4表达和分布发生变化,说明TLR2与TLR4均参与针对LPS的反应.     

脂多糖刺激后腹腔巨噬细胞表面Toll样受体表达的变化

目的探讨LPS刺激后小鼠腹腔巨噬细胞表面TLR2、TLR4表达的动态变化。方法常规方法从BALB/C小鼠腹腔中分离出巨噬细胞,调整细胞数为2×106/孔,分为6组,每组设3个复孔,加入LPS使其终浓度为1μg/ml,在终浓度为1μg/mlLPS刺激下,5%CO2,37℃孵育0、1.5、3、6、16、24h。用异硫氢酸荧光素(FITC)标记的大鼠抗小鼠TLR2抗体和藻红蛋白(PE)标记的大鼠抗小鼠TLR4抗体对小鼠腹腔巨噬细胞进行免疫荧光染色,流式细胞仪(FCM)测定FITC、PE阳性细胞数及其平均荧光强度(MFI)。结果1.随着LPS刺激时间的延长,TLR2阳性率逐步上升,6h达到高峰后出现缓慢下降趋势,各刺激组阳性率与对照组组相比,P<0.01。TLR2MFI则随着LPS刺激时间的延长而缓慢下降,各刺激组与对照组相比,P<0.05。2.随着LPS刺激时间的延长,TLR4阳性率逐步上升,刺激达24h时,阳性率为14.02%±1.23%,与对照组(8.98%±1.06%)相比,P<0.01。TLR4MFI也随着刺激时间的延长而上升,各刺激组与对照组相比,P<0.05。结论LPS能够引起巨噬细胞TLR2/4表达和分布发生变化,说明TLR2与TLR4均参与针对LPS的反应。     

TGFB1和TLR4 mRNA在糖尿病肾病患者外周血单核细胞中的表达及其与病情严重度的关系

目的分析转化生长因子B1(TGFB1)和Toll样受体4(TLR4)mRNA在糖尿病肾病(DN)患者外周血单核细胞中的表达及其与病情严重度的关系。方法选取186例2型糖尿病患者为研究对象,根据2型糖尿病诊断及DN诊断、临床分期参考标准将其分为单纯2型糖尿病组(A组)、早期DN组(B组)、临床期DN组(C组)、肾衰竭期组(D组),同时选取60例健康体检者作为对照组。采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测各组患者外周血单核细胞TGFB1和TLR4 mRNA的表达水平。结果⑴单因素方差分析显示,各组研究对象外周血单核细胞TLR4、TGFB1 mRNA表达水平比较差异有统计学意义(P0.05)。进一步两两比较显示,外周血单核细胞TLR4、TGFB1 mRNA表达水平,D组显著高于C组、B组、A组、对照组(P0.05),C组显著高于B组、A组、对照组(P0.05),B组患者显著高于A组、对照组(P0.05),A组患者显著高于对照组(P0.05)。⑵DN患者外周血单核细胞TLR4、TGFB1 mRNA表达水平与血清甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、空腹血糖(FBG),全血糖化血红蛋白(HbAlc)等指标呈显著正相关(P0.05),与血清高密度脂蛋白胆固醇(HDLC),估算肾小球滤过率(e GFR)等指标呈显著负相关(P0.05),与年龄、体重指数、收缩压、舒张压、病程等指标无显著相关性(P0.05)。⑶血清LDL-C、FBG、HbAlc,外周血单核细胞TLR4、TGFB1 m RNA是DN发生发展的独立危险因素(P0.05),血清HDL-C是DN发生发展的独立保护因素(P0.05)。结论 DN患者外周血单核细胞TGFB1、TLR4 mRNA呈高表达状态,且患者病情越严重,两者表达水平越高,它们是影响DN发生发展的独立危险因素。     

白癜风患者外周血单个核细胞中TLR7、TLR9、NF-κB的表达及意义研究

目的探究白癜风患者外周血单个核细胞(PBMC)中Toll样受体7(TLR7)、Toll样受体9(TLR9)、核因子-κB(NF-κB)的表达情况及其意义。方法前瞻性选取2017年4月至2018年4月沈阳市第七人民医院收治的33例白癜风患者作为观察组,33例同期健康体检者为对照组。使用流式细胞仪检测两组PBMC中的TLR7、TLR9表达情况,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测两组PBMC中的NF-κB表达情况。结果流式细胞仪结果显示,观察组患者PBMC中的TLR7表达量为(94.65±3.931)%,高于对照组的(92.84±3.52)%,但差异无统计学意义(P0.05);而观察组患者PBMC中的TLR9表达量为(86.68±11.01)%,低于对照组的(90.75±5.74)%,但差异无统计学意义(P 0.05); PCR反应结果显示,观察组患者PBMC中的NF-κB mRNA表达量为(0.96±1.52),高于对照组的(0.24±0.35),差异具有统计学意义(P 0.05)。结论白癜风患者PBMC中TLR7表达过量,TLR9则低表达,但与正常健康者的表达情况未见较大差异,而该信号通路的信号分子NF-κB表达量远高于正常健康者,推测TLR7、TLR9、NF-κB的表达与白癜风可能存在一定的关系,但具体机制需进一步探寻。     

核因子—κB及Toll样受体4介导脂多糖诱导内皮细胞单层通透性增高

目的：探讨核因子—κB(nuclear factor-kappa B，NF—κB)及Toll样受体4(Toll—like receptor 4，TLR4)在脂多糖(1ipopolysaccharide，LPS)诱导的内皮细胞单层通透性增高中的作用。方法：采用免疫荧光法及改良Boydon小室测定LPS对人脐静脉内皮细胞株ECV-304的单层细胞通透性及其F—肌动蛋白分布的影响；以免疫组织化学染色及RT—PCR法检测LPS刺激细胞NF—κB活化后的核转位及TLR4 mRNA的表达。结果：LPS作用ECV—304 1h后，免疫组织化学染色证实NF—κB活化后发生核转位；LPS以一定的剂量—时间依赖方式上调TLR4 mRNA的表达，ECV—304单层通透性也随之增加。结论：NF—κB及TLR4可能在LPS诱导内皮细胞单层损伤导致通透性增高过程中发挥重要作用。     

LPS刺激后小鼠巨噬细胞Toll样受体(TLR)4及肿瘤坏死因子α表达的变化

革兰阴性菌败血症休克的发生主要是因为免疫系统对细菌LPS应答,产生过量细胞因子和炎性介质从而引起组织和器官损害。研究发现与果蝇Toll蛋白类似的哺乳动物Toll样受体家族在宿主防御中起重要作用,其中TLR4介导针对LPS的免疫应答。它们对病原体的保守结构产生应答并且激活单核细胞和中性粒细胞产生细胞因子和炎性介质。本研究观察LPS刺激后体外培养的小鼠腹腔巨噬细胞表面TLR4表达及最重要的炎性细胞因子之一的肿瘤坏死因子α分泌水平的变化。方法常规方法从BALB/C小鼠腹腔中分离出巨噬细胞（Mφ）,细胞分为6组,分别加入LPS使其终浓度为0、0.001、0.01、0.1、1、10μg/ml,5%CO2,37℃孵育2h。流式细胞术测定Mφ表面TLR4的表达。同时取培养液上清采用ELISA方法检测TNFα。实验重复三次。结果①经0.01μg/mlLPS刺激的MφTLR4-PE阳性率与0μg/mlLPS组相比,P〈0.05。其它浓度刺激组TLR4阳性率则与对照组无差异,P〉0.05。Mφ细胞TLR4MFI随着LPS浓度的升高而增强,除了10μg/mlLPS组,其余各组MFI与对照组相比,P〈0.05。②随着LPS浓度增加,TNFα分泌量逐渐升高,呈剂量依赖关系。但当LPS浓度达10μg/ml时,TNFα分泌量下降。结论LPS能够诱导Mφ胞膜表面TLR4表达和TNFα分泌升高,并且在一定浓度范围内呈量-效关系.     

LPS刺激后小鼠巨噬细胞Toll样受体(TLR)4及肿瘤坏死因子α表达的变化(英文)

革兰阴性菌败血症休克的发生主要是因为免疫系统对细菌LPS应答,产生过量细胞因子和炎性介质从而引起组织和器官损害。研究发现与果蝇Toll蛋白类似的哺乳动物Toll样受体家族在宿主防御中起重要作用,其中TLR4介导针对LPS的免疫应答。它们对病原体的保守结构产生应答并且激活单核细胞和中性粒细胞产生细胞因子和炎性介质。本研究观察LPS刺激后体外培养的小鼠腹腔巨噬细胞表面TLR4表达及最重要的炎性细胞因子之一的肿瘤坏死因子α分泌水平的变化。方法常规方法从BALB/C小鼠腹腔中分离出巨噬细胞(Mφ),细胞分为6组,分别加入LPS使其终浓度为0、0.001、0.01、0.1、1、10μg/ml,5%CO2,37℃孵育2h。流式细胞术测定Mφ表面TLR4的表达。同时取培养液上清采用ELISA方法检测TNFα。实验重复三次。结果①经0.01μg/mlLPS刺激的MφTLR4-PE阳性率与0μg/mlLPS组相比,P<0.05。其它浓度刺激组TLR4阳性率则与对照组无差异,P>0.05。Mφ细胞TLR4MFI随着LPS浓度的升高而增强,除了10μg/mlLPS组,其余各组MFI与对照组相比,P<0.05。②随着LPS浓度增加,...     

基于TLR4/NF⁃κB信号通路探讨益生菌对肝内胆汁淤积大鼠的保护作用

目的 探讨益生菌对肝内胆汁淤积大鼠的保护作用及其机制.方法 将40只SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、模型+益生菌组和正常+益生菌组,模型+益生菌和正常+益生菌组给予益生菌5×107 CFU/(kg·d)灌胃14 d,正常组及模型组给予生理盐水处理,于实验第12天给药4 h后,模型组和模型+益生菌组75 mg/kgα...     

人TLR4胞外段真核表达质粒的构建及其在HEK293 细胞中的表达

目的 构建人Toll—like receptor 4（TLR4）胞外段真核表达质粒并观察其表达。方法 通过PCR扩增人TLR4胞外段基因，将其克隆入真核表达质粒pcDNA3．1（＋），重组质粒peDNA3．1（＋）-eTLR4转染入人胚肾293细胞（HEK293 细胞）中，RT-PCR检测TLR4胞外段的表达。结果 测序结果表明，成功构建人TLR4胞外段真核表达质粒pcDNA3．1（＋）-eTLR4，并在HEK293细胞中获得表达。结论 TLR4胞外段能在HEK293细胞中获得正确表达，为TLR4信号通路的进一步研究打下了基础。     

冠心病患者外周单核细胞TLR4表达及其与血浆P选择素的相关性

目的探讨冠心病（CHD）患者外周血单核细胞Toll样受体4（TLR4）表达及其与血浆P选择素（P-selectin）水平的相关性和临床意义。方法选择研究对象139例,其中稳定性心绞痛（SAP）39例、不稳定性心绞痛（UAP）66例、急性心肌梗死（AMI）34例、正常对照组30例,比较各组间TLR4、P-selectin表达的差异。采用流式细胞术检测外周血单核细胞TLR4表达,采用酶联免疫吸附试验检测血浆P选择素水平。结果对照组、SAP组、UAP组与AMI组外周血单核细胞TLR4的表达和血浆P选择素水平依次增高;各组表达量均高于对照组（P〈0.05）,TLR4表达与血浆P选择素各组间两两比较差异均有统计学意义（P〈0.05）,TLR4与血浆P选择素水平呈正相关（P〈0.05）。结论冠心病患者TLR4表达上调,促进炎症前体细胞因子的分泌,提示TLR4及其介导的炎性反应与冠心病的发生、发展有关;冠心病患者P-selectin水平升高,客观反映病情的严重性,预示心血管事件的危险性增加。     

跑台运动训练对脊髓损伤后大鼠肺损伤及HMGB1/TLR4/NF-κB信号通路表达的影响

目的：探讨跑台运动训练对脊髓损伤（SCI）后大鼠肺损伤及HMGB1/TLR4/NF-κB信号通路表达的影响。方法：选取54只SD雌性大鼠,随机分成3组,包括假手术组、SCI制动组、SCI运动组。SCI运动组及SCI制动组分别于术后第3天开始跑台运动训练或制动干预,BBB评分评定大鼠脊髓损伤后后肢运动功能。分别在运动或制动后第3天、第7天取肺组织,HE染色检测大鼠肺组织病理结构变化;免疫组化检测肺组织HMGB1蛋白表达情况;qRT-PCR检测HMGB1、TLR4、NF-κB、IL-1β、IL-6、TNF-α m RNA表达情况;Western Blot检测HMGB1、TLR4、NF-κB蛋白表达情况。结果：BBB评分结果显示,与假手术组比较,SCI制动组、SCI运动组BBB评分均显著下降（P<0.05）;SCI运动组与SCI制动组评分结果比较无显著性差异（P>0.05）。HE染色结果显示,SCI制动组及SCI运动组第3天、第7天肺组织中均出现水肿、出血、炎性细胞浸润,相较于SCI制动组,SCI运动组肺损伤评分显著降低（P<0.05）。qRT-PCR、免疫组化、Weste...     

黄芪甲苷调控TLR4/NF-κB通路对系膜增生性肾小球肾炎大鼠发挥保护作用

目的探究黄芪甲苷(AS-IV)调控Toll样受体4(TLR4)/核因子κB(NF-κB)通路对系膜增生性肾小球肾炎大鼠的保护作用。方法将Wistar大鼠分为假手术组、模型组、AS-IV低、中、高剂量组、NF-κB抑制剂组(BAY11-7082)组,每组16只。假手术组大鼠开腹后游离左肾后关腹。AS-IV低、中、高剂量组大鼠在系膜增生性肾小球肾炎模型制备结束后,分别灌胃2. 5 mg/(kg·d)、5 mg/(kg·d)、10 mg/(kg·d) AS-IV,BAY11-7082组静脉注射5μmol/(kg·d) BAY11-7082,假手术组、模型组大鼠腹腔注射生理盐水,连续给药4周。给药2周、4周后测定尿液24 h蛋白量,酶联免疫法检测血清肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)水平,HE、PSA染色观察肾脏组织形态学变化,TUNEL染色检测肾脏细胞凋亡情况;蛋白免疫印迹(WB)分析肾组织TLR4、NF-κB蛋白表达;免疫组化法检测肾脏中基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)蛋白阳性表达。结果与假手术组相比,模型组24 h尿蛋白、Scr、BUN升高,肾小球病理分级、肾小管间质损伤评分均升高,细胞凋亡率升高、TLR4、NF-κB蛋白表达升高、MMP-9蛋白阳性表达率降低,TIMP-1蛋白阳性表达率升高(P 0. 05)。与模型组相比,AS-IV各组、BAY11-7082组24 h尿蛋白、Scr、BUN降低,肾小球病理分级、肾小管间质损伤评分降低,细胞凋亡率降低、TLR4、NF-κB蛋白表达降低、MMP-9蛋白阳性表达率升高、TIMP-1蛋白阳性表达率降低(P 0. 05)。结论 AS-IV通过抑制TLR4/NF-κB信号通路,影响MMP-9、TIMP-1蛋白表达进而发挥对系膜增生性肾小球肾炎大鼠的保护作用。     

全氟化碳通过下调TLR4/NF-κB信号通路抑制脂多糖刺激A549细胞分泌TNF-α的研究

目的探讨全氟化碳对内毒素诱导的人肺泡Ⅱ型上皮细胞(A549细胞)炎症因子TNF-α表达的影响及机制。方法人肺泡Ⅱ型上皮细胞,传代培养后,均分为3组:空白对照组(C组)、脂多糖(LPS)组、全氟化碳+LPS(P+LPS组),P+LPS组在给予LPS同时加入全氟化碳,LPS的终浓度为10μg/ml,全氟化碳的终浓度为12.5%,各组分别孵育30 min、2 h、4 h、12 h、24 h,结束后用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测核转录因子-κB(NF-κB)、Toll样受体4(TLR4)蛋白表达水平,酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞培养上清中TNF-α的水平。结果 (1)Western blot结果显示,C组人肺泡Ⅱ型上皮细胞上有TLR4蛋白的表达,但表达量较低;LPS组人肺泡Ⅱ型上皮细胞在30 min、2 h、4 h、12 h、24 h点TLR4及NF-κB蛋白的表达量明显高于C组(P<0.05);与LPS组比较,P+LPS组人肺泡Ⅱ型上皮细胞30 min、2 h、4 h、12 h、24 h点TLR4及NF-κB蛋白表达明显下降(P<0.05),C组人肺泡Ⅱ型上皮细胞的TLR4及NF-κB蛋白表达量与P+LPS组相比,无明显差异(P>0.05)。(2)ELISA结果显示,与C组比较,LPS组人肺泡Ⅱ型上皮细胞30 min、2 h、4 h、12 h、24 h点TNF-α均明显升高(P<0.05)。P+LPS组人肺泡Ⅱ型上皮细胞30 min、2 h、4 h、12 h、24 h点TNF-α较LPS组均明显降低(P<0.05)。结论 (1)TLR4可能介导了LPS诱导的人肺泡Ⅱ型上皮细胞的炎症反应。(2)全氟化碳减轻LPS诱导的人肺泡Ⅱ型上皮细胞的炎症反应,可能与抑制细胞表面TLR4的信号活化,进一步抑制下游NF-κB的转导路径,从而降低TNF-α的产生有关。     

脓毒症合并心肌损伤患者TLR4/NF-κB信号通路及其与心肌损伤标志物的相关性

目的 探讨脓毒症合并心肌损伤患者Toll样受体4(TLR4)/核因子-κB(NF-κB)信号通路与心肌损伤标志物的相关性。方法 回顾性选取2020年6月至2022年6月应急管理部应急总医院收治的脓毒症患者84例作为研究对象,根据患者有无心肌损伤分为无心肌损伤组(n=59)和心肌损伤组(n=25)。以酶联免疫吸附试验法检测血清脑钠肽(BNP)、N末端B型脑钠肽(NT-proBNP)、人心型脂肪酸结合蛋白(h-FABP)、心肌肌钙蛋白Ⅰ(cTnⅠ)、肌酸激酶同工酶(CK-MB);以实时荧光定量PCR法检测外周血单个核细胞(PBMC)中TLR4、NF-κB、MyD88 mRNA相对表达量。比较两组血清BNP、NT-proBNP、h-FABP、cTnⅠ、CK-MB水平,以及PBMC中TLR4、NF-κB、MyD88 mRNA相对表达量。以Pearson相关系数分析血清BNP、NT-proBNP、h-FABP、cTnⅠ、CK-MB水平与TLR4、NF-κB、MyD88相对表达量的相关性。结果 心肌损伤组血清BNP、NT-proBNP、h-FABP、cTnⅠ、CK-MB水平分别为(442.17±8...     

脂多糖对人脐静脉内皮细胞蛋白C受体和核因子-κB表达的影响

目的:观察脂多糖(LPS)对人脐静脉内皮细胞蛋白C受体(EPCR)和核因子-κB(NF-κB)表达的影响.方法:分别在12、24、48 h采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、western-blot技术测定正常对照组、LPS组培养的人脐静脉内皮细胞EPCR mRNA、蛋白及NF-κB蛋白的表达.结果:与正常对照组比较,LPS(24、48 h)组EPCR mRNA,LPS(24 h)组EPCR蛋白含量均显著下降(均P<0.01),LPS(48 h)组EPCR蛋白含量亦显著下降(P<0.05);与LPS(24 h)组比较,LPS(12 h)组EPCR蛋白含量明显增高(P相似文献   

Toll样受体4/核因子-κB p65通路对轮状病毒肠炎患儿肝损害的影响

目的 探讨轮状病毒(RV)肠炎患儿Toll样受体4(TLR4)/核因子-κB(NF-κB)p56通路对肝损害的影响。方法 选取50例RV肠炎患儿为RV组,另选取同期50例RV感染阴性的肠炎患儿为对照组。采用全自动生化分析仪检测患儿肝功能指标谷草转氨酶(AST)和谷丙转氨酶(ALT)水平。采用聚合酶链式反应(PCR)检测外周血单核细胞(PMBC)的TLR4 mRNA、NF-κB mRNA表达;采用蛋白质印迹法检测NF-κB p65蛋白表达水平。比较2组患儿血清AST、ALT水平和肝损害发生率。比较2组患儿PMBC的TLR4 mRNA、NF-κB mRNA和NF-κB p65蛋白表达。比较RV组中伴肝损害患儿和无肝损害患儿PMBC的TLR4 mRNA、NF-κB mRNA和NF-κB p65蛋白表达水平。采用Pearson相关分析法分析RV肠炎患儿肝功能与TLR4/NF-κB p65通路的相关性。结果 RV组患儿血清AST、ALT水平及肝损伤发生率高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。RV组患儿PBMC的TLR4 mRNA、NF-κB mRNA和NF-κB p65蛋白表达高于...     

敲除TRIF基因对TLR3介导胰岛β细胞损伤的影响及机制研究

目的 探讨敲除TRIF基因后,激活Toll样受体3(TLR3)对胰岛β细胞增殖的影响及可能的作用机制。方法 首先利用CRISPR/Cas9技术,在小鼠胰岛素瘤β细胞NIT-1细胞株中敲除TRIF基因,得到敲除TRIF基因细胞株。再以敲除TRIF基因的NIT-1细胞株为研究对象,用DMEM培养基进行细胞培养,当细胞处于增殖期比例达到80%～90%时进行实验分组,分为空白对照组和实验组,实验组予以不同水平(30、60、90μg/mL)的TLR3特异性激动剂病毒聚肌胞(PIC)刺激,刺激干预48 h后再检测细胞增殖、细胞周期与凋亡蛋白表达,以及核转录因子-κB(NF-κB)的mRNA和蛋白表达。结果 与空白对照组相比,PIC刺激敲除TRIF基因后的NIT-1细胞株,细胞停留在G₀/G₁期细胞的比例明显上调,而在S期和G₂/M期的细胞比例出现明显下调,差异均有统计学意义(P<0.05);CyclinD1表达在不同水平的PIC刺激下明显下调(P<0.05);细胞因子NF-κB和凋亡蛋白Caspase-3的表达在不同水平...