SD大鼠抗日本血吸虫感染机理的初步研究

目的　对SD大鼠天然抗日本血吸虫感染机理进行初步研究。　方法　用免疫印迹技术分析正常SD大鼠血清(NRS)、感染SD大鼠血清 (IRS)对日本血吸虫成虫可溶性抗原 (AWA)的识别 ;并用间接ELISA方法检测NRS抗AWA、日本血吸虫可溶性虫卵抗原 (SEA)、日本血吸虫可溶性肺期童虫抗原 (SSA)的IgG抗体及亚类 ;并观察了NRS、去补体血清对体外培养的童虫的杀伤作用。　结果　NRS可识别AWA中的 75、47、3 4.5和 2 3ku的抗原分子 ,IRS则主要识别分子质量为 62～ 86、5 4.7、47、3 4.5、3 0 .3和 2 3ku的特异性条带 ;NRS抗AWA、SEA、SSA特异性IgG1 抗体水平明显高于正常昆明鼠血清中相应的抗体水平 ,而IgG2b则无明显增高 ;SD大鼠去补体血清在体外对童虫的杀伤作用低于正常血清 ,培养 48h童虫的死亡率分别为 41.0 %和 76.2 %。　结论　SD大鼠血清中存在天然抗日本血吸虫感染的抗体 ,此抗体在SD大鼠血清的杀伤机制中起重要作用。     

SD大鼠抗日本血吸虫感染机理的初步研究

目的对SD大鼠天然抗日本血吸虫感染机理进行初步研究。方法用免疫印迹技术分析正常SD大鼠血清(NRS)、感染SD大鼠血清(IRS)对日本血吸虫成虫可溶性抗原(AWA)的识别；并用间接ELISA方法检测NRS抗AWA、日本血吸虫可溶性虫卵抗原(SEA)、日本血吸虫可溶性肺期童虫抗原(SSA)的IgG抗体及亚类；并观察了NRS、去补体血清对体外培养的童虫的杀伤作用。结果NRS可识别AWA中的75、47、34．5和23ku的抗原分子．IRS则主要识别分子质量为62～86、54．7、47、34．5、30．3和23ku的特异性条带；NRS抗AWA、SEA、SSA特异性IgG1抗体水平明显高于正常昆明鼠血清中相应的抗体水平，而IgG2b则无明显增高；SD大鼠去补体血清在体外对童虫的杀伤作用低于正常血清，培养48h童虫的死亡率分别为41．0%和76．2％。结论SD大鼠血清中存在天然抗日本血吸虫感染的抗体，此抗体在SD大鼠血清的杀伤机制中起重要作用。     

日本血吸虫门脉内童虫表膜抗原组分及其保护性免疫力研究

目的探讨日本血吸虫门脉内童虫表膜抗原(SjHmAg)的免疫特性,观察其抗日本血吸虫(Sj)的保护效果。方法用SDS-PAGE电泳技术分析SjHmAg蛋白组分,酶联免疫电转移印迹(EITB)分析感染兔血清(IRS)和正常兔血清(NRS)对SjHmAg的识别;用完整SjHmAg免疫昆明鼠3次,分别在0、2、4周进行,第6周每鼠经腹部感染40±1条Sj尾蚴,42天后剖杀,计数虫数及肝卵数。结果用SDS-PAGE电泳获得SjHmAg主带7条,IRS主要能识别SjHmAg23、33和63kDa等10个抗原组分;间接ELISA测其抗体滴度>1:6400,与对照组相比,SjHmAg免疫小鼠的减虫率为16.2％,减卵率为55.4％。结论用SDS-PAGE获得了不同分子量的SjHmAg蛋白,EITB鉴别出具有免疫活性的蛋白分子,且SjHmAg对Sj攻击感染及雌虫生植似有一定的抗性。     

日本血吸虫不同病期血清抗体对虫源性及卵源性组分抗原的识别及鉴定

目的分析不同病期感染兔血清所识别的日本血吸虫成虫抗原(adult worm antigen,AWA)和可溶性虫卵抗原(soluble egg antigen,SEA)的组分蛋白,探索可能与Th1/Th2极化相关的主要功能性抗原。方法常规方法制备成虫和虫卵抗原,用SDS-PAGE电泳和Western blotting技术,分析鉴定感染动物血清抗体识别的虫源性及卵源性组分抗原。结果不同病期血清抗体识别的AWA、SEA组分蛋白谱不同。其中AWA中的11kDa、37kDa、57kDa、79kDa、95kDa a组分分子能被各病期(2~20w)感染血清抗体所识别;SEA中的10kDa、18kDa、41kDa、47kDa、74kDa则可被急性期及以后各病期(6~20w)血清抗体所识别,25kDa、32kDa仅为急性期(6~12 w)血清抗体所识别,提示这些组分抗原可能为血吸虫免疫应答的主要功能性抗原,并且同感染血清的反应性明显与病期相关。结论以上AWA和SEA的组分蛋白和不同病期感染血清的反应与血吸虫感染后的Th1/Th2免疫偏移相关,其中能被急性期及以后各病期血清抗体共同识别的SEA主要功能性组分抗原中可能存在诱导Th2极化反应的重要抗原分子。     

树突状细胞和巨噬细胞诱导抗日本血吸虫保护性免疫作用比较(英文）

目的 比较树突状细胞(DCs)和巨噬细胞诱导抗日本血吸虫感染的保护性免疫作用。方法 用日本血吸虫可溶性虫卵抗原(SEA)体外分别负载DCs和巨噬细胞,将负载和未负载的DCs和巨噬细胞分别免疫BALB/c小鼠3次,血吸虫尾蚴攻击感染42 d后门静脉灌注法收集成虫,计数肝脏中的虫卵,比较各组小鼠血吸虫成虫负荷和雌虫生殖能力,以评估DCs和巨噬细胞诱导抗日本血吸虫感染的保护性免疫作用.ELISA检测血清特异性抗体水平。结果 SEA负载的DCs免疫组小鼠减虫率为26.3%,减卵率为37.9%,明显高于SEA负载的巨噬细胞组(22.0%和30.7%)和未负载的DCs及巨噬细胞对照组(16.3%,17.3%和11.7%,12.0%),攻击感染后42 d各组小鼠血清特异性抗体水平均升高,以负载的DCs免疫组小鼠最为明显。结论 体外抗原负载后,DCs诱导的抗日本血吸虫感染的保护性免疫力高于巨噬细胞.     

日本血吸虫SIEA66-68kDa抗原的分离、纯化及免疫保护性研究

目的研究日本血吸虫未成熟虫卵可溶性抗原66-68kDa（SIEA66-68kDa）的动物免疫保护力,并对其作为天然分子疫苗的可行性进行评估。方法采用电泳切胶、电洗脱、超滤离心等技术,分离纯化SIEA66-68kDa天然分子抗原,免疫小鼠,待其产生抗体后进行尾蚴攻击感染（40尾/只）,计算减虫率和减卵率。结果 SIEA66-68kDa天然蛋白质分子能刺激机体产生抗日本血吸虫的作用,其减虫率为41.70%,每克肝脏减卵率为51.23%,雌虫子宫减卵率为29.30%,每克大肠减卵率为59.26%,每克粪便减卵率为45.17%,与对照组相比差异具有统计学意义（P〈0.05）。结论 SIEA66-68kDa天然分子抗原具有刺激小鼠产生较好的抗日本血吸虫感染的免疫保护作用,可作为抗日本血吸虫感染候选分子疫苗的靶标。     

血吸虫感染小鼠早期诊断抗原的研究

目的对已知的6种日本血吸虫抗原的早期诊断价值进行评价,为研制用于哨鼠早期诊断的免疫试剂提供候选抗原。方法用日本血吸虫尾蚴感染小鼠,收集感染前及感染后不同时间的小鼠血清。采用重组日本血吸虫中国大陆株23kDa膜蛋白大亲水性肽段与谷胱甘肽的融合表达蛋白（GST-HD）、可溶性虫卵抗原（SEA）、血吸虫四跨膜蛋白第二亲水基团（TSP2HD）、血吸虫虫卵蛋白（IPSE）、日本血吸虫虫卵毛蚴抗原（SjMP-10）及日本血吸虫信号蛋白（Sj14-3-3）作为诊断抗原,采用酶联免疫吸附试验检测感染血吸虫后不同时间小鼠血清中特异性抗体IgM和IgG水平,通过分析感染后不同时间点抗原特异性抗体水平变化及阳性率,筛选具有血吸虫感染早期诊断价值的抗原分子。采用免疫印迹试验进一步验证其对血吸虫急性感染早期诊断的价值。结果感染后第18、21、28天,抗GST-HD抗体IgM阳性率分别为60%、70%、100%,特异性IgG阳性率分别为40%、60%、90%;抗SEA抗体IgM阳性率为50%、60%、90%,特异性IgG阳性率为20%、50%、70%;抗TSP2HD抗体IgM阳性率为30%、40%、50%,特异性IgG阳性率为20%、30%、70%;抗IPSE抗体IgM阳性率为20%、30%、50%,特异性IgG阳性率为20%、30%、60%;抗SjMP-10抗体IgM阳性率为10%、20%、20%,特异性IgG阳性率为10%、20%、30%;抗Sj14-3-3抗体IgM阳性率为0、10%、20%,特异性IgG阳性率为0、10%、30%。以GST-HD融合蛋白和SEA为抗原,检测小鼠早期感染血吸虫的敏感性高于Sj14-3-3、IPSE、TSP、MP-10,检测IgM的敏感性高于IgG。免疫印迹试验结果显示,SEA中分子量在73kDa左右的蛋白条带可被感染后1周小鼠血清所识别,并随着时间推移反应加强。GST-HD最早出现反应的血清是感染后第10天小鼠血清,反应强度在感染后第5周达到最强。结论重组GST-HD融合蛋白与SEA中分子量约73kDa的蛋白分子具有血吸虫感染早期诊断价值,免疫印迹试验的敏感性比酶联免疫吸附试验高。     

日本血吸虫31kDa组织蛋白酶B DNA疫苗保护性免疫效果观察

目的观察日本血吸虫31kDa组织蛋白酶BDNA疫苗(Sj31B1N)在小鼠体内的保护性免疫效果.方法用Sj31B1N和Sj31B1N+pUCDNA疫苗肌注免疫BALB/C小鼠,用空白质粒载体VR1012做对照,在0、4、8周共免疫3次,每次免疫前及末次免疫后4周从尾静脉采血收集血清,经ELISA法检测小鼠血清抗体升高时,用日本血吸虫尾蚴攻击感染小鼠.结果Sj31B1N和Sj31B1N+pUC减虫率分别为24.2%和22.0%;肝卵减少率分别为34.9%和39.5%,每雌肝卵减少率分别为30.4%和35.3%.结论小鼠接种Sj31B1N后对日本血吸虫感染有减虫、减卵作用及抗雌虫生殖的作用.加质粒佐剂pUC未见有增强免疫效果的作用.     

日本血吸虫成虫38kDa天然分子抗原的分离纯化与免疫保护性的研究

目的研究日本血吸虫成虫可溶性抗原38kDa（SjAWA38kDa）的动物保护作用，并对SjAWA38kDa作为抗日本血吸虫病分子疫苗的可行性进行评估。方法用SDS-PAGE电泳、切胶、电洗脱、超滤等方法分离纯化SjAWA38kDa．继而用SjAWA38kDa免疫昆明小鼠，然后进行尾蚴攻击感染（40尾／只），进行减虫率和减卵率研究。结果SjAWA38kDa天然蛋白质分子能刺激机体产生抗日本血吸虫的作用，其减虫率为33．8％，减卵率为51．7％，有统计学意义（P〈0．05）。结论SjAWA38kDa分子抗原具有刺激机体产生抗日本血吸虫病的免疫保护作用，可以作为抗日本血吸虫病分子疫苗研究的靶标。     

日本血吸虫疫苗候选分子的基因克隆、表达及特性鉴定

本研究用日本血吸虫（Sj）成虫抗原免疫的免血清从日本血吸虫中国大陆株成虫cDNA库筛选出Sj22．6基因克隆；用根据曼氏血吸虫23kDa膜抗原（Sm23）的编码基因设计的引物，以PCR法从日本血吸虫成虫CDNA库扩增出Sj23基因；用根据日本血吸虫菲律宾林的磷酸丙糖异构酶（SjTPI）基因设计的引物，以RT－PCR从日本血吸虫中国大陆株成虫mRNA扩增出SjTPI基因；并测得了上述3个基因的核苷酸序列；通过与国外有关单位合作研究，获得日本血吸虫中国大陆株肌球蛋白的62kDa肽段（Sj62）的编码基因克隆．Sj22．6、SjTPI及Sj62的编码基因巴克隆入质粒pGEX并获得表达；Sj23基因克隆入杆状病毒，在家蚕幼虫体内获得表达．用Glutathione－Sepharose4B（GS4B）已纯化出重组的Sj22．6（rSj22．6）、Sj62（rSj62）及SjTPI。Sj22．6、Sj23、SjTPI和Sj62基因的表达产物均可被Sj重感染的兔血清识别；用rSj22．6免疫家兔和小鼠，均可诱生明显升高的IgG抗体，其可特异地识别rSj22．6，还可识别成虫抗原中天然的相应分子，但不识到虫卵抗原中任何成份．用rSj22．6对昆明鼠及BALB／C小鼠分别作免疫攻击实验，前者可产生38.93％的减虫率，后者可产生32．1％－35.27％的减虫率和28．4％的总体减卵率。Sj22．6／Sj26GST融合蛋白可诱导BALB     

日本血吸虫尾蚴成虫及虫卵的早期诊断组分抗原分析

目的寻找具有血吸虫病早期诊断价值的组分抗原.方法以感染后不同时间的兔血清,用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）和免疫印迹试验（Western blotting）方法,对日本血吸虫尾蚴、成虫和虫卵中的可溶性抗原的成分进行免疫分析.结果可溶性尾蚴抗原（SCA）94、48、41、40 kDa和38 kDa组分抗原最早出现免疫印迹反应,能被感染后2周兔血清所识别,可被感染后3周兔血清识别的SCA 71、23 kDa组分抗原反应最强.可溶性成虫抗原（AWA）最早出现反应的组分抗原是71、58 kDa,能被感染后3周兔血清所识别.可溶性虫卵抗原（SEA）最早出现反应的组分抗原是270、151、73、69、50 kDa和24 kDa,能被感染后4周兔血清所识别.结论 SCA 94、71、48、41、40、38、23 kDa,AWA 71、58 kDa和SEA 270、151、73、69、50、24 kDa能被急性感染兔血清所识别,是具有潜在早期诊断价值的组分抗原.     

日本血吸虫成虫组分抗原的分离及小鼠免疫试验

目的 分离日本血吸虫可溶性成虫抗原(AWA)中的组分抗原，分析其诱导的抗血吸虫的免疫保护性。方法 电泳层析法分离日本血吸虫AWA中的组分抗原，计算各组分抗原的分子量，并分析其免疫学活性。将各组分抗原分别免疫小鼠，攻击感染日本血吸虫尾蚴，感染后45d剖杀，观察各组分抗原的免疫保护效果。结果 采用电泳层析法分离获得多个组分抗原，选择收集其中4个较纯的组分抗原，分子量分别为52kD、63kD、67kD和74kD；其中63kD和67kD抗原与感染血清有强的反应，而52kD和74kD抗原则反应弱；4种组分抗原均与AWA的免疫血清反应。63kD抗原诱导的免疫保护力水平较52kD、67kD和74kD抗原好。结论 电泳层析法分离的4个血吸虫组分抗原有良好的免疫原性，且63kD抗原有一定的免疫保护性。     

Phage displaying peptides mimic schistosoma antigenic epitopes selected by rat natural antibodies and protective immunity induced by their immunization in mice

AIM: To obtain the short peptides mimic antigenic epitopes selected by rat natural antibodies to schistosomes, and to explore their immunoprotection against schistosomiasis in mice. METHODS: Adults worm antigens (AWA) were analyzed by sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) and enzyme-linked transferred immunoblotting methods with normal SD rat sera (NRS). The killing effects on schistosomula with fresh and heat-inactivated sera from SD rats were observed. Then the purified IgG from sera of SD rats was used to biopan a phage random peptide library and 20 randomly selected positive clones were detected by ELISA and 2 of them were sequenced. Sixty female mice were immunized thrice with positive phage clones (0, 2nd, 4th wk). Each mouse was challenged with 40 cercariae, and all mice were killed 42 d after challenge. The worms and the liver eggs were counted. RESULTS: NRS could specifically react to the molecules of 75 000, 47 000, 34 500 and 23 000 of AWA. Sera from SD rats showed that the mortality rate of schistosomula was 76.2%, and when the sera were heat-inactivated in vitro, the mortality rate was decreased to 41.0% after being cultured for 48 h. The specific phages bound to IgG were enriched about 300-folds after three rounds of biopanning. Twenty clones were detected by ELISA, 19 of them bound to the specific IgG of rat sera. Immunization with these epitopes was carried out in mice. Compared with the control groups, the mixture of two mimic peptides could induce 34.9% (P = 0.000) worm reduction and 67.6% (P = 0.000) total liver egg reduction in mice. Two different mimic peptides could respectively induce 31.0% (P= 0.001), 14.5% (P= 0.074) worm reduction and 61.2% (P= 0.000), 35.7% (P = 0.000) total liver egg reduction. The specific antibody could be induced by immunization of the mimic peptides, and the antibody titer in immunized mice reached more than 1:6 400 as detected by ELISA. CONCLUSION: Specific peptides mimic antigenic molecules can be obtained by biopanning the phage random peptide library and a partially protective immunity against schistosome infection can be stimulated by these phage epitopes in mice.     

Natural antibodies in Microtus fortis react with antigens derived from four stages in the life-cycle of Schistosoma japonicum.

The levels of antibodies which react with the cercarial antigens (CA), schistosomulum stage antigens (SSA), adult-worm antigens (AWA) and soluble egg antigens (SEA) of Schistosoma japonicum were investigated in Microtus fortis and albino mice, using an indirect ELISA. The M. fortis studied fell into three groups: animals caught in the wild; laboratory-bred animals left unchallenged; and laboratory-bred animals that had been challenged with S. japonicum (30 cercariae/animal) 15 days previously. There were also three groups of albino mice: those without infection; those studied 15 days after challenge infection; and those investigated 42 days after infection. The antibodies detected at the highest levels in the laboratory-bred, uninfected voles and in the wild-caught animals were those reacting with SSA, followed, in descending order, by those reacting with AWA, CA and SEA. The levels of natural antibodies to SSA and AWA in these voles were significantly higher than the corresponding levels observed in the uninfected mice and even in the mice infected 15 days previously. The levels of antibodies reacting with CA, SSA, SEA and AWA in the experimentally infected M. fortis were 1.9-, 2.2-, 1.5- and 2.1-fold higher, respectively, than those in the laboratory-bred but uninfected voles. The observations indicate that even uninfected M. fortis produce antibodies which react with S. japonicum, and this presumably results in the natural resistance to infection which has been reported in these rodents.     

日本血吸虫31／32kDa抗原纯化及诊断应用的研究

采用超凝胶柱层析结合超滤、透析、沉淀等方法分离纯化了日本血吸虫成虫３１／３２ｋＤａ抗原。经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、银染和免疫印迹分析，证明免疫及生化纯度。银染及ＰＡＳ证实此抗原是一种不含糖的多肽类组分。用于ＥＬＩＳＡ和ＩＨＡ诊断日本血吸虫病，与ＳＥＡ同样敏感，而特异性明显较优。     

日本血吸虫31/32kDa分子抗原快速诊断试剂盒的研制与现场应用

目的基于纯化的日本血吸虫31／32kDa分子抗原,建立一种敏感、特异、简便、快速诊断血吸虫病的试剂盒。方法采用Chappell方法分离纯化Sj31／32kDa抗原并建立快速ELISA,检测急、慢性血吸虫病人,并以肺吸虫病人、肝吸虫病人及正常人血清作为平行对照。结果血吸虫病人457例,阳性检出率为94．3％,67例肺吸虫病人及76例肝吸虫病人血清均未出现明显交叉反应,正常人群假阳性率为1％。结论提示采用纯化的优势诊断抗原分子建立的快速诊断试剂盒有较好的现场应用潜能,且具有简便、快速、无需特殊设备等优点,值得推广应用。     

日本血吸虫不同抗原检测家兔感染及治疗前后IgG/IgM抗体动态

目的探索特异性抗体检测在日本血吸虫病诊断和疗效考核中的潜在应用价值。方法ELISA方法采用可溶性虫卵抗原(SEA)、成虫抗原(AWA)检测人工感染家兔治疗前后血清中特异性IgGI、gM抗体,评价特异性抗体检测的诊断和疗效考核价值。结果用SEA抗原检测IgM抗体,发现感染后7周不管治疗与否,抗体水平均快速下降。与SEA相比,感染后AWA特异性IgM抗体上升时间早,且治疗后5个月仍为阳性。SEA特异性IgG抗体水平最高,但治疗后5个月仍为阳性。结论采用SEA抗原检测IgG用于血吸虫病诊断效果较好;对早期感染的诊断可以考虑SEA抗原检测IgM抗体作辅助。AWA抗原检测IgM,对急、慢性血吸虫感染均有较好诊断效果。采用这两种抗原检测IgG和IgM,均无考核疗效意义。     

洞庭湖区东方田鼠天然抗日本血吸虫抗体水平的初步研究

目的：探讨洞庭湖区东方田鼠天然抗日本血吸虫尾蚴（ Ｃ Ａ）、童虫（ Ｊ Ａ）、成虫（ Ａ Ｗ Ａ）及虫卵抗原（ Ｓ Ｅ Ａ）的抗体检出率及其水平。方法：应用间接 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ 对未感染野生东方田鼠（ Ｗ Ｍ Ｆ）、室内繁殖东方田鼠（ Ｂ Ｍ Ｆ）和感染日本血吸虫尾蚴１５ ｄ 的室内繁殖东方田鼠（ Ｂ Ｍ Ｆｉ１５ ）的抗日本血吸虫 ４ 种不同阶段抗原的抗体进行了检测,并与昆明小鼠感染尾蚴１５ ｄ（ Ａ Ｍｉ１５ ）、４２ ｄ（ Ａ Ｍｉ４２）和未感染组（ Ａ Ｍ）作了对比。结果： Ｗ Ｍ Ｆ和 Ｂ Ｍ Ｆ的抗日本血吸虫抗体检出率以抗 Ｊ Ａ Ａｂ 最高（９４． ６％ 和 ９４． ４％ ）, 抗 Ａ Ｗ Ａ Ａｂ 其次（８５． ５％ 和 ８３． ３％ ）, 抗 Ｓ Ｅ Ａ Ａｂ （５８． １％ 和５９．４％ ）,抗 Ｃ Ａ Ａｂ（１４．３％ 和１３．９％ ）最低。 Ｂ Ｍ Ｆｉ１５ 的４ 种抗体水平较未感染组显著升高, 抗 Ｊ Ａ Ａｂ 和抗 Ａ Ｗ Ａ Ａｂ 的检出率为 １００％ ,抗 Ｓ Ｅ Ａ Ａｂ 为８４．４％ ,抗 Ｃ Ａ Ａｂ 为６５．６％ ; Ｗ Ｍ Ｆ、 Ｂ Ｍ Ｆ和 Ｂ Ｍ Ｆｉ１５ 的４ 种抗体水平呈相同趋势（ Ｊ Ａ＞ Ａ Ｗ Ａ＞ Ｓ Ｅ Ａ＞ Ｃ Ａ）, Ｂ Ｍ Ｆｉ１５