耐热脂肪酶产生菌的筛选及其产酶条件和酶学特性的研究

从福州温泉等地取样品若干，筛选耐热脂肪酶产生菌，最终获得一株脂肪酶产生菌wi-2，初步鉴定为细菌。经发酵产酶条件优化得到：Wi-2最佳产酶条件为：发酵周期35h，培养温度37℃（2，培养起始pH6．5，摇瓶装量25ml／250ml，接种量7％。用硫酸铵提取wi-2发酵液中脂肪酶，进行酶学特性的初步研究，结果：最适反应pH为8．2，最适反应温度为45℃（2。酶的热稳定性：在40℃下处理100min，酶活基本不损失，在60℃下处理100min，酶残余酶活为40％以上。     

产冷活性β-半乳糖苷酶的菌株的筛选、鉴定及酶特性研究

目的 筛选新的产冷活性β-半乳糖苷酶的菌株,为解决目前工业用β-半乳糖苷酶耗能大、pH要求高的难题创造条件.方法 通过含X-gal(5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷)的筛选培养基在油田附近土壤中分离纯化菌株并进行鉴定,以邻硝基苯β-D-半乳吡喃糖苷(ONPG)为底物测定酶特性.结果 获得了一株新的产冷活性β-...     

大蒜蒜酶的提取纯化及其酶学性质

大蒜为百合科多年生草本植物,可药食两用,一直受到青睐。大蒜主要具有抗感染、防治心脑血管疾病、抗肿瘤等功效。目前公认大蒜的功效成分是蒜酶(alliinase,EC4.4.1.4)催化裂解蒜氨酸(alliin)产生的大蒜辣素(al-licin)、阿藿烯(ajoene)等系列含硫有机化合物。主要从大蒜的功效成分、蒜酶的提取纯化、蒜酶的酶学性质及展望等方面综述了蒜酶的研究进展。表明大蒜制剂以其独特的显著功效,必将为人类的健康做出巨大贡献。     

癌组织和正常组织腺苷脱氨酶性质的比较

测定３６ 例共８ 种癌组织和癌旁正常组织腺苷脱氨酶（ＡＤＡ）的活性;从人胃癌及正常胃组织中纯化ＡＤＡ达电泳纯并比较它们的酶学及免疫学性质。结果表明：癌组织中ＡＤＡ活性显著高于癌旁正常组织（ｔ＝ １０５６８,Ｐ＜ ００１）。胃癌及正常胃ＡＤＡ 的分子量和等电点相近,Ｎ末端均匀为精氨酸,二者的活性均可被对氯汞苯甲酸抑制,二硫苏糖醇可部份恢复被抑制的活性,免疫双向扩散试验显著,二者有相同的抗原性。但是,胃癌ＡＤＡ的Ｋｍ 较大,热稳定性较差。     

γ-谷氨酰转肽酶酶学性质的研究

目的了解地衣芽孢杆菌菌体细胞中γ-谷氨酰转肽酶的一些基础酶学性质。方法采用溶菌酶法破碎细胞壁,经硫酸铵沉淀后透析得到粗酶后,采用紫外分光光度法测定该酶的酶活力。结果该酶在25～35℃的温度范围有很好的耐受性,在碱性条件下保持一定的活性,最适反应温度为45℃,最适反应pH值为8.0,Ca2＋、Mg2＋等金属离子在适当浓度时对酶活性有促进作用。结论本实验为利用该酶转化生产茶氨酸提供了依据。     

苯丙氨酸氨解酶的包被及其对家兔肠道苯丙氨酸吸收的影响

目的考察苯丙氨酸氨解酶(L-phenylalanine ammonia-lyase,PAL)的包被条件,并考察其对家兔肠道苯丙氨酸吸收的影响。方法绿豆芽(Phaseolus radiatusL.)来源的PAL通过光照、硫酸铵盐析和不同的柱层析等制备过程,使PAL纯化到电泳纯。酶活性的测定用紫外分光光度法,苯丙氨酸含量采用荧光比色法。结果PAL被纯化了74.6倍,并经聚丙烯酰胺凝胶(PAG)固定化(T∶C=8∶30)。该固定化酶比活0.153 U.g-1,固定化百分数为64%。将PAG固定化酶在人工胃液和人工胰液中保温不同时间后,发现该固定化PAL在1 h后全部失活。将PAG固定化的PAL过120目尼纶筛网制成微粒,再用硝酸纤维膜包被,在人工胃液中不同时间保温,发现酶活性可维持2.5 h,包被的酶颗粒在光镜下呈球形,直径2~11.4μm,自然干燥保存1个月不破坏。用硝酸纤维膜包被的PAL与L-苯丙氨酸同时注入家兔小肠腔内,与正常对照比较,PAL对苯丙氨酸有明显消除作用,吸收量减少,血苯丙氨酸浓度上升缓慢。结论该包被条件温和,PAL损失减少,预期可作为口服的酶制剂应用于临床。     

短尾蝮蛇毒磷脂结合抗凝蛋白的酶学性质研究

目的:研究短尾蝮蛇毒磷脂结合抗凝蛋白(Phospholipid-binding anticoagulation protein,PBAP)的酶学性质.方法:通过对短尾蝮蛇毒PBAP精氨酸脂酶活性的测定,研究丝氨酸蛋白酶抑制剂苯甲基磺酰氟(Phenylmethanesulfonyl fluoride,PMSF)、胰蛋白酶、抑肽酶、二价金属离子(Ca2+、Mg2+、Co2+、Mn2+、Zn2+)、温度、pH、金属络合剂乙二胺四乙酸(Ethylene diamine tetraacetic acid,EDTA)对PBAP的影响.结果:丝氨酸蛋白酶抑制剂PMSF、胰蛋白酶对PBAP精氨酸酯酶有抑制作用.抑肽酶、Ca2+、M2+、Co2+、Mn2+、Zn2+、二胺四乙酸对PBAP精氨酸酯酶活性无明显影响,温度在20℃～90℃,pH在4.0～11.0的条件下,PBAP的精氨酸酯酶性质稳定.结论:丝氨酸蛋白酶抑制剂PMSF、胰蛋白酶对PBAP精氨酸酯酶有抑制作用,温度在20℃～90℃,pH在4.0～11.0的条件下,PBAP的精氨酸酯酶性质稳定.     

苯丙氨酸解氨酶固定化的初步研究

本文报道制备固定化苯丙氨酸解氨酶(PAL)的初步结果。采用包埋和共价结合两种方法将PAL固定化。结果表明前者的偶联率高于后者。冷冻干燥,4°下贮存6个月后,活性存留分别为89％和76％,说明固定化后稳定性良好。包埋法采用不同T/C比(T为凝胶总浓度;C为交联百分比)的聚丙烯酰胺凝胶(PAG)包埋,结果证明按T/C比为3:30时固定化的酶活性明显高于T/C比为8:19者,二者的相对活性分别为58％和6％。用戊二醛将PAL固定于Bio—Gel P—300上的酶活性高于用碘化—1—[环已基—3—(3—二甲氨丙基)]碳二亚胺(CDC)固定化的酶,相对活性分别为63％和18％。     

延胡索酸酶产生菌的筛选

L-苹果酸是体内Krebs循环的成员之一,也是氨基酸输液的组成之一,对肝功能异常尤其是高血氨症具有良好的疗效:作为酸味剂广泛应用于果汁,汽水、糖果等食品生产。L-苹     

组织细胞肉瘤L-Ⅱ高侵袭转移瘤株的筛选及鉴定

目的取小鼠组织细胞肉瘤L-Ⅱ的肺转移灶细胞体内连续传代，筛选出L-Ⅱ高侵袭转移瘤株。方法L-Ⅱ瘤细胞接种小鼠胁部皮下，取其肺转移灶接种另一小鼠体内，再取其肺转移灶传代，如此数代后，建立L-Ⅱ肺高转移模型。检测：形态学，免疫组化，核型分析，流式细胞分析，肿瘤生长曲线，小鼠荷瘤生存时间，肺转移率。结果目前传至第7代，第1、第7代形态学上比较，光镜下无明显差别，染色体均为亚四倍体核型，众数66～70条。细胞周期1／7：G1期：70．1／50．8，S期：15．9／27．7，G期：14．0／21．6。DNA倍体为亚四倍体。平均荷瘤生存时间为22／16．33天，P〈0．01。免疫组化nm23第1代表达弱阳性，第7代未见表达。肺转移率：1／7为25％（3／12）／66．7％（8／12），P=0．099。结论筛选出L-Ⅱ高侵袭转移瘤株，为肿瘤的侵袭和转移的研究提供了理想的实验模型。     

酵素菌中芽孢杆菌的分离鉴定

目的　对分离自酵素菌的 18株芽孢杆菌 (Bacillus)进行分类鉴定。方法　观察实验菌株的形态大小、染色特征、动力、芽孢的形态位置 ,菌细胞苏丹黑颗粒染色。触酶反应 ,气体要求。糖醇类发酵产酸、产气试验 ,有机酸盐利用试验 ,酪蛋白、酪氨酸、七叶苷、尿素、明胶、淀粉、土温 -80水解试验。吲哚试验 ,V P反应 ,硝酸盐还原试验 ,二羟丙酮形成试验 ,生长因子试验、厌氧生长试验 ,石蕊胨化试验。马尿酸盐结晶试验 ,卵磷脂酶试验 ,溶菌酶抗性试验 ,进行表型性状的观察研究。结果　 9株芽孢菌被鉴定为地衣芽孢杆菌 (Bacilluslicheniformis) ;6株芽孢菌被鉴定为枯草芽孢杆菌(Bacillussutilis) ;1株芽孢菌鉴定为腊状芽孢杆菌 ;1株芽孢菌鉴定为环状芽孢杆菌 ;1株芽孢菌被鉴定为巨大芽孢杆菌。结论　地衣芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌、环状芽孢杆菌和巨大芽孢杆菌是酵素菌的主要活性菌种。     

广东登革3型病毒株的分离培养和鉴定

目的 对2009年发生于广东地区的3例家庭聚集性登革热患者血清进行登革病毒的鉴定和病毒株的培养分离.方法 用胶体金法检测患者血清中登革病毒特异性IgM、IgG抗体;C6/36细胞培养患者血清中登革病毒;RT-PCR扩增C-PrM基因序列的片段以检测患者血清中登革病毒RNA,PCR产物经序列测定后进行生物信息学分析.结果 3例患者血清学检测均为登革病毒特异性IgM阳性、IgG阴性;特异性RT-PCR产物长约290bp,经琼脂糖电泳和测序分析,证实3例患者血清中均存在登革3型病毒;从1例患者血清中培养分离到了登革病毒株,经RT-PCR和测序证实为登革3型病毒.结论 2009年发生于广东地区的3例登革热患者经病毒培养和分子生物学鉴定,证实均为登革3型病毒感染.     

酵素菌中乳酸菌的分离鉴定

目的　对分离自酵素菌的 2株乳杆菌 (Lacotbacillus)进行分类鉴定。方法　观察实验菌细胞的形态大小 ,染色特征。葡萄糖氧化试验、氧化酶试验、触酶试验、生长因子试验、硝酸盐还原试验、葡萄糖产气试验。阿拉伯糖、葡萄糖、纤维二糖、乳糖、麦芽糖、甘露醇、松三糖、密二糖、棉子糖、核糖、木糖、鼠李糖、甘油等糖醇类发酵产酸试验。厌氧生长试验。菌株的 15℃生长试验、4 5℃生长试验。乳酸产气试验。营养要求、底物利用、代谢途径及代谢产物检测等 ,进行表型性状的观察分析。结果　 2株乳酸菌 (Lacotbacillus)被鉴定为植物乳杆菌 (Lactobacilluaplantarum)。结论　植物乳杆菌 (Lactobacilluaplantarum)是酵素菌的主要活性菌种。     

金褐霉素高产菌株的推理选育

为了得到金褐霉素高产菌株,采用紫外和化学诱变方法,再通过对突变株推理选育得到一株制霉菌素抗性的菌株NTG-UV-35的产素单位最高,达到2330．43μg／mL,比出发菌株R22-103提高了87.25％;该菌株传代的稳定性试验表明：NTG-UV-35有较稳定的产抗生素遗传特性。     

螺旋霉素产生菌抗噬菌体菌株的选育

用Ｃｏ＾６０处理螺旋霉素产生菌ＰＳ，获得了一株抗噬菌体且摇瓶发酵单位比原菌株稍高的突变株Ｒ１０，继而对Ｒ１０进行理性化筛选，在加有２－脱氧葡萄糖的分离培养基上分离到一株抗噬菌体稳定、摇瓶发酵单位又比Ｒ１０高２０％的新突变株，且其摇瓶发酵周期缩短１２ｈ、能耐受更高浓度的自身代谢产物－螺旋霉素。     

仙台病毒黑龙江省地方株的分离与鉴定

目的自本省普通级实验动物中分离并鉴定出仙台病毒地方毒株,为建立仙台病毒血清抗体检测方法奠定基础。方法通过鸡胚尿囊腔传代自普通级小鼠肺脏分离病毒,经血凝实验、血凝阻断实验和结构基因序列测定对分离得到的病毒进行鉴定;大量繁殖病毒并通过蔗糖密度梯度离心纯化,免疫动物制备阳性血清,用标准试剂盒检测阳性血清效价。结果自150份小鼠肺脏分离到2株有血凝性的病毒,经形态学、血清学和结构基因序列测定鉴定为仙台病毒,命名为SV-HLJ。SV-HLJ与标准毒株Fushimi核蛋白基因(N)的核苷酸、氨基酸同源性分别为99·6%和99·0%。结论分离并鉴定出了仙台病毒黑龙江省地方毒株,为检测试剂盒的研制奠定了基础。     

雄甾-4-烯-3,17-双酮转化菌株的筛选及转化产物的鉴定

目的甾体化合物雄甾-4-烯-3,17-双酮（andros-t 4-ene-3,17-dione,4AD）是制造甾体激素类药物的关键药物中间体之一,开展4AD的微生物转化,以探索具有新活性的4AD衍生物的合成。方法本研究通过摇瓶培养转化,TLC分析,筛选能够对4AD进行有效转化的菌株,利用硅胶柱层析对转化产物进行分离纯化,通过TOF-MS、IR、1 HNMR、13 C NMR光谱数据分析,同时与相关文献报道结合,确定转化产物的结构。结果本研究筛选到了一株能够对4AD进行有效转化的菌株,初步确定其为茄病镰孢菌（Fusarium solani）,得到2种转化产物：具有较大生物活性潜力的17-hydroxy-pregen-1,4-dien-3-one和重要的药物中间体雄二烯二酮（ADD）。结论本研究筛选得到的茄病镰孢菌能够对4AD进行有效转化,对于利用微生物转化的方法生产17位羟基化甾体物质和ADD具有较大的应用潜力。     

宫颈癌相关新基因的筛选、克隆及鉴定

目的:筛选、克隆及鉴定宫颈癌相关基因———BLCAP。方法:利用基因芯片技术对1例原发性宫颈癌患者的癌组织及其癌旁正常组织进行分析;将在宫颈癌组织中表达显著降低的BLCAP基因克隆到pET-28(a)表达载体上,以构建原核表达重组质粒pET-28(a)-BLCAP,通过PCR、限制性内切酶酶切和DNA测序等技术鉴定阳性重组子。结果:通过基因芯片分析发现存在表达差异的原癌和抑癌基因共11条,其中表达降低最明显的是BLCAP基因。构建的重组表达质粒经PCR、酶切和DNA测序鉴定与预期的结果一致,即BLCAP基因共264 bp,基因序列无改变,基因插入后阅读框(ORF)正确。结论:筛选出了在宫颈癌中表达显著降低的BLCAP基因并成功构建了pET-28(a)-BLCAP原核表达质粒,为表达BLCAP目的蛋白及研究该蛋白的性质奠定了基础。     

纯合子NEOr转基因小鼠品系的建立及鉴定

目的　建立清洁级Neor 转基因小鼠纯合子品系。方法　通过胚胎移植生物净化方法获得 1 0只清洁级NeorF1 小鼠 ,按孟德尔遗传法则交配 ,用PCR、Southernblot杂交和交配实验检测相结合的方法筛选纯合子。结果　选育出 4只纯合子 ,并建系。该纯合转基因小鼠与野生型小鼠交配制备的胎儿成纤维细胞具有G4 1 8抗性 ,可作为ES细胞基因打靶培养中的饲养层细胞。结论　通过微生物学和遗传学上对Neor 转基因小鼠进行质量控制 ,使Neor 转基因小鼠达到了清洁级 ,并建立纯合子品系。