脂多糖受体CD14通过核因子-κB途径参与大鼠急性肝功能衰竭的动态观察

目的 观察CD14、核因子(NF)-κB在D-氨基半乳糖介导的大鼠急性肝功能衰竭模型中的动态变化规律.方法 用D-氨基半乳糖诱导大鼠急性肝功能衰竭模型,在造模后6、12、24、36、48、72、120、168、240 h用鲎试剂检测门静脉脂多糖(LPS),RT-PCR法检测肝脏CD14 mRNA,免疫组织化学检测CD14和NF-κB蛋白表达.实验数据采用两样本t检验及直线相关.结果 CD14蛋白和CD14 mRNA在造模后6 h升高,48 h达高峰(37.13±17.65,0.716±0.089),与健康对照组(2.07±1.84,0.355±0.098)比较,差异有统计学意义(t=-13.236,t=-6.664,P＜0.01),72、120、168和240 h逐渐下降.NF-κB蛋白6 h升高,48 h达高峰(41.97±8.76),与健康对照组(2.33±2.02)比较,差异有统计学意义(t=-24.137,P＜0.01),72 h及以后逐渐下降(P＜0.01).LPS、ALT和AST在6 h有轻度升高,至24 h与健康对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.05),48 h达高峰(P＜0.01),72 h及以后逐渐下降(P＜0.01).相关性分析显示,CD14 mRNA、CD14蛋白与ALT、AST、LPS、NF-κB蛋白均有正相关性(r=0.698,P＜0.01).结论 CD14作为LPS的识别受体,可能通过NF-κB途径激活下游细胞因子,引起肝脏损伤.     

铜绿假单胞菌肺炎大鼠核因子-κB表达及二硫代氨基甲酸吡咯烷对其的影响

目的探讨NF-κB及其诱导TNFα在大鼠铜绿假单胞菌（PA）肺炎中的表达及二硫代氨基甲酸吡咯烷（PDTC）对其的影响。方法72只SD大鼠分为健康对照组、PA组、PDTC干预组。每组24只。PA组大鼠制作PA模型,PDTC干预组制作PA模型前腹腔注射PDTC200mg／kg体重。PA组、PDTC干预组接种铜绿假单胞菌悬液0．2ml（6×10^8CFU／m1）。观察大鼠肺组织形态学改变,免疫组化及Western blot检测肺组织NF-κB表达,RT-PCR检测肺组织TNFαmRNA表达。结果PA组大鼠肺组织明显充血、水肿,大量炎性细胞浸润;PDTC干预组大鼠肺组织充血、水肿等炎性表现较PA组明显减轻。PA组大鼠肺组织NF-κB表达阳性细胞明显增多,PDTC干预组NF—κB表达阳性细胞明显减少。Western blot显示,各时间点NF-κB表达不同,3h达高峰。RT—PCR显示,PA组TNFαmRNA高表达,以6h最为明显;PDTC干预组TNFαmRNA表达明显下调,与PA组相比,差异有统计学意义（P〈0．01）。结论NF-κB及其诱导的TNFα在PA肺炎中发挥重要作用,PDTC可能通过抑制NF-κB的活性减轻PA引起的肺损伤。     

异甘草酸镁对D-氨基半乳糖致急性肝衰竭大鼠模型的保护作用

目的探讨异甘草酸镁对D-氨基半乳糖致急性肝衰竭(ALF)大鼠模型的保护作用及其机制。方法 90只SD大鼠随机分为正常组(A组,n=10)、模型组(B组,n=20)、异甘草酸镁低剂量组(C组,n=20)、中剂量组(D组,n=20)和高剂量组(E组,n=20)。A组腹腔内仅注射等量无菌生理盐水,其余4组均一次性腹腔注射10%D-氨基半乳糖。C、D、E 3组在造模30 min后均于尾静脉注射异甘草酸镁注射液(25、50和100 mg/kg)。建模24和48 h后分别取肝组织行HE染色观察肝组织结构的病理变化,收集血清检测各组大鼠肝功能指标[ALT、AST、TBil、白蛋白(Alb)]、促炎症因子[肿瘤坏死因子(TNF)α、白细胞介素(IL)1β、干扰素(IFN)γ]和抑炎症因子[IL-4、IL-10、转化生长因子(TGF)β]水平。计量资料多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用SNK-q检验。结果 5组大鼠的血清ALT、AST、TBil和Alb水平比较差异均有统计学意义(F值分别为74.6、108.9、25.1、58.4,P值均0.05);与A组比较,B组血清ALT、AST和TBil水平显著升高,Alb水平显著降低(P值均0.05);与B组比较,C、D、E 3组ALT、AST、TBil水平显著降低,Alb水平上升,E组变化最明显,差异均有统计学意义(P值均0.05)。5组大鼠的TNFα、IL-lβ、IFNγ、IL-4、IL-10、TGFβ水平比较差异均有统计学意义(F值分别为75.1、58.9、25.4、43.6、66.4、86.8,P值均0.05);与A组比较,B组血清TNFα、IL-lβ、IFNγ、IL-4、IL-10、TGFβ水平显著升高,差异有统计学意义(P值均0.05);与B组比较,C、D、E 3组血清TNFα、IL-1β、IFNγ水平显著降低,IL-4、IL-10、TGF-β水平显著升高,E组变化最明显,差异均有统计学意义(P值均0.05)。结论异甘草酸镁可通过降低促炎因子、升高抗炎因子降低炎症反应,对ALF大鼠具有保护作用。     

生脉散对急性肝衰竭大鼠内毒素诱导抑制性-κBα及细胞因子的影响

目的:探讨生脉散对急性肝衰竭大鼠内毒素(LPS,即大肠杆菌脂多糖)诱导细胞因子水平及大鼠肠道组织抑制性-κBα(I-κBα)蛋白表达的影响.方法:采用D-氨基半乳糖(D-Gal)腹腔注射复制急性肝衰竭大鼠模型,观察LPS诱导2小时及8小时后生脉散对血清内毒素、细胞因子水平及大鼠肠道组织I-κBα蛋白表达的影响.结果:D-Gal能明显增加大鼠血清白细胞介素6(IL-6)、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)和白细胞介素1β(IL-1β)水平(P＜0.001),随着D-Gal作用时间延长,其增加的趋势明显减弱,但对血清LPS、肿瘤坏死因子(TNF-α)水平无明显影响(P＞0.05);生脉散能显著降低D-Gal肝衰竭大鼠血清IL-6、ICAM-1和IL-1β水平(P＜0.001,P＜0.05).LPS攻击2小时和8小时,能明显升高D-Gal大鼠血清LPS、TNF-α、IL-6、ICAM-1和IL-1β水平(P＜0.001);除在8小时对TNF-α无影响外(P＞0.05),生脉散能明显减轻LPS攻击D-Gal大鼠后对血清LPS、TNF-α、IL-6、ICAM-1和IL-1β水平的影响(P＜0.001,P＜0.05);采用Western blot方法,检测大鼠肠道组织胞浆蛋白I-κBα表达发现,LPS可调节肠道组织I-κBα蛋白表达,诱导NF-κB激活,生脉散可抑制NF-κB激活.结论:在急性肝衰竭模型中,LPS能增加TNF-α、IL-1β、IL-6和ICAM-1等炎症因子水平,诱导I-κBα表达;生脉散可降低LPS水平,并抑制LPS诱导的炎症因子水平和I-κBα在胞浆内的表达,阻断了炎性介质及LPS本身对机体的损伤.     

暴发性肝功能衰竭大鼠肝组织核因子-κB和诱导型一氧化氮合酶的表达及其意义

目的 探讨核因子-κB(NF-κB)在暴发性肝功能衰竭肝细胞炎性反应中的作用机制.方法 Wistar大鼠腹腔注射D-氨基半乳糖(D-Gain)和脂多糖(LPS)制作暴发性肝功能衰竭模型.免疫组织化学技术分别观察注药后2、4、8、12和24 h大鼠肝组织中NF-κB和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的表达情况,分析NF-κB、iNOS与暴发性肝功能衰竭的关系.结果 模型组NF-κB p65蛋白表达阳性细胞主要为肝细胞、库普弗细胞.造模后4、8和12 h时,核阳性表达的细胞数逐渐增多,明显高于对照组.2 h组主要是非实质细胞的胞质着色;而4、8、12和24 h组以肝细胞胞核着色为主.对照组不同时间点NF-κB p65蛋白表达差异无统计学意义(P＞0.05),模型组则随肝细胞坏死程度的加重而增加(r=0.694,P＜0.01).随着肝细胞炎性反应、坏死程度的增高,模型组肝细胞质iNOS表达逐渐增多(r=0.867,P＜0.01),以肝细胞表达为主.对照组肝细胞质iNOS表达较弱(P＞0.05).肝组织中NF-κB活化与iNOS表达呈正相关(r=0.801,P＜0.01).结论 NF-κB可能是暴发性肝功能衰竭肝细胞炎性反应、坏死过程中的关键环节.     

重症急性胰腺炎大鼠心肌核因子-κB激活和复方丹参注射液的干预作用

[目的]研究重症急性胰腺炎（SAP）心肌功能损害时心肌NF-κB的活化及复方丹参注射液的干预作用。[方法]63只SD大鼠随机分为假手术组（A组,n=9）、对照组（B组n=27）、复方丹参注射液治疗组（C组,n=27）,采用5％的牛磺胆酸钠胰胆管逆行注射方法建立SAP模型。ELISA法测定B、C组6h、12h、24h各时点及A组24h血TNF-α、IL-6含量,RT-PCR检测心肌NF-κBmRNA的表达,免疫组化法检测心肌NF-κB蛋白的表达,苏木精一伊红染色光镜下观察胰腺及心肌组织的病理变化。[结果]与A组比较,B组、C组大鼠心肌NF-κBmNA及NF-κB蛋白表达异常增高,TNF-α、IL-6呈进行性升高;与B组比较,C组心肌NF-κBnRNA及蛋白表达下调（P〈0．05）,血TNF-α、IL-6明显下降（P〈0.05）,C组胰腺及心肌组织的病理变化减轻。[结论]SAP大鼠的心肌损伤可能与循环中TNF-α、IL-6水平升高导致的心肌NF-κB活化有关,复方丹参注射液对SAP并发的心肌损伤具有防治作用。     

银杏苦内脂B对急性坏死性胰腺炎大鼠胰腺组织NF-κB p65、IκBα mRNA表达的影响

目的 观察NF-κB p65、IκBα mRNA在急性坏死性胰腺炎(ANP)大鼠胰腺组织中的表达以及银杏苦内脂B(BN52021)对其表达的影响.方法 180只Wistar大鼠随机分为对照组(NC组)、ANP模型组(ANP组)、BN52021治疗组(BN组),每组大鼠分别在术后1 h、2 h、3 h、6 h、12 h和24 h 6个时间点处死,抽血测定血淀粉酶含量,取胰腺组织行病理学检查,RT-PCR法检测NF-κB p65、IκBα mRNA表达.结果 血清淀粉酶和病理学改变符合ANP.BN52021能降低ANP大鼠的血清淀粉酶含量和改善胰腺的病理损害.ANP组和BN组NF-κB p65 mRNA均呈双峰改变,第1峰在1 h,第2峰分别在24 h和12 h,6 h时降至最低.ANP组NF-κB p65 mRNA表达在2 h、3 h、12 h和24 h较NC组显著增加(P ＜ 0.05或0.001),仅在1 h时较BN组有显著差异(P ＜ 0.041),其他时间点无显著差异;但较NC组各时点显著升高(P ＜ 0.05或0.001).ANP组IκBα mRNA表达仅在24 h点较NC组明显增加(P = 0.000),BN组在1 h、6 h和12 h较ANP组显著增加(P ＜ 0.01),在1 h、12 h和24 h也较NC组显著增加(P ＜ 0.01).结论 NF-κB p65 mRNA在ANP大鼠胰腺组织表达上调,IκBα mRNA仅在造模后24 h时表达上调.BN52021可能通过上调IκBα mRNA的表达,破坏NF-κBp65 mRNA和IκBα mRNA的平衡,从而发挥其治疗作用.     

糖尿病通过炎症反应加重大鼠脑缺血再灌注损伤

目的：探讨肿瘤坏死因子-α（tumornecrosisfactor-α,TNF-α）和核因子-κB（nuclear factor-κB, NF-κB）在糖尿病大鼠缺血再灌注损伤中的作用。方法36只健康雄性Sprague-Daw ley大鼠按随机数字表法分为正常血糖假手术组、正常血糖脑缺血再灌注组和糖尿病脑缺血再灌注组,每组12只。采用腹腔注射链脲佐菌素制作大鼠糖尿病模型,然后应用栓线法建立局灶性脑缺血再灌注模型,再灌注24 h行神经功能缺损评分,然后2,3,5-氯化二苯四氮唑染色检测脑梗死面积,蛋白质印迹法检测缺血侧皮质NF-κB和TNF-α表达水平。结果正常血糖假手术组、正常血糖脑缺血再灌注组和糖尿病脑缺血再灌注组神经功能评分分别为（0.00±0.00）分、（2.50±1.08）分和（3.20±1.03）分,差异有统计学意义（F=38.015,P<0.001）,且糖尿病脑缺血再灌注组神经功能缺损评分较正常血糖脑缺血再灌注组显著性加重（ P<0.05）。正常血糖假手术组、正常血糖脑缺血再灌注组和糖尿病脑缺血再灌注组梗死面积分别为（0.00±0.00）％、（33.09±5.17）％和（55.45±9.29）％,各组间差异有统计学意义（F=206.614,P<0.001）,其中糖尿病脑缺血再灌注组梗死面积较正常血糖脑缺血再灌注组显著性增大（P<0.05）。再灌注后24 h,各组缺血侧皮质NF-κB（F=29.993,P<0.001）和TNF-α（F=28.722,P<0.001）表达水平差异有统计学意义,其中糖尿病脑缺血再灌注组NF-κB和TNF-α表达水平较正常血糖脑缺血再灌注组显著性增高（P均<0.05）。结论糖尿病会加重脑缺血再灌注损伤,TNF-α和NF-κB表达上调可能是糖尿病加重脑缺血再灌注损伤的机制之一。     

重组人粒细胞集落刺激因子对急性肝衰竭大鼠模型的作用

目的评价重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)对于D-氨基半乳糖(D-GalN)诱导的急性肝衰竭大鼠模型的作用。方法将105只雄性SD大鼠随机分为正常对照组、肝衰竭模型组、rhG-CSF组,每组35只。采用腹腔内注射D-GalN (1400mg/kg)建立急性肝衰竭模型。观察建立模型后12、24、48、72及120 h的肝脏ALT、TBil水平、外周血白细胞计数、肝脏组织病理变化;测定TNFα阳性细胞率。并观察建立模型后120 h生存率。计量资料多组间比较用单因素方差分析,进一步两两比较采用LST-t检验。结果 rhG-CSF组与肝衰竭模型组相比,肝脏HE染色提示除造模后120 h外,其余各个时间点肝细胞变性坏死均更严重;造模后120 h rhG-CSF组的肝脏HE染色提示肝小叶结构恢复相对更完全。rhG-CSF组在5个时间点TNFα阳性细胞率较肝衰竭模型组均有增高趋势。rhG-CSF组ALT及TBil水平在5个时间点均有高于肝衰竭模型组的趋势,两组内比较,ALT水平在造模后24 h差异有统计学意义(P 0. 05),TBil水平在造模后24、48、120 h差异有统计学意义(P 0. 05)。在5个时间点,rhG-CSF组外周血白细胞计数水平均高于肝衰竭模型组,差异均有统计学意义(P值均0. 05)。rhG-CSF组和肝衰竭模型组相比,120 h生存率差异无统计学意义(P 0. 05)。结论在急性肝衰竭的急性炎症反应期应用rhG-CSF可能加重肝脏炎症反应。     

促肝细胞生长素颗粒剂对大鼠急性肝衰竭的防护作用(摘要)

目的:探讨促肝细胞生长素颗粒剂(促肝康)对大鼠急性肝衰竭的防护作用。方法:用D-氨基半乳糖(D-GalN)和内毒素脂多糖(LPS)制备大鼠急性肝衰竭模型,检测血清ALT、AST、TBil及肿瘤坏死因子α(TNFα)、内毒索(ET)的变化,并观察光镜下肝组织的病理改变。结果:模型组ALT、AST、     

大鼠内毒素性急性肝损伤后肝细胞凋亡与炎性因子的表达

目的 探讨脂多糖诱导D-氨基半乳糖胺致敏大鼠急性肝损伤肝细胞凋亡、炎性因子表达情况及其发生机制.方法 56只大鼠分为0 h对照组与1、2、4、6、24和48 h脂多糖+D-氨基半乳糖胺处理组.在相应时间点处死大鼠后收集肝组织及血清,肝组织苏木精-伊红染色后光学显微镜下观察ELISA法检测血清细胞因子表达;反转录(RT)-PCR法检测TNF-α、IL-β、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和p53基因表达;收集24 h肝组织用底物显色法检测Caspase-3、8、9,12活性.组间比较用方差分析.结果 经药物处理后,肝组织出现碎片状坏死、大量炎性细胞浸润等表现,从6 h开始,24 h和48 h显著加重.血清TNF-α浓度在1 h处理组为(727.8±261.3)ng/L,显著高于对照组及其他处理组(F=49.82,P<0.01),2 h处理组为(156.4±52.2)ng/L,显著低于1 h组,但高于对照组(F:30.23,P<0.01);血清IL-β浓度逐渐上升,24 h处理组最高,为(360.5±121.6)ng/L(F=18.61,P<0.01).24 h处理组肝组织Caspase-3、8、9、12活性明显高于对照组(F=84.96,P<0.01).iNOS基因在对照组无表达,药物作用后6 h达最高,24 h和48 h则显著下降(F=34.07,P<0.01);p53基因在24 h和48 h处理组表达明显增高(F=37.43,P<0.01);TNF-α和IL-1β基因表达均较对照组升高(F=2.94,P<0.05),其峰值均出现在1 h处理组.结论 小剂量脂多糖可诱导D-氨基半乳糖胺致敏大鼠发生急性肝损伤;Caspase-3、8、9、12活性明显增强是其特征性改变之一;肝损伤的发生与TNF-α、iNOS和p53基因早期高水平表达有密切关系.     

生脉散对急性肝衰竭大鼠内毒素诱导细胞因子的影响

[目的]探讨生脉散对急性肝衰竭大鼠内毒素（LPS）诱导细胞因子水平的影响。[方法]采用胁氨基半乳糖腹腔注射法制作急性肝衰竭大鼠模型。予生脉散灌胃2h及8h后,检测血清LPS与细胞因子水平。[结果]D-氨基半乳糖能明显增加大鼠血清白细胞介素6（IL-6）、细胞间黏附分子1（ICAM-1）和IL-1β水平（P〈0．01）,随着D-氨基半乳糖作用时间延长的趋势明显减弱,但对血清LPS、肿瘤坏死因子α（TNF-α）水平无明显影响（P〉0．05）;生脉散能显著降低D氨基半乳糖肝衰竭大鼠血清IL-6、ICAM-1和IL-1β水平（P〈0．01,〈O．05）。LPS攻击2h和8h后,能明显诱导D-氨基半乳糖大鼠血清LPS、TNF-α、IL-6、ICAM-1和IL-1β水平增加（P〈0．01）;除在8h对TNF-α无影响外,生脉散能明显减轻LPS攻击D-氨基半乳糖大鼠后对血清LPS、TNF-α、IL-6、ICAM-1和IL-1β水平的影响（P〈0．01,〈O．05）。[结论]SD大鼠在急性肝衰竭状态下,存在严重LPS血症,并引起细胞因子水平变化的炎症级联反应,生脉散可通过调节细胞及炎症因子水平起到治疗作用。     

连翘对重症急性胰腺炎大鼠肝组织中NF-κB和Foxp3表达的影响

目的探讨核因子NF-κB和Foxp3在重症急性胰腺炎（SAP）肝损伤中的作用及连翘对其表达活性的影响。方法雄性Wistar大鼠80只,随机分成假手术组（SO组）、SAP组和干预组,其中干预组分连翘高、中、低剂量组和阳性对照组（PDTC）。牛磺胆酸钠溶液在胰胆管远端注射造模,SO和SAP组于术后3、6、12 h,干预组于术后12 h处死大鼠,分别留取标本。测各组血淀粉酶（AMY）、ALT及TNFα水平,鲎试剂法测血浆内毒素水平,流式细胞术测外周血Treg百分数,对胰腺及肝脏进行病理学检查及评分,RT-PCR法检测肝脏组织中NF-κBmRNA和Foxp3mRNA表达量。组间比较采用单因素方差分析,进一步进行多重比较,采用LSD法进行统计学处理,各指标间相关性分析采用直线相关分析。结果与SO组比较,SAP组中各项指标均随时间升高,于12 h达高峰。与SAP12 h组相比,干预组（大鼠死亡率为0）肝脏组织中的NF-κBmRNA和Foxp3mRNA表达明显降低（P〈0.01）,与Treg呈正相关（r=0.738,P〈0.01）。随连翘剂量增加,AMY、ALT及TNFα水平均明显降低,肝脏和胰腺组织炎症明显减轻,高剂量组和阳性对照组相比较无明显差异（P〉0.05）。结论 NF-κB的激活参与SAP肝损伤的发生,连翘能显著降低NF-κB的活性及肝脏组织中NF-κBmRNA和Foxp3mRNA的表达,减轻SAP肝损伤的严重程度。     

肿瘤坏死因子α调节人肝癌MHCC-97H细胞中白细胞介素8的分泌

目的 研究肿瘤坏死因子(TNF)α诱导人肝癌细胞系MHCC-97H分泌白细胞介素8(IL-8)及p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)和核因子-κB (NF-κ B)信号通路对其的调节作用.方法 酶联免疫吸附法检测不同浓度的TNF α(0、1、5 ng/ml)干预人肝癌细胞MHCC-97H 24 h和相同浓度的TNFα(1 ng/ml)干预不同时间后,细胞上清液中IL-8的浓度; Western blot和免疫荧光方法检测TNFα(1 ng/ml)刺激MHCC-97H细胞后,p38 MAPK磷酸化蛋白的表达及其分布;非放射性NF-κ B p50/p65转录因子活性试剂盒检测TNFα干预MHCC-97H细胞后核蛋白中活性NF-κB p65蛋白的含量.多组均数比较采用单因素方差分析,多个样本均数间两两比较用q检验.结果 TNFα明显促进肝癌细胞分泌IL-8,具有显著的时间和浓度依赖性:TNFα干预0、6、12、18、24h,IL-8的浓度分别为(47.45±9.78)pg/ml、(497.41±52.83)pg/ml、(694.14±44.43)pg/ml、(909.35±97.22) pg/ml、(1093.59±75.72) pg/ml (F=144.04,P＜0.01);TNFα0、1、5、10 ng/ml干预24h,IL-8浓度分别为(47.45±9.12) pg/ml、(1093.59±75.72)pg/ml、(1372.77±85.10) pg/ml和(1614.55±153.52) pg/ml(F=364.14,P＜0.01).TNFα刺激肝癌细胞后,p38 MAPK磷酸化蛋白表达明显上调,给予p38 MAPK通路特异性抑制剂(SB203580)可以显著抑制TNFα诱导的IL-8的分泌(P值均＜0.01)且呈浓度依赖性(F=165.92,P＜0.01).免疫荧光结果显示TNFα促进肝癌细胞NF-κ B p65的核转位,且呈浓度依赖性(TNF α0、1、5、10 ng/ml处理肝癌细胞1h后细胞核蛋白表达NF-κ B p65对应吸光度值分别为0.52±0.04、2.75±0.15、3.13±0.18、3.81±0.14 (F=1266.42,P＜0.05),而SB203580则可以部分抑制NF-κB p65的核转位(F=141.20,P＜0.05).结论 TNFα通过p38 MAPK-NF-κB信号途径调节人肝癌细胞系MHCC-97分泌IL-8.     

ω-3多不饱和脂肪酸在体外胰腺腺泡细胞培养体系中的炎症调控作用及机制

目的 探讨ω-3多不饱和脂肪酸(ω-3 PUFAs)对急性胰腺炎早期炎症反应的作用.方法 培养胰腺腺泡细胞系AR42J,随机分为A组(空白对照)、B组(ω-3 PUFAs预处理后蛙皮素刺激)、C组(仅用蛙皮素刺激);实时荧光定量PCR检测各组细胞肿瘤坏死因子(TNF)α、白细胞介素(IL) -6和线粒体解偶联蛋白-2(UCP-2)mRNA表达;Western Blot检测细胞核中NF-κB p65亚单位的含量;Hoeehst33342/PI染色检测细胞坏死.结果 B组TNFα、IL -6、UCP-2 mRNA表达水平、细胞核NF - κBp 65含量及细胞坏死率与C组相比均明显减少,差异有统计学意义[(0.69±0.10)vs(1.34±0.19),P＜0.001;(0.69±0.06) vs( 1.39±0.06),P＜0.001;(0.58±0.12)vs(1.26±0.07),P＜0.001;(0.54±0.09) vs (0.92±0.09),P＜0.001;(0.20±0.01)vs(0.35±0.03),P＜0.001;F =62.718～157.426,P均＜0.05].而B组、C组TNFα、IL -6、UCP-2 mRNA表达水平、细胞核NF-κBp65亚单位含量及细胞坏死率均高于A组,差异有统计学意义[(0.69±0.10)、(1.34±0.19) vs (0.34±0.05),P=0.003、P＜0.001;(0.69±0.06)、(1.39±0.06) vs (0.23±0.03),P=0.001、P＜0.001; (0.58±0.12)、(1.26±0.07)vs(0.32±0.08),P=0.003、P＜0.001; (0.54 +0.09)、(0.92±0.09)vs(0.26±0.12),P＜0.001、P＜0.001; (0.20±0.01)、(0.35±0.03) vs (0.13±0.03),P=0.024、P＜0.001;F=62.718～157.426,P均＜0.05].结论 ω-3 PUFAs可能抑制急性胰腺炎早期炎症反应.     

微囊化肝细胞移植治疗暴发性肝衰竭大鼠的疗效观察

目的观察微囊化肝细胞腹腔移植对暴发性肝衰竭大鼠的疗效。方法气流法制备含肝细胞的微囊。D-氨基半乳糖诱导大鼠急性肝功能衰竭模型,设模型组、裸肝细胞腹腔移植组、微囊化肝细胞移植组,每组8只测定ALT、AST、TBil水平。样本比较采用重复测量的多元方差分析或单因素方差分析,组间比较采用t检验。结果肝衰竭模型建立后ALT、AST、TBil迅速升高（P〈0．05）,并于24h～72h达高峰。同一时间点两两比较发现,Ⅱ、Ⅲ组在48h、72h、120h均明显低于Ⅰ组（P〈0．05）,Ⅲ组在48h、72h均低于Ⅱ组（P〈0．05）。Ⅲ组峰值较Ⅰ组前移。模型组、裸肝组和微囊组大鼠生存率分别是26．7％（4／15）、40．0％（6／15）、73．3％（11／15）,微囊组较模型组、裸肝组大鼠生存率有显著性提高（P〈0．05）。结论HCT能降低FHF大鼠ALT、AST和TBil水平,减轻肝损伤程度,可能改善FHF预后。     

N-乙酰半胱氨酸对肝星状细胞核因子κB的影响

目的　阐明N乙酰半胱氨酸(NAC)对肝星状细胞(HSC)核因子κB(NF-κB)结合活性和环氧合酶 2(COX-2)表达的影响机制。方法　体外培养大鼠 HSC-T6 细胞株,MTT法检测 NAC对HSC增殖的抑制作用。分别予NAC(1 mmol/L)处理 1 h;NAC和肿瘤坏死因子(TNF)α联合干预(先予 NAC处理1 h,再予TNFα干预1 h);TNFα100 ng/ml处理1 h。凝胶电泳移动抑制实验检测NF κB的结合活性。免疫蛋白质印迹检测相应的胞质内NF-κB抑制蛋白(IκBα)表达。免疫组化观察 HSC-T6NF-κB表达的核转移。激光共聚焦检测NAC对 HSC-T6 中 COX-2 表达的影响。结果　NAC对 HSC具有明显的抑制作用。TNFα可诱导 NF-κB结合活性,而 NAC可显著抑制 TNFα诱导的 NF-κB结合活性。TNFα处理后 IκBα表达减弱,NAC处理后 IκBα表达增强。TNFα刺激 1 h后,NF κB表达从细胞质转移至细胞核内。NAC预处理后再予TNFα刺激,NF κB表达主要位于细胞质,很少发生核转移。HSC T6经TNFα处理后细胞内COX 2表达明显高于NAC和TNFα联合处理组以及正常对照组(P<0.05);NAC和TNFα联合处理组与正常对照组差异无统计学意义(P> 0. 05)。结论　NAC可抑制HSC增殖,抑制HSC-NF κB结合活性和COX-2表达。     

急性坏死性胰腺炎大鼠心肌核因子-κB激活及重组葡激酶的干预作用

目的 研究重症急性胰腺炎(SAP)心肌功能损害时心肌核因子-κB (NF-κB)的活化及葡激酶的干预作用.方法 63只SD大鼠随机分为假手术组(n = 9)、ANP组(n = 27)、葡激酶干预组(n = 27),ANP模型采用5%的牛磺胆酸钠胰胆管逆行注射方法建立.干预自造模前2 d腹腔注射葡激酶1.5 mg/kg体重,一天2次,共4次.ELISA法测定制模后6 h、12 h、24 h各时点血TNF-α、IL-6含量;RT-PCR检测心肌NF-κB mRNA的表达;免疫组化法检测心肌NF-κB蛋白的表达,常规观察胰腺及心肌组织的病理变化.结果 ANP组术后6 h大鼠心肌NF-κB mRNA及NF-κB蛋白表达异常增高,TNF-α、IL-6呈进行性升高,干预组胰腺及心肌组织的病理变化减轻.心肌NF-κB mRNA及蛋白表达下调,血TNF-α、IL-6明显下降,与ANP组比较,差异均显著(P＜0.05).结论 ANP大鼠的心肌损伤可能与循环中TNF-α、IL-6水平升高导致的心肌NF-κB活化有关.葡激酶对SAP并发的心肌损伤具有防治作用.     

cav-1和TNF-α在机械通气联合高氧致大鼠ALI中的表达研究

目的 观察机械通气联合高氧对大鼠肺组织小窝蛋白1(cav-1)、核转录因子κB(NF-κB)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)表达的影响,探讨机械通气联合高氧致大鼠ALI的发生机制及其相互作用.方法 24只雄性SD大鼠随机分为对照组、机械通气组和机械通气联合高氧组.观察各组大鼠肺组织的病理学改变,计算肺组织湿/干重比值;采用BCA法测定BALF中蛋白含量;采用免疫组化染色法和Western blot法测定肺组织中cav-1蛋白表达;采用RT-qPCR法测定肺组织中NF-κB和TNF-αmRNA表达.结果 与对照组比较,机械通气组和机械通气联合高氧组大鼠肺组织湿/干重比值、BALF中总蛋白含量以及肺组织中cav-1蛋白、NF-κB mRNA和TNF-αmRNA表达水平均显著升高(P值均<0.001),同时肺组织呈明显损伤性改变;机械通气组和机械通气联合高氧组之间上述指标比较差异也均有统计学意义(P值均<0.001),但机械通气组肺组织病理损伤程度较机械通气联合高氧组轻.相关性分析结果显示,各组大鼠肺组织cav-1蛋白表达量与NF-κB mRNA表达量之间呈正相关(r=0.827,P<0.001);NF-κB mRNA表达量与TNF-αmRNA表达量之间呈正相关(r=0.903,P<0.001).结论 高氧可上调肺组织cav-1的表达,使NF-κB信号通路发生活化,后者通过介导TNF-α等炎症细胞因子释放,从而加重机械通气大鼠肺组织炎症性损伤.     

急性肝衰竭TNF-α、Caspase-3及TGF-β1 mRNA的表达及罗格列酮的干预

目的: 观察D-氨基半乳糖(D-Ga lN)联合脂多糖(LPS)诱导的小鼠急性肝衰竭TNF-α、Caspase-3、TGF-β1 mRNA的表达,并探讨罗格列酮的干预作用.方法: ♂昆明小鼠随机分为3组: 正常组、对照组、干预组.对照组和干预组以D-Ga lN/LPS腹腔注射构建小鼠急性肝衰竭模型,正常组则相应予以生理盐水腹腔注射;干预组于造模前2 h予以罗格列酮灌胃,正常组和对照组则相应予以生理盐水灌胃.比较各组小鼠血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天门冬氨酸氨基转移酶(AST)水平,肝组织病变程度及肝组织TNF-α、Caspase-3,TGF-β1 mRNA的表达水平.结果: D-GalN联合LPS腹腔注射成功构建了小鼠急性肝衰竭模型,对照组肝组织中TNF-α、Caspase-3、TGF-β1 mRNA的表达较正常组明显增高( P＜0.001);干预组小鼠血清ALT,AST水平明显低于对照组(403.6±76.1 U/L vs 3664.8±646.1 U/L,464.6±63.0 U/L vs 3514.0±468.9 U/L,均P＜0.001),肝组织中TNF-α、Caspase-3、TGF-β1 mRNA表达水平明显低于对照组(0.270±0.042 vs 0.459±0.072,0.388±0.033 vs 0.553±0.033,0.261±0.031 vs 0.403±0.042,均P＜0.001);与对照组比较,干预组肝组织炎性细胞浸润明显减少,肝细胞以变性为主,未见明显坏死.结论: 罗格列酮可能通过下调T N F - α、Caspase-3、TGF-β1的表达对D-GalN/LPS小鼠急性肝衰竭起保护作用.