小檗碱通过诱导细胞抑制性自噬发挥抗胃癌作用

目的探讨中药黄连活性成分小檗碱抗胃癌作用及相关机制。方法用MTT法检测小檗碱对人胃癌BGC-823细胞的生长抑制作用;用MDC染色结合流式细胞术及GFP-LC3质粒转染法检测小檗碱引起BGC-823细胞发生自噬;用Western印迹法检测自噬标志蛋白LC3和Beclin-1表达水平;引入自噬抑制剂3-MA和CQ,用MTT法检测小檗碱诱导的自噬与细胞存活之间的关系;建立人胃癌BGC-823细胞裸鼠移植瘤模型,评价小檗碱在体内抑制人胃癌细胞移植瘤的生长作用,用免疫组化法和Western印迹法检测肿瘤组织中自噬相关蛋白的表达水平。结果小檗碱呈时间-剂量依赖性的诱导BGC-823细胞死亡,其48 h的IC50值为24μmol·L~(-1)。与对照组相比,小檗碱处理后细胞中自噬小体的数目及自噬标志蛋白LC3及Beclin-1的表达水平皆随时间依赖性增加,且抑制自噬后小檗碱引起的细胞死亡率下降,提示小檗碱诱导的自噬发挥抑制细胞生长的作用。裸鼠移植瘤实验表明,5、10及20 mg·kg~(-1)的小檗碱均对裸鼠移植瘤的生长具有显著的抑制作用,且抑制作用与剂量成正比。其中小檗碱高剂量组的相对肿瘤增殖率为28%,优于阳性对照药物5-FU(31%)。同时,小檗碱不影响裸鼠的体重,裸鼠生长状态良好,说明其毒性较小。进一步发现小檗碱能够呈剂量依赖性的增加肿瘤组织中自噬标志性蛋白LC3-Ⅱ和Beclin-1的表达水平。结论小檗碱在体内和体外通过诱导细胞抑制性自噬而发挥抗胃癌作用。     

北美黄连有效成分的提取分离与含量测定

介绍了北美黄连的应用简况，用溶剂法提取其有效成分北美黄连碱和盐酸小檗碱，并用柱层析，重结晶法加以分离精制，同时建立了这两种成分的含量测定方法。     

中草药对细菌耐药性消除作用的研究进展

近年来,随着经济生活条件的不断提高,人们对健康的认识也不断提升,各种抗生素广泛应用于治疗病原微生物的频率也不断加快,临床上耐药菌株随之产生,目前细菌的耐药性的产生已成为我国普遍存在且非常严重的问题,一种新的抗生素刚刚应用没多久,就可能出现广泛的耐药现象,已成为临床治疗上的疑难课题。针对细菌耐药现象的复杂性和广泛性,急需部分或全部去除其对抗生素的耐药性。中草药因以其低毒性目前已成为去除细菌耐药性的重要方法之一。     

黄连愈伤组织的诱导及小檗碱和药根碱的含量测定

不同生长季节的黄连外植体在一系列培养基上诱导产生愈伤组织。经高效液相色谱法测定愈伤组织内小檗药根碱的含量。结果表明：幼叶柄外植体在６７．Ｖ０．５ｍｇ／Ｌ２，４－Ｄ上产生的愈小檗碱和药根碱含量明显高于对照组。花苔外植体在６７－Ｖ０．５ｍｇ／Ｌ２，４－Ｄ上诱导的愈伤组织小檗碱含量高于对照组。     

黄连及其制剂中小檗碱的薄层扫描法定量

本文介绍了黄连及其制剂盐酸黄连素片、胃疡安胶囊、胃炎康胶囊使用荧光扫描法测定小檗碱的含量，具有图谱清晰、分离效果好、操作简便迅速、结果准确等特点。     

黄连饮片极细粉化形式的考察

目的:寻找中药黄连饮片形式改革的合理方式。方法:采用薄层色谱法分别测定黄连饮片极细粉、按传统中药煮制及沸水冲泡方式制得溶液和黄连常规饮片传统中药煮制法制得的溶液等3种溶液中的小檗碱含量。结果:3种溶液中所含盐酸小檗碱量分别为10.49%、10.01%和6.85%;黄连饮片极细粉在传统中药煮制法及沸水冲泡方式制得溶液,相对于黄连常规饮片传统中药煮制法制得溶液中含有盐酸小檗碱百分含量,分别为153.14%及146.13%。结论:中药饮片极细粉化形式可能是一些中药饮片改革比较实际及合理的方式。     

不同方法对黄连小檗碱的纯化比较研究

目的:比较大孔吸附树脂和液液萃取两种方法对黄连小檗碱的纯化效果,为开发利用黄连小檗碱提供参考.方法:采用大孔吸附树脂法和液液萃取两种方法.结果:以标准品盐酸小檗碱为对照,大孔吸附树脂在产品重量和产品中小檗碱含量方面均明显高于液液萃取,其中D101大孔吸附树脂对黄连小檗碱有较好的纯化效果,产品中小檗碱含量达29.82％.结论:黄连小檗碱为传统中药材黄连的主要成分,在抗菌消炎、心血管疾病治疗等方面显示出良好的治疗效果.具有广阔的应用前景.     

黄连总碱-卡波姆复合物的制备、体外释药特性及其胃生物粘附性能评价

目的：探讨黄连总碱-卡波姆复合物的缓释特性及其胃生物粘附性能。方法以复合物收率和载药量为指标,采用单因素法分别探讨卡波姆品种、卡波姆浓度、黄连总碱浓度等因素对酸碱沉淀反应的影响。采用体外释放度测定法探讨黄连总碱-卡波姆复合物在pH值分别为1.2,5.0,6.8,7.0和7.4的介质中的释药动力学。采用大鼠胃内的留存量测定法初步探讨黄连总碱-卡波姆复合物在体内的胃生物粘附性。结果（1）黄连总碱-卡波姆复合物消除了黄连的强烈苦味,最佳的卡波姆品种为934P,卡波姆浓度为0.25%,黄连总碱浓度为1%。（2）黄连总碱-卡波姆复合物在人工胃液中具有较佳的缓释性能。但在纯水、pH 5.0、pH 6.8和pH 7.4四种介质中的释药非常缓慢。（3）黄连总碱-卡波姆复合物在胃内的滞留时间远远大于黄连总碱。结论黄连总碱-卡波姆复合物具有良好的缓释性能和胃生物粘附性能。     

黄连的不同干燥方法对小檗碱含量的影响

本文作者比较了太阳光直射、太阳光下用薄纸遮盖、微火炒、烘箱烘等四种不同的干燥方法,及烘箱烘法中不同温度对黄连中小檗碱含量的影响。结果显示:采用烘箱或烘房低温干燥,它既保证了外观色泽的不变,又保证了内在有效成份的免遭破坏,同时也缩短了干燥的时间,操作起来也较方便,是医院加工炮制行之有效的好方法。     

温度对黄连提取方法的影响

以小果碱为成分指标,用稀盐酸法对黄连的不同提取温度进行比较,结果随着温度升高,小檗碱得量增高,但温度达100℃时,小檗碱被破坏较大。     

复方黄连胶囊的稳定性研究

目的考察复方黄连胶囊的稳定性。方法采用留样观察,在室温下,分别于0、1、2、3、6、12、18、24个月对样品的外观、性状进行观察,对盐酸小檗碱、葛根素、熊果酸进行定性鉴别,并对盐酸小檗碱的含量进行测定。结果按本品最佳制备工艺条件制成的3批中试产品的外观、性状、定性鉴别、含量测定结果均符合规定。结论复方黄连胶囊稳定性符合标准。     

黄连、大黄和苦参联合应用对金黄色葡萄球菌的体外抗菌活性研究

目的比较黄连、大黄和苦参联合与其单药对金黄色葡萄球菌（MRSA）的体外抗菌活性的关系,为临床研制治疗MRSA感染的中药制剂提供参考。方法采用肉汤稀释法测定其对MRSA的最小抑菌浓度（MIC）值,推算出MIC50和MIC90值,并作比较。结果黄连、大黄和苦参单药及相互配伍后对MRSA的抑菌效果从高至低依次为：黄连、黄连一苦参、黄连．大黄、大黄-苦参、大黄、苦参。结论大黄与苦参配伍对MRSA呈相加作用;黄连与苦参呈无关作用;黄连与大黄呈拮抗作用。     

黄连中的盐酸小檗碱的提取、分离及分离物的含量测定研究

目的 探讨高纯度盐酸小檗碱的可行性.方法 先将存在于黄连中的盐酸小檗碱转化为溶解性较大的硫酸小檗碱提取出来,然后再将其转化为盐酸小檗碱粗品,进一步用薄层色谱法分离得到纯度相对较高的盐酸小檗碱,再用柱层析法分离纯化,经乙醇反复多次重结晶,得到高纯度的盐酸小檗碱,采用高效液相色谱法测定盐酸小檗碱含量.结果 本方法提纯得到的盐酸小檗碱纯度达97%以上.结论 本方法操作简单、实用、重现性好,可用于大批量生产及合理利用资源提供科学依据.     

比较研究黄连粉末及煎煮液中小檗碱、药根碱在2型糖尿病大鼠药动学特征

目的: 比较研究黄连粉末及煎煮液中的盐酸小檗碱(BER)和盐酸药根碱(JAT)在2型糖尿病大鼠药动学变化,揭示古方应用黄连治疗消渴症选择丸剂的科学内涵。方法: 将黄连粉末及其煎煮液灌胃于2型糖尿病大鼠,应用RP-HPLC测定血浆中小檗碱、JAT的血药浓度,DAS2.0药动学软件计算药动学参数。结果: BER、JAT的药动学过程均为二室开放模型;与煎煮液组比较,黄连粉末口服给药组BER、JAT AUC均显著增加,V1/F显著减小,CL/F显著降低,T_max提前,t_1/2Ka及t_1/2α缩短,t_1/2β延长。结论: 与煎煮液比较,黄连粉末效应物质生物利用度更高,吸收更快,消除更慢,提示黄连用于治疗2型糖尿病选择粉末形态如丸剂入药优于煎剂入药。     

连桂清心片的薄层色谱鉴别

目的：建立连桂清心片中甘草和黄连的薄层色谱鉴别方法,为连桂清心片质量标准提供依据。方法分别采用不同的方法处理样品,分别以甘草酸铵、盐酸小檗碱为对照品,以甘草、黄连为对照药材,在硅胶 G 薄层板上点样,以适宜的展开剂展开,取出,晾干,显色剂显色。结果在薄层色谱中能够检出连桂清心片中的甘草、黄连,连桂清心片供试品溶液色谱中,与对照品或对照药材色谱相对应位置,色谱斑点清晰,荧光斑点显示相同的颜色,分离良好且阴性对照无干扰,均能有效提供连桂清心片的鉴别特征。结论建立的两种薄层色谱鉴别方法简便,专属性强,重现性好,可用于连桂清心片的薄层定性鉴别。     

黄连配方颗粒高效液相色谱特征图谱研究

目的：建立黄连配方颗粒高效液相色谱（HPLC）特征图谱,为黄连配方颗粒的品种鉴别和质量控制提供参考依据。方法：色谱柱为Megres5-C18（250 mm×4.6 mm,5μm）,流动相为乙腈-0.05 mol·L-1磷酸二氢钾水溶液（磷酸调节pH值为4.0）梯度洗脱,流速为1.0 mL·min-1,柱温为30℃,检测波长为345 nm,进样量为10μL。结果：由5个共有峰构成黄连配方颗粒的特征图谱,且10批样品的相似度在0.999以上。结论：HPLC法精密度、稳定性、重复性良好,可为黄连配方颗粒的鉴别和质量评价提供参考。     

黄连、氯己定与抗生素介导的细菌交叉耐药

目的：研究抗生素、消毒剂（氯己定）和抗菌中药（黄连）能否介导细菌产生交叉耐药。方法：根据国际标准微量肉汤稀释法测定上述药物对金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus, Sa）的最低抑菌浓度（minimum inhibitory concentration, MIC）。根据抗性结果分析,选择亚致死剂量下的药物浓度连续培养细菌14 d,诱导细菌产生交叉耐药。结果：经环丙沙星（ciprofloxacin, CIP）和庆大霉素（gentamicin, GEN）诱导后细菌没有增加对氯己定（chlorhexidine, CHX）的抗性,但出现了对CHX敏感性提高的现象。分别有1株和4株Sa对黄连水提液（Rhizoma coptidis extract, RCE）和盐酸小檗碱（berberine, BBR）提高了抗性。经四环素（tetracycline, TET）诱导后,对CHX、RCE和BBR产生交叉耐药的Sa菌株分别有3,6,8株。经CHX诱导后,几乎所有菌株都对至少一种抗生素产生了交叉耐药,分别有7株和9株Sa对RCE和BBR抗性提高了4倍以上。经RCE诱导后,对抗生素、CHX和BBR产生交叉耐药的Sa菌株数分别是11,3和14。经BBR诱导后,对抗生素、CHX、RCE产生交叉耐药的Sa菌株数分别是9,2和14。结论：根据实验结果可知,抗生素、消毒剂和抗菌中药能诱导细菌产生交叉耐药,细菌对三者的抑菌机制可能相同。     

铜绿假单胞菌对碳青霉烯类抗生素的耐药性及其耐药表型与外膜蛋白OprD2的关系

目的 了解铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa，Pa）临床分离株对几种常用抗铜绿假单胞菌药物的敏感性；探索铜绿假单胞菌临床分离株对亚胺培南和美罗培南耐药性差异与其膜孔蛋白0prD2变化的关系。方法琼脂对倍稀释法测定142株Pa对亚胺培南、美罗培南等8种常用抗假单胞菌药物的最低抑菌浓度，从中筛出32株对亚胺培南和美罗培南不同耐药表型的Pa，提取外膜蛋白并采用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）法分离，检测OprD2相对含量。结果耐药率最高的是亚胺培南（54．23％），其次是环丙沙星（45．07％）、美罗培南（28，87％）、氨曲南（19．72％）、阿米卡星（17.61％）、哌拉西林／三唑巴坦（14．08％）和头孢他啶（11．97％），头孢哌酮／舒巴坦耐药率最低（9．86％）。呈现多重耐药的菌株占38．73％（55／142），交叉耐药率高达40．84％（58／142）。在对亚胺培南耐药的菌株中，合并有其他肛内酰胺类抗生素耐药的菌株达到62．34％（48／77）。32株Pa外膜蛋白电泳结果显示OprD2相对含量在耐药组为0～3．5％（其中有一株为8.70％），敏感组为6．20％～10.20％。在碳青霉烯类耐药组与敏感组之间统计分析P〈0．05，耐碳青霉烯类组低于敏感组，但是在亚胺培南耐药、美罗培南敏感组与亚胺培南、美罗培南均耐药组之间差异无统计学意义。结论铜绿假单胞菌耐药菌株常见，且常呈多重耐药和交叉耐药。亚胺培南耐药率高于美罗培南。膜孔蛋白OprD2减少或缺失是我院Pa对亚胺培南耐药的主要原因之一。但在美罗培南耐药中所起的作用，有待进一步研究。     

五倍子、黄芩和黄连联合应用对MRSA的体外抗菌活性研究

目的:研究五倍子、黄芩和黄连联合应用对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的体外抗菌活性。方法:采用肉汤稀释法测定其对MRSA的最小抑菌浓度(MIC)值,推算出半数抑菌浓度(MIC50)和抑菌90%浓度(MIC90)值,并作比较。结果:五倍子、黄芩和黄连单药及相互配伍后对MRSA的抑菌效果从高至低依次为:黄芩-五倍子、五倍子、黄连-五倍子、黄连、黄连-黄芩、黄芩。结论:黄芩与五倍子配伍对MRSA有协同作用,与黄芩呈拮抗作用。     

延胡索的薄层色谱鉴别研究

目的建立一种可以同时鉴别延胡索药材多种有效成分的薄层色谱方法。方法采用两次展开薄层色谱法。结果薄层板在紫外灯（365 nm）下观察,供试品中延胡索乙素,小檗碱,巴马汀3种有效成分被检识。结论操作简便,重现性好,为鉴别延胡索药材提供了更为有效薄层色谱方法。