达沙替尼体外抗鼻咽癌细胞增殖与转移的作用

目的SRC作为酪氨酸蛋白激酶在多种实体肿瘤中存在高表达,通过激活RAS/RAF/MEK/ERK、P13K/AKT通路促进肿瘤细胞的生长与增殖,并通过激活FAK促进肿瘤细胞的转移。此外,SRC还参与了EGFR抑制剂耐药的发生。本研究旨在研究SRC的抑制剂达沙替尼在体外对鼻咽癌细胞的抑制作用。方法采用M1Tr方法绘制细胞生长曲线,并计算达沙替尼对鼻咽癌细胞的半数抑制浓度（IC50值）;PI/AnnexinV双染法检测达沙替尼诱导鼻咽癌细胞凋亡的作用;WesternBlot检测达沙替尼引起鼻咽癌细胞中信号通路的改变;Transwell实验检测达沙替尼对鼻咽癌细胞迁移的影响。结果达沙替尼能明显在体外抑制鼻咽癌细胞的增殖,诱导鼻咽癌细胞的凋亡,并且呈浓度依赖性;应用达沙替尼处理CNE2后发现,能明显抑制RAS/RAF/MEK/ERK、P13K/AKT通路活性表现为phospho-AKT、Phospho．MEK、Phospho-ERK的表达水平明显减低;达沙替尼还能明显抑制CNE2的迁移能力和Phospho-FAK的表达水平。结论SRC的抑制剂达沙替尼能在体外明显抑制鼻咽癌细胞中RAS/RAF/MEK/ERK、P13K/AKT通路的活性和FAK蛋白的表达,进一步抑制鼻咽癌细胞的增殖与转移,促进细胞凋亡。     

神经酰胺诱导鼻咽癌细胞凋亡

目的　了解第二信使神经酰胺信号转导对鼻咽癌细胞生长的影响。方法　采用MTT法检测神经酰胺对鼻咽癌细胞株 (CNE 2 )增殖的抑制作用。光镜观察、荧光染色、流式细胞术检测细胞凋亡改变。Westernblot法检测p2 1WAF1的表达。结果　神经酰胺在 6 2 5、12 5、2 5、5 0 μm浓度下 ,对CNE 2细胞生长有明显的抑制作用 ,流式细胞仪检测发现亚G1峰出现 ,荧光染色可见核荧光强度增加、核片段化和凋亡小体。p2 1WAF1蛋白表达明显上调。结论　神经酰胺能诱导鼻咽癌细胞株CNE 2凋亡 ,且上调 p2 1WAF1蛋白表达。p2 1WAF1可能是神经酰胺诱导鼻咽癌细胞凋亡中起作用的因素之一。     

PI3K/Akt信号通路在小檗碱联合人参皂苷Rg3诱导鼻咽癌细胞凋亡中的调控作用

目的研究PI3K/Akt信号通路在小檗碱联合人参皂苷Rg3诱导鼻咽癌细胞凋亡中的作用。方法RTCA法检测小檗碱联合人参皂苷Rg3对鼻咽癌CNE2、6-10B细胞增殖的影响;Hoechst 33342染色法、荧光双染流式细胞仪检测药物对CNE2细胞凋亡的影响;Western blot法检测PI3K/Akt信号通路关键蛋白及凋亡相关蛋白表达的变化。结果小檗碱联合人参皂苷Rg3可抑制鼻咽癌CNE2、6-10B细胞的增殖,诱导CNE2细胞的凋亡。与单独用药组相比,联合用药组细胞的PI3K/Akt信号通路关键蛋白PI3K p110α和p-Akt的表达明显下调(P<0.05)。加入PI3K/Akt信号通路的激活剂SC79后,小檗碱联合人参皂苷Rg3抑制CNE2细胞增殖和诱导细胞凋亡的效应降低,p-Akt、Survivin、PCNA及Bcl-2表达量增加,Bax的表达下降。结论小檗碱联合人参皂苷Rg3可通过PI3K/Akt信号通路发挥抑制鼻咽癌细胞增殖和诱导细胞凋亡的作用。     

去甲斑蝥素诱导人鼻咽癌细胞CNE1凋亡的实验研究

目的检测去甲斑蝥素对人鼻咽癌细胞CNE1增殖、凋亡的影响,为临床应用NCTD治疗鼻咽癌细胞提供实验基础。方法体外常规培养CNE1细胞用于实验,经NCTD作用后,采用MTT比色法检测细胞增殖情况,流式细胞仪观察鼻咽癌细胞凋亡、细胞周期。结果 NCTD对鼻咽癌细胞的生长有明显的抑制作用,呈剂量依赖性,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01);NCTD可剂量和时间依赖性地诱导肿瘤细胞凋亡;NCTD可剂量依赖性地诱导肿瘤细胞周期发生改变,将鼻咽癌细胞阻滞在G2期。结论 NCTD对体外培养的CNE1细胞的生长有明显抑制作用和诱导凋亡的作用。     

SOX1对鼻咽癌细胞化疗敏感性的影响

目的 观察SOXl基因过表达对鼻咽癌细胞化疗敏感性的影响.方法 采用脂质体Lipofectamin2000介导的方法,将SOXl基因转入鼻咽癌细胞CNE2和HONE1中,RT-PCR和Western blot法检测转染空载体对照组及转染SOX1过表达组鼻咽癌细胞中SOX1基因的表达,并用MTT法检测两组鼻咽癌细胞对化疗药物的敏感性.结果 RT-PCR和Western blot法表明,转染过表达组鼻咽癌细胞的SOX1基因的mRNA及蛋白表达水平均较对照组明显增强,MTT法结果表明过表达SOX1的鼻咽癌细胞对化疗药物顺铂的敏感性显著提高（P＜0.05）.结论 转染外源性SOX1并使之在鼻咽癌细胞中过表达,能提高CNE2和HONE1细胞对化疗药物的敏感性.     

异补骨脂查耳酮对鼻咽癌CNE1细胞增殖和转移的影响及作用机制的研究

摘要：目的:探讨异补骨脂查耳酮对鼻咽癌CNE1细胞增殖和转移的影响及作用机制。方法:采用CCK-8、克隆平板、划痕和Transwell实验检测不同浓度(10,20,40μmol·L-1)异补骨脂查耳酮对鼻咽癌CNE1细胞增殖、克隆形成、迁移和侵袭能力的影响;利用生物信息学技术分析异补骨脂查耳酮的核心作用靶点;Western Blot检测异补骨脂查耳酮对其核心作用靶点表皮生长因子（EGFR）及其下游通路蛋白磷脂酰肌醇-3-羟激酶（PI3K）、磷酸化磷脂酰肌醇-3-羟激酶（p-PI3K）、蛋白激酶B（AKT）、磷酸化蛋白激酶B（p-AKT）和雷帕霉素靶蛋白（mTOR）蛋白的影响。CNE-1细胞分别予以DMSO、40μmol·L-1异补骨脂查耳酮、40μmol·L-1异补骨脂查耳酮联合100μmol·L-1?EGFR激动剂NSC 228155以及40μmol·L-1异补骨脂查耳酮联合10μmol·L-1?AKT激动剂SC79处理,应用CCK-8、克隆平板、划痕及Transwell实验检测各组细胞的增殖、克隆形成、迁移和侵袭能力的改变。结果:异补骨脂查耳酮显著抑制鼻咽癌CNE1细胞的增殖、克隆形成、迁移和侵袭能力（P<0.05或P<0.01）。通过生物信息学分析,异补骨脂查耳酮有104个作用靶点,作用靶点主要富集在肿瘤发生通路上;其中,作用靶点EGFR与其他靶点蛋白联系最广泛,且在多个通路上均有富集,被认为是异补骨脂查耳酮的核心作用靶点。Western Blot结果显示,异补骨脂查耳酮显著抑制鼻咽癌CNE1细胞中EGFR、p-PI3K、p-AKT和mTOR蛋白的表达（P<0.05或P<0.01）。此外,EGFR激动剂NSC228155和AKT激动剂SC79能够显著减轻异补骨脂查耳酮介导的CNE-1细胞增殖、克隆形成、迁移和侵袭能力的抑制（P<0.01）。结论:异补骨脂查耳酮可能是通过抑制EGFR/PI3K/AKT/mTOR信号通路减少鼻咽癌CNE1细胞增殖和转移能力。     

盐酸埃克替尼对人非小细胞肺癌HCC827细胞凋亡及EGFR下游信号通路蛋白表达的影响

目的 探讨盐酸埃克替尼(Icotinib)对人非小细胞肺癌(NSCLC)HCC827细胞凋亡及EGFR下游信号通路蛋白表达的影响.方法 通过噻唑蓝比色(MTT)法检测Icotinib对HCC827细胞增殖的影响,流式细胞仪观察Icotinib对HCC827细胞凋亡的诱导作用,采用蛋白质免疫印迹(Western blot)检测表皮生长因子受体(EGFR)、蛋白激酶B(AKT)、胞外信号调节激酶(ERK)、p-EGFR、p-AKT、p-ERK和Survivin等EGFR下游信号通路蛋白的表达水平.结果 Icotinib抑制HCC827细胞增殖和诱导细胞凋亡的作用具有浓度依赖性和时间依赖性(P<0.05);随着Icotinib对HCC827细胞作用的药物浓度升高,p-EGFR、p-AKT、p-ERK和survivin等EGFR下游信号通路蛋白的表达水平均明显下调(P<0.05).结论 Icotinib可能通过抑制EGFR下游信号通路蛋白的表达,进而有效抑制HCC827细胞的增殖和诱导HCC827细胞的凋亡.     

芬太尼抑制鼻咽癌细胞侵袭转移的机制研究

目的：通过选择10 nmol/L芬太尼作用于鼻咽癌细胞系CNE2和HONE1，研究芬太尼对鼻咽癌细胞迁移能力的影响。 方法：取对数生长期的鼻咽癌细胞系CNE2和HONE1，选择10 nmol/L芬太尼分别作用于鼻咽癌细胞系30分钟和1小时，Western blot检测p-Src和Src表达，Transwell检测细胞迁移能力；构建Src过表达质粒，转染鼻咽癌细胞系，观察鼻咽癌细胞形态，检测细胞的迁移能力。 结果：10 nmol/L芬太尼处理鼻咽癌细胞CNE2和HONE1 48小时后，细胞呈现出类间质向上皮转化的形态特征，同时，与对照组相比，加入芬太尼处理组的鼻咽癌细胞其迁移能力显著降低；应用芬太尼分别处理鼻咽癌细胞30分钟和1小时后，p-Src水平显著下调；此外，与转染空载体质粒的对照组相比，过表达Src的细胞迁移能力明显增强，而在过表达Src的细胞中同时联合芬太尼处理后，细胞的迁移能力没有被抑制。 结论：芬太尼可能通过抑制Src通路活化抑制鼻咽癌细胞侵袭转移。     

ZnPcH1-PDT对CNE1细胞增殖抑制作用研究

目的本文探讨新型酞菁类光敏剂ZnPcH1介导的光动力疗法(ZnPcH1-PDT)对鼻咽癌细胞的杀伤作用。方法采用人鼻咽癌CNE1细胞作为研究对象。应用MTT比色法和细胞集落形成实验检测PDT对细胞的杀伤作用。结果 ZnPcH1-PDT对鼻咽癌CNE1细胞有杀伤作用,呈量效关系(P<0.05)。结论 ZnPcH1-PDT能够有效地抑制鼻咽癌细胞的增殖,且呈量效关系。     

PIAsxα对鼻咽癌细胞系CNE1凋亡的影响及其机制探讨

目的　探讨PIAsxα 对鼻咽癌细胞凋亡和成瘤能力的影响及可能机制。方法　采用实时定量PCR,流式细胞术以及裸鼠成瘤实验分析PIAsxα 在鼻咽癌组织中的表达情况,PIAsxα 对鼻咽癌细胞系CNE1 凋亡和cyclin D、CDK 表达及其成瘤能力的影响。结果　鼻咽癌组织中PIAsxα mRNA 的表达水平显著低于邻近正常鼻咽组织。过表达PIAsxα 的CNE1 细胞凋亡率及G2/M 期细胞比例均明显增高,cyclin D1、cyclin D3、CDK4、CDK6 和CDK8 的mRNA 表达均显著降低且在裸鼠体内的成瘤能力亦受到抑制。结论　PIAsxα 的表达下调可能通过增加cyclin D 和CDK 的表达,抑制鼻咽癌细胞的凋亡,促进鼻咽癌的发生和发展。     

DHA对人鼻咽癌CNE2细胞增殖的抑制作用及机制研究

目的 研究DHA对鼻咽癌细胞增殖、凋亡的影响.方法 CCK8法检测DHA对CNE2细胞增殖的影响;AnnexinV/PI双染流式细胞仪检测DHA对CNE2细胞凋亡的影响;RT-PCR检测DHA处理后CNE2细胞凋亡相关蛋白表达变化情况.结果 DHA较对照组明显抑制CNE2细胞增殖.经DHA处理后CNE2细胞中Bcl-2、Bcl-xl表达下降,且呈剂量依赖性.结论 DHA可有效抑制Bcl-2、Bcl-xl的表达而发挥抑制癌细胞增殖、诱导凋亡效应.     

表皮生长因子在肿瘤诊疗中的研究进展

表皮生长因子受体（Epidermal growth factor receptor,EGFR）在90％的肿瘤中存在过度表达。EGFR介导的信号通路与肿瘤细胞扩增、凋亡抑制、血管生成、侵袭及转移有关。EGFR是与细胞增殖有关的蛋白质,而EGFR蛋白表达水平与活性的改变不仅影响细胞的生长亦与细胞对化、放疗的敏感性有关。本文综述TEGFR的结构、功能及其靶向抗肿瘤新生血管生成药物及其研究进展。     

敲低 Ⅰ型胶原 α1链基因抑制鼻咽癌细胞增殖、迁移和侵袭的研究

目的 研究Ⅰ型胶原α1链(COL1A1)基因对鼻咽癌细胞增殖、侵袭、迁移的影响.方法 该研究于2017年9月至2018年12月完成,实时定量PCR(qPCR)和蛋白质印迹法(Western blotting)检测COL1A1在鼻咽癌(C666-1、CNE1、CNE2)细胞系中的表达量;CNE1细胞分m为对照组、阴性对照(si-NC组)、敲低COL1A1(si-COL1A1)组,通过Lipofectamine 2000将siRNA COL1A1质粒转染至鼻咽癌CNE1细胞中,对照组细胞正常培养,si-NC组细胞转染阴性对照;qPCR和Western blotting检测转染效果,噻唑蓝(MTT)、Transwell实验分别检测细胞增殖、侵袭、迁移;Western blotting检测钙黏蛋白E(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、钙黏蛋白N(N-cadherin)水平.结果 COL1A1 mRNA[(3.565±0.341)(4.253±0.410)(3.968±0.378)]和蛋白表达量[(2.214±0.216)(3.152±0.305)(2.519±0.221)]在鼻咽癌(C666-1、CNE1、CNE2)细胞系中表达量增加(P<0.05);CNE1细胞转染siRNA COL1A1质粒能显著下调COL1A1 mRNA(0.352±0.045)和蛋白表达量(0.245±0.232)(P<0.05);敲低COL1A1的表达量抑制CNE1细胞增殖(0.536±0.059)(0.665±0.067)(0.893±0.081)(P<0.05),降低其侵袭(52.895±5.635)、迁移(113.254±13.279)能力(P<0.05),上调E-cadherin蛋白水平(2.152±0.223)(P<0.05),下调Vimentin(0.362±0.045)、N-cadherin(0.423±0.043)蛋白水平(P<0.05).结论 COL1A1可能通过抑制上皮细胞间充质化(EMT)促进鼻咽癌细胞增殖、侵袭、迁移.     

三维共培养模型下人脐静脉内皮细胞对鼻咽癌CNE2细胞侵袭、迁移及增殖能力的影响

目的探讨三维共培养下人脐静脉内皮细胞(HUVEC)对CNE2细胞侵袭、迁移及增殖能力的影响。方法采用Transwell小室对HUVEC细胞和CNE2细胞进行共培养,CCK-8法比较两组实验中CNE2细胞增殖能力,细胞计数法比较细胞迁移能力,以及Matrigel胶法比较侵袭能力。结果 HUVEC与CNE2共培养条件下,共培养组迁移能力显著高于非共培养组(P0.01)。共培养组侵袭能力显著高于非共培养组(P0.01)。在增殖实验中,共培养组和非共培养组的OD值第3天,第4天及第5天,共培养组的细胞增殖率显著高于非共培养组(P0.05)。结论在三维共培养条件下,HUVEC对CNE2鼻咽癌细胞的侵袭、迁移及增殖能力有促进作用。     

MAPK/ERK信号通路在益气解毒方水提物诱导鼻咽癌细胞凋亡中的作用

目的研究益气解毒方水提物对鼻咽癌细胞凋亡的影响,并从MAPK/ERK信号通路探讨其诱导凋亡的作用机制。方法 CCK-8法检测益气解毒方水提物对CNE1、CNE2细胞增殖的影响;Hoechst 33342染色法、JC-10染色法、荧光双染流式细胞仪检测其对CNE1、CNE2细胞凋亡的影响;Western blot法检测其对CNE1、CNE2细胞蛋白表达的影响。结果益气解毒方水提物能抑制CNE1、CNE2细胞增殖(P<0.05)、诱导凋亡(P<0.05);药物作用48 h后,Survivin、XIAP、Bcl-2表达下降,Bax表达上升,MAPK/ERK信号通路关键蛋白p-c-Raf、p-MEK、p-ERK表达下降(P<0.05);在此基础上,加入激活剂ISO和益气解毒方水提物后,与单用益气解毒方水提物相比,p-c-Raf、p-MEK、p-ERK1/2表达上调,Survivin、XIAP、Bcl-2表达增加,Bax表达下降,促凋亡效应也降低(P<0.05)。结论益气解毒方水提物可诱导鼻咽癌细胞凋亡,该效应与其抑制MAPK/ERK信号通路关键蛋白p-c-Raf、p-MEK、p-ERK1/2表达,进而下调Survivin、XIAP、Bcl-2表达,上调Bax表达有关。     

茶多酚对人鼻咽癌细胞系放射增敏机制的实验观察

目的探讨茶多酚对鼻咽癌细胞生长的抑制,及对放疗增敏作用机制的观察。方法体外培养鼻咽癌CNE-2细胞系,分单纯放疗组和放疗加茶多酚组,通过MTT（四唑蓝比色试验）法观察组间细胞生长的抑制情况,通过流式细胞仪检测细胞周期变化,通过电子显微镜观察细胞凋亡情况。结果 MTT法显示与单纯放疗组相比,放疗加茶多酚组,随着茶多酚浓度的增高和作用时间的延长对鼻咽癌细胞生长的抑制也逐渐增加;流式细胞仪结果显示放疗加茶多酚组使G2/M期的细胞减少,提示放疗杀伤了更多的处于G2/M期的细胞;电子显微镜观察细胞凋亡超微结构显示放疗加茶多酚组能较早的诱导鼻咽癌细胞产生凋亡小体。结论茶多酚在体外试验中显示,其对鼻咽癌细胞系CNE-2的放疗有增敏作用。     

长链非编码 RNA组蛋白去乙酰化酶 3通过哺乳动物雷帕霉素靶蛋白信号通路调控肝癌细胞增殖、迁移侵袭和凋亡

目的 研究长链非编码RNA组蛋白去乙酰化酶3(HDAC3)对肝癌细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的调控机制.方法 运用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测正常肝细胞MIHA、肝细胞癌细胞SK-Hep1中HDAC3的表达;将si-NC组(转染si-NC)、si-HDAC3组(转染si-HDAC3)、si-HDAC3+DMSO组[转染si-HDAC3并用二甲基亚砜(DMSO)处理]、si-HDAC3+MHY1485组[转染si-HDAC3并用哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路抑制剂MHY1485处理]用脂质体法转染至SK-Hep1细胞;CCK-8法检测细胞增殖;Transwell小室检测细胞迁移侵袭;流式细胞术检测细胞凋亡;蛋白质印迹法(Western blot?ting)检测细胞中Akt激酶、翻译起始因子4E结合蛋白1(4E-BP1)、核糖体p70S6激酶蛋白(S6K1)、磷酸化核糖体p70S6激酶蛋白(p-S6K1)的蛋白表达.结果 与正常肝细胞MIHA(1.00±0.06)相比,肝细胞癌细胞SK-Hep1中HDAC3表达(4.38±0.34)显著上调(P<0.05).敲减HDAC3后,SK-Hep1细胞的增殖、迁移、侵袭能力均得到明显下调,凋亡能力得到明显上调.有趣的是,敲减HDAC3后,SK-Hep1细胞中mTOR信号通路关键基因Akt、4E-BP1、p-S6K1的表达均明显下调,并且激活mTOR信号通路可部分逆转敲减HDAC3对肝癌细胞的增殖、迁移、侵袭和凋亡调控作用.结论 长链非编码RNA HDAC3可调控肝癌细胞的增殖、迁移、侵袭和凋亡,其机制可能与mTOR信号通路相关,可为肝癌的治疗提供新的作用靶点.     

TESTIN在鼻咽癌中的表达及对鼻咽癌细胞系增殖、上皮-间质转化和侵袭转移的影响

目的 观察TESTIN在鼻咽癌组织和细胞中的表达,分析TESTIN过表达对鼻咽癌细胞增殖、上皮-间质转化(EMT)和侵袭转移的影响.方法 采用免疫组化、Real time-PCR、Western-blot检测TESTIN在鼻咽癌组织和细胞系的表达状况.利用脂质体LipofectamineTM2000转染鼻咽癌5-8F细胞,Real time-PCR、Western-blot验证转染效率.MTT、细胞划痕实验、细胞侵袭实验检测TESTIN过表达对5-8F细胞增殖、EMT和侵袭转移的影响.Western-blot检测TESTIN过表达对侵袭转移相关基因表达的影响.结果 TESTIN在鼻咽癌组织的阳性表达率和表达水平明显低于正常鼻咽部组织,差异有统计学意义(P<0.05).与人正常永生化鼻咽上皮细胞系NP69比较,鼻咽癌细胞系CNE1、CNE2、C666-1、5-8F、6-10B中TESTIN表达水平显著降低,差异有统计学意义(P<0.05).转染pcDNA3.1/TESTIN的5-8F细胞中TESTIN表达显著上调(P<0.05).TESTIN过表达显著抑制5-8F细胞增殖、EMT和侵袭转移,同时上调E-cadherin表达,下调N-cadherin、Vimentin、MMP-2、MMP-9表达(P<0.05).结论 鼻咽癌组织和细胞系中TESTIN表达显著降低,TESTIN过表达可抑制鼻咽癌5-8F细胞增殖、EMT和侵袭转移.     

转化生长因子-β及其Smad信号转导的研究进展

<正>转化生长因子-β(TGF-β)是具有多种生物学活性的多肽类细胞因子,在细胞的增殖、分化、凋亡等过程中起重要的调节作用,与炎症、纤维化、肿瘤等关系密切。Smads蛋白作为TGF-β下游的信号蛋白分子,是将TGF-β信号从细胞外转导到细胞核内的关键因子,在细胞水平介导TGF-β的生物学效应。本文就近年来国内外在TGF-β及其Smad跨膜信号转导、主要生物学作用及与风湿性疾病关系的研究进展作一综述如下。     

用于治疗癌症的抗EGFR人单克隆

表皮生长因子受体（EGFR）是一种跨膜糖蛋白，它包括一个胞外配体结合区和一个具有酪氨酸激酶活性及信号传导功能的胞内区，EGF和转化生长因子-α（TGF-α）是其最重要的配体。其配体的结合可激活受体及其信号传导途径，并由此激活或调节细胞生长进程。该受体存在于源自所有3个胚细胞层（尤其是上皮层）的健康细胞及恶性组织中，已证实在多种恶性细胞中均出现该受体的过度表达，且受体水平上调导致临床预后不良。近20年来的研究表明，EGFR（或称HER1和ErbB1）的失调会引起自主性细胞生长（autonomous cell growth）、侵袭及血管生成等肿瘤的主要特征性表现