冠心病患者外周血内皮祖细胞数量与心血管危险因素的关系

目的:观察冠心病患者外周血内皮祖细胞(EPCs)数量与心血管危险因素之间的关系.方法:选择20例冠心病患者(G1组,n=20)和10例非冠心病患者(G2组,n=10),分别抽取外周血进行EPCs 的分离培养,于第10天对EPCs进行鉴定,并于倒置相差显微镜下计数内皮祖细胞克隆形成单位(EPC-CFU),评估外周血EPCs水平.分析外周血EPCs数量与心血管的各个危险因素(高血压、糖尿病、血清低密度脂蛋白(LDL)、总胆固醇、高敏C反应蛋白(hsCRP)水平)及整体危险性(用Framingham危险积分定量评估)的关系.结果:G1组外周血EPCs数量较G2组明显减少(10.3±2.5 vs 17.7±2.2),差异有统计学意义(P＜0.05).冠心病患者外周血EPCs数量与Framingham危险积分、高血压、血清LDL、hsCRP水平呈负相关.结论:冠心病患者外周血EPCs数量减少,并与Framingham危险积分呈负相关.     

神经胶质细胞对小鼠骨髓血管内皮前体细胞迁移的作用

目的 探讨视网膜神经胶质细胞对小鼠骨髓血管内皮前体细胞(EPCs)迁移的作用及可能机制.方法 荧光免疫激活流式细胞仪分选获得小鼠骨髓血管内皮前体细胞,分别用神经胶质细胞或对照组成纤维细胞作为条件共培养细胞与EPCs细胞共培养24 h后,检测内皮前体细胞通过孔隙的迁移数量;并用ELISA法检测培养液内VEGF及SDF一1的含量.结果 CD34/VEGFR2双标阳性的细胞为富含骨髓血管内皮前体细胞的细胞群,约占全部骨髓细胞的0.2%;当EPCs神经胶质细胞共培养24h后,EPCs通过孔隙的数量显著高于对照组与成纤维细胞共培养时通过的数量(上层存留细胞(20±16)个、vs(170±55)个,P<0.01).与神经胶质细胞共培养系统细胞培养液中VEGF及SDF～1含量显著高于对照组[VEGF:(230.28±27.37)pg/mL vs(89.22±11.23)pg/mL,P<0.01;SDF-1:(328.34±57.42)pg/mL vs(62.44±34.35)pg/mL,P<0.01].结论 神经胶质细胞可能通过细胞因子的分泌作用增强EPCs的移行,在EPCs参与的新生血管形成中可能有重要的介导作用.     

冠心病患者高敏C反应蛋白与循环内皮祖细胞的关系及临床意义

目的研究冠心病患者血清高敏C反应蛋白(hs-CRP)与循环内皮祖细胞(EPCs)水平之间的关系及临床意义.方法将46例研究对象随机分为稳定型心绞痛(SAP)组(n=18)、急性冠脉综合征(ACS)组(n=24)及对照组(n=36),并根据冠状动脉造影结果分为单支病变组(n=18)、双支病变组(n=14)及三支病变组(n=10).胶乳凝集反应法测定冠状动脉造影患者高敏CRP浓度,同时采集研究对象外周血进行EPCs的分离培养,倒置相差显微镜下计数细胞克隆形成单位评估循环EPCs水平.结果 ACS组hs-CRP浓度明显高于对照组和SAP组,而SAP组及ACS组循环EPCs水平明显低于对照组(P<0.05 );双支病变组与三支病变组hs-CRP水平较对照组显著升高(P<0.05),冠状动脉病变(单支、双支、三支)组EPCs水平均显著低于对照组(P< 0. 01).高敏C反应蛋白与循环内皮祖细胞水平呈负相关(r= -0.429,P<0.05).结论 CRP和EPCs与冠心病及冠状动脉病变程度具有相关性,且CRP和EPCs两者之间呈负相关.提示CRP可能通过抑制EPCs数量从而减弱EPCs参与损伤内皮修复的能力,与冠心病发生及临床表现相关.     

支架置入对ACS患者外周血EPCs数量和血清G-CSF浓度的影响

目的:观察支架置入术对急性冠脉综合征(ACS)患者外周血内皮祖细胞(EPCs)数量和血清粒细胞集落刺激因子(G-CSF)浓度的影响及意义。方法:32例行冠状动脉支架置入术的ACS患者根据不同临床类型分为:ST段抬高ACS急诊PCI组(n=7)和非ST段抬高ACS[包括14例非ST抬高心肌梗死(NSTEMI)和11例不稳定心绞痛(UAP)择期PCI组(n=25)],10例同期经冠状动脉造影(CAG)证实无冠状动脉病变者作为对照组(n=10)。分别于术中和术后3 d抽取外周血进行EPCs的分离培养,同时分离血清以备G-CSF浓度检测。于第10 d对EPCs进行鉴定并于倒置相差显微镜下计数内皮祖细胞克隆形成单位(EPC-CFU)以评估外周血EPCs水平。G-CSF浓度检测采用酶联免疫吸附法(ELISA)。结果:①急诊PCI组术前外周血EPC-CFU数量稍高于择期PCI组,但无统计学意义(P>0.05),且均明显少于对照组(P<0.01)。急诊PCI组术前血清G-CSF明显高于择期PCI组,且均明显高于对照组。②急诊PCI组和择期PCI组术后外周血EPCs数量及血清G-CSF均有增高,但后者外周血EPCs数量增加幅度明显大于前者,对照组外周血EPCs数量及血清G-CSF改变无统计学意义(P>0.05)。③择期PCI组外周血EPCs增加数量与血清G-CSF改变相关(r=0.261,P=0.009),急诊组则无。结论:择期PCI患者术后外周血EPCs数量明显增加,且与血清G-CSF改变相关。AMI后急诊PCI患者术后血清G-CSF浓度明显升高但与外周血EPCs数量增加无明显相关。     

不稳定型心绞痛患者外周血内皮祖细胞与冠状动脉狭窄程度的关系

目的:探讨外周血内皮祖细胞(EPCs)的数量与不稳定性心绞痛患者冠状动脉病变程度的相关性。方法:选取不稳定性心绞痛患者53例作为患者组,同期无冠状动脉病变患者33例作为对照组。患者入院后即抽取静脉血,采用流式细胞仪检测单个核细胞中CD34及CD133双阳性细胞(EPCs)的数量。然后行冠状动脉造影,采用Gensini评分系统对冠脉病变程度进行定量分析。分析外周血EPCs数量与冠脉病变程度的关系。结果:不稳定性心绞痛患者外周血EPCs数量较对照组明显减少(P<0.05);冠状动脉狭窄程度严重的患者外周血EPCs数量明显高于狭窄程度较低的患者(P<0.05);冠脉狭窄的严重程度与EPCs数量呈正相关(P<0.05)。结论:不稳定性心绞痛患者外周血内皮祖细胞的数量明显降低,冠脉狭窄可导致外周血EPCs数量增多。     

VEGF测定在急性心肌梗死中的意义

目的探讨急性心肌梗死(AMI)患者血清血管内皮生长因子(VEGF)含量的变化及意义.方法观察16例AMI患者经过冠状动脉成型术,以及肝素、硝酸酯类药物、阿斯匹林等治疗前后血清VEGF的变化.于发病第1、3、14d和28d分别测定血清VEGF的含量.结果发病后第1 d血清VEGF的浓度与对照组无显著差别(85±11) vs (72±2)pg/mL(P>0.05).发病后第3 d,VEGF的浓度较第1 d 明显升高(150±46) vs (85±11) pg/mL(P<0.001).发病后第7 d 达高峰(171±31) vs (85±11)pg/mL(P<0.0001).之后开始下降,但第28 d 仍明显高于第1 d(142±132) vs (85±11) pg/mL(P<0.001).结论AMI治疗后VEGF的水平明显持续增高,可能与缺血心肌的血管新生及冠状血管侧枝循环的建立有关.     

pcDNA3.1(+)/VEGF165质粒转染骨髓内皮祖细胞后VEGF165的表达

目的:培养和鉴定大鼠内皮祖细胞(Endothelial progenitor cells,EPCs),观察pcDNA3.1(+)/VEGF165质粒转染大鼠骨髓内皮祖细胞后内皮细胞生长因子165(Vascular endot-helial growth fator-165,VEGF165)的表达.方法:体外培养内皮祖细胞,以免疫细胞化学法检测其表面抗原(CD34、CD133、KDR)的表达.通过pcDNA3.1(+)质粒转染VEGF165后,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测内皮祖细胞培养上清液中VEGF蛋白的水平,反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测内皮祖细胞中VEGF165mRNA的表达.结果:免疫细胞化学检测表明培养的细胞为大鼠内皮祖细胞,PCR后凝胶电泳显示pcDNA3.1(+)/VEGF165质粒转染组在576 bp处可见有明显条带,pcDNA3.1(+)空质粒转染组和未转染组可见微弱的电泳带位于500 bp与600 bp之间,约576bp大小.ELISA检测结果为pcDNA3.1(+)/VEGF165质粒转染组上清液中VEGF165水平为(175.8±10.7)pg/ml,pcDNA3.1(+)空质粒组为(10.5±1.6)pg/ml,未转染组为(9.3±1.3)pg/ml.结论:内皮祖细胞体外培养有微量VEGF165表达,应用pcDNA3.1(+)/VEGF165载体转染,可使SD大鼠内皮祖细胞高效表达VEGF165.     

脑缺血再灌注大鼠外周血EPCs与VEGF、bFGF、eNOS水平变化及相关性

目的 探讨大鼠脑缺血再灌注后外周血内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)、血清血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)及内皮型一氧化氮合成酶(endothelial nitric oxide synthase,eNOS)水平变化及相关性.方法 SD大鼠随机分为正常空白对照组、假手术组、脑梗死组、糖尿病组、糖尿病假手术组和糖尿病缺血再灌注组.链脲佐菌素诱导制作糖尿病模型,线栓法制作脑缺血再灌注模型.流式细胞仪测定EPCs数量.ELISA法测定VEGF、bFGF及eNOS的数量.结果 脑梗组EPCs、VEGF、bFGF和eNOS数量较正常组及假手术组增高(P<0.01),糖尿病脑梗组EPCs较糖尿病组下降(P<0.05),而VEGF、bFGF和eNOS数量则升高(P<0.05).EPCs与VEGF和bFGF数量变化有相关性(P<0.05),与eNOS数量变化相关性无统计学意义.结论 大鼠脑缺血再灌注后外周血EPCs与VEGF和bFGF水平变化存在相关性,它们可能共同影响着缺血性脑血管病的一些病理生理过程.这种变化及相关性对于估测脑梗死患者病情程度和预后有一定的指导意义.     

冠心病患者外周血内皮祖细胞数量差异及其对内皮功能的影响

目的 探讨冠心病患者外周血内皮祖细胞(EPCs)的水平及其对内皮功能的影响。方法 随机选取经冠脉造影确诊为冠心病患者53例为冠心病组,非冠心病患者52例为正常对照组,采用超声测定其内皮舒张功能指标(FMD),采用流式细胞术检测各组EPCs水平,同时检测反映内皮功能的生化指标,采用免疫散射比浊法测定高敏C反应蛋白(hs-CRP)水平,硝酸盐还原酶法测定NO。结果 在基线水平上,冠心病组内皮功能较正常对照组明显低下,EPCs数目明显减少,hs-CRP 水平升高,NO含量减低,差异均有统计学意义(P均<0.05); FMD与EPCs数量显著相关,FMD随EPCs数量增加而改善,呈正相关趋势(r=0.52,P<0.01)。同时,反映内皮功能的指标hs-CRP与FMD、EPCs均呈负相关趋势(r=-0.43,r=-0.50,P<0.05),NO与FMD、EPCs均呈正相关趋势(r=0.54,r=0.45,P<0.05)。结论 冠心病患者EPCs数量较健康人群明显减少,内皮功能明显低下,同时内皮功能随EPCs数量增加而改善。     

组织工程学内皮祖细胞膜片制备及生物学功能研究

目的 制备大鼠骨髓来源内皮祖细胞(BM-EPCs)组织工程学细胞膜片并行生物学功能研究.方法 建立大鼠BM-EPCs培养体系,获取培养至14 d的EPCs.应用流式细胞术行细胞表面标志物检测并Dil标记的乙酰化低密度脂蛋白(Dil-acLDL)和异硫氰酸荧光素(FITC)标记的荆豆凝集素-1(FITC-UEA-1)共同染色方法鉴定BM-EPCs.应用Nunc UpCell Surface培养皿制备BM-EPCs组织工程学细胞膜片,测量膜片厚度并应用CCK-8法检测膜片中细胞代谢功能,体外血管形成实验检测内皮分化功能,间接酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测细胞膜片旁分泌基质细胞衍生因子1α(SDF-1α)、血管内皮生长因子(VEGF)、表皮细胞生长因子(EGF)水平.结果 通过建立大鼠BM-EPCs培养体系并成功获得EPCs膜片.体外实验结果显示,与EPC单细胞组比较,EPC膜片组具有更强的增殖能力及血管形成能力,且具有更强的旁分泌SDF-1α、VEGF作用,差异均有统计学意义[(4.86±0.09)pg/mL vs.(5.32±0.12)pg/mL、(162.88±0.96)pg/mL vs.(194.72±6.53)pg/mL,P<0.01].两组细胞EGF水平比较,差异无统计学意义[(281.50±9.96)pg/mL vs.(294.16±8.98)pg/mL,P>0.05].结论 EPCs膜片具有更强的细胞增殖能力、血管形成能力及旁分泌作用,可为干细胞移植方式提供参考.     

角膜内皮抗原及抗角膜内皮抗原抗体的提纯

目的提纯角膜内皮抗原(cornealendothelialantigen,CEN-Ag)及抗角膜内皮抗原抗体(anti-cornealendothelialantibody,aCEN-Ab)。方法用猪角膜内皮做抗原,上皮做对照,经离子交换层析及2B4.14.1单克隆抗体亲和层析制得纯化的CEN-Ag和角膜上皮抗原(cornealepithelialantigen,CEP-Ag),用提纯的CEN-Ag和CEP-Ag分别免疫家兔,取血清经亲和层析得到aCEN-Ab和抗角膜上皮抗原抗体(anti-cornealepithelialantibody,aCEP-Ab)。结果经聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析,抗原CEN-Ag和CEP-Ag的Mr分别为43000和53000,相应的免疫球蛋白是IgG2和IgG3。     

角膜内皮抗原及抗角膜内皮抗原抗体的提纯

目的 提纯角膜内皮抗原（corneal endothelial antigen,CEN-Ag)及抗角膜内皮抗原抗体（anti-corneal endothelial antibody,aCEN-Ab)。方法 用猪角膜内皮做抗原，上皮做对照，经离子交换层析及2B4.14.1单克隆抗体亲和层析制得纯化的CEN-Ag和角膜上皮抗原（corneal epithelial antigen,CEP-Ag)，用提纯的CEN-Ag和CEP-Ag分别免疫家兔，取血清经亲和层析得到aCEN-Ab和抗角膜上皮抗原抗体（anti-corneal epithelial antibody,aCEP-Ab)。结果 经聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）分析。抗原CEN-Ag和CEP-Ag的Mr分别为43000和53000，相应的免疫球蛋白是IgG2和IgG3。     

雷公藤内酯醇抑制血管内皮细胞生长因子的表达与合成

目的 探讨雷公藤内酯醇对血管内皮细胞生长因子（VEGF）mRNA表达及VEGF合成与分泌的影响,进一步探讨雷公藤内酯醇降低肾小球肾炎患者尿蛋白的作用机制。方法 以人内皮细胞系ECV－304为研究对象,利用逆转录－聚合酶链反应（RT－PCR）、流式细胞仪、酶联免疫吸附法（ELISA）检测不同剂量雷公藤内酯醇对佛波脂（PMA）诱导的内皮细胞VEGF mRNA表达及VEGF合成与分泌的影响,并采用RT－PCR检测雷公藤内酯醇对内皮细胞c-jun/c-fos mRNA表达的影响。结果 雷公藤内酯醇可以抑制PMA诱导的内皮细胞VEGF mRNA表达及VEGF合成与分泌,并呈剂量依赖性。同样,雷公藤内酯醇剂量依赖性抑制PMA诱导的内皮细胞c-jun/c-fos mRNA的表达。结论 雷公藤内酯醇抑制内皮细胞VEGF mRNA表达及VEGF合成与分泌可能是其雷公藤内酯醇降低肾小球肾炎患者尿蛋白的作用机制之一。雷公藤内酯醇可能通过影响转录因子AP－1的形成而影响内皮细胞VEGF的表达与合成。     

肾上腺髓质素和内皮屏障功能

研究表明,内皮屏障功能丧失是急性炎症的标志,并且在严重感染中促成器官功能衰竭,但是目前还没有关于内皮屏障功能稳定性治疗方面的研究。内源性肽肾上腺髓质素（Adrenomedullin,AM）血清水平显示其在严重感染包括脓毒症和脓毒性休克时升高,在体内和体外脓毒症模型中用作有效的内皮屏障功能的稳定剂。AM还具有心血管保护作用,包括在炎症状态保护微循环。总之,AM可能作为一个有效的保护因素,通过保护内皮屏障功能防治严重感染中的心血管功能障碍。     

内皮微颗粒与内皮细胞凋亡

微颗粒（microparticle,MP）是各种类型的细胞激活或损伤时,从细胞膜上脱落的微小膜性囊泡,直径为0.1～1μm,表面表达各种磷脂和粘附分子,少量存在于健康个体血浆中。根据微颗粒的细胞来源,分为血小板来源的MP、白细胞来源的MP、红细胞来源的MP和内皮细胞来源的MP（endothelial—derived microparticles,EMP）,     

肺血栓栓塞症与内皮细胞

肺血栓栓塞症(PTE)时肺血管内皮功能会发生明显变化[1],通过释放各种血管活性物质参与调节肺循环的病理生理过程.本文就PTE后血浆内皮素、氧化氮(NO)水平的变化,低分子肝素对血栓形成的触发机制,血浆内皮素、NO等产生的影响,以及内皮细胞的靶向治疗总结如下.     

循环内皮细胞、内皮祖细胞与肿瘤关系的研究进展

近年来的研究表明,与血管内皮细胞密切相关的循环内皮细胞（circulating endothelial cells,CEC）与内皮祖细胞（endothelial progenitor cells,EPC）在肿瘤机体内明显增高,其水平和活性与肿瘤的发展和治疗密切相关。因此,这些细胞在肿瘤形成中的作用及肿瘤治疗中的临床意义成为肿瘤研究领域的一大热点,     

血管内皮生长因子通过缝隙连接蛋白43调节内皮祖细胞增殖迁移

目的 探讨血管内皮生长因子(vascular endothelial groth factor,VEGF)是否通过缝隙连接蛋白43(connexin 43,Cx43)调控内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)增殖迁移.方法 分离培养原代大鼠脾源性EPCs,不同浓度VEPF(0、10、50 ng/mL)刺激细胞,Western blot检测Cx43的表达.实验分3组:对照组、VEGF组、VEGF+siCx43组.荧光漂白恢复实验(fluorescence redistribution afterphotobleaching,FRAP)分别检测3 min内各组选定细胞荧光强度变化情况.CCK-8检测干扰Cx43蛋白表达对EPCs增殖的影响;Transwell小室迁移实验检测干扰Cx43蛋白表达对EPCs迁移的影响.结果 (1) VEGF促进EPCs中Cx43的表达(P＜0.05),且有浓度依赖性.(2)与对照组相比,VEGF组缝隙连接功能明显增强(P＜0.05);与VEGF组相比,VEGF+siCx43组缝隙连接功能明显降低(P＜0.05).(3)与对照组相比,VEGF组促进EPCs增殖及迁移,差异有统计学意义(P＜0.05);与VEGF组相比,VEGF+ siCx43组EPCs增殖及迁移活性明显降低(P＜0.05).结论 VEGF可以通过上调EPCs中Cx43的表达,引起缝隙连接功能增强,从而促进内皮祖细胞的增殖及迁移.     

脱氢表雄酮对血管内皮细胞损伤后单核细胞与内皮细胞相互作用的影响

目的脱氢表雄酮(dehydroepiandrosterone,DHEA)是成人体内最为丰富的来源于肾上腺的甾体激素,文中探讨DHEA对氧化型低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein,ox-LDL)所致血管内皮细胞损伤后单核细胞与内皮细胞相互作用的影响。方法以培养的人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVEC)作为靶细胞,在内皮细胞培养基中加入ox-LDL或在试验体系中加入不同浓度的DHEA,测定人单核细胞系U937与HUVEC的黏附,检测内皮细胞条件培养基中一氧化氮(nitric oxide,NO)及单个核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemoattractant protein,MCP-1)的含量,应用流式细胞仪检测内皮细胞表面黏附分子细胞间黏附分子-1(intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1)、血管细胞黏附分子-1(vascularcell adhesion molecule-1,VCAM-1)及E-选择素的表达。将内皮细胞条件培养基作用于U937细胞,应用RT-PCR检测U937细胞CCR2、LFA-1以及VLA-4 mRNA的表达。结果 DHEA可明显抑制单核U937细胞与内皮细胞之间的相互黏附,明显促进内皮细胞NO合成,抑制MCP-1分泌,降低内皮细胞表面ICAM-1、VCAM-1的表达,且经DHEA作用后的内皮细胞条件培养基可明显抑制单核U937细胞CCR2、淋巴细胞功能相关抗原(lymphocyte function-associated antigen,LFA)-1以及非常晚期抗原(very late antigen,VLA)-4 mRNA的表达。结论 DHEA可通过抑制内皮细胞分泌趋化因子、下调内皮细胞表面黏附分子的表达,抑制内皮细胞对单核细胞的趋化及相互黏附,据此认为DHEA可能对血管内皮细胞具有保护作用。     

彩色超声对高血压、糖尿病肱动脉及微血管血管内皮功能的研究应用价值

目的:探讨高血压及高血压合并糖尿病患者血管内皮功能。方法:应用高分辨率超声检测35例高血压患者,27例高血压合并糖尿病患者,22例正常对照者,肱动脉内径和峰值流速变化,并测量各组患者眼动脉、视网膜动脉血流参数。结果:正常对照组、高血压组及高血压合并糖尿病组充血性反应后内径变化和峰值流速的变化,眼动脉及视网膜动脉血流参数均有明显差异。眼动脉、视网膜动脉各参数与充血性肱动脉内径变化显著性相关。结论:超声检测可以评价高血压及高血压合并糖尿病患者的肱动脉、眼动脉及视网膜动脉内皮功能。