姜黄素对晶状体上皮细胞增殖的抑制作用

目的探讨姜黄素（Cur）对表皮生长因子（EGF）诱导的牛晶状体上皮细胞（LEC）增殖的抑制作用及其量效与时效关系。方法MTT测定不同浓度的Cur作用于牛LEC不同时间后细胞增殖的情况，流式细胞术（FCM）检测不同浓度的Cur作用于牛LEC不同时间后增殖细胞核抗原（PCNA）的表达状况。结果（1）MTT法结果表明，高、中、低不同浓度的Cur作用24h后，其增殖抑制率分别为66．65％、22．43％、8．72％，呈明显的剂量-效应关系，20mg／L的Cur作用6、12、24、48、72h后，其增殖抑制率分别为9．97％、19．81％、22．43％、41．67％、81．59％，呈明显的时间-效应关系。（2）FCM检测表明，Cur对LEC内PCNA蛋白表达有明显的下调作用，也呈明显的时间-效应关系和剂量-效应关系。结论Cur能有效抑制EGF诱导的LEC增殖，可望成为防治后发性白内障的理想药物。     

环孢素A对兔晶状体上皮细胞增殖的影响

目的研究环孢素A(CsA)在不同情况下,对兔晶状体上皮细胞(RLECs)超微结构和增殖的影响。方法用CsA分别处理正常生长的RLECs和经过H2O2损伤的RLECs后,用透射电镜观察RLECs超微结构变化;噻唑蓝(MTT)法测定RLECs增殖能力改变。结果CsA浓度≥10μmol/L时,明显损伤正常RLECs的超微结构和增殖;当浓度<40μmol/L时,能部分抑制H2O2对RLECs超微结构损伤和增殖抑制。与对照组比较,差异有显著意义(P<0.01)。结论CsA对不同情况下的兔晶状体上皮细胞的超微结构和增殖具有不同的作用。     

维生素E琥珀酸酯对人晶状体上皮细胞增殖的影响

目的研究维生素E琥珀酸酯(vitamin E succinate,VES)对体外培养的人晶状体上皮细胞(HLECs)增殖的影响。方法人晶状体上皮细胞株HLECs-B3以VES刺激24h、48h、72h、96h,VES浓度为5μg/ml、10μg/ml和20μg/ml,用MTT比色法测定VES对细胞增殖的抑制作用;以流式细胞仪分析细胞周期。结果VES对人晶状体上皮细胞的增殖具有显著的抑制作用,表现为时间和剂量依赖关系。并且将细胞周期阻滞于G0/G1期。结论VES对体外培养的人晶状体上皮细胞的增殖具有抑制作用,为临床筛选防治后发性白内障的药物提供依据。     

bFGF对人晶状体上皮细胞增殖的影响

目的 研究碱性成纤维细胞生长因子（ｂａｓｉｃ ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ,ｂＦＧＦＧ）在体系对人晶状体上皮细胞增殖的影响及机制探讨。方法 取人晶状前囊膜培养。加入不同浓度ｂＦＧＦ（１μｇ．Ｌ＾－１１０μｇＬ＾－１、１００μｇ．Ｌ＾－１）,４８ｈ后免疫组化测增殖核细胞抗原阳性面积率,取人晶状体前囊膜免疫组化测ｂＦＧＦ受体。结果 一定浓度（１～１００ｕｇ．Ｌ＾－１）的ｂＦＧＦ在体     

丙戊酸钠对体外培养的人晶状体上皮细胞增生的抑制作用

目的 探讨丙戊酸钠(sodium valproate,VPA)对体外培养的人晶状体上皮细胞(human lens epithelial cells,HLECs)增生和细胞周期的影响.方法 采用不同浓度的VPA(0.5 mmol·L-1、1 mmol·L-1、2 mmol·L～、4 mmol·L-1)作用于HLECs,四甲基偶氮唑蓝法(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)检测在不同时间点(24 h、48 h、72 h)VPA对细胞增生的抑制作用;流式细胞仪测定VPA(1 mmol·L-1、2 mmol·L-1)作用于HLECs 48 h后细胞周期分布情况;Western blot测定在VPA(1 mmol·L-1、2mmol·L-1)作用于HLECs 48 h后,细胞周期依赖性激酶抑制因子(p21)在蛋白质水平表达量的改变.结果 MTT检测显示VPA浓度≥0.5 mmol·L-1对体外HLECs增生的抑制作用呈时间和剂量依赖性.VPA作用48 h后,各药物浓度组(0.5 mmol·L-1、1 mmol·L-1、2 mmol·L-1、4 mmol·L-1)细胞生长抑制率分别为11.05%、21.58%、26.67%和38.25%,流式细胞仪检测显示VPA可阻滞HLECs由G0/G1期向s期转换,使G0/G1期细胞增多,S期细胞减少.经2 mmol·L-1VPA作用48 h,G0/G1期及S期细胞比例分别为(85.40±3.90)%和(7.35±1.47)%,与阴性对照组[(53.14±1.71)%和(35.31±1.14)%]比较差异具有统计学意义(P<0.05).Western blot检测发现VPA可促进p21蛋白质水平的表达.VPA处理48 h后,各组平均灰度比值分别为0.582±0.082(1 mmol·L-1)和0.914±0.113(2 mmol·L-1),与阴性对照组(0.303±0.029)比较,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 VPA可以通过促进p21表达,使HLEcs阻滞于G0/G1期,最终抑制HLECs增生.     

维拉帕米对体外人晶状体上皮细胞增殖和黏附的抑制作用

目的:研究钙离子拮抗剂维拉帕米(verapamil,Ver)对体外培养的人晶状体上皮细胞(human lens epithelial cell,HLEC)增殖、凋亡和黏附的影响。方法:组织块法培养人晶状体上皮细胞,用Ver处理第二代人晶状体上皮细胞。MTT法观察不同浓度的Ver对HLEC增殖和黏附的影响,AO/EB双染法观察细胞形态,Annexin V-FITC/PI双染法观察细胞凋亡情况,流式细胞术(FCM)检测Ver对HLEC周期的影响。结果:组织块贴壁4~6d可见HLEC从组织块边缘长出,15~20d接近融合。随着Ver药物浓度的增加,HELC增殖率减少,以72h最为明显。FCM检测细胞周期变化时发现,G1期细胞在10,40g/L Ver(78.1±0.2,83.2±0.6)较正常组(72.0±0.9)增加(P<0.05);S期的细胞在10,40g/L Ver(10.2±0.1,8.5±0.3)较正常组(16.9±0.3)明显减少(P<0.05)。形态学观察发现,HELC在40g/LVer作用48h后发生了一系列形态改变,包括细胞核固缩、染色质边集等凋亡改变。10,20,40,80g/L的Ver可以诱导HLEC发生凋亡,且随着浓度的升高凋亡率显著升高。用药24h后HELC的贴壁量为对照组的73.2%。结论:Ver能改变细胞周期而抑制HLEC增殖、诱导细胞凋亡,并且抑制HLEC的黏附。     

维拉帕米对人晶状体上皮细胞整合素表达的抑制作用

目的研究钙通道阻滞剂维拉帕米对人晶状体上皮细胞（LECs）株SRA01/04整合素表达的影响。方法对人LECs株SRA01/04进行培养并传代,分别以0.02、0.04、0.08mmol/L的维拉帕米作用于SRA01/0424h,经流式细胞仪检测SRA01/04各整合素的阳性表达率。结果整合素α2、α3、α5、β1、β2在人LECs株SRA01/04中呈阳性表达,维拉帕米对其表达具有抑制作用,并随药物浓度的增加而逐渐增强（P〈0.05）。结论钙通道阻滞剂维拉帕米对LECs整合素的表达具有抑制作用,可能阻碍整合素介导的LECs黏附、移行和增生,有望成为防治后发性白内障的有效药物。     

奥曲肽对bFGF诱导的兔晶状体上皮细胞增殖的影响

目的 研究奥曲肽对bFGF诱导的兔晶状体上皮细胞增殖的影响.方法 体外培养的兔晶状体上皮细胞分为对照组和实验组,其中对照组包括空白对照和bFGF对照组,实验组包括单独用奥曲肽和联合10 mg·L-1碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)组,奥曲肽浓度分别为10-11mol·L-1、10-10 mol·L-1、10-9 mol·L-1、10-8 mol·L-1.加药后48 h用MTT比色法测定奥曲肽对细胞增殖的抑制作用;用流式细胞仪分析细胞周期.结果 bFGF组与空白对照组相比,吸光度A值升高,加入奥曲肽作用48 h后,随着药物浓度增加,A值明显降低(P<0.05),抑制率增加,10-9 mol·L-1、10-8 mol·L-1奥曲肽组的抑制率分别为(24.7±3.6)%、(22.8 ±6.6)%.联合应用bFGF+奥曲肽组与仅用bFGF组相比,吸光度下降更明显(P<0.05),即抑制率增加更明显,10-9 mol·L-1、10-8 mol·L-1奥曲肽联合bFGF组的抑制率分别为(32.1±2.9)%、(33.6±3.3)%.流式细胞仪分析奥曲肽对兔晶状体上皮细胞的周期的影响与MTT法栓测结果呈现大致相同趋势,随着药物浓度的增加,处于静止期的细胞逐渐增加而增殖期细胞逐渐减少.结论 奥曲肽可明显抑制bFGF诱导的兔晶状体上皮细胞的增殖,并呈剂量依赖性关系,为临床筛选防治后发性白内障的药物提供一定的依据.     

叶黄素对牛晶状体上皮细胞增殖及迁移的影响

目的观察叶黄素（lutein）对体外培养的牛晶状体上皮细胞（bovine lens epithelial ceHs，BLECs）增殖和移行的影响．为药物防治后发性白内障（after-cataract）提供新的选择。方法首先进行BLECs原代培养和传代培养。取第2～3代BLECs。分别采用MTT法、划线法．研究不同浓度及作用时间的叶黄素对体外培养的BLECs增殖及移行的影响。结果①与对照组相比．当浓度〉μmol／L时，叶黄素能够明显抑制BLECs的增殖．差异有显著性（P〈0．01）。相同作用时间不同浓度组之间抑制作用比较，随药物浓度的增加，抑制作用加强，各浓度组之间差异有显著性（P〈0．01）。而相同药物浓度组随着作用时间的延长，抑制作用加强，各时间点差异亦有显著性（P〈0．01）。②浓度为1μmol和2μmol／L的叶黄素能明显抑制BLECs的的移行，与对照组相比，差异有显著性（P〈0．01）。两组间愈合率比较，差异亦有显著性（P〈0．01）。结论①在浓度≥1μmol时，叶黄素能有效抑制BLECs的增殖。②浓度为1μmol／L和2μmol的叶黄素能抑制BLECs的移行，其强度呈一定时间依赖性。③叶黄素可能成为药物治疗后发性白内障的新选择。     

尾加压素Ⅱ体外促进晶状体上皮细胞增殖的细胞信号转导机制

目的:探讨尾加压素Ⅱ(urotensinⅡ,U-Ⅱ)促进晶状体上皮细胞(lens epithelial cell,LEC)增殖的细胞信号转导机制。方法:采用U-Ⅱ与体外培养的LEC共同孵育,并用4种细胞信号转导阻断剂H7,PD98059,W7,尼卡地平(nicardipine)分别作用于LEC,再用3H胸腺嘧啶(3H-TdR)掺入法检测LEC增殖的情况。结果:U-Ⅱ组LEC的3H掺入放射活性显著高于对照组(P<0.01),4种信号转导阻断剂组的放射活性与U-Ⅱ组比较均有不同程度的降低(P<0.01,P<0.01)。PD98059和H7的阻断作用强于nicardipine和W7(F=13.251,P<0.01)。结论:尾加压素Ⅱ促进LEC增殖是通过细胞信号转导的机制,该作用可被信号转导阻断剂所阻断。     

MG132对人晶状体上皮细胞增生、移行和上皮-间充质转化的抑制作用

背景 晶状体后囊膜混浊（PCO）发生的主要病理机制是白内障术后后囊膜残留的晶状体上皮细胞（LECs）的增生、移行和分化,研究发现蛋白酶体抑制剂MG132可抑制牛LECs的增生,但对人LECs的生物学影响尚不明确. 目的 研究蛋白酶体抑制剂MG132对体外培养的人LECs增生、移行和上皮-间充质转化（EMT）的抑制作用.方法 收集白内障超声乳化摘出术中连续环形撕囊的囊膜片用组织块培养法进行原代培养并传代,取第2代或第3代LECs进行常规消化,调整细胞密度至5×105个/ml,以200 μl/孔接种至96孔板常规培养24 h,分别加入成纤维细胞生长因子-2（FGF-2）、MG132或MG132＋FGF-2,以基础培养液培养的细胞作为对照组,培养24 h后用MTT法测定吸光度（A490）值,计算LECs的增生率.在移行能力测定中,应用传代的人LECs分别加入FGF-2、MG132或MG132＋FGF-2,以基础培养液培养的细胞作为对照组,用无菌棉棒在细胞层中划出细胞裸露区,继续培养24 h,计数移行至裸露区的细胞,评估细胞移行率.在传代的人LECs培养液中分别加入转化生长因子-β2（TGF-β2）、MG132或MG132＋TGF-β2,以基础培养液培养的细胞作为对照组,培养24 h后用免疫组织化学法检测细胞质中纤维连接蛋白（FN）的表达. 结果 对照组、FGF-2组、MG132组和MG132＋FGF-2组的LECs增生值（A490）分别为0.582±0.020、0.723 ±0.010、0.434±0.011和0.465±0.008,总体差异有统计学意义（F=110.482,P＜0.01）,FGF-2组LECs增生值明显高于对照组,MG132组和MG132＋FGF-2组的LECs增生值明显低于对照组,差异均有统计学意义（P＜0.05）.对照组、FGF-2组、MG132组和MG132＋FGF-2组LECs移行数目分别为8.67±1.08、11.58±1.59、2.67±0.09和2.75±0.09,差异有统计学意义（F=34.301,P＜0.01）,其中FGF-2组LECs的移行数明显多于对照组,而MG132组和MG132＋FGF-2组LECs移行数明显少于对照组,差异均有统计学意义（P＜0.05）.与对照组比较,MG132组LECs的增生率和移行率分别降低25.4％和75.0％,FGF-2组LECs增生率和移行率分别增加24.2％和33.6％,MG132＋FGF-2组LECs的增生率和移行率分别下降20.1％和68.3％.对照组、TGF-β2组、MG132组和MG132＋TGF-β2组LECs中FN表达量（A值）分别为1.242±0.023、2.329±0.113、1.043±0.021和1.163±0.018,差异有统计学意义（F=113.752,P＜0.01）,TGF-β2组LECs中FN表达量明显高于对照组,而MG132组和MG132＋TGF-β2组明显低于对照组,差异均有统计学意义（P＜0.05）.TGF-β2可以诱导人LECs转分化,FN表达增强;MG132与TGF-β2同时存在时可以减弱人LECs转分化,FN表达下降. 结论 MG132抑制体外培养的人LECs的增生与移行,并可阻止TGF-β2诱导的人LECs的EMT.     

多西他赛对人晶状体上皮细胞的抑制作用

背景一些已知的抑制人晶状体上皮细胞（LECs）增生的药物由于严重的不良反应限制了其临床应用,寻找高效、安全的抑制LECs增生的药物是防治晶状体后囊膜混浊（PCO）的研究热点。目的探讨多西他赛对LECs增生的影响,并与盐酸表柔比星、盐酸吡柔比星和雷替曲塞的作用进行比较。方法对永生系人LECs细胞株SRAOI／04进行培养及传代,将不同浓度的多西他赛、盐酸表柔比星、盐酸吡柔比星和雷替曲塞加入LECs中分别作用24、48、72h,以MTT法评价不同浓度的多两他赛对人LECs增牛的抑制作用并与其他药物进行比较。用流式细胞术分析不同浓度的多西他赛作用48h后对LECs细胞周期的影响,采片jAnnexinV-FITC／PI标记法和蛋白印迹分析法评估不同浓度的多西他赛作用48h后LECs细胞bcl-2蛋白的表达和凋亡情况。结果8～519pmol／L多西他赛组LECs的增生率为100％,LECs形态正常,而66nmol／L多西他赛组干预48h和72h后LECs的增生率分别为34．7％和27．4％,LECs形态出现异常。23．22～523．56μmol／L雷替曲塞对人LECs的增生无明显抑制作用。多西他赛作用48h和72h时,半数抑制量（IC50）明显低于盐酸吡柔比星和盐酸表柔比星。多西他赛作用LECs48h后,随着多西他赛浓度的增高,处于G2／M期的LECs百分数明显增加,各组的总体差异有统计学意义（F=2633．05,P〈0．01）;8．3nmol／L和266nmol／L多西他赛浓度组干预48h后,LECs的凋亡率分别为22．4％和27．9％,较细胞对照组升高,差异均有统计学意义（χ2=20．00,P〈0．01;χ2=42．68,P〈0．01）。Westernblot检测表明不同浓度多西他赛干预后bcl-2蛋白在LECs中的表达条带均较对照组淡,8．3nmol／L多西他赛组bcl-2蛋白表达降低更为明显。结论多西他赛、盐酸表柔比星和盐酸吡柔比星均可抑制人LECs的增生,而雷替曲塞对人LECs的增生无明显的抑制作用。多西他赛对LECs增生的抑制作用强于其他药物,其作用强度呈浓度和时间依赖性。     

姜黄素对人晶状体上皮细胞增生的抑制作用

目的探讨姜黄素(curcumin,CUR)对人晶状体上皮细胞株SRA01/04(human lens epithelial cell line SRA01/04,HLECSRA01/04)增生的抑制作用及其剂量-效应与时间-效应的关系。方法MTT比色法分别测定不同浓度的CUR作用于HLEC不同时间后的细胞生长抑制率;不同浓度的CUR作用于HLEC24h后,流式细胞术检测HLEC的细胞凋亡率;DAPI免疫荧光染色观察HLEC的形态学改变;免疫组织化学检测HLEC的caspase-3蛋白表达情况。结果MTT比色法实验结果显示,随药物浓度增加和作用时间延长,HLEC生长抑制率增加(P<0.05)。CUR作用于HLEC24h后,流式细胞术检测表明,细胞凋亡率随药物浓度增加而明显增加(P<0.05);DAPI免疫荧光染色可见细胞核固缩、溶解碎裂、产生凋亡小体,而对照组细胞形态规则,细胞核呈现均匀的荧光染色;免疫组织化学可见,用药组caspase-3蛋白的表达随CUR浓度增加而增强(P<0.05)。结论CUR对HLEC有抑制增生和诱导凋亡作用,且呈明显的剂量-效应与时间-效应关系,可望成为后发性白内障的防治药物。     

蛋白酶体抑制剂MG132诱导牛晶状体上皮细胞凋亡的观察

目的 观察蛋白酶体抑制剂MG132对晶状体上皮细胞(LECs)凋亡的诱导作用.方法 用不同浓度的MG132分别处理牛LECs 12、24、36h,通过MTT法检测细胞活力,流式细胞术(FCM)检测MG132对牛LECs凋亡的影响.结果 在作用时间相同的条件下,随着MG132浓度的增高(0、2、5、10μmol/L),对牛LECs增生的抑制作用逐渐增强(P＜0.01).当作用时间达36h时,半效抑制浓度IC50为2.03μmol/L.同时,MG132能够明显诱导牛LECs凋亡:FCM分析结果表明,浓度为2μmol/L的MG132作用12h,细胞早期凋亡率为20.24%±1.51%,对照组为0.98%±0.20%(P＜0.01,n=3).结论 蛋白酶体抑制剂MG132能够诱导牛LECs凋亡,蛋白酶体活性的丧失可能在白内障的形成中起重要作用.     

8-氯腺苷对抑制人晶状体上皮细胞增生的体外研究

目的探讨8-氯腺苷(8-chloroadenonosine)是否对体外培养的晶状体上皮细胞增生有抑制作用。方法取第2、3代传代培养的晶状体上皮细胞做药物抑制试验。加入不同浓度的8-氯腺苷(2,4,8,16μmol/L)作用24、48、72和96小时后,用MTT比色测定法和流氏细胞仪检测法确定药物对兔晶状体上皮细胞增生的抑制作用。结果 8-氯腺苷在4-16μmol/L的浓度下能抑制晶状体上皮细胞的增生。并且其抑制程度呈时间、剂量依赖性。结论该结果可为临床筛选防治后发性白内障的药物提供依据。     

硫酸镍对正常人眼晶状体上皮细胞抑制作用的研究

目的 探讨硫酸镍对体外培养的正常人晶状体上皮细胞(LECs)的抑制作用.方法 四甲基偶氮唑蓝法测定不同质量浓度的硫酸镍(100、200、300、400、500μg/mL)对人LECs增生的抑制作用,观察时间-效应关系;透射电镜观察细胞的超微结构改变.结果 不同质量浓度的硫酸镍作用24 h、48 h后,LECs的增生抑制率随质量浓度的增加而增高,呈明显的质量浓度-效应关系(r=0.964).作用24 h后LECs的半数抑制质量浓度(IC50)为162.71 μg/mL;作用48 h后为129.31μg/mL;电子显微镜下观察到细胞核染色质凝集、固缩,核碎裂,大量凋亡小体出现等典型的细胞凋亡的形态学改变.结论 硫酸镍对人LECs的增生具有明显的抑制作用,呈明显的质量浓度-效应关系,并能诱导人LECs凋亡.     

碱性成纤维细胞生长因子促人晶状体上皮细胞增生的研究

目的 探讨碱性成纤维细胞生长因子（ｂ－ＦＧＦ）在后发性白内障形成过程中的作用。方法 应用体外培养人的晶状体上皮细胞,第３代细胞悬液接种于２４孔培养板内,加入不同终浓度的ｂ－ＦＧＦ（０,１,０,１０．０,１００．０ｎｇ／ｍｌ）,每组重复３孔,培养７２ｈ后,细胞计数。结果 ｂ－ＦＧＦ添加组,细胞增生呈浓度依赖性,ｂ－ＦＧＦ浓度越高,细胞增生越快。结论 白内障手术后房水中内源性ｂ－ＦＧＦ的增加可能是后发